Anvendelse af en ELISA Til Bestem Antigen – Antibody Binding

enzymmaerket Assay, ELISA, er et meget følsomt immunoeassay, der bruges i stedet for radioimmunoassay da det ikke indebærer særlige håndtering og bortskaffelse procedurer, der kræver arbejde med radioaktive stoffer. ELISA afhængig af antistofferne til påvisning af tilstedeværelsen af ​​antigener i væskeformige prøver, således skifter fra en klar væske til et farvet én. Fordi de er antistof-baseret, er ELISA’er kaldes immunoassays. ELISA’er kan detektere små mængder af sygdomsfremkaldende agenser i prøver i f.eks legemsvæsker, før kroppen havde haft en chance for at opbygge et immunrespons. Når eksperimentere anvendelse af et ELISA antistofferne er til stede i prøverne bindes til antigenet pladen og efter fjernelse af overskydende antistof, kan antistof påvises ved tilsætning af enzym-konjugeret andet antistof.

Formålet med denne undersøgelse er at undersøge to ting: for det første er der antigen-antistof-binding på en plade, der indeholder to forskellige antistoffer specifikke for to forskellige antigener: hønseæglysozym (HEL) og bovint serumalbumin ( BSA), og for det andet, hvor meget af binding er til stede i pladen? For at undersøge disse spørgsmål, ved hjælp af en enzymmaerket Assay at hjælpe skærm til antistof-secernerende hybridomer, hvilket er både meget følsomme og rimeligt at udføre. Fremgangsmåden i anvendelse af en ELISA har øget forståelse af bindinger af antigen til antistof af sådan afprøvning som HIV, lægemiddel (marihuana), graviditeter, etc.

Formålet med en ELISA er at bestemme, om bestemte antigen-antistof-bindinger er til stede i en prøve; hvis der er antistoffer, som binder til antigener til stede, en ELISA med til at bestemme, hvor meget. Der er to væsentlige variationer med denne metode; en er så vi definere mængden af ​​antigen-antistof-binding og den anden, tidligere anført er så vi kan se, hvor meget antistof er til stede i vores prøve. I dette laboratorium eksperiment har vi overtrukket en mikro-plade med brønde med antigener. Antigenet er stærkt absorberet af plast og forbliver fastgjort til brøndens overflade under hele proceduren. Efter belægning og tilsætning af antistofferne, var vi i stand til at bestemme antigen-antistof-binding.

I de fleste eksperimenter, forskere bruge BSA og HEL som ubeslægtede antigener til kontrol for ikke-specifik antigen reaktivitet. For eksempel bør brønde overtrukket med HEL antigen ikke viser positive tegn, når anti-BSA-antistoffer er til stede, og vice versa. Det betyder den mængde enzym-konjugeret antistof bundet i hver brønd er i stand til at hydrolysere et farveløst substrat til dannelse af et farvet produkt.

Som konklusion resultaterne af anvendelse af en ELISA bør konkludere, at antigener binder til antistoffer, med de medfølgende antigener til stede. Det sekundære antistof er bundet til et enzym, der kemisk ændrer enzymsubstratet, dreje den fra en farveløs opløsning til en gul opløsning. En side bemærkning dog tomme brønde uden antigener skal trækkes fra styrepladen men ikke danner nogen af ​​de antigen-coatede plader. Dette resulterer i det sekundære antistof er kovalent bundet, konjugeret til et enzym, der katalyserer en kemisk reaktion, når der tilsættes enzymsubstratet. Dette ville frembringe en farveændring, hvis serumprøven indeholdt antistof mod bakterierne, fordi enzymet bundet sekundært antistof ville binde til det primære antistof allerede bundet til antigen i brøndene.