PLoS ONE: Den Tumor-Uddannet-makrofag Stigning for malignitet for Human kræft i bugspytkirtlen forhindres af zoledronsyre Acid

Abstrakt

Vi har tidligere defineret makrofager høstet fra bughulen af ​​nøgne mus med subkutane humane pancreas tumorer som ” tumor-uddannede-makrofager “(EDU) og makrofager høstet fra mus uden tumorer som” naive-makrofager “(naive), og viste, at Edu-makrofager fremmet tumorvækst og metastase. I denne undersøgelse blev Uddan- og Naive-makrofager sammenlignet for deres evne til at forbedre pancreascancer malignitet på celleniveau in vitro og in vivo. Den inhiberende virkning af zoledronsyre (ZA) på Edu-makrofag-forstærket metastase blev også bestemt. XPA1 humane pankreatiske cancerceller i Gelfoam samdyrket med Edu-makrofager prolifererede i højere grad i forhold til XPA1 celler dyrket med naive makrofager (

P

= 0,014). XPA1 celler udsat for medium konditioneret høstet fra Edu kultur markant øget proliferation (

P

= 0,016) og havde mere migration stimulation kapacitet (

P

0,001) sammenlignet med dyrkede kræftceller behandlet med konditioneret medium fra naive. Mitoseindekset af XPA1 celler, der udtrykker GFP i kernen og RFP i cytoplasmaet, steget betydeligt i vivo i nærvær af uddan- sammenlignet med naive makrofager (

P

= 0,001). Zoledronsyre (ZA) dræbte både Edu og naive in vitro. Edu fremmet tumorvækst og metastase i en ortotopisk musemodel af XPA1 human pankreatisk cancercellelinie. ZA reducerede primær tumorvækst (

P

= 0,006) og forhindrede metastaser (

P

= 0,025) fremmes af Edu-makrofager. Disse resultater indikerer, at ZA inhiberer forøget primær tumorvækst og metastase af human pancreascancer induceret af Edu-makrofager

Henvisning:. Hiroshima Y, Maawy A, Hassanein MK, Menen R, Momiyama M, Murakami T, et al . (2014) Den Tumor-Uddannet-makrofag Stigning for malignitet for Human kræft i bugspytkirtlen forhindres af zoledronsyre. PLoS ONE 9 (8): e103382. doi: 10,1371 /journal.pone.0103382

Redaktør: keping Xie, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, USA

Modtaget: 17. maj 2014; Accepteret: 1 juli 2014; Udgivet: 12. august 2014

Copyright: © 2014 Hiroshima et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet delvist af National Cancer Institute tilskud CA132971 og JSP’er KAKENHI Grant Numbers 26.830.081 til Y.H., 26.462.070 til DVS. og 24592009 til K.T. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Yukihiko Hiroshima, Shinji Miwa, Mako Yamamoto, Shuya Yano er datterselskaber af AntiCancer Inc. Mohamed K. Hassanein, Rhiana Menen, Masashi Momiyama, Fuminari Uehara og Takashi Chishima var tidligere afdelinger af AntiCancer Inc. Robert M. Hoffman er en ikke-lønnet datterselskab af AntiCancer Inc. AntiCancer Inc. markedsfører dyremodeller for kræft. Der er ikke andre konkurrerende interesser. Der er ingen patenter, produkter i udvikling eller markedsførte produkter til at erklære. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer, som beskrevet online i vejledningen for forfattere.

Introduktion

Tumoren mikromiljø (TME) spiller en væsentlig rolle for tumor adfærd. Vi har tidligere vist, at stromale celler er nødvendige for metastase at forekomme [1]. En anden indikation af den rolle, som TME påvirke tumor adfærd er orthotopisk implantation i musemodeller for intakt tumorvæv, herunder hele tumor stroma, hvilket resulterer i en meget højere metastatisk sats sammenlignet med ortotopisk injektion af cancerceller alene, hvor metastase er sjælden [2], [3].

Tumor-associerede makrofager er blevet vist at korrelere med dårlig prognose i adskillige undersøgelser [4], [5]. Makrofager kan fremme tumorprogression ved kronisk inflammation, matrix remodeling, fremme af tumor-celle invasion, intravasation, angiogenese, og såning på fjerne steder [6]. Vaskulær celleadhæsionsmolekyle-1 (VCAM-1) fremmer lunge metastase i brystcancer ved tethering cancerceller for lunge metastase-associerede makrofager [7], [8].

Vores laboratorium tidligere sammenlignet primær og metastatisk tumorvækst efter tilsætningen af ​​enten tumor-naive-makrofager (naive) eller makrofager tidligere har været udsat for bugspytkirtelkræft i en musemodel, som blev betegnet tumor-uddannede-makrofager (EDU) [8].

Vores tidligere resultater tyder at makrofager påvirke tumorer og tumorer påvirke makrofager, og at Edu-makrofager fremmer tumorprogression [8].

i den foreliggende undersøgelse, uddannelse og Naive-makrofager blev sammenlignet for deres evne til at fremme malignitet på celleniveau in vitro og in vivo. Effekten af ​​Zoledronsyre (ZA) til at hæmme Edu-makrofag-forstærket malignitet blev også bestemt.

Materialer og metoder

cellelinje og dyrkningsbetingelser

XPA1 menneskelige bugspytkirtlen cancer cellelinje blev anvendt i dette studie, som var en venlig gave fra Dr. Anirban Maitra ved Johns Hopkins University [6] – [16]. Den XPA1 cellelinien blev transformeret til stabilt udtrykker GFP i kernen og RFP i cytoplasmaet [9], [17], [18]. Celler blev opretholdt i RPMI 1640-medium suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS) og 2 mM glutamin (Gibco-BRL, Life Technologies Inc., Grand Island, NY). Alle medier blev suppleret med penicillin og streptomycin (Gibco-BRL). Celler blev dyrket ved 37 ° C med 5% CO

2 [19].

Dyr

NOD /SCID-mus og athymiske nøgne mus (

nu /nu

) blev 4-6 uger, (AntiCancer Inc., San Diego, Californien), der anvendes. Transgene nøgen C57 /B6-GFP-mus (AntiCancer, Inc., San Diego, CA). udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP) under kontrol af den kylling β-actinpromotoren og cytomegalovirus enhancer blev også anvendt [20] – [23]. Mus blev holdt i en barriere facilitet under HEPA filtrering. Mus blev fodret med autoklaveret laboratorium gnaver kost. Alle kirurgiske procedurer og billeddannelse blev udført med dyrene bedøvet ved intramuskulær injektion af 0,02 ml af en opløsning af 50% ketamin, 38% xylazin, og 12% acepromazinmaleat. Alle dyr blev udført med et anticancer Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) -protokol specifikt er godkendt til denne undersøgelse, og i overensstemmelse med de principper og procedurer, der er beskrevet i National Institute of Health Guide for pasning og anvendelse af dyr under Assurance Number A3873-1.

Subkutan tumorcelleimplantation

Humant XPA1 dual-color bugspytkirtelkræftceller blev høstet ved trypsinisering og vasket to gange med serum-frit medium. Celler (2 × 10

6 i 100 pi serum-frie medier) blev injiceret subkutant, inden for 30 min af høsten, over flankerne i transgene nude C57 /B6-GFP mus eller ikke-transgen

nu /nu

mus mellem 4 og 6 uger. Subkutane tumorer fik lov til at vokse i 2-4 uger, indtil store nok til yderligere forsøg eller efterfølgende ortotopisk implantation.

Real-time scanning af samspillet mellem værten makrofager og kræftceller i levende mus

efter musene blev bedøvet som beskrevet ovenfor blev et bueformet snit i den abdominale hud, og derefter subkutant bindevæv blev adskilt for at frigøre hudlap uden at skade den epigastriske cranialis arterie og vene [24]. Huden-flap blev spredt og et fast stativ. XPA1-GFP-RFP-celler (1 x 10

6 i 100 pi medium) blev drysset over overfladen af ​​huden-flappen af ​​mus (Fig. 1A) [25]. Fireogtyve timer senere blev den indvendige overflade af huden-flappen observeres direkte med FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) med excitation fra halvlederlasere ved 473 nm for GFP og 559 nm for RFP excitation. Fluorescens billeder blev opnået ved hjælp af 20 × /1,0 XLUMPLFLN mål [26]. Antallet af fagocyterede og mitotiske cancerceller blev talt, og det gennemsnitlige antal blev beregnet ud fra fem synsfelter ved 20 ganges forstørrelse.

(A) Scheme of afbildning interaktionerne mellem værten makrofager og cancerceller i levende mus. GFP nøgne mus med tofarvet XPA1 subkutane tumorer var kilden til Edu-makrofager. GFP nøgne mus uden tumorer var kilden til Naïve-makrofag. En hud-flap blev spredt og et fast stativ. XPA1-GFP-RFP-celler (1 x 10

6 i 100 pi medium) blev drysset over overfladen af ​​huden-flappen af ​​mus. Fireogtyve timer senere blev den indvendige overflade af huden-flappen observeres direkte med FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus). Scale barer: 10 mm. GFP vært makrofager og dual-color XPA1 cancerceller blev observeret hos naive-makrofag-mus (B) og Edu-makrofag-mus (C). Fagocyterede cancerceller (hvide pilespidser) og mitotiske cancerceller (gule pilespidser) blev påvist i begge grupper. Middelværdierne for phagocytosized og mitotiske cancerceller blev beregnet ud fra fire felter med en 20 ganges forstørrelse objektiv (D og E). Mitose steget betydeligt i kræftceller i mus med Edu-makrofager sammenlignet med kræftceller i mus med Naive-makrofager (

P

= 0,001). Mere fagocytose af cancerceller en tendens til at blive detekteret i mus med Naive-makrofager, (

P

= 0,061). Scale barer:. 20 um

makrofag høst

Transgene nøgen C57 /B6-GFP mus med tofarvet XPA1-GFP-RFP subkutane tumorer var kilde til Edu-makrofager . Transgene nude C57 /B6-GFP-mus uden tumorer var kilde til Naive-makrofager. Efter musene blev bedøvet som beskrevet ovenfor, blev 6 ml RPMI injiceres i intraperitoneal rum på hver mus under anvendelse af en 10 ml sprøjte og musene blev forsigtigt omrørt i 5 minutter. Sprøjten blev derefter genindsat og alle RPMI medium blev fjernet og anbragt i en plastik petriskål. Skålene blev derefter inkuberet ved 37 ° C i 4 timer. RPMI-medium blev derefter fjernet, og hver plade blev vasket 10-15 gange med 10 ml PBS, eller indtil alle røde blodlegemer, fibroblaster, og andre cellerester blev fjernet. Plader blev visualiseret under en IX71 fluorescens mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) for at bekræfte tilstedeværelsen af ​​GFP-udtrykkende makrofager. Makrofager blev skrabet af petriskålen ved anvendelse af en gummi spatel, samlet med en vask på 10 ml PBS og centrifugeret ved 850 rpm i 10 minutter. PBS blev derefter fjernet og makrofager blev resuspenderet i RPMI.

Proliferation assay under anvendelse af 3D kultur

Naïve- eller Edu-makrofager blev co-dyrket med dual-color XPA1-GFP-RFP cancerceller, men de blev adskilt fra hinanden af ​​Gelfoam (Pharmacia hvid firkant: Edu, hvid trekant: kontrolgruppe. *

P

0,05, **

P

0,01 (vs. kontrolgruppen). (E) Sårede områder blev målt i 72 timer efter at ridse monolaget af cancerceller og behandling med det konditionerede medium fra hver type makrofag. (F) Edu-makrofag-konditioneret medium-behandlede celler dækket en væsentligt større sårområde end andre grupper ved hvert tidspunkt. Diagrammer er afbildninger af sårede områder af hver gruppe målt med ImageJ af tre tilfældige områder i 3 dage. Data fra tre gentagne forsøg er vist som middelværdi ± SD (n = 5). *

P

0,05, **

P

. 0,01 (vs. kontrolgruppe)

MTS proliferationsanalysen

XPA1 GFP-RFP celler i eksponentiel vækstfase blev trypsinbehandlet, hvilket gav en cellesuspension og podedes på plader med 96 brønde (1 x 10

4 celler /brønd) i tre eksemplarer. Konditioneret medium blev høstet fra hver type makrofager dyrket i RPMI 1640 med 10% FBS i 72 timer. Dyrkningsmediet blev fjernet fra brøndene med XPAI-GFP-RFP-celler, og det konditionerede medium blev tilsat efter at cellerne fik lov til at klæbe i 24 timer. Efter pladerne blev inkuberet ved 37 ° C i 5% CO

2 blev MTS-assayet udført på forskellige tidspunkter (0-72 h) ved hjælp af Cell Titer 96 assay (Promega, Madison, WI, USA) ifølge producentens instruktioner.

sårheling assay

Celler blev dyrket i plader med 24 brønde i 500 pi medium per brønd indtil konfluens var nået. Et sår blev fremstillet ved at skrabe cellerne med en 10 pi pipettespids i PBS, efterfulgt af erstatning med konditioneret medium, der blev høstet fra hver makrofag typen dyrket i RPMI 1640 med 10% FBS i 72 timer. Kontrolgruppen fik det samme volumen af ​​frisk dyrkningsmedium uden serum. De sårede monolag blev photomicrographed med IX71 fluorescens mikroskop ved forskellige tidspunkter (0-72 h) efter at være blevet ridset. Cellemigrering blev vurderet ved at måle gap størrelser i flere felter med Image J (National Institute of Mental Health, Bethesda, MD).

cytotoksicitet assay

Naïve- eller Edu-makrofager blev podet på 6 Tja plader (2 × 10

5 celler /brønd). Zoledronsyre (ZA) (Novartis Pharmaceuticals Corporation, NJ, USA) blev tilsat til hver brønd efter at cellerne fik lov til at klæbe i 24 timer. De endelige koncentrationer af ZA var som følger: 0, 10, 50 og 100 uM. Efter 48 timer blev ZA-holdige medium fjernet og erstattet med vækstmedium i 24 timer. Efter hver brønd blev vasket 5 gange med 3 ml PBS, blev antallet af GFP-udtrykkende makrofager tælles med IX71 fluorescens mikroskop. Det gennemsnitlige makrofag antal blev beregnet ud fra fem synsfelter ved 10 ganges forstørrelse. Alle målinger blev udført tredobbelt.

ortotopisk tumorimplantation

En lille 6- til 10-mm tværgående indsnit i venstre side af musen gennem huden og peritoneum. Halen af ​​pancreas blev eksponeret gennem denne incision og en enkelt tumor fragment (3 mm

3) fra en XPA1 tofarvet subkutan tumor blev syet til halen i bugspytkirtlen hjælp 8-0 nylon kirurgiske suturer (Ethilon; Ethicon Inc., NJ, USA). Efter endt halen i bugspytkirtlen returneres til abdomen, og snittet blev lukket i et lag under anvendelse af 6-0 nylon kirurgiske suturer (Ethilon) [2], [27] – [29].

ZA behandling af XPA1 ortotopisk nøgen musemodel

nøgne mus blev orthotopisk implanteret med XPA1-GFP-RFP celler som beskrevet ovenfor. Musene blev behandlet i følgende grupper: (1) saltvand (køretøj /kontrol), (2) Naïve- makrofager (3) Edu-makrofager, (4) Edu-makrofager + ZA. Makrofager (1 x 10

6 celler i 200 pi PBS) injiceret ip ugentligt som tidligere beskrevet [8]. ZA blev subkutant injiceret dagligt fra dag 21 efter tumorimplantation i 4 uger. Hver behandling arm involveret 8 tumor-bærende mus. Ingen væsentlige virkninger på kropsvægt, sygelighed, eller svær toksicitet blev observeret i nogen behandling arm. Dyr undergik laparotomi på 7 uger, og både primære tumorer og metastaser blev afbildet ved hjælp af OV100 variabel forstørrelse Mindre Husdyrs Imaging System (Olympus, Tokyo, Japan) [24] og vejet og høstet til analyse.

Databehandling og statistisk analyse

PASW Statistics 18,0 (SPSS, Inc) blev anvendt til alle statistiske analyser. Den t-test blev anvendt til sammenligning af kontinuerlige variabler mellem to grupper. Variansanalyse modeller blev anvendt til at sammenligne flere grupper. En p-værdi på 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant for alle sammenligninger.

Resultater og Diskussion

Edu-makrofager stimulerer kræft-celle mitose in vivo

Dual-farve XPA1-GFP -RFP celler (1 x 10

6) blev drysset over overfladen af ​​en musehud-flap. Fireogtyve timer senere blev den indvendige overflade af huden-flappen observeres direkte med FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus) (fig. 1A). GFP-udtrykkende host makrofager og dual-color XPA1 cancerceller blev observeret hos naive-makrofag-mus (fig. 1B) og Edu-makrofag-mus (fig. 1C). Cancer-celle mitose var signifikant større i cancerceller i Edu-makrofag mus sammenlignet med cancerceller hos naive-makrofag mus (

P

= 0,001) (fig. 1E). Fagocytose af kræftceller tendens til at være større i Naïve-makrofag mus sammenlignet med Edu-makrofag mus (

P

= 0,061) (fig. 1D).

Edu-makrofager stimulerer proliferation af cancerceller

in vitro

Naïve- eller Edu-makrofag blev dyrket med dual-color XPA1 cancerceller adskilt fra hinanden af ​​Gelfoam (fig. 2A). Otteogfyrre timer senere blev konfokal mikroskopi billeder opnået fra overfladen til 200 um dybde hver 1 um og blev stablet langs Z-aksen (fig. 2B). Edu-makrofag-behandlede cancerceller prolifererede i højere grad sammenlignet med naive-makrofag-behandlede cancerceller (

P

= 0,014) (fig. 2c). Konditioneret medium fra Edu-makrofager stimuleret proliferation af cancerceller sammenlignet med kontrolgruppen ubehandlede cancerceller (24 timer;

P

= 0,001, 48 h;

P

= 0,003, 72 H;

P

= 0,012, henholdsvis). I modsætning hertil var der ingen signifikant forskel mellem konditioneret medium fra naive makrofager og frisk medium på proliferation af XPA1 celler (fig. 2D).

Edu-makrofag-konditioneret medium-behandlede cancerceller dækket en væsentligt større sår område end ubehandlede kontrol celler på hver tidspunkt (24 timer;

P

= 0,008, 48 h;

P

= 0,002, 72 timer;

P

0,001 henholdsvis) (fig. 2E og 2F).

ZA inhiberer XPA1 pancreas tumorprogression induceret af Edu-makrofager

Edu-makrofager fremmet primære tumorvækst sammenlignet med kontrol og Naïve- makrofag (kontrol

P

= 0,026, Naïve;

P

= 0,03). Edu-makrofager fremmes også metastase i forhold til at styre og Naive-makrofager (kontrol;

P

= 0,012, Naïve;

P

= 0,015) (fig 3C-E.). ZA er blevet vist at dræbe makrofager og forhindre metastase [30], [31]. Antallet af både Naïve- og Edu-makrofager blev signifikant reduceret med ZA ved hver dosis in vitro (fig. 3A og 3B). I en orthotopisk musemodel af pancreascancer, ZA undertrykte signifikant Edu-makrofag, stimulerede tumorvækst, og forhindrede metastase sammenlignet med mus behandlet med kun Edu-makrofager (primær tumor;

P

= 0,006, metastase;

P

= 0,025) (fig. 3C-E).

(A) Repræsentative fluorescens billeder af Edu-makrofager efter ZA behandling. Scale bars: 10 um. (B) Bar grafer af antallet af Naïve- eller Edu-makrofager efter ZA behandling in vitro. Antallet af både Naïve- og Edu-makrofager behandlet med ZA blev væsentligt reduceret ved hver dosis. ZA dræbte både naive og Edu på en dosis-afhængig måde. **

P

0,01 (vs. kontrolgruppen). (C) Intravital billeddannelse af XPA1-RFP tumorbærende mus ved afslutning af forsøget. Scale barer: 10 mm. (D) Den primære tumor vægt Edu-makrofag-behandlede mus blev væsentligt forøget i forhold til at styre eller naive-makrofag-behandlede mus (kontrol:

P

= 0,026; Naïve:

P

= 0,03, henholdsvis). Den primære tumor vægt af Edu-makrofag + ZA-behandlede mus blev signifikant reduceret sammenlignet med Edu-makrofag-behandlede mus (

P

= 0,006). *

P

0,05, **

P

0,01. (E) Den metastaser vægt Edu-makrofag-behandlede mus blev væsentligt forøget i forhold til at styre eller Naive-makrofag-behandlede mus (kontrol;

P

= 0,012, Naïve;

P

= 0,015 , henholdsvis). Nr metastase blev påvist i Edu + ZA-behandlede mus. Der var en signifikant forskel mellem Edu og Edu + ZA-behandlede mus (

P

= 0,025). *

P

. 0,05

I vores tidligere undersøgelse, GFP-udtrykkende makrofager fra GFP transgene nøgne mus med en subkutan BxPC3-RFP human pancreas tumor blev brugt som en kilde til edu-makrofager og sammenlignet med naive makrofager fra transgene GFP nøgne mus uden tumorer. Når uddan- eller Naive-makrofager blev derefter implanteret i nøgne mus med BxPC-3-RFP voksende orthotopisk, EDU-makrofager stimuleret tumorvækst og metastase i højere grad end naive makrofager [8].

i en anden tidligere undersøgelse blev humane perifere blod mononukleære celler eksponeret for konditioneret medium fra BxPC-3 humane pankreatiske cancerceller, hos normale eller høje glucoseniveauer. De bugspytkirtelkræftceller uddannede makrofagerne til at være mere invasive in vitro, som blev yderligere forstærket af hyperglykæmi [32].

I en anden tidligere undersøgelse, ZA reducerede makrofag-induceret invasivitet af brystcancerceller. ZA ramt makrofager, men ikke kræftcellerne [33].

En anden tidligere undersøgelse viste, at både peritoneale og bryst-tumor associerede makrofager hurtigt tog ZA in vivo, yderligere tyder makrofager er et mål for den anti-tumor effekt af ZA [34].

i en anden tidligere undersøgelse, ZA direkte forårsaget apoptose på bugspytkirtlen carcinomceller og hæmmede deres invasiv, og såvel som gøre bugspytkirtelkræftceller mere sårbare over for T-celle angreb [35].

Den foreliggende undersøgelse anvendte subcellulære billeddiagnostiske teknikker vi tidligere har udviklet [36] til direkte billede, Edu-makrofager har reduceret fagocytose evne og kan direkte simulere mitose af kræftcellerne, som visualiseres i realtid. I modsætning til tidligere undersøgelser, at evaluere effekten af ​​ZA den foreliggende rapport anvendt en ortotopisk metastatisk musemodel for at demonstrere effekten af ​​ZA på stimulering af Edu-makrofager på metastaser samt på den primære tumor. I den foreliggende undersøgelse blev makrofagerne isoleret fra den peritoneale kavitet fra tumorbærende mus eller kontrolmus, langt fra tumoren og administreres systemisk. Resultaterne indikerede, at tumorer havde fjernt indvirkning på makrofager og omvendt, og at ZA kunne systemisk inhibere sådanne virkninger.

ZA reduceret Edu-stimulerede primære tumorvækst og metastase til ca. kontrolværdier tyder den store ZA virkning var på edu-makrofager, selvom en relativt mindre direkte inhiberende virkning på tumoren selv ved ZA kan ikke udelukkes som beskrevet i en tidligere undersøgelse [35]. ZA er tidligere blevet rapporteret at have større makrofag drab effekt end andre bisphosphonater og blev derfor valgt til den foreliggende undersøgelse [37].

Den foreliggende undersøgelse viste, at Edu-makrofager fremmer malignitet. Dette blev vist ved den stimulerende virkning af Edu-makrofager på cancer-celle mitose og efterfølgende spredning samt på metastase. Som vi sagde tidligere [8], kan tumorer påvirke makrofager, som igen kan påvirke tumorer. Tumorprogression induceret af Edu-makrofager blev inhiberet af ZA, der inhiberede Edu-makrofag-forstærket primær tumorvækst og forhindrede metastase. De mekanismer, som Edu-makrofager stimulerer kræft-celle proliferation og progression vil blive genstand for en fremtidig undersøgelse.

Tak

Dedication. Dette papir er dedikeret til mindet om A. R. Moossa, M.D.