PLoS ONE: Den kliniske betydning af kræft-associerede mikrovaskulatur og fibroblast i Advanced tarmkræft Patienter med synkrone eller Metachronous Metastaser

Abstrakt

Baggrund

Vi havde til formål at vurdere den kliniske betydning af mikrokardannelse densitet (MVD), lymfekar densitet (LVD), og cancer-associerede fibroblaster (CAF) i relation til tumor placering i fremskreden kolorektal cancer (CRC).

Metoder

Brug immunhistokemi undersøgte vi 181 avancerede CRC patienter for CD31 og D2-40 at måle MVD og LVD henholdsvis α-glatmuskelactin (SMA) og desmin at identificere CAF, og PTEN at undersøge genetiske ændringer af CAF. For at evaluere den regionale heterogenitet af disse egenskaber, vi undersøgte væv fra fire steder (det center og periferi af den primære cancer, en fjern metastase, og en lymfeknude metastase) i hver patient.

Resultater

MVD, LVD, og ​​CAF viste signifikant heterogenitet i forhold til tumoren placering. LVD var den største i midten af ​​de primære kræftformer, og mængden af ​​CAF var det laveste i fjernmetastaser. I fjernmetastaser, dem fra lungerne havde højere LVD og MVD, men færre CAF end dem fra leveren, bughinden eller æggestok. Patienter med lav MVD og LVD i centrum af den primære cancer havde dårligere resultater og patienter med få CAF i fjerne metastaser og i den primære tumor havde en lavere overlevelsesrate. PTEN udtryk i CAF i fjernmetastaser gik tabt i 11 af 181 CRC patienter (6,1%), som blev forbundet med en dårligere prognose.

Konklusioner

mikromiljø, herunder kræft-associeret microvasculature og fibroblaster, er heterogent med hensyn til tumoren placering i CRC patienter. Derfor bør der tages heterogenitet mikromiljøer i betragtning ved behandlingen af ​​CRC patienter

Henvisning:. Kwak Y, Lee HE, Kim WH, Kim DW, Kang SB, Lee HS (2014) Den kliniske betydning af kræft-associerede mikrovaskulatur og fibroblast i Advanced tarmkræft Patienter med synkrone eller Metachronous Metastaser. PLoS ONE 9 (3): e91811. doi: 10,1371 /journal.pone.0091811

Redaktør: Anthony W. I. Lo, Den kinesiske University of Hong Kong, Hongkong

Modtaget: 11 januar, 2014 Accepteret: 14 februar 2014; Udgivet: 18 marts 2014

Copyright: © 2014 Kwak et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af tilskud nummer 03-2011-012 fra Seoul National Bundang Research Fund Universitetshospital. Den bidragyder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Selvom dødelighed af kolorektal cancer (CRC) patienter er faldet i de fleste vestlige lande og i flere udviklingslande i Asien, avancerede CRC patienter, der oprindeligt er til stede med stadie IV sygdom eller dem, der udvikler fjernmetastaser flere måneder efter diagnose stadig have en lavere fem-års overlevelse [1], [2] ._ ENREF_4 nylig er rækken af ​​systemisk kemoterapi udvidet og målrettet terapi, herunder epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) og vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF) inhibitor terapier , er blevet anvendt i avancerede CRC patienter, stigende patientoverlevelse [3]. Men nogle CRC patienter reagerer dårligt på målrettet terapi trods præsentere positive resultater i målrettede terapi-specifik mutation undersøgelser [4]. En mulig forklaring på denne terapeutiske fiasko er tumor heterogenitet; flere undersøgelser har rapporteret, at CRCs besidder en heterogen genotype eller fænotype, herunder

KRAS

, p53, og

BRAF

[5] – [7]. Derfor, for at de forskellige karakteristika for den primære tumor websted og de tilsvarende metastatisk organ behov afklares for at forbedre forvaltningen af ​​CRC patienter med metastaserende sygdomme. Desuden at forstå de klinisk-patologiske kendetegn ved fremskreden CRC er vigtig for udvikling og forbedring af systemiske behandlinger.

Da Paget et al. først beskrev kræft mikromiljø med “frø og jord” teori [8], har der været voksende beviser for, at kræft-associerede stroma kan påvirke kræftceller selv og bidrage til kræft progression [9]. De vigtigste komponenter i kræft mikromiljø er mikrovaskulatur (mikrokar og lymfekar), inflammatoriske celler og cancer-associerede fibroblaster (CAF) [10] – [12]. Den nuværende metode til at kontrollere angiogene og lymphangiogenetic aktivitet i kræftvæv er at vurdere mikrokar densitet (MVD) og lymfe fartøj densitet (LVD), hhv. MVD er blevet foreslået som en surrogatmarkør for cancerassocieret angiogenese til at identificere patienter med høj risiko for tilbagefald eller dem med dårlige prognoser for forskellige cancerformer, herunder CRC [13], [14]; imidlertid den prognostiske korrelation af angiogenese i CRC er stadig kontroversiel [15], [16]. Svarende til angiogenese, har LVD modtaget interesse som et middel til lymfatisk metastase og overlevelse [17], [18], men dens rolle i tumorprogression er stadig uklart [19]. Den anden fremtrædende del af stroma, CAF, konsekvent aktiveret og påvirker mange aspekter af tumor initiering, invasion, og progression [9]. Mens nogle undersøgelser har antydet, at CAF kan hæmme tumor progression [20], [21], andre undersøgelser har foreslået, at CAF kan fremme progression i prostata, bryst, og hudkræft [22] – [24]. I forbindelse med CRC, Tsujino et al. har antydet, at α-glat muskulatur actin (SMA) udtrykkende CAF kunne være en nyttig indikator for dårlig prognose. Imidlertid blev disse resultater begrænset til trin II og III CRCs [25].

Udover cancerceller, genetiske ændringer i CAF har vist herunder tab af heterozygositet, mikrosatellit ustabilitet, og genetiske mutationer [26], [27]. For nylig blev den genetiske inaktivering af PTEN i CAF rapporteret i brystkræftpatienter [28]. Trimboli et al. identificeret, PTEN tab i stromale fibroblaster resulterede i omfattende ekstracellulær matrix remodellering og angiogenese, som er karakteristisk for tumor progression [28]. Imidlertid har udtryk tab af PTEN og dens kliniske betydning ikke blevet undersøgt i patienter med tarmkræft.

Formålet med denne undersøgelse var at undersøge karakteristika mikromiljøer, herunder microvasculatures og CAF, i avancerede CRC patienter. Derudover vurderede vi den intratumoral heterogenitet i den primære tumor og uoverensstemmelse mellem primær tumor og fjernmetastaser mikromiljøer.

Materialer og metoder

Patient valg

I alt 181 avanceret CRC patienter med synkrone eller metachronous metastaser, som blev behandlet ved Seoul National University Bundang Hospital (Seongnam-si, Sydkorea) mellem 2003 og 2009, blev indrulleret i denne undersøgelse. Synkrone metastaser blev defineret som fjernmetastaser indtræffer inden seks måneder efter primær diagnose af CRC og metachronous metastaser var dem, der forekommer efter dette tidspunkt [29]. Cancervævet anvendt i denne undersøgelse blev modtaget fra patienter, der havde kirurgisk resektion af både den primære tumor og beslægtede metastaser. Ingen af ​​patienterne havde fået kemo- eller strålebehandling før resektion af den primære tumor. Medicinske diagrammer og patologi rapporter blev revideret til at registrere kliniske og patologiske data. Objektglas blev gennemgået for at afgøre den histologiske type i henhold til WHO klassifikationen [30]. Opfølgning oplysninger, herunder patientens resultat og tidsintervallet mellem datoen for kirurgisk resektion og død blev indsamlet. Sagerne tabte til opfølgning og dødsfald fra andre end CRC årsager blev anset censurerede data for overlevelse analyse. Den mediane follow-up periode var 37,9 måneder (interval, 0.8-104.6 måneder).

Etisk erklæring

Alle humane prøver blev indhentet fra de filer af kirurgisk resektion sager undersøgt ved Patologisk Institut , Seoul National University Bundang Hospital for den patologiske diagnose. Den retrospektiv undersøgelse blev udført under anvendelse af de opbevarede prøver efter patologisk diagnose, og alle prøverne blev anonymiseret før undersøgelsen. Deltagerne har ikke skriftligt informeret samtykke i denne undersøgelse. Undersøgelsen blev godkendt af Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital på betingelse af anonymisering. (Reference: B-1109 /136-302)

Tissue array-metoder

For at vurdere regionale stromale forskelle, blev der udtaget prøver fra hver patient fra fire områder: centrum og periferien af ​​den primære kræft, fjernmetastaser, og lymfeknudemetastaser. De fjerne metastatiske steder til vævet arrays var som følger: lever i 83 tilfælde (45,9%), lunge i 38 tilfælde (21,0%), seedings i 38 tilfælde (21,0%), fjerne lymfeknuder i 6 tilfælde (3,3%), og æggestok i 16 tilfælde (8,3%). De repræsentative kerne vævsprøver (2 mm i diameter) blev taget fra individuelle paraffinblokke og omstruktureret i nye væv array-blokke ved hjælp af en trepan apparat (Superbiochips Laboratories, Seoul, Sydkorea) [31].

Immunhistokemi

Array slides blev mærket ved immunhistokemi hjælp antistoffer til CD31 (1:100, DAKO, Glostrup, Danmark), D2-40 (1:100, DAKO), SMA (1:1000, NeoMarkers, Fremont, CA, USA ), desmin (1:300, DAKO) og PTEN (1:80, Epitomics, Burlingame, CA, USA) efter en mikrobølgeovn antigen procedure hentning undtagen SMA. Ikke-reaktive steder blev blokeret under anvendelse af 1% hesteserum i Tris-bufret saltvand (pH 6,0) i 3 min. Primære antistoffer blev anvendt og antistofbinding blev påvist med diaminobenzidin (DAB). Snit blev modfarvet med hæmatoxylin. Reaktiviteten af ​​PTEN i hvert vævssnit blev scoret som negativ, svag eller stærk, og procentdelen af ​​PTEN-positive fibroblaster blev kvantificeret. For den statistiske analyse blev prøven anses PTEN-positiv, hvis 5% eller mere CAF blev scoret som stærke positive.

Beregning af LSD, MVD og CAF bruger digital patologi

Slides blev samtidig vurderet ved to patologer (HEL og HSL) under anvendelse af lysmikroskopi for at forbedre nøjagtigheden af ​​resultaterne (fig. 1). CRC-celler blev betragtet som interne negative kontroller. Mellem- til store og mellemstore skibe blev betragtet som interne positive kontroller for CD31 og D2-40. Intestinal muskulære lag eller mellemlang til store og mellemstore skibe blev betragtet som interne positive kontroller for desmin og SMA. Prøver viser upassende farvning i interne negative eller positive kontroller blev betragtet som ikke-informative og blev udelukket fra analysen. Slides blev scannet ved hjælp af en Aperio ScanScope® CS instrument (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA) ved 20 × forstørrelse. Efterfølgende blev de analyseret i ImageScope ™ ved hjælp af mikrokardannelse Analyse v1 algoritme (Aperio Technologies), og MVD og LVD blev beregnet. Fordi desmin-positive muscularis mucosa og propria er positive for SMA immunofarvning, området af CAF (mm

2) blev beregnet ved at subtrahere områderne desmin-farvning fra den for SMA-farvning. (SMA – desmin)

Statistisk analyse

En chi-squared test eller Fishers eksakte test (2-sidet) for ikke-kontinuerlige variable og Mann-Whitney eller Kruskal-Wallis-analyse for kontinuerlige variabler blev anvendt til at sammenligne hver parameter med hensyn til CRC-stedet og i henhold til dens clinicopathologic funktioner. Korrelationen mellem kontinuerlige variabler blev analyseret under anvendelse af Pearson korrelationskoefficienten. For at bestemme de bedste cut-offs af kontinuerte variable til at forudsige patientens overlevelse, blev den maksimale chi-squared metode udføres ved hjælp af R-programmet (https://cran.r-project.org/). De overordnede overlevelseskurver blev afbildet under anvendelse af Kaplan-Meier produkt-grænse fremgangsmåde og betydningen af ​​forskellene mellem disse kurver blev bestemt ved anvendelse af log-rank test. En univariate og multivariat regressionsanalyse blev udført under anvendelse af Cox ‘Cox proportional hazards model til bestemmelse hazard ratio (timer).

P

-værdier på mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser, eksklusive den maksimale chi-squared test blev udført med IBM SPSS Statistics 20 (Armonk, NY, USA).

Resultater

1. Heterogenitet cancerassocieret stroma ifølge undersøgt tumor steder Salg

klinisk-patologiske egenskaber ved de avancerede CRC patienter er beskrevet i tabel 1. De CRC patienter med synkrone metastaser havde aggressive funktioner, herunder større tumorstørrelse, mere avanceret pT og pN fase, og tilstedeværelsen af ​​perineurale og venøs invasion end patienter med metachronous metastaser (p 0,05).

de heterogene værdier for LSD, MVD, og ​​CAF-området er vist i fig 2. LVD var den højeste i midten af ​​de primære kræftformer (median, interkvartilt rækkevidde (IQR), 37,00, 10,50-81,00) end noget andet site (5,00, 1,00 til 23,75 i periferien, 2,50, 1,00 til 15,00 i lymfeknudemetastaser, 3,00, 1,00 -20,00 i fjerne metastaser). MVD var lavere i fjerne metastaser (median, IQR; 641,50, 428,00 til 1006,75) end ved periferien af ​​den primære cancer (731,00, 508,25 til 1049,75) og lymfeknudemetastaser (893.50, 520,25-1275,25). Området besat af CAF var den laveste i de fjerne metastaser (median, IQR, 0,91, 0,68-1,18) end noget andet site (1,12, 0,88 til 1,41 i midten, 1,22, 0,96-1,54 i periferien, 1,40, 1,00- 1,71 i lymfeknudemetastaser). Derudover stromale egenskaber varierede i forhold til den metastatiske organ undersøges. MVD og LVD var højere i lungemetastaser end dem i leveren, bughinden eller lymfeknuder (p 0,001;. Figur 3). Men mængden af ​​CAF var overensstemmelse mellem de forskellige metastatiske organer (p = 0,180).

LVD (A), MVD (B) og CAF-området (C) var signifikant forskellig i henhold til hver tumor placering.

de karakteristiske træk ved cancer-associerede stroma afveg med hensyn til den metastatiske site. LVD (A) og MVD (B) var større i metastatiske tumor prøver indsamlet fra lungerne end i prøver indsamlet fra andre metastatiske sites (p 0,001). Men mængden af ​​CAF var ikke signifikant forskellig mellem metastatiske sites (C).

På trods af den heterogenitet stromale egenskaber, CRC sager med højere LSD, MVD og CAF i centrum af de primære kræftformer havde en tendens højere LVD, MVD og CAF i periferien (p 0,05; tabel S1). Men LVD i centrum og periferien af ​​primær kræft blev ikke korreleret med LSD i beslægtede fjernmetastaser (tabel S1). Desuden blev mængden af ​​mikrovaskulatur signifikant korreleret med mængden af ​​CAF (Tabel S2).

2. Klinisk betydning af cancer-associeret stroma i avancerede CRC’er

MVD, LSD, og ​​mængden af ​​CAF til stede ved hver tumor placering blev sammenlignet i henhold til deres clinicopathologic funktioner (tabel 2). Høj kvalitet CRC’er var forbundet med lavere CAF i prøver taget fra den centrale cancer stedet (p = 0,041). Sammenlignet med synkrone metastaser, patienterne med metachronous metastaser havde højere LVD i centrum og periferi af den primære cancer og havde højere MVD i lymfeknudemetastaser. De fleste patienter med metachronous metastaser blev behandlet af adjuverende kemoterapi før metastasectomy. LVD og MVD i fjernmetastaser var væsentligt højere i de patienter, der havde fået kemoterapi før metastasectomy end dem, der ikke gjorde (p = 0,011 og 0,048 henholdsvis).

3. Ekspression tab af PTEN i CAF

PTEN blev udtrykt i cytoplasmaet og undertiden kernen i både kræft og ikke neoplastiske celler, når undersøgt under anvendelse af immunhistokemi. Ekspression af PTEN gik tabt i 8 tilfælde i centrum, 2 tilfælde i periferien, 4 tilfælde i lymfeknudemetastaser, og 11 tilfælde i fjernmetastaser (Tabel S3). I alle 11 fjerne metastaser med PTEN tab, PTEN ekspression var intakt i både centrum og periferi af primær cancer (data ikke vist). PTEN tab i fjernmetastaser var korreleret med synkron metastaser (p = 0,018).

4. Kræft-associeret stroma og patient prognose

Ved at bruge de opnåede cut-offs, lavere LSD, MVD og CAF i centrum, LVD og CAF i periferien og MVD og CAF i fjernmetastaser var alle signifikant korreleret med lavere overlevelse (p 0,05;. figur S1). Blandt andet clinicopathologic funktioner, synkron metastase, alderdom, større størrelse, høj histologiske kvalitet, avanceret pT og pN fase og tilstedeværelsen af ​​perineurale invasion var forbundet med en dårligere prognose (tabel 3). Ved multivariat Cox regressionsanalyse, hazard ratio for synkron versus metachronous var den højeste (4,029) med den laveste p-værdi (p 0,001). CAF i fjernmetastaser, LVD og MVD i centrum, LSD i periferien, alder og perineurale invasion også uafhængigt forudsagt patient overlevelse. Desuden blev tab af PTEN ekspression i CAF i fjerne metastaser forbundet med en dårligere prognose (p = 0,042, Fig S2), men ikke i primær cancer eller lymfeknudemetastase

Discussion

.

carcinomceller i forskellige vævsområder har distinkte karakteristika [32]. I centrale områder af tumoren, carcinomceller opretholde en epitelcelle fænotype, men carcinomceller i den invasive foran erhverve en mere malign og mesenchymale fænotype og menes at have en forøget vandrende kapacitet og bidrage til metastatiske sygdomme. Disse metastatiske celler kan gendanne epitel fænotype ved metastatiske steder [33]. Foruden carcinomceller selv, er mikromiljø foreslået at være ujævn inden for en given tumor fordi tumordannelse og progression involverer co-evolution af cancerceller og mikromiljøer [34]. Den foreliggende undersøgelse viste, at kræften-associerede mikromiljø havde også forskellige karakteristika i forskellige områder. Af de undersøgte lokaliteter, LSD var højest i midten af ​​den primære kræft. MVD var lidt højere i midten end ved periferien af ​​den primære cancer, men denne forskel var ikke statistisk signifikant. Interessant mængden af ​​CAF i fjerne metastaser var signifikant lavere end i midten og periferien af ​​den primære cancer. Vi viser, at det stromale mikromiljø har regional heterogenitet både inden for primær tumor og mellem den primære websted og dets relaterede metastaser. Desuden vores data antyder, at det stromale heterogenitet kan skyldes tumor heterogenitet. Derfor ville det være gavnligt at overveje både stromale og tumor celle heterogenitet for at håndtere CRC patienter bedre.

Vi evaluerede MVD, LVD, og ​​mængden af ​​CAF i metastatiske væv af forskellige organer, herunder lever, lunge , peritoneal podning fjernt lymfeknuder, og æggestok. Af de metastatiske organer vi undersøgt, både LVD og MVD var den højeste i lungen. I vores tidligere undersøgelse,

KRAS

uoverensstemmelse sats var også signifikant højere i matchede lungemetastaser end i andre matchede metastatiske organer [35]. Den underliggende mekanisme er ikke kendt. Det kunne være, at primære CRCs med høj LVD og MVD har en tendens til at producere lungemetastaser; dog vores resultater viste, at LVD og MVD i midten og ved periferien af ​​de primære cancere var lavere hos patienter med lungemetastaser (data ikke vist). Alternativt kan det være på grund af de fysiologiske egenskaber metastatiske organer, interaktioner mellem cancerceller og mikromiljø inden den metastatiske organ eller egenskaberne ved de kræft cellekloner tilbøjelige til lunge metastase. Men tekniske eller stikprøvefejl også kan være muligt, hvilket yderligere storstilede undersøgelser er påkrævet.

Selvom talrige undersøgelser har forsøgt at påvise en sammenhæng mellem tumormikromiljøet egenskaber og overlevelse, de prognostiske konsekvenser af MVD og LVD er stadig kontroversiel. Nogle undersøgelser er blevet præsenteret, at aktiv angiogenese og lymfangiogenese repræsenteret ved høj MVD og LVD er forbundet med dårlig prognose og aggressive clinicopathologic faktorer [36], [37]. Seneste meta-analyse har vist, at LSD signifikant var forbundet med sygdomsfri overlevelse, men ikke samlet overlevelse [38]. Andre undersøgelser har rapporteret nogen statistisk signifikans af MVD og LVD på overlevelse [39]. Prall et al. har rapporteret, at høj MVD og LVD er relateret med bedre overlevelse i en fortløbende serie og levermetastaser [40]. Vores resultater var baseret på patienter med fremskreden sygdom med fjernmetastaser og vi viste, at høj MVD og LVD var relateret med forbedret overlevelse. Dette kan være fordi alle patienterne i denne undersøgelse havde bekræftet at have fjernmetastaser og microvasculatures kan påvirke selv levering af det kemoterapeutiske stof ind i tumoren. Men vores undersøgelse havde nogle begrænsninger med hensyn til overlevelse analyse. Vi indskrevet CRC patienter med tilgængelige kirurgisk resektion kræft væv fra både primære tumorer og tilsvarende metastatiske tumorer. Ikke alle avancerede CRC patienter med metastaserende sygdomme blev inkluderet og langt fremskredne tilfælde blev ikke indskrevet på grund af deres operationsevne. Derfor kan ikke-indregnede fordomme have påvirket vores overlevelse resultater.

Nogle undersøgelser har vist en anti-tumorigen effekt af fibroblaster [20], [21]. Imidlertid er det blevet klart, at CAF bidrager til progression af cancer og deres prognostisk betydning i forskellige kræftformer også er blevet rejst [41] og desuden har flere undersøgelser observerede genetiske ændringer i CAF [26], [27]. PTEN tab af CAF er blevet observeret i brystkræft og er blevet foreslået prognostisk sammenslutning af det [27], [28]. Vi observerede PTEN tab af CAF i CRC patienter, og det blev observeret hyppigere i de tilsvarende fjernmetastaser. Det foreslås, at CAF, ikke kun cancerceller, har ændret genekspression. Endvidere tab af PTEN ekspression af CAF i fjerne metastaser var signifikant korreleret med overlevelsen af ​​patienter. Til vores viden, det er de første resultater viser PTEN tab i CAF i CRC patienter. Selvom der kræves mere forskning, forventer vi, at det kunne være en prognostisk faktor i CRC patienter.

I vores store kohorte af avancerede CRC patienter med synkron og metachronous fjernmetastaser, demonstrerede vi den regionale heterogenitet stromal microenvironment faktorer ifølge til tumoren placering. Mængden Mikrovaskular målt ved LVD og MVD var også heterogen i forhold til den metastatiske organ undersøges. Ved Cox regressionsanalyse, center LVD og MVD, periferien LVD, og ​​CAF i fjernmetastaser var uafhængigt associeret med patienternes prognose foruden synkron fjernmetastaser, alder og perineurale invasion. Heterogenitet mikromiljø, ikke blot af cancerceller, foreslås at bidrage til tumor heterogenitet og biologisk kompleksitet, hvorfor det bør overvejes i forvaltningen CRC patienter. Desuden viste vores resultater, at PTEN ekspression blev ændret hos CAF af CRC’er, tyder på, at CAF kunne have ændret genekspression og spille en aktiv rolle i udviklingen af ​​kræft.

Støtte oplysninger

figur S1.

Den prognostiske sammenslutning af stromale karakteristika som det vedrører tumor placering. Analysen blev udført ved hjælp af cut-off værdier opnået ved maksimale chi-squared metoder

doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s001

(TIF)

Figur S2.

repræsentant PTEN antistof farvninger af stromale celler og den prognostiske sammenslutning af PTEN udtryk. (A) Intakt udtryk for PTEN i CAF (× 400) og (B) tab af PTEN udtryk i CAF (× 400). (C-F) Kaplan-Meier-overlevelseskurver for midten (C) og periferien (D) af den primære tumor, lymfeknude metastaser (E), og fjernmetastaser (F) i henhold til CAF PTEN udtryk status.

Doi : 10,1371 /journal.pone.0091811.s002

(TIF)

tabel S1.

Pearsons korrelationskoefficienter blandt center, periferi, lymfeknude metastaser og fjernmetastaser

doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s003

(DOCX)

tabel S2.

Korrelationskoefficienter mellem CAF og LVD eller MVD

doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s004

(DOCX)

tabel S3.

PTEN udtryk i CAF og clinicopathologic faktorer

doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s005

(DOCX)