PLoS ONE: En polymorfi (rs2295080) i mTOR Promotor regionen og dens Association med Gastric Cancer i en kinesisk Population

Abstrakt

Baggrund

Som en absolut nødvendighed del af PI3K /Akt /mTOR pathway , mammalian target of rapamycin (mTOR) er blevet påvist at stige i gastriske cancerceller og tumorer. Vores forskning udforskede forholdet mellem enkelt (SNP) rs2295080 i

mTOR

promotor-regionen og risikoen for mavekræft (GC).

Metoder

Seven hundrede og halvtreds -Tre (753) gastrisk adenocarcinom patienter og 854 matchede raske forsøgspersoner blev rekrutteret i kræft foreningen studiet og 60 væv blev anvendt til at teste udtryk for

mTOR

. Ubetinget logistisk regression blev udvalgt til at vurdere sammenhængen mellem rs2295080 T G polymorfi og GC risiko. Vi undersøgte derefter funktionaliteten af ​​denne promotor genetisk variant af luciferaseanalyse og EMSA.

Resultater

Personer med G-allelen havde en 23% nedsat risiko for GC, sammenligne med dem, der udfører T-allelen (justeret OR = 0,77, 95% CI = 0,65-0,92). Denne beskyttende virkning af G-allelen stod bedre i mandlige gruppe. I mellemtiden, GC patienter bærer TG /GG genotype vises også et reduceret mRNA niveau af

mTOR

(

P

= 0,004). I luciferaseanalyse, T-allelen havde tendens til at forøge transskriptionel aktivitet af

mTOR

med en omtrentlig 0,5 gange i forhold G-allelen. Desuden EMSA tests forklarede, at forskellige alleler af rs2295080 vises forskellige tilhørsforhold til nogle transkriptionel faktor.

Konklusion

mTOR

promotor polymorfi rs2295080 var signifikant associeret med GC risiko. Denne SNP, som effektivt påvirkes ekspressionen af ​​

mTOR

, kan være en ny biomarkør for tidlig diagnosticering af gastrisk cancer og en egnet indikator for at udnytte mTOR inhibitor til behandling af GC

Henvisning:. Xu M, Tao G, Kang M, Gao Y, Zhu H, Gong W, et al. (2013) En polymorfi (rs2295080) i

mTOR

Arrangøren Region og dens tilknytning til Gastric Cancer i en kinesisk Befolkning. PLoS ONE 8 (3): e60080. doi: 10,1371 /journal.pone.0060080

Redaktør: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto FIRC di Oncologia Molecolare, Italien

Modtaget: November 26, 2012; Accepteret: 21 februar 2013; Udgivet: Marts 29, 2013 |

Copyright: © 2013 Xu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev delvist støttet af National Natural Science Foundation of China (81230068, 30972444, 81001274, og 81102089), Key Program of Natural Science Foundation i Jiangsu-provinsen (BK2010080), Natural Science Foundation i Jiangsu-provinsen (BK2011773 og BK2012842), Key Program for Basic Research i Jiangsu Provincial Department of Education (11KJB330002 og 12KJA330002), Qing-Lan Projekt i Jiangsu Provincial Department of Education, og Priority Academic Program Udvikling af Jiangsu videregående uddannelsesinstitutioner (Folkesundhed og forebyggende medicin). Vi vil også gerne takke Luo Y (Nanjing Røde Kors Blood Center) for hendes hjælp med funktionelle eksperimenter. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret nogen interessekonflikter

Introduktion

mavekræft (GC) er den hyppigst forekommende kræft på verdensplan blandt mænd med 640.556 og kvinder med 349,042 nye tilfælde og 738,069 dødsfald i 2008 [1]. I betragtning af det terapeutiske effektivitet, kan kirurgisk resektion være primær kurativ behandling til tidligere fase af GC patienter [2]. Desværre er de fleste gastriske kræftpatienter påvist i fremskredent stadium, i hvilket tidsrum tumoren er inoperabel mere. Desuden tilbagefald efter operation er en anden frygtelig begivenhed for en fattig 5-årige overlevelsesrate. I betragtning af de patienter med fremskreden eller recidiverende mavekræft, er det ingen tvivl om, at opdagelsen af ​​biomarkører og deres anvendelse ledsaget med traditionel diagnose kan være en værdifuld indikation og en omfattende hjælp til at formulere strategi for forebyggelse og behandling.

Pattedyr mål af rapamycin (mTOR) består af 2.549 aminosyrer arrangeret i højt konserveret domæne [3]. Strukturelt indeholder mTOR en rapamycin-bindende domæne i sin centrale del og en kinase domæne i C-terminalen [4]. Som et centralt element i PI3K /Akt /mTOR pathway, mTOR er tæt relevant for kapital cellulære processer såsom cellevækst, formering, metabolisme, migration, angiogenese, og apoptose [5] – [7]. Indtil nu,

mTOR

produkter er bekymrede som to forskellige komplekser (dvs. mTORC1 og mTORC2) med forskellig følsomhed [8], [9]. mTORC1 er en rapamycin-sensitive kompleks, der omfatter mTOR plus FK506-bindende protein 12 kDa (FKBP12), pattedyr LST8 (mLST8), og den regulerende-associeret protein af mTOR (raptor). I modsætning hertil mTORC2 består med Sin1, mLST8, og rapamycin-ufølsom følgesvend af mTOR (Rictor) [10] – [12]. Dysregulering af

mTOR

vises ofte i forskellige former for kræft i løbet af carcinogenese og forringelse. Men årsagerne til denne afvigende fænomen stadig glutted med debatter.

En række studier har undersøgt den rolle, single nukleotid polymorfier (SNPs) af

mTOR

gen i ætiologien af ​​kræft i forskellige organer, herunder esophageal cancer [13], lungecancer [14], blærecancer [15], coloncancer, rektal cancer [16], og akut lymfoblastisk leukæmi [17]. De fleste af disse SNPs finde i exoner eller introner med ukendte funktionelle effekter. For nylig er et stigende antal undersøgelser fokuseret på SNP’er siddepladser i genpromotorregion, som er vist sig at påvirke bindingsevnen med nogle transkriptionelle faktorer (TFS) og resultaterne til følgende gentransskription. I denne undersøgelse, vi hypotese, at

mTOR

rs2295080 T G polymorfi i promotorområdet kunne påvirke modtageligheden for GC. For at teste denne hypotese, vi genotypebestemmes hyppigheden af ​​

mTOR

rs2295080 at teste dens betydning på GC risiko i vores løbende, hospital-baseret, case-kontrol undersøgelse i en kinesisk befolkning. Derfor vi opdaget de

mTOR

mRNA-niveauer med forskellige genotyper i væv af gastrisk kræftpatienter. Desuden vi yderligere kendetegnet funktionaliteten af ​​denne genetiske variant på

mTOR

promotor transskription af luciferaseanalyse og EMSA.

Materialer og metoder

Undersøgelse Emner

Denne undersøgelse omfattede 753 patienter med histologisk bekræftet gastrisk adenocarcinom og 854 kræft-fri kontrol. Alle patienter blev rekrutteret fra Cancer Clinical Research Base of Nanjing Medical University mellem marts 2006, og januar 2010. Og alle demografiske og kliniske oplysninger, herunder alder, køn, tumorstørrelse, tumor site, histologiske typer, dybde invasion, lymfeknude metastaser, fjernmetastaser, og TNM stadie, blev opnået ved hjælp af et kort spørgeskema og kliniske medicinske journaler.

frekvens-matchede kontroller til disse tilfælde fordelt på alder (± 5 år) og køn blev indsamlet på den samme periode og regioner relateret genetiske forhold med gastrisk sygdom og fordøjelsessystemet tumorer. Hver deltager underskrevet en skriftligt informeret samtykke og doneret 5 ml veneblod til genomisk DNA-ekstraktion. Forskningen Protokollen blev godkendt af den institutionelle gennemgang bestyrelse Nanjing Medical University.

DNA Udvinding og SNP Genotypning

Genomisk DNA blev ekstraheret fra blodprøver som beskrevet tidligere [18]. Genotypebestemmelse blev afsluttet ved TaqMan SNP genotypebestemmelsesassay hjælp ABI 7900HT realtids-PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) og Sequence Detection System version 2.4 (SDS 2.4). Sekvenserne af primere og prober var til rådighed på anmodning, og kontroller var indeholdt for hver plade for at sikre nøjagtigheden af ​​genotypning. Genotypebestemmelse blev udført af to personer uafhængigt i en blind måde. Mere end 10% af prøverne blev udvalgt tilfældigt til bekræftelse, og resultaterne var 100% overensstemmende. Primere og prober blev anført i tabel S1.

Celledyrkning og konstruktion af promoter reporter plasmider

En normal gastrisk mucosa epitelial cellelinje (GES-1) og tre forskellige gastriske cancercellelinier (BGC -823, MGC-803, og SGC-7901) blev vedtaget i denne undersøgelse. Alle celler blev dyrket i Dulbeccos modificerede Egale Medium /High glucose dyrkningsmedium med 10% FBS, 10 mM HEPES, 2 mM L-glutamin, 1 mM pyruvat natrium, 100 U /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin ved 37 ° C i en fugtig atmosfære indeholdende 95% luft og 5% CO

2. De fleste af reagenserne blev fremskaffet fra GIBCO (Burlington, Ontario, Canada)

I luciferase reporter plasmider, den humane

mTOR

promotorsekvenser med forskellige alleler for rs2295080 T . G polymorfi blev syntetiseret og fremstillet i pGL3-grundlæggende vektor (Promega, Madison, WI, USA) Generay Company (Shanghai, Kina). Alle plasmider blev bekræftet ved DNA-sekventering. Primere involveret i testen var opført i tabel S2.

Transient transfektion og Luciferase Assay

GES-1, BGC-823, MGC-803, og SGC-7901-celler blev transficeret af Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) med 0,8 ug af hver konstrueret vektor, enten med T-allel eller med G-allelen. Samtidig blev 10 ng pRL-SV40 per brønd også transficeret som en intern kontrol til at korrigere transfektion effektivitet. Før det blev celler podet på plader med 24 brønde natten over for at sikre 90% -95% konfluens på tidspunktet for transfektion. Fireogtyve timer efter transfektion blev luciferaseaktivitet målt ved Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI, USA) og udtrykt som forholdet mellem Firefly luciferase til Renilla luciferaseaktiviteter. Alle celler blev udført tre gange med de samme betingelser

elektroforetiske mobilitet (EMSA)

Den følelse probe sekvenser var som følger: rs2295080 T sonde, 5′-AGGGTTCCCATCCCTGAGGAC-3 ‘;. rs2295080 G probe, 5’-AGGGTTCCCAGCCCTGAGGAC-3 ‘. Kerneproteiner blev ekstraheret med NE-PERTM Nuclear og cytoplasmiske Ekstraktion Reagenser (Pierce, Rock-ford, IL, USA). DNA-prober blev fremstillet med Biotin 3’-enden DNA Labeling Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Elektroforetisk mobilitet (EMSA) blev udført med en LightShift Chemiluminescent EMSA Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Bindingsreaktioner blev udført som følger: kerneekstrakter (8 ug protein) og 1 × bindingsbuffer med 2,5% glycerol, 5 mM MgC

2, 50 ng /pl poly (dI-dC), 0,05% NP-40, og 20 fmol biotinmærkede rs2295080 T /rs2295080 G prober blev inkuberet på is i 30 minutter i et volumen på 20 pi. Af konkurrence- undersøgelser blev kerneekstrakter inkuberet med umærket oligonukleotid i 30 min før tilsætning af mærket oligonukleotid.

Ekspressionsniveauer af

mTOR

mRNA.

Totalt RNA fra 60 gastrisk cancervæv, indeholdt i 753 tilfælde med forskellige genotyper blev ekstraheret ved anvendelse af Trizol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). MRNA blev målt ved kvantitativ realtids-PCR (ABI 7300) efter revers transkription. GAPDH blev anvendt som en intern kvantitativ kontrol for hver prøve. Primerne anvendt til mTOR amplifikation var F: 5′-TTGCTTGAGGTGCTACTG-3 ‘og R: 5′-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3′; primerne til GAPDH var F: 5’-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3 ‘og R: 5′-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3’. Relativ kvantificering af

mTOR

mRNA blev beregnet ved hjælp af 2-ΔΔCt metoden. Fold ændringer blev normaliseret i forhold til GAPDH, og hvert assay blev udført tre gange.

Statistisk analyse.

Hardy-Weinberg ligevægt (HWE) blev vurderet ved chi-square goodness of fit test at sammenligne de observerede genotypefrekvenser med det forventede blandt kontrollerne. Foreninger mellem genotyper og risikoen for mavekræft blev estimeret ved computing odds ratio (OR) og 95% konfidensintervaller (CIS) fra logistisk regressionsanalyser med justering for alder og køn. To-sidet χ

2 tests af statistisk signifikans blev udført ved anvendelse af SAS-software (version 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) og

P

0,05 blev betragtet statistisk betydning.

Resultater

Karakteristik af forsøgspersonerne

de valgte karakteristika ved disse sager og kontroller er sammenfattet i tabel 1. de sager og kontroller syntes at være tilstrækkeligt matchet på alder (

P

= 0,424) og køn (

P

= 0,406). Blandt de 753 sager, tumorsteder inkluderet 295 cardia cancer (39,2%) og 458 ikke-cardia cancer (60,8%). Patienter med diffus type (437, 58,0%) viste en lidt højere forhold end intestinal type (316, 42,0%). Baseret på TNM klassifikation af amerikanske Blandede kræft (AJCC kræft iscenesættelse manual, 6

th udgave) [19], 17,3%, 17,3%, 50,6%, og 14,8% af patienterne havde T1, T2, T3, og T4 hhv. I mellemtiden, 60,6% af patienterne positivt lymfeknudemetastase og 13,0% eksisterede fjernt metastase. Ifølge disse kliniske karakteristika, blev alle patienter endelig identificeret at iscenesætte I, II, III og IV med 26,8%, 21,9%, 35,3%, og 16,0%, hhv.

de samlede virkninger af rs2295080 Polymorfi om risikoen for GC

genotype fordelinger og allelfrekvenserne af rs2295080 er vist i tabel 2. genotypefrekvenser i kontrollerne var efter aftale med HWE model (

P

= 0,569 ). Som vist i tabel 2, genotypefrekvenserne af rs2295080 var 64,0%, 32,7% og 3,3% for de TT, TG, og GG genotyper blandt tilfælde, og 58,2%, 35,7% og 6,1% blandt kontrollerne hhv. Forskellen mellem de tilfælde og kontroller var statistisk signifikant (

P =

0,008). , G-allelen frekvens var også signifikant lavere blandt tilfælde end kontroller (19,7% versus 23,9%,

P

= 0,003). Hertil kommer, at kombinerede TG /GG genotype frekvens var lavere blandt tilfælde end kontroller (36,0% versus 41,8%,

P

= 0,016). Når du tager TT genotype som reference, fandt vi, at variant genotyper (TG og GG) var forbundet med en nedsat risiko for GC i en dosis-respons måde sammenlignet med TT genotypen (justeret OR = 0,83, 95% CI = 0,67-1,02 for TG, og 0,49, 0,30-0,80 for GG

P

trend = 0,003). Ligeledes har vi også observeret, at de kombinerede TG /GG genotyper forbundet med en statistisk signifikant lavere følsomhed over for GC sammenlignet med TT genotype (0,78, 0,64-0,96). Tilsammen foreslog disse data, at den

mTOR

rs2295080 G allel kan være en formodet beskyttende allel.

Mænd var mere modtagelige for mavekræft med rs2295080 Polymorfi

Som det er veletableret, alder og køn var vigtige faktorer i tumor carcinogenese herunder mavekræft. Ifølge lagdeling analyse med alder og køn faktorer, fandt vi, at signifikant association blev observeret i mandlige gruppe, snarere end i kvindelige gruppe (tabel 3). Hos mænd, der bærer rs2295080 G allelen var en signifikant nedsat risiko faktor (OR = 0,72, 95% CI = 0,56-0,93 for TG /GG versus TT), sammenligne med transporterer T-allelen. Men der var ingen statistisk forskel mellem unge og gamle fag.

Den Stratificeret Analyse af sammenhængen mellem rs2295080 Polymorfi og kliniske variable af mavekræft

Vi udførte lagdeling analyse af rs2295080 polymorfi i alle fag ved kliniske funktioner i GC. Blandt alle uafhængige variable blev de beskyttende virkninger hovedsageligt observeret i undergrupper af patienter med mavemunden mavekræft (OR = 0,68, 95% CI = 0,52-0,91), intestinal type (0,73, 0,56 til 0,96), T3 dybde invasion (0,78, 0,60 -1.00), positive lymfeknudemetastase (0,79, 0,62-1,00), negativ fjernmetastaser (0,76, 0,62-0,94), og lokaliseret trin (0,76, 0,59 til 0,98) (tabel 4).

effekt af rs2295080 polymorfi på transkriptionsaktivitet

for at få et indblik i den biologiske funktionelle effekt af rs2295080 polymorfi på

mTOR

transskription, GES-1, BGC823, MGC803, og SGC-7901 celler transficeret med forskellige luciferase rapport plasmider, herunder vildtype (T-allel) og mutere type (G allel). Som vist i fig. 1A, fandt vi, at transkriptionen aktivitet af T-allelen var højere end G-allelen med et ca. 1,5-fold i over fire cellelinier, hvilket antyder at rs2295080 G allelen arbejdede som forsvarer for gastrisk cancer ved at reducere transkriptionen af ​​

mTOR

.

(A) Promotor aktivitet af forskellige alleler af

mTOR

rs2295080 polymorfi. T-allelen blev beskrevet ca. 0,5 gange over G-allelen evne inden luciferaseanalyse af fire former for gastrisk cellelinjer (GES-1, BGC-823, MGC-803 og SGC-7901). (B) Nukleare proteiner bindende aktivitet af forskellige alleler af

mTOR

rs2295080 polymorfi. Biotinylerede prober (20 fmol) blev inkuberet med 8 ug af nukleare ekstrakter fra SGC-7901 celler. I konkurrencesager eksperimenter, 10-, 100- og 200-gange molært overskud af umærkede rs2295080 T /rs2295080 G sonder blev anvendt til at demonstrere specificiteten af ​​hver bindende reaktion.

Nuklear proteinbinding aktivitet af varianter i rs2295080

Dernæst udførte vi en EMSA eksperiment for at analysere de biologiske konsekvenser af rs2295050 polymorfi i SGC-7901 celler. Et stærkt bånd (protein-kompleks) blev flyttet når de nukleare ekstrakter inkuberet med biotin-mærket rs2295080 T probe, hvorimod der blev observeret den svage bånd, når de nukleare ekstrakter inkuberet med biotin-mærket med rs2295080 G probe. De forskudte bånd blev signifikant inhiberet af et molært overskud af et umærket rs2295080 T eller rs2295080 G konkurrent på en dosis-afhængig måde (Fig. 1B). Disse resultater viste, at rs2295080 G allel kan mindske den nukleare protein bindende aktivitet til en vis grad.

associering mellem

mTOR

rs2295080 Polymorfi og ekspressionsniveauerne af

mTOR

mRNA

Sixty-tre mavekræft væv med forskellige genotyper af

mTOR

rs2295080 var tilgængelige i vores nuværende undersøgelse. På grund af den lave frekvens af GG genotype, tilføjede vi det i prøverne med TG genotype til analyse. Som vist i fig. 2, ekspressionsniveauerne af

mTOR

mRNA var dramatisk højere hos personer med TT genotypen end i dem med TG eller GG genotype (Middelværdi ± SEM af TT versus TG /GG: 12.35 ± 1.51 versus 6,17 ± 1,32,

P

= 0,004).

TT versus TG /GG genotyper,

P

= 0,004.

diskussion

I den foreliggende undersøgelse har vi vist, at G-allelen af ​​

mTOR

promotor- polymorfi rs2295080 var forbundet med en signifikant nedsat risiko for GC. Vi fandt, at T til G ændring i rs2295080 væsentligt ændret transkriptionsaktivitet

mTOR

gen via påvirke bindingen af ​​nogle transkriptionel faktor. Vi har også observeret, at

mTOR

rs2295080 T-allelen var forbundet med højere

mTOR

mRNA ekspressionsniveauerne

in vivo

.

pattedyr mål for rapamycin (mTOR) , også kendt som FRAP1, er en nødvendig medlem af PI3K /Akt /mTOR pathway og centralt for metabolisk signalering [20], [21]. Den kan aktiveres ved insulin, insulin-lignende vækstfaktorer og andre vækstfaktorer, og inaktiveres under cellulært sult. mTOR eksisterer to forskellige slags kompleks, opkaldt mTORC1 og mTORC2 henholdsvis [22]. Den mTORC1 kompleks phosphorylerer sin nedstrøms effecter p70S6k, som kunne fremkalde nedbrydningen af ​​insulin receptor substrat og yderligere øge insulin-drevne Akt aktivitet. Den mTORC2 komplekset phosphorylerer den C-terminale ende af Akt ved Ser473, hvilket kunne føre til hele aktivering af Akt [9]. Som et terapeutisk mål i andre cancere [4], [8], [23] – [27], mTOR kunne også vist sig som et potentielt mål for behandling af gastrisk cancer, spontant. Sirolimus [28] og everolimus [29], mTOR inhibitorer, blev identificeret at resultere i G1 cellecyklusstandsning og inhiberede proliferationen af ​​gastriske cellelinier. For nylig er en hidtil ukendt potentiale

mTOR

promotor polymorfi rs2295080 er blevet beskrevet i adskillige undersøgelser [30] – [32]. Imidlertid blev utilstrækkelige funktionelle studier udført for at vurdere betydningen af ​​denne genetiske variant i reguleringen af ​​

mTOR

udtryk. I GC, vores resultater forudsat de beviser, rs2295080 T allel kan øge transskription aktivitet

mTOR

til en vis grad i GES-1-cellelinje efter transficeret

in vitro

. Og videre luciferaseanalyse i tre gastrisk cancer cellelinjer (dvs. BGC-823, MGC-803 og SGC-7901) yderligere bekræftet denne effekt rs2295080 polymorfi. Disse resultater i vores foreliggende undersøgelse var i overensstemmelse med resultaterne i renal cancercellelinie og cervical cancer cellelinje [32]. I EMSA assay blev rs2295080 forudsagt at finde på det potentielle bindingssted, hvis polymorfe varianter kan påvirke rekruttere af transkriptionsfaktorer (ved hjælp af p-MATCH program, som bruger bindingssteder i TRANSFAC, www.gene-regulation.com). Taget disse resultater sammen, er det plausibelt, at

mTOR

rs2295080 polymorfi kan påvirke ekspressionsniveauet af

mTOR

og individuel følsomhed over for forskellige kræftformer.

SNP rs2295080 samt som en anden intron SNP rs11121704, blev først rapporteret af Hildebrandt

et al.

at finde i

mTOR

potentiel promotor region [13]. Som beskrevet i kræft i spiserøret, rs2295080 syntes ingen sammenhæng eller funktion med overlevelse efter kemo- og stråleterapi og kirurgi. Men indtil nu, har flere undersøgelser identificeret effekten af ​​denne polymorfi i

mTOR

for kræft risiko [30] – [32], som alle anses for rs2295080 T allel som en risikofaktor. I den aktuelle undersøgelse, sammenhængen mellem rs2295080 T allel og GC risiko var i overensstemmelse med resultaterne af tidligere tre undersøgelser [30] – [32]. Derudover vores resultater antydede også, at denne polymorfisme kunne være en biologisk kernen i udviklingen af ​​GC. På grund af forskellige befolkningsgrupper og forskellige mekanismer blandt forekomst, udvikling og overlevelse, vi spekulerede de etnicitet forskelle og mekanistiske distinktioner kan forklare disse discordances.

En anden roman resultat kommer fra foreningen mellem kønnene og

mTOR

rs2295080 polymorfi i stratificeret analyse. Denne rs2295080 polymorfi afslørede mere stærk betydning hos mænd end kvinder. Derudover Hartgrink

et al

. (2009) har rapporteret forholdet mellem mænd til smittet med mavekræft kvinder er omkring 2:01 om året [33]. Yderligere forklaring på forbindelser af disse resultater skal søges, og forskellige slags hormoner udtryk hos mænd og kvinder blive den bedste overvejelse, rationelt. I en undersøgelse af brystkræft, Galoian

et al.

Har givet de data, der prolinerich polypeptid-1 udøver antiproliferativ virkning via hæmning mTOR kinase aktivitet i ER-negative MDA-231, men der findes ingen hæmmende effekt i luminale T47 -D celle, som opfører sig som en ER-positiv cellelinie [34]. Men for studier af androgen, troede man, at androgen kunne stimulere mTOR aktivitet i PTEN-deficiente prostatacancerceller. En nylig undersøgelse af androgenreceptor forbedret rolle androgen i opregulering mTORC2 aktivitet [35]. Det er sandsynligt, at androgen, i stedet for østrogen, kan øge

mTOR

udtryk; androgen kan føre til den høje forekomst af mavekræft hos mænd og den stærke betydning af

mTOR

rs2295080 i mandlige gruppe i vores undersøgelse.

Nogle begrænsninger vores nuværende undersøgelse skal påpeges som følger . Først rs2295080 var ikke den eneste polymorfi betydeligt eksisterende på

mTOR

, og vigtigheden af ​​at kombinere SNPs blev forsømt i vores undersøgelse. For det andet, som afgørende faktorer i gastrisk carcinogenese, den mangler af

Helicobacter pylori

oplysninger, rygning information, og drikker oplysninger var også utilstrækkelig i vores undersøgelse, er det uheldige for os for yderligere undersøgelse af virkningerne af denne polymorfi. Hertil kommer, på grund af den relative lille stikprøve i vores studie, ingen signifikante resultater syntes at være fundet særligt lag (alder undergrupper, kvindelige undergruppe, og andre klinisk-patologiske undergrupper) af stratificerede analyser (tabel S3 og S4). Yderligere større undersøgelse med mere information forventedes at bekræfte vores resultater.

Som konklusion, vores undersøgelse belyst de

mTOR

rs2295080 lokalisering i promotor-regionen i

mTOR

gen var signifikant forbundet med risiko for mavekræft i en kinesiske befolkning.

Støtte oplysninger

tabel S1.

Primere og prober anvendt til genotypebestemmelse

doi:. 10,1371 /journal.pone.0060080.s001

(DOC)

tabel S2.

Primere til konstruktion af plasmider

Doi:. 10,1371 /journal.pone.0060080.s002

(DOC)

Tabel S3.

Interaktion analyser af

mTOR

rs2295080 polymorfi og alder eller køn status i case-control undersøgelse

doi:. 10,1371 /journal.pone.0060080.s003

(DOC)

Table S4.

Interaktion analyser af

mTOR

rs2295080 polymorfi og alder /køn eller kliniske tegn i case-eneste undersøgelse

doi:. 10,1371 /journal.pone.0060080.s004

(DOC)

tak

Vi vil gerne takke Luo Y (Nanjing Røde Kors Blood center) for hendes hjælp med funktionelle eksperimenter.