PLoS ONE: Gene Silencing af Toll-like receptor 2 Forhindrer spredning af human lever cancerceller og Sekretion af inflammatoriske cytokiner

Abstrakt

Baggrund

Toll-lignende receptorer (TLRs) er nøglefaktorer i det medfødte immunsystem og initiere den inflammatoriske reaktion på fremmede patogener, såsom bakterier, svampe og vira. I mikromiljø tumorigenese, kan TLR’er fremme inflammation og celleoverlevelse. Toll-like receptor 2/6 (TLR2 /6) signalering i tumorceller betragtes som en af ​​mekanismerne i kronisk inflammation, men det kan også mediere tumorcelle immune escape og tumorprogression. Imidlertid har udtryk for TLR2 og dens biologiske funktion i udviklingen og progressionen af ​​leverkarcinom ikke blevet undersøgt. Denne undersøgelse havde til formål at bestemme ekspressionen af ​​TLRs 1-10 i den etablerede humane hepatocellulært carcinom cellelinie BLE-7402, for at undersøge den biologiske effekt af TLR2 på cellevækst og overlevelse.

Metoder

TLR-ekspression i BLE-7402 celler blev analyseret ved RT-PCR, real-time PCR og flowcytometri (FCM). For yderligere at undersøge funktionen af ​​TLR2 i leverkarcinom vækst blev BLE-7402-celler transficeret med rekombinante plasmider, der udtrykker en af ​​tre former af TLR2 siRNA (sh-TLR2 RNAi (A, B og C)). TLR2 knockdown blev bekræftet under anvendelse af RT-PCR, real-time PCR og fluorescensmikroskopi. Tumorcelleproliferation blev overvåget ved MTT-assay og udskilles cytokiner i supernatanten af ​​transficerede celler blev målt ved perle-baserede FCM blev funktionen af ​​TLR2 siRNA også undersøgt in vivo.

Resultater Salg

BLE-7402 cellelinie udtrykte TLRs 2 til 10 på både mRNA og protein niveauer. TLR2 var den mest stærkt udtrykt TLR. Mens alle tre siRNAs inhiberede TLR2 mRNA og proteinekspression, sh-TLR2 RNAi (B) havde den stærkeste knockdown effekt. TLR2 knockdown med sh-TLR2 RNAi (B) reducerede celleproliferation. Endvidere sekretion af IL-6 og IL-8 blev også reduceret. Resultatet viste en drastisk reduktion i tumorvolumen i mus behandlet med sh-TLR2 RNAi (B).

Discussion

Disse resultater antyder, TLR2 knockdown inhiberer proliferation af dyrkede leverkarcinom celler og sænke sekretionen af cytokiner. Det foreslås, at TLR2 lyddæmpning kan værd yderligere undersøgelser for siRNA baseret genterapi til behandling af hepatocarcinoma

Henvisning:. Huang Y, Cai B, Xu M, Qiu Z, Tao Y, Zhang Y, et al. (2012) Gene Silencing af Toll-like receptor 2 Forhindrer spredning af Humane Leverkræft Cells og Sekretion af inflammatoriske cytokiner. PLoS ONE 7 (7): e38890. doi: 10,1371 /journal.pone.0038890

Redaktør: Pan-Chyr Yang, National Taiwan University Hospital, Taiwan

Modtaget: Januar 4, 2012; Accepteret: 14 maj 2012; Udgivet: den 16. juli, 2012