Poly medieret Cre rekombinase påvirket Rac1 knock-out

Poly terapi førte til en Z reduceret mængde Rac1 DNA i levervæv. Western blot analyse viste et tab på Rac1 protein ekspression ved ca. 757-200, hvilket blev bekræftet ved immunohistokemisk analyse. Udover lever, blev poly medieret Cre-rekombinase påvirket Rac1 knock-out også bemærket i knoglemarv, milt, lunge, perifert blod, hjerte og nyre, skønt ingen indlysende Rac1 fjernelse var mærkbar i tarmen og hjernen. DNA skader som følge af hæmning af topoisomerase II betragtes som den mest relevante anticancer eftervirkninger af antracyklin biprodukt doxorubicinand kunne også være af betydning for normalt væv skader som følge af antracykliner.

tidligere erhvervet in vitro og in vivo data viste, at Rac1 signalering er meget vigtigt for doxorubicininduced stressreaktioner og celledød af endotelceller samt af hjerte og levervæv. Her, vi havde til formål at undersøge denne teori udnytte den ovennævnte genetiske musemodel, som er karakteriseret ved en poly inducerbar hepatisk knockout af Rac1. S139 phosphorylering af histon H2AX, som er et generelt accepteret markør af DNA dobbelt-strengbrud, blev overvåget, at analysere virkningen af ​​Rac1 på akut leverskade efter doxorubicin behandling.

Som det fremgår af både vestlige blotbased analyse af gH2AX protein beløb og immunfluorescens baseret påvisning af gH2AX foci, opdagede vi, at Rac1 mangel beskytter betydeligt mod doxorubicin som analyseret 48 og 96 timer efter enkelt eksponering for forskellige doser af doxorubicin induceret dannelse af DSBs. Tilsammen Rac1 signalering er nødvendig for doxorubicin at udløse genotoksicitet i en akut indstilling. Til sammenligning IR-induceret hepatisk gH2AX fosforylering, som blev analyseret 72 timer efter total-krop bestråling af mus med 6 Gy, blev ikke ændret, da Rac1 blev slettet. Niveauet af gH2AX foci var 0. 8-1. 2 foci /celle foruden status af hepatocytter. Også i ikke-bestrålede dyr, mængden af ​​hepatisk gH2AX foci var meget ens i vildtype og Rac1 ringere dyr. Ivacaftor pris

ry også påvirkede ikke H2AX fosforylering på tidligere tidspunkter efter bestråling. Over alt, viser dataene, at manglende Rac1 ikke resulterer i en generel hepatoprotection mod de akutte DNA skadelige virkninger af genotoxins. Nogenlunde, genoprotection er unik for doxorubicin og omfatter ikke IR. Relaterede mægler visse forskelle er allerede observeret efter antracyklin og IR behandling af lovastatin forbehandlet cellsand skabninger. Virkning af hepatisk Rac1 knockout på basal og genotoksisk stress induceret mRNA-ekspression.

For at undersøge konsekvenserne af Rac1 knock-out på basal og genotoxininduced mRNA ekspression af gener er aktive i reguleringen af ​​angst reaktioner, en delvis tilpasset PCR-array blev anvendt. Dette interval muliggør kvantitativ analyse af mRNA-ekspression af 94 udvalgte gener involveret i DNA-reparation, DNA beskadigelse respons, cellecyklusprogression og død. Under normale omstændigheder, blev fundet i alt syv gener, der skal forskelligt forvaltes i levervæv når Rac1 knockout-mus blev vejet mod kontrollen. Dernæst undersøgte vi indflydelsen af ​​Rac1 på svært nedsat stressrespons udløst af midler, der er, anthracyclinderivatet doxorubicin og ioniserende stråling.

Som besluttet 48 timer efter jeg. s. Behandling af doxorubicin, Rac1 mangel forårsaget inhibering af doxorubicin vakt mRNA-ekspression af cdkn1a, hspa1b, ICAM1 og topoIIb henviser det øgede mRNA ekspression af DNA-reparation genet RAD51 og cellecyklus-associeret kinase Wee1. Vedrørende IR inducerede ændringer i genekspression efter 24 timer efter TBI, Rac1 mangel resulterede specifikt i inhibitoriske virkninger, især IR-induceret mRNA-ekspression af DNA reparation gener fen1, topoIIb, Adv og Xpc, cellecyklen regulerende gener cdkn1a og ccne1 og varmen chok gen hspa1b.