PLoS ONE: Øget B-celle-aktiverende faktor Fremmer Tumor invasion og metastase i Human Bugspytkirtelkræft Cancer

Abstrakt

B-celle-aktiverende faktor (BAFF) er et cytokin, der tilhører tumornekrosefaktor (TNF) superfamilien. Det er blevet rapporteret, at BAFF er forhøjet hos patienter med autoimmune pancreatitis og bidrager til det maligne potentiale blodkræft og solide tumorer. I denne undersøgelse blev opnået klinisk tegn på øget BAFF niveauer hos patienter med pancreas duktalt adenokarcinom (PDAC), og de roller og mekanismer BAFF i PDAC blev afklaret i humane væv af PDAC og fra

in vitro

data PDAC cellelinier. Serumniveauer af BAFF i patienter med PDAC var signifikant højere end hos raske personer (p = 0,0121). Patienter med UICC stadie IV PDAC (T1-4, N0-1, M1) havde signifikant højere niveauer af serum BAFF sammenlignet med patienter med PDAC (p = 0,0182). BAFF blev bemærkelsesværdigt udtrykt i infiltrerende B-lymfocytter omgivende bugspytkirtelkræft i humane pancreas væv, hvilket antyder, at BAFF kan spille en rolle i udviklingen af ​​kræft i bugspytkirtlen. PDAC cellelinier blev dyrket med human rekombinant BAFF, og morfologi og genekspression blev analyseret; bugspytkirtelkræftceller ændret til en fibroblast-lignende morfologi, og viste ændrede gen ekspression af E-cadherin, vimentin og sneglen. Disse BAFF-inducerede ændringer afspejler forøget cellemotilitet og invasion. BAFF-R-overekspression cellekloner bekræftede associationen mellem disse BAFF-inducerede ændringer og epitel-mesenchymale overgang (EMT) -relaterede gener. BAFF blev forhøjet hos patienter med metastatisk fremskreden PDAC og inducerede ændringer i PDAC celler via regulering af EMT-relaterede gener. Belysning af den præcise rolle og kontrolmekanisme af BAFF kan føre til nye terapeutiske tilgange med henblik på at forbedre kræft i bugspytkirtlen overlevelse

Henvisning:. Koizumi M, Hiasa Y, Kumagi T, Yamanishi H, Azemoto N, Kobata T, et al. (2013) Øget B-celle-aktiverende faktor Fremmer Tumor invasion og metastase i Human kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 8 (8): e71367. doi: 10,1371 /journal.pone.0071367

Redaktør: Srikumar P. Chellappan, H. Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, USA

Modtaget: Januar 14, 2013; Accepteret: 28 Juni 2013; Udgivet: 6. august, 2013 |

Copyright: © 2013 Koizumi et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev delvist understøttet af en Grant-in-Støtte til videnskabelig forskning (Japan Society for fremme af videnskab, KAKENHI 24.590.980 til YH) og programmet for Forbedring Systematisk uddannelse i Graduate School (til MK) fra Ministeriet for Undervisning, Kultur, Sport, Videnskab og Teknologi, Japan, og ved en Grant-in-Støtte til videnskabelig forskning og udvikling (til YH) fra det japanske ministerium for sundhed, arbejde og velfærd, Japan. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i bugspytkirtlen er en af ​​de kræftformer med den dårligste prognose hos mennesker. 5-års overlevelsesraten for kræft i bugspytkirtlen er kun omkring 6% på grund af vanskeligheden ved diagnose i tidlige kliniske faser, samt hyppige metastaser [1], [2]. For nylig er der blevet rapporteret nye terapeutiske muligheder; Men behandlingsmuligheder er begrænsede, og reaktionen på kemoterapi fortsat lav [3], [4]. Identifikation af hidtil ukendte mål for pancreascancer kunne forbedre prognosen.

Det er for nylig blevet rapporteret, at B-celle-aktiverende faktor (BAFF), et proinflammatorisk cytokin, er forhøjet hos patienter med autoimmun pancreatitis [5]. BAFF er et cytokin, der tilhører en delmængde af tumornekrosefaktor (TNF) superfamilien. I et tidligere eksperiment, hvor serumniveauer af BAFF blev undersøgt i patienter med kræft i bugspytkirtlen [5], patienter med metastase syntes at have forøgede niveauer af BAFF.

BAFF er et 285-aminosyre peptid glycoprotein, som udtrykkes som et transmembrant protein, og udskilles i en opløselig form fra forskellige celletyper (monocytter, dendritiske celler, T-lymfocytter og B-lymfocytter) [6] – [8]. Det er kendt at være forbundet med overlevelse og modning af B-lymfocytter. BAFF er en ligand for tre receptorer: BAFF-receptor (BAFF-R) [9]; transmembran aktivator, calcium-modulator og cyclophilin-ligand interaktions (TACI) [10]; og B-celle modning antigen (BCMA) [11]. Desuden et protein svarende til BAFF, opkaldt en proliferationsinducerende ligand (april) [12], kan være en ligand af TACI og BCMA. Binding af BAFF eller april til disse receptorer kan aktivere forskellige signalveje, herunder nuklear faktor-KB (NF-KB) pathway [13] – [15]. Det er blevet rapporteret, at BAFF og april bidrage til maligne potentiale af blodkræft og solide tumorer [16] – [18]. Imidlertid roller BAFF, april, og deres receptorer i bugspytkirtelkræft endnu ikke blevet belyst.

I denne undersøgelse blev opnået klinisk tegn på øget BAFF niveauer hos patienter med pancreatisk duktalt adenokarcinom (PDAC), og rolle og mekanismen for BAFF i PDAC blev præciseret fra klinisk evidens og fra

in vitro

data fra PDAC cellelinjer.

Materialer og metoder

Patienter og bugspytkirtel prøver

Serumprøver blev undersøgt fra 44 patienter med PDAC og sund alders- og køn-matchede emner. For diagnose af iscenesættelse, blev tumoren node metastaser system Union for International Cancer Control (UICC), der anvendes. Alle serumprøver blev lagret ved -80 ° C før brug. Enheder af PDAC blev opnået fra patienter, som gennemgik kirurgi. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle tilmeldte deltagere. Undersøgelsen protokol var i overensstemmelse med de etiske retningslinjer i 1975 Helsinki-deklarationen, og blev godkendt af Institutional Review Board of Ehime Universitetshospital (Godkendelsesnr: 1.107.003). Denne undersøgelse, der involverer humane prøver blev registreret i University Hospital Medical Information kliniske forsøg Registry (registreringsnummer 000.008.654) Netværk (Umin).

enzymmaerket assay for BAFF og april

Serum niveauer af BAFF og april i alle fag blev analyseret ved hjælp af en enzymbundet immunosorbent assay kit (R Nichirei, Tokyo, Japan) i 1 time ved stuetemperatur og inkuberet med Simple Stain DAB Solution (Nichirei). Der blev taget mikrofotografier ved anvendelse af et Nikon Microphot FXA med et Nikon digitalkamera DXM 1200 (Nikon, Tokyo, Japan).

For immunfluorescensfarvning, monteret og formalinfikserede snit blev anvendt. Snit blev inkuberet med det relevante primære antistof (tabel S1) ved 4 ° C natten over. Efter vask med phosphatbufret saltvand, blev sektionerne inkuberet med DyLight488-konjugeret æsel-anti-gede-antistof til BAFF eller BAFF-R, og med DyLight549-konjugeret æsel-anti-muse-antistof til CD20. Kernerne i snit blev farvet med 4,6-diamidino-2-phenylindol (Wako, Osaka, Japan). Objektglas blev afbildet under anvendelse af et Zeiss Axioskop 2 Plus fluorescensmikroskop og fanget af et Zeiss AxioCam HRc digitalkamera (Zeiss, Tokyo, Japan) og gemmes i en computer. Fotografierne farvet for BAFF, BAFF-R og CD20 fusioneret til at evaluere deres placeringer i cellerne.

Celler og dyrkningsbetingelser

Fire bugspytkirtelkræft cellelinier (Panc-1, BxPC-3 , AsPC-1 og MIA PaCa-2-celler), der oprindeligt blev dannet fra patienter med PDAC, og Ramos-celler blev opnået fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Den PANC-1 og MIA PaCa-2-celler blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) suppleret med 10% føtalt bovint serum (Life Technologies) og 1% penicillin. BxPC-3, AsPC-1 og Ramos-celler blev dyrket i RPMI-1640 suppleret med 10% føtalt bovint serum og 1% penicillin. Mikrofotografier blev opnået efter forskellige behandlinger på et omvendt mikroskop (Olympus IX70, Olympus, Tokyo, Japan) forsynet med et Olympus DP12 digitalkamera. Efter at være serum sultet i 24 timer blev cellerne inkuberet med rekombinant BAFF (Reliatech, Braunschweig, Tyskland) og rekombinant TGF-β (R 0,05 baseret på en to-halet test. Korrelationer mellem to variabler blev vurderet ved hjælp af Pearsons korrelationskoefficient, og p-værdier for. 0,05 blev anset for at repræsentere statistisk signifikans

Resultater Salg

Serumniveauer af BAFF i patienter med fremskreden PDAC

Serum niveauer af BAFF og april blev undersøgt hos patienter med PDAC og i sund alders- og køn-matchede individer (tabel 1). Serumniveauer af BAFF var 1704 ± 1409 pg /ml (middelværdi ± SD) hos patienter med PDAC, betydeligt højere end hos raske forsøgspersoner (1147 ± 315 pg /ml; p = 0,0121) (. Figur 1A). På den anden side, serumniveauer i april i patienter med PDAC ikke signifikant højere end hos raske forsøgspersoner (7,7 ± 2,4 vs. 7,3 ± 2,2 pg /mL; p = 0,895) (fig 1B.). Stigningen i serumniveauer af BAFF blev bedømt ved UICC fase. Patienter med UICC stadie IV PDAC (T1-4, N0-1, M1) havde signifikant højere niveauer af serum-BAFF end patienter med UICC stadium Ib-III (2063 ± 1736 vs. 1186 ± 328 pg /mL; p = 0,0182) (fig. 1C). Den kliniske baggrund af patienterne i hver fase er angivet i tabel 2. Hvad angår forholdet mellem serumniveauerne af BAFF og PDAC tumorstørrelse, var der en signifikant positiv korrelation, som angivet i fig. 1D (r = 0,348; p 0,001). Dette antydede, at stigningen i serumniveauer af BAFF var forbundet med tumorvækst og metastase af PDAC.

(A) Serumniveauer af BAFF blev bestemt hos patienter med PDAC (n = 44) og hos raske forsøgspersoner (n = 44). (B) Serumniveauer APRIL blev bestemt hos patienter med PDAC (n = 44) og hos raske forsøgspersoner (n = 44). (C) Serumniveauer af BAFF og UICC stadium PDAC er vist. (D) Serum niveauer af BAFF og tumor størrelser af primær PDAC var signifikant korreleret i 44 patienter (p 0,001). Data er vist som middelværdi ± SD (* p 0,05). n.s .; ikke signifikant. Vejviser

Angivelse af BAFF og BAFF-R i humant PDAC væv

Immunhistokemi eksperimenter blev udført for at bestemme, om BAFF udtrykkes i pancreas væv. Pancreasvæv fra kirurgiske arter opnået fra patienter med PDAC blev farvet for BAFF og BAFF-R (fig. 2 og 3). Tumor-infiltrerende immunceller omgivende PDAC celler fandtes at bemærkelsesværdigt udtrykke BAFF og BAFF-R (fig. 2). Yderligere farvning af CD20 (en markør for B-lymfocytter), CD3 (T-celle-receptor, en markør for T-lymfocytter) og CD68 (en markør for monocytter /makrofager) blev udført for at identificere deres typer infiltrerende celler, der udtrykker BAFF eller BAFF-R. Fordelingen af ​​BAFF- og BAFF-R-positive celler optrådte i overensstemmelse med fordelingen af ​​B-lymfocytter, snarere end T-lymfocytter eller monocytter /makrofager (fig. 2). For nylig er det blevet vist, at B-lymfocytter kan udskille BAFF [7], [8], [16]. Dobbelt immunfluorescensfarvning med BAFF og CD20, CD3, CD68 (fig. 3A), og farvning med BAFF-R og CD20, CD3, CD68 (fig. 3B) blev udført. Fordelingen af ​​BAFF (grøn) og CD20 (rød) blev slået sammen og optrådte gul (fig. 3A). Desuden er fordelingen af ​​BAFF-R (grøn) og CD20 (rød) blev også slået sammen og optrådte gul (fig. 3B). Fordelingen af ​​BAFF og BAFF-R blev ikke co-lokaliseret med CD3 eller CD68. Disse resultater viser, at B-lymfocytter, som udtrykker høje niveauer af BAFF og BAFF-R, er i infiltrat og proliferere i vævet, der omgiver PDAC

(A) Farvning med hematoxylin og eosin. (H dog BAFF og CD3 eller CD68 blev ikke co-lokaliseret. (B) Immunofluorescens-farvning med BAFF-R (grøn) og CD20, CD3, og CD68 (rød) er vist. Ekspression af BAFF-R og CD20 blev co-lokaliseret (gul); dog BAFF-R og CD3 eller CD68 blev ikke co-lokaliseret. First Ab (-) angiver farvning kontrol uden det første antistof

Angivelse af BAFF receptorer i humane PDAC væv og menneskelige PDAC cellelinjer

For at undersøge ekspressionen af ​​BAFF receptorer. i PDAC blev immunhistokemi udført på PDAC væv fra patienter samt på humane PDAC cellelinjer. BAFF-R blev udtrykt i PDAC celler, som havde positive signaler af MIB-1 og CA19-9 (fig. 4A, venstre spalte). Der blev imidlertid andre BAFF-receptorer (TACI- og BCMA) ikke udtrykkes i de PDAC celler (Fig. 4A, højre spalte). De humane PDAC cellelinjer, Panc-1, BxPC-3, aspC-1, og MIA Paca-2, blev anvendt til

in vitro

studier. Kvalitativ RT-PCR for genet ekspression af BAFF-R, TACI, og BCMA afslørede kun ekspression af BAFF-R (fig. 4B). Ramos-celler, der er kendt som et væv, der udtrykker BAFF-R, TACI og BCMA, blev anvendt som en positiv kontrol [21]. Endvidere blev Western blotting udført for at evaluere proteinet ekspression af disse BAFF receptorer (fig. 4C). Ekspression af BAFF-R blev bekræftet i alle de PDAC cellelinjer, men kunne ikke påvises udtryk for TACI og BCMA. Taget sammen viste disse resultater, at forøgede niveauer af BAFF resulterede fra infiltrerende og prolifererende B-lymfocytter omgivende PDAC væv; disse øgede niveauer af BAFF kan stimulere PDAC gennem BAFF-R-signalering. For at identificere den rolle af BAFF i PDAC, en

in vitro

assay blev udført under anvendelse af PANC-1 PDAC cellelinie, dens klonet transfektant af BAFF-R, og rekombinant human BAFF til yderligere analyse.

(A) Farvning med hematoxylin og eosin (H 0,05 over BAFF 0 ng /ml). (C) Western blotting-analyse af EMT markører indikerer, at ekspression af hvert protein blev moduleret ved tilsætning af BAFF. β-actin er vist som en husholdning protein.

Behandling med humant rekombinant BAFF og motilitet og invasion af PDAC celler

I forbindelse med morfologiske ændringer, blev det foreslået, at BAFF inducerer EMT i PDAC. Disse resultater bedt undersøgelse af de andre effekter af BAFF, såsom motilitet og invasion. PANC-1-celler blev inkuberet med humant rekombinant BAFF, og ændringer i motilitet blev evalueret med sårhelingen /scratch test. Behandling med BAFF øget motilitet PANC-1-celler og resulterede i accelereret sårlukning (p 0,01) (fig 6A og 6B.). Desuden behandling med human rekombinant BAFF væsentligt forbedret cellernes evne til at invadere den ekstracellulære matrix

in vitro

(fig. 6C).

(A) sårheling /scratch test viste, at motilitet af PANC-1-celler blev styrket ved 24 timers inkubering med BAFF. (B) Den procentvise sårede område fyldt i sårheling /scratch test er vist som en graf (* p 0,01 vs. BAFF 0 ng /ml). (C) Den invasion assay viser forøgelse af invasion med BAFF i PANC-1-celler (* p 0,05 over BAFF 0 ng /ml). (D) Den sårheling /scratch test med neutraliserende anti-BAFF-R antistof viste, at motiliteten af ​​PANC-1-celler med BAFF blev inhiberet af antistoffet. (E) Den procentvise sårede område fyldt i sårheling /scratch test er vist som en graf. Data er vist som middelværdi ± SE for seks separate forsøg (* p 0,05, ** p 0,01).

Yderligere assays blev udført under anvendelse af anti-humant BAFF-R antistof, som kan hæmme binding af BAFF til BAFF-R [23]. Med tilsætning af human rekombinant BAFF til supernatanten af ​​de dyrkede celler, fyldte procent sårede område steget betydeligt (15,1 ± 2,3 vs. 27,2 ± 2,3; p 0,01). Med tilsætning af både human rekombinant BAFF og det anti-humane BAFF-R antistof, blev sårlukning formindsket betydeligt sammenlignet med tilsætning af kontrol gede-antistof (27,2 ± 2,3 vs. 20,9 ± 2,4; p 0,05). (Fig 6D og 6E ). Disse data antyder, at BAFF-stimulering forårsaget øget motilitet og invasion af PANC-1-celler.

BAFF-R-overekspression cellekloner og ekspression af EMT-beslægtede gener

Fire cellekloner, der kan overudtrykke BAFF -R gennem transfektion med et plasmid (pBCMGS-BAFF-R) [20] og selektion ved dyrkning med G418 blev etableret. Overekspression af BAFF-R blev bekræftet i disse cellekloner ved Western blotting og FACS-analyse (fig. 7A og S2). Funktionel signalering af transducerede BAFF-R i disse cellekloner blev bekræftet ved inkubering med BAFF (Fig. S3). Forøget ekspression af NF-KB P52-proteinet blev set på Western blotting, hvilket indikerer, at NF-KB-vejen blev aktiveret ved overekspression af BAFF-R; denne aktivering af NF-KB-vejen blev også afspejlet i faldet ekspressionen af ​​E-cadherin og forøget ekspression af vimentin og Snail i disse kloner. Disse ændringer var magen til resultaterne af assayet med rekombinant humant BAFF.

Fire PDAC cellekloner, som kan overudtrykker BAFF-R gennem transfektion med et plasmid (pBCMGS-BAFF-R), blev etableret. (A) I de fire kloner blev overekspression af BAFF-R bekræftet, og de proteiner, der er forbundet med EMT viste sig at blive moduleret i en BAFF-R niveau-afhængig måde. (B) mRNA-niveauer af hvert gen blev evalueret med real-time RT-PCR. Data er vist som middelværdi ± SE for fire separate forsøg (* p 0,05, ** p 0,01 vs. PANC-1). (C) Den sårheling /scratch test viste, at motiliteten af ​​disse cellekloner var forøget sammenlignet med den oprindelige PANC-1. (D) Den procentiske sårede område fyldt af hver klon i sårheling /scratch test er vist som en graf. Data er vist som middelværdi ± SE for seks separate forsøg (* p 0,05, ** p 0,01 vs. PANC-1).

Desuden ekspression af mRNA’er blev evalueret ved hjælp af real-time RT -PCR (fig. 7B). Et fald i E-cadherin-mRNA blev observeret i alle de BAFF-R-overekspression cellekloner, mens en stigning i vimentin og snail mRNA’er blev observeret i de fleste af de cellekloner. Motiliteten af ​​cellekloner blev bekræftet at være signifikant højere end den for ikke-BAFF-R-transficerede PANC-1-celler på sårheling /scratch test (fig. 7C og D). Taget sammen med resultaterne fra de cellekloner, blev det bekræftet, at stimulering med BAFF inducerer genændringer forbundet med EMT i PDAC celler.

Discussion

Dette er den første undersøgelse til at rapportere, at serumniveauer af BAFF er forhøjet hos patienter med PDAC, og den første undersøgelse for at undersøge den rolle af BAFF i human PDAC. I denne undersøgelse blev det afsløret, at: i) serumniveauer af BAFF hos patienter med PDAC (især i dem med metastase) var forhøjet i forhold til raske personer; ii) tumor-infiltrerende B-lymfocytter udtrykte BAFF og PDAC væv udtrykte BAFF-R; og iii) øget BAFF-induceret genændringer var forbundet med EMT i en PDAC cellelinie, og med forbedret tumorcellemotilitet og invasion.

BAFF vides at blive udtrykt af monocytter, dendritiske celler, T-lymfocytter, B lymfocytter og epitelceller [6] – [8], [24], [25]; men dens præcise udtryk profil i patienter med PDAC er ikke tidligere blevet defineret. For nylig, Nakajima et al. viste gennem immunhistokemi, at BAFF-udtrykkende B-lymfocytter infiltrerer synoviale væv af rheumatoid arthritis [26]. Størstedelen af ​​infiltrerende celler i vævet, der omgiver PDAC i den foreliggende undersøgelse var BAFF-udtrykkende B-lymfocytter. Desuden har mange af disse B-lymfocytter udtrykte også BAFF-R. Ud fra disse resultater kunne infiltrerende BAFF-udtrykkende B-lymfocytter anses for at spille en vigtig rolle i opregulering af BAFF i PDAC patienter. Den øgede BAFF sandsynligvis spiller en rolle i progressionen af ​​PDAC, fordi serumniveauerne af BAFF bemærkelsesværdigt blev opreguleret i patienter med fremskreden PDAC. BAFF fra disse B-lymfocytter kan også have en vigtig rolle i overlevelsen, aktivering og proliferation af infiltrerende B-lymfocytter omgivende PDAC.

BAFF tilhører TNF-superfamilien, og er tæt knyttet til april. Begge har en vigtig rolle i aktiveringen og proliferationen af ​​B-lymfocytter. BAFF binder sig til alle tre BAFF receptorer (BAFF-R, BCMA og TACI), mens APRIL binder sig til to af dem (BCMA og TACI). I den foreliggende undersøgelse blev der kun serumniveauer af BAFF (ikke april) signifikant opreguleret i patienter med PDAC, og kunne detekteres kun ekspressionen af ​​BAFF-R i PDAC væv. Således blev rollen som BAFF og BAFF-R i PDAC undersøges yderligere. En af de vigtigste BAFF-induceret mekanismer er aktiveringen af ​​NF-KB. Det er blevet rapporteret, at BAFF-R aktiverer NF-KB-inducerende kinase (NIK), og at aktivering af NIK inducerer behandlingen af ​​transskriptionsfaktoren NF-κB2 P100 til NF-κB2 P52 [27], [28]. Korrelationen mellem aktiveringen af ​​NF-KB og ekspression af Snail er tidligere blevet beskrevet [29]. NF-KB synes at have en vigtig rolle i induktionen af ​​EMT

EMT er det fænomen, hvor epitelceller konvertere til mesenchymale celler.; Det er grundlæggende for fosterudviklingen og indebærer dybtgående fænotypiske ændringer, herunder tab af celle-celle-adhæsion og cellepolaritet og erhvervelse af vandrende og invasive egenskaber [30]. I tidligere rapporter har EMT været præget af købet af en spindel-lignende /fibroblastisk morfologi, opregulering af mesenkymale markører som vimentin, og nedregulering af epitelial markør ligesom E-cadherin [31], [32]. Snegl er blevet anset for at være en udløser af EMT gennem nedregulering af ekspressionen af ​​epiteliale markører og opregulering af ekspressionen af ​​mesenchymale markører [33]. Disse molekyler blev opreguleret af BAFF i PDAC celler; nedregulering af E-cadherin og opregulering af vimentin blev også observeret i disse celler.

Fra de foreliggende resultater, foreslås det, at BAFF og BAFF-R-signalering inducerer EMT i PDAC celler (Fig. 8). PDAC celler moduleret af forøget BAFF viser en spindel-formet morfologi, mister celle-celle-adhæsion og cellepolaritet, og erhverve evnen hos cellemotilitet og invasion. Det er almindeligt accepteret, at E-cadherin spiller en afgørende rolle i EMT, en tidlig begivenhed i kræftcellen invasion og metastase [34]. EMT anses for at være en vigtig begivenhed under malign tumor progression og metastase [35], [36].