PLoS ONE: kliniske betydning af ændret ekspression af β-Catenin og E-Cadherin i Oral dysplasi og Kræft: Potentiel Link med ALCAM Expression

Abstrakt

Baggrund

Forstyrrelser i celleadhæsionsmolekyler er knyttet til ændringer i cadherin-catenin komplekser og sandsynligvis spiller store roller i invasion og metastase; deres indvirkning på tidlige forstadier stadier forbliver endnu ukendt. Vi viste ALCAM overekspression i tidlige orale læsioner og dens cytoplasmatisk akkumulering i mundtlig planocellulært karcinom (OSCC) at være en indikator for sygdomsprogression og dårlig prognose. Denne undersøgelse testede den hypotese, at ændringer i E-cadherin og β catenin udtryk er tidlige hændelser i mundtlig tumorigenese, der er forbundet med sygdommen prognose, og korrelerer med forstyrrelser i ALCAM udtryk.

Metoder

Expressions af E-cadherin og β-catenin blev analyseret i samme kohorte af 105 OSCCs, 76 orale læsioner og 30 normale orale væv ved immunhistokemi og korreleret med klinisk-patologiske parametre og prognose. Effekten af ​​siRNA medieret ALCAM knockdown på E-cadherin og β catenin blev bestemt ved anvendelse af western blot, konfokal mikroskopi og RT-PCR-analyse i orale kræftceller.

Resultater

betydeligt tab af membranøs E-cadherin og β-catenin ekspression blev observeret fra normal, hyperplasi, dysplasi til OSCCs (p

trend 0,001); og korreleret med cytoplasmatisk ALCAM akkumulering i OSCCs (p = 0,006). Multivariat analyse viste β-catenin membran tab og ALCAM /β-catenin

nukleare /cytoplasma ophobning at være betydelige prædiktorer for sent klinisk fase (p 0,001 ELLER = 8,7; p = 0,006, OR = 9,9, henholdsvis) og nodal metastase (p = 0,003, OR = 3,8; p = 0,025, OR = 3,4 henholdsvis). Cox regression viste E-cadherin membran tab /ALCAM cytoplasmatisk udtryk [p 0,001; HR = 4,8] for at være uafhængige negative prognosticators i OSCCs. siRNA medieret silencing af ALCAM medførte samtidig stigning i E-cadherin og β-catenin både udskrift og protein niveauer.

Konklusioner

Tab af E-cadherin og β-catenin udtryk er tidligt begivenheder i oral tumorigenese; deres foreninger med aggressiv tumor adfærd og sygdom tilbagefald understreger deres potentiale som prognostiske markører. Korrelation af tab af E-cadherin og β-catenin med cytoplasmatisk ALCAM ophobning både

in vitro

i

in vivo

antyder, at disse dynamiske ændringer i celleadhæsion Systemet kan spille central rolle i oral cancer .

Henvisning: Kaur J, Sawhney M, Dattagupta S, Shukla NK, Srivastava A, Walfish PG, et al. (2013) Klinisk Betydningen af ​​ændret ekspression af β-Catenin og E-Cadherin i Oral dysplasi og Kræft: Potentiel Link med ALCAM Expression. PLoS ONE 8 (6): e67361. doi: 10,1371 /journal.pone.0067361

Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan

Modtaget: November 30, 2012; Accepteret: 16 maj 2013; Udgivet: 28 juni 2013

Copyright: © 2013 Kaur et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Den finansielle støtte for dette arbejde fra Mount Sinai Foundation of Toronto Da Vinci Gala Fundraiser, Alex og Simona Shnaider Chair i kræft i skjoldbruskkirtlen, canadiske Institutes of Health Research for stol i Advanced Cancer Diagnostics, George Knudson Oakdale Golf Tournament Fund Raiser, og Mount Sinai Hospital Department of Medicine Research Fund er taknemmeligt anerkendt. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne erklærede, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Forstyrrelser i sammenskruet modulering af celleadhæsion forårsage defekter i vævsopbygning, der spiller kritiske roller i udvikling af kræft [1] – [3]. E-cadherin er lokaliseret på overfladen af ​​epitelceller i områder af celle-celle-kontakt kaldet adherensovergange og er impliceret i celle-celle adhæsion i epitelvæv [4] – [6]. β-catenin interagerer med cadheriner gennem sin cytoplasmatiske domæne. α-catenin forbinder E-cadherin og β-catenin-komplekset til actinfilamenter. Dissociationen af ​​E-cadherin-cateninkomplekset fra cellemembranen er vigtig i malign progression. I mange epiteliale cancere, er membranøs E-cadherin tabt og β-catenin dissocierer i cytoplasmaet og akkumuleres i kernen som en transkriptionsfaktor, samtidig med tumorudvikling [5]. Nedregulering af membranøs E-cadherin og β-catenin, og cytoplasmatisk /nukleare akkumulering af β-catenin er tidligere blevet beskrevet i flere kræftformer og holde lovende som prognostiske markører [7].

Udvikling af oral squamous cellecarcinom (OSCC) er en flertrinsproces, der involverer interaktioner mellem flere faktorer, såsom tobak-associeret intraoral carcinogener, arecanødder møtrik, betelnødder quid og alkoholforbrug og /eller virale infektioner [8], [9]. OSCCs ofte forudgået af klinisk evident læsioner ofte leukoplakia, og risikoen for flere kræftformer er 5-10 gange større i patienter med OSCCs indledes med leukoplakia [8], [10]. Disse læsioner ofte udvikle sig til kræft, hvis ubehandlet [11]. er blevet foreslået En gennemsnitlig årlig transformation på 1% baseret på flere undersøgelser rapporterer 5% transformation observeret i 5 år [11], [12]. I Indien, over 80% af OSCCs skyldes eksisterende orale læsioner (OLS) [13], [14]. Evnen til at forudsige udfaldet af OLS er fortsat en stor udfordring for tidlig intervention. Tidlig påvisning af OLS, der vil udvikle sig til invasive tumorer er nødvendig for at forbedre den dårlige prognose af orale cancerpatienter.

dynamiske ændringer i celleadhæsion manifesteret ved dissociation af membranøs E-cadherin-β-catenin-komplekset er impliceret i tab af epitelial samhørighed som en vigtig begivenhed i invasion og metastase. Aktiveret leukocyt celleadhæsionsmolekyle (ALCAM) /MEMD /CD166) er et transmembrant glycoprotein på immunglobulinsuperfamilien der medierer celle-celle adhæsion gennem både homofil (ALCAM-ALCAM) og heterofil (ALCAM-CD6) interaktioner [15], [16]. Vi demonstrerede ALCAM ekspression er forøget i OLS og dets cytoplasmatiske akkumulering i OSCC er en indikator for sygdomsprogression og dårlig prognose [17]. Heri, søgte vi at undersøge den kliniske betydning af E-cadherin og β-catenin-ekspression i serielle vævssnit af det samme sæt af patienter fra forskellige sygdomstilstande stadier ved immunhistokemi, at identificere fase-specifikt protein ændringer og bestemmes deres forhold til ALCAM ekspression. De eksperimentelle beviser til støtte for korrelationer mellem forstyrrelser i ALCAM udtryk og ændringer i E-cadherin og β-catenin udtryk blev leveret af kort interfererende RNA (siRNA) medieret ALCAM knockdown og bestemme ændringen i udtryk for alle disse tre proteiner både på udskrift og protein niveauer.

Materialer og metoder

vævsprøver

Denne undersøgelse blev godkendt af menneskelige etiske komité af All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Indien. For immunhistokemisk analyse kirurgisk resektion væv eller biopsi prøver fra OSCC, dysplasi, hyperplasi og histologisk normale orale væv blev opnået fra Kirurgisk Oncology Enhed for Dr. B.R. Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Indien, med forudgående informeret skriftligt samtykke fra patienterne.

klinisk-patologisk Karakteristik af Patientklagenævnet

Et hundrede og fem primære OSCC patienter (aldersgruppe, 29-75 år, gennemsnitsalder 40 år) gennemgår helbredende oral cancer kirurgi ved Kirurgisk Oncology enhed Dr. BR Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Indien blev indrulleret i denne undersøgelse efter opnåelse af forudgående skriftligt samtykke fra patienterne. Den kliniske og patologiske data, herunder klinisk TNM mellemstationer (tumor, node, metastase baseret på Union International Center le Cancer TNM klassifikation), stedet for læsionen, histopatologiske differentiering, alder og køn blev registreret i en pre-designet Performa som tidligere beskrevet [ ,,,0],17]. Diagnosen var baseret på klinisk undersøgelse og histopatologisk analyse af vævsprøver. Sitet fordeling af OSCC tilfælde var: mundslimhinden (36), tunge (35), alveole (12), læbe (6) og andre steder (16), der indbefatter ginigivobuccal sulcus, hårde gane, bløde gane, retromolar trigone og gulvet i mund. Tumorerne blev histologisk gradueret samt, moderat eller dårligt differentierede SCC’er. Biopsier fra OLS med histologiske tegn på hyperplasi (56 tilfælde) og dysplasi (20 tilfælde) var også inkluderet i denne undersøgelse. Sitet fordeling af OLS var: mundslimhinden (53), tunge (12), alveole (5), læbe (4) og ginigivobuccal sulcus (2). Tredive ikke-maligne væv taget fra et fjernt sted for OSCCs (med histologisk bekræftet normal oralt epitel hid til omtalt som orale normale væv) blev også bedømt for ALCAM ekspression. Efter udskæring blev vævene straks lynfrosset i flydende N

2 og opbevaret ved -80 ° C indtil yderligere anvendelse og ét stykke blev opsamlet i 10% formalin og indlejret i paraffin for histopatologiske og immunohistokemiske analyser.

immunhistokemi

paraffinindlejrede sektioner (5 um tykkelse) af humane orale vævsprøver blev farvet med hematoxylin og eosin til histopatologisk analyse, og immunfarvning blev udført på serielle snit som tidligere beskrevet af Sawhney

et al

. [17]. Kort fortalt blev vævssnit efter antigen-genvinding i citratbuffer inkuberet med anti-E-cadherin eller anti-β-catenin antistoffer (0,2 ug /ml) (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) i 16 timer ved 4 ° C. Antistoffer blev påvist under anvendelse af biotinyleret sekundært antistof og peroxidasemærket streptavidin-kompleks under anvendelse af Dako LSAB plus kit (Dako Labs, Glostrup, Danmark) under anvendelse af diaminobenzidin (DAB) som kromogen. I negative kontroller, blev det primære antistof erstattet af ikke-immunt IgG af samme isotype at sikre specificitet. Brystkræft vævssnit med kendt immunopositivitet til E-cadherin eller β-catenin blev anvendt som positive kontroller i hver batch af sektioner analyseret.

Positiv Kriterium for immunhistokemisk farvning

immunfarvning blev evalueret i tilfældigt udvalgt fem ikke-overlappende områder af vævssnit med mere end 80% epitelceller. For E-cadherin, blev specifik farvning i membranen defineres som positiv farvning. Objektglassene blev scoret som følger: ≥50% tumorceller viser immunoreaktivitet blev gradueret som positive for E-cadherin-ekspression, mens dem, der angiver immunfarvning i 50% tumorceller blev gradueret som negative [18]. For β-catenin-proteinekspression blev specifik farvning i membranen /cytoplasma /kerner defineret som positiv farvning. For membranfarvning objektglassene blev bedømt som følger: ≥50% tumorceller viser immunoreaktivitet blev gradueret som positive, mens dem, der angiver immunfarvning i 50% tumorceller blev gradueret som negative [18]. For cytoplasmatisk /nuklear farvning af p-catenin objektglassene blev bedømt som følger: 0, 10% tumorceller viser immunreaktivitet; 1 = 10-30% tumorceller viser immunreaktivitet; 2, ≥31-50% tumorceller viser immunreaktivitet; 3, 50% tumorceller viser immunoreaktivitet. Den immunhistokemiske undersøgelse var blind, dvs. slides blev kodet og patolog havde ikke forudgående kendskab til det lokale tumor byrde, lymphonodular spredning og sortering af OSCCs mens scorer det immunoreaktivitet.

Opfølgning Study

Seventy-to af de 105 OSCC patienter, som gennemgik behandling af primær OSCC perioden 2002-2005, kunne følges løbende i opfølgningen klinikken, mens 33 patienter blev tabt for opfølgning. Overlevelse status af patienterne blev verificeret og regelmæssigt opdateret fra Tumor Registry optegnelser, Institut for Rotary Cancer Hospital, fra december 2010. Pr vores protokol, OSCC patienter med T

1 og T

2 tumorer blev behandlet med radikal strålebehandling eller kirurgi alene, hvorimod flertallet af patienter med T

3 og T

4 sygdom blev behandlet med en kombination af radikal kirurgi efterfulgt af postoperativ radikal strålebehandling som beskrevet [19]. Patienterne blev fulgt op med jævne mellemrum og blev indspillet tid til tilbagefald. Hvis en patient døde under opfølgningen, blev patienten overlevelsestid censureret på dødstidspunktet. Medicinsk historie, klinisk undersøgelse, og radiologisk evaluering blev anvendt til at bestemme, om dødsfaldet skyldes tilbagevendende kræft (recidiverende patienter) eller fra nogen anden årsag. Sygdomsfri overlevende blev defineret som patienter fri for klinisk og radiologisk evidens for lokal, regional eller fjern recidiv på tidspunktet for den sidste opfølgning. Loco-regional tilbagefald /død blev observeret i 32/72 (44%) patienter overvåges i denne undersøgelse. Patienter, som ikke udviste tilbagefald var i live indtil slutningen af ​​opfølgningsperioden. Blandt de 33 patienter, der blev tabt til at følge op, kunne antallet af dødsfald ikke konstateres; derfor samlet overlevelse ikke kunne betragtes som en særskilt parameter i vores undersøgelse. Kun sygdomsfri overlevelse af patienterne blev undersøgt. Sygdomsfri overlevelse blev udtrykt som det antal måneder fra datoen for kirurgi til loco-regional tilbagefald. Patienterne blev overvåget i en periode på median 24 måneder og maksimum 91 måneder.

Statistisk analyse

De immunhistokemiske data blev udsat for statistisk analyse ved hjælp af SPSS 17,0 software (Chicago IL). Forholdet mellem E-cadherin, β-catenin og ALCAM udtryk og klinisk-patologiske parametre blev testet i univariat analyse af Chi-Square test, Chi-Square test for trend, Fishers eksakte test og logistisk regressionsanalyse. For at bestemme uafhængige prædiktorer for tumorigenese, var logistisk regressionsanalyse udføres trinvis for de enkelte variabler, clinicopatholgical parametre og proteinerne E-cadherin, β-catenin og Alcam. Forskellige kombinationer af variabler blev dannet for at vurdere sammenhængen mellem disse kombinationer og patientens prognose. Opfølgende undersøgelser blev analyseret af Kaplan-Meier, og Cox proportionel risiko test. Kun sygdomsfri overlevelse blev vurderet i nærværende undersøgelse, da antallet af dødsfald på grund af sygdomsprogression ikke tillod en pålidelig statistisk analyse. Sammenhængen mellem patientresultatet og variabler blev vurderet ved log-rank test. Dobbeltklæbende P-værdier blev beregnet og p. 0,05 blev betragtet som signifikant

lille interfererende RNA-medieret ALCAM Knockdown

menneskelige hoved og hals pladecarcinom cellelinie, SCC-4-celler blev opretholdt i DMEM indeholdende 10% FBS, 100 pg /ml streptomycin, 100 U /ml penicillin ved 37 ° C i fugtig atmosfære af 5% CO

2. SCC-4-celler blev transient transficeret under anvendelse Hiperfect reagens (Qiagen) og en stumpendet duplex af RNA-oligonukleotider, 5′-AAG CCC GAU GGC UCC CCA GUA UU-3’and 5′-AAU ACU GGG GAG CCA UCG GGC UU -3 ‘. SCC-4-celler blev behandlet med varierende koncentrationer af siRNA (1-15 nM) og med varierende koncentrationer af Hiperfect reagens (1-4,5 pi). ALCAM siRNA (15 nM) med 4,5 pi Hiperfect reagens i 48 timer viste sig at være den bedste koncentration med maksimal transfektionseffektivitet (95%) og den maksimale dæmpning af ALCAM genekspression (data ikke vist). Otteogfyrre timer efter transfektion blev siRNA-behandlede celler anvendt i efterfølgende eksperimenter.

Reverse Transcription-PCR-analyse

Totalt RNA blev isoleret fra SCC-4-celler (kontrol og siRNA transfektanter) som tidligere beskrevet [20]. PCR-amplifikation blev udført i et samlet volumen på 20 pi indeholdende 3 pi revers transkriberet cDNA, 10X PCR-buffer, 10 mM dNTP’er, 20 pM af hver primer og 1unit Taq polymerase, (Gibco BRL, Gaithersburg, MD). Efter 5 minutters indledende denaturering, 35 amplifikationscykler på 1 minut ved 94 ° C blev 2 minutter ved specifik annealing temperatur og 1 minut ved 72 ° C udført, efterfulgt af en 10 minutters forlængelse ved 72 ° C. Til amplifikation af ALCAM cDNA fremadrettet primer, 5′-GTC TGG GCA ATA GTG ACT CC-3 ‘og revers primer 5′-AAC CAT TGC AAG TGG AAA CC-3′ blev anvendt. For E-cadherin cDNA, frem primer 5’-CAG CAC GTA CAC AGC FTT AA-3 ‘og revers primer 5′-ACC TGA GGC TTT GGA TTC CT-3′ blev anvendt. For β-catenin cDNA, frem primer 5’-GAA ACG GCT TTC AGT TGA GC-3 ‘og revers primer 5’-CTG GCC ATA TCC ACC AGA GT -3 “blev brugt. β-actin blev anvendt som en intern kontrol for at sikre, at samme mængde RNA blev anvendt i kontrol- og siRNA transficerede celler. For β-actin cDNA, fremad primer 5’CAG CCA TGT ACG TTG CTA TCC AG -3 ‘og revers primer 5’GTT TCG TGG ATG CCA CAG GAC -3 “blev brugt. PCR-produkter blev separeret på 1,5% agarosegel, farvet med ethidiumbromid og visualiseret med AlphaEase FC-software (version 3.1.1) De intensiteter af PCR bånd blev kvantificeret med Chemi Imager IS-4400 (Alpha Innotech Corp, CA) som beskrevet tidligere [14].

immunblotting

ALCAM siRNA transficeret SCC-4-celler i 48 timer og ubehandlede kontrolceller blev anvendt til fremstilling af celleekstrakter ved kogning cellepelleten i SDS-lysepuffer. Kort fortalt blev helcelleekstrakt (100 ug protein /bane) opløst ved SDS-PAGE og overført til nitrocellulose-membran [21]. Nitrocellulosemembranerne blev blokeret med 10% fedtfri mælk natten over ved 4 ° C og undersøgt med anti-ALCAM; E-cadherin og β-catenin antistoffer (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) i 2 timer ved 37 ° C. Derefter blev membranerne probet med sekundære antistoffer mod disse proteiner (anti-ged 1:5000 og anti-muse 1:2000 fortynding). Blottene blev testet igen med α-tubulin at normalisere for lige protein loading. Blottene blev fremkaldt under anvendelse forøget kemiluminescens Reagent (ECL) (Amersham, Buckinghamshire, UK) som beskrevet [21].

Konfokal Laser Microscopy

SCC-4-celler dyrket på dækglas blev behandlet med ALCAM siRNA i 48 timer og behandlet til konfokal laser mikroskopi som tidligere beskrevet [21]. Celler blev skyllet i Dulbeccos PBS (DPBS), fikseret i methanol i 5 minutter. ved -20 ° C og inkuberet med anti-ALCAM, E-cadherin og β-catenin antistoffer (10 ng /ml) opnået fra SantaCruz Biotechnologies Inc., Santacruz, CA. Efter skylning i DPBS, blev dækglassene inkuberet med biotinyleret sekundært antistof (anti-kanin /ged, LSAB + Kit, DAKO Cytomations, Glostrup, Danmark) i 45 minutter. ved 37 ° C efterfulgt af inkubering med streptavidin-konjugeret fluorochrom, fluoresceinisothiocyanat (FITC) (DAKO Cytomations, Danmark). Derefter blev dækglassene modfarvet med propidiumiodid (PI) (10 mg /ml; Sigma-Aldrich, MO) i 30 sek. Dækglas blev derefter skyllet og monteret i monteringsmedium. Slides blev undersøgt med Konfokal Laser Scanning Microscope som tidligere beskrevet [21].

Resultater

immunhistokemisk analyse af E-cadherin membranøs Expression i Normal Oral Væv, Hyperplasi, dysplasi og OSCC

E-cadherin-ekspression i membranen af ​​epitelceller blev observeret hos 27/30 (90%) af de histologisk normale orale væv med lejlighedsvis cytoplasmatisk ekspression (tabel 1, figur 1A). Signifikant tab af E-cadherin membranøs ekspression blev observeret i hyperplasi [19/56, 34% (figur 1B) sammenlignet med de normale orale væv (3/30, 10%), [p = 0,015; OR = 4,6, 95% C.I. = 1,2-17,2], og i 12/20, 60% dysplasi (figur 1C) [H /D: p = 0,06; OR = 2,9, 95% C.I. = 1,0-8,4]. Chi-Square trendanalyse viste signifikant tab af E-cadherin membranøs udtryk i væv fra forskellige oral cancer udvikling (normal, hyperplasi, dysplasi og invasive cancer; p

trend 0,001). Tab af E-cadherin membranøs ekspression blev observeret i 61/105 (58%) OSCCs (tabel 1, figur 1 D) blev og associeret med sent klinisk fase (p = 0,006, OR = 3,1, 95% CI = 1,3-7,0), øget tumor byrde (p = 0,03, OR = 2,4, 95% CI = 1,1-5,3), og nodal metastaser (p = 0,04, OR = 2,4, 95% CI = 1,1-5,3)

Histologisk normal. vævssnit viser membranøs immunoreaktivitet for E-cadherin (A) og β-catenin (G) -proteiner. Hyperplastisk (B), dysplastiske (C), OSCC (D) vævssnit afbilder tab af membranøs farvning for E-cadherin. Hyperplastisk (H), dysplastiske (I), OSCC (J) vævssnit afbilder tab af membranøs farvning for β-catenin. I negative kontroller for E-cadherin (E) og β-catenin (F), blev det primære antistof erstattet af ikke-immunt IgG af samme isotype at sikre specificitet. Brystkræft vævssnit anvendt som positiv kontrol viste membran farvning for E-cadherin (K) og β-catenin (L) proteiner. Original forstørrelse X 200.

Foreningen af ​​tab af membranøs E-cadherin Expression med Disease Outcome

Seventy-to OSCC patienter kunne følges op i en periode på 91 maksimal måneder (median 24 måneder). Kaplan-Meier overlevelsesanalyse og Cox ‘proportionale hazard model viste, at patienter med E-cadherin positive tumorer havde øget median sygdomsfri overlevelse (DFS) af 74 måneder i forhold til dem med tab af membranøs immunopositivitet (median DFS = 18 måneder) [p = 0,001; HR = 3,9; 95% CI = 1,6-9,6] (figur 2A)

A: tab af E-cadherin membranøs (E-cad

-) udtryk, B:. Tab af β-catenin membranøs (β-catM

-) udtryk, C: tab af E-cadherin og β-catenin membranøs (E-cad

– /β-cat M

-) udtryk, D: ALCAM cytoplasmatisk positiv og E-cadherin tab membran (E-cad

– /ALCAM C

+).

immunhistokemisk analyse af β-catenin Expression i Normal Oral væv, Hyperplasi, dysplasi og OSCC

β catenin var hovedsageligt til stede i membranen af ​​epitelceller i 27/30 (90%) af histologisk normale orale væv; lejlighedsvis cytoplasmatisk /nuklear farvning blev også observeret (tabel 1, figur 1G). Betydeligt tab af β-catenin membran ekspression blev observeret i hyperplasi [20/56, 36%, p = 0,01; OR = 5,0, 95% C.I. = 1,3-18,6, (figur 1 H)] sammenlignet med normale orale væv (3/30, 10%), og i dysplasi i sammenligning med hyperplasi [14/20, 70%, (fig 1 i), p = 0,008; OR = 4,2, 95% C. I. = 1,4-12,6]. Signifikant stigning i cytoplasmatisk /nukleare akkumulering af β-catenin blev observeret i dysplasi i sammenligning med hyperplasi (p = 0,046; OR = 3,1; 95% C.I. = 1,0-9,5) (tabel 1). Chi-Square trendanalyse viste signifikant tab af β-catenin membranøs udtryk og stigning i cytoplasmatisk /nukleare akkumulering i væv fra forskellige oral cancer (normal, hyperplasi, dysplasi, og invasive kræftformer; p

trend 0,001 og p

trend = 0,003 henholdsvis).

Tab af β-catenin membranøs udtryk blev observeret i 65 af 105 (62%) OSCCs (Figur 1J, tabel 1) og var forbundet med sen klinisk udvikling (p = 0,001, OR = 7,4, 95% CI = 3,1-18,1), øget tumor byrde (p = 0,001, OR = 4,1, 95% CI = 1,8-9,4) og nodal metastaser (p = 0,003, OR = 3,7, 95% CI = 1,6-8,9). I OSCCs 28 af 105 (27%) tilfælde udviste cytoplasmatisk /nukleare akkumulering af β-catenin og var forbundet med sen klinisk fase (p = 0,014, OR = 3,6, 95% CI = 1,2-10,6) og tumorbelastning (p = 0,025 ELLER = 2,8, 95% CI = 1,1-7,2).

Foreningen af ​​tab af membranøs β-catenin Expression med disease Outcome

Tab af membranøs β-catenin immunopositivitet var forbundet med reduceret sygdom free-overlevelse (median DFS = 15 måneder) sammenlignet med patienter med β-catenin membran positive tumorer (median DFS = 78 måneder) [p 0,001; HR = 7,8; 95% CI = 2,7-22,3] (figur 2B).

associering mellem E-cadherin og β-catenin i orale læsioner og OSCCs

signifikant sammenhæng blev observeret mellem tab af membranøs E-cadherin og β-catenin udtryk i OLS (p = 0,001, OR = 16,7, 95% CI = 5,3-52,7, tabel 2) og OSCCs (p = 0,001, OR = 8,8, 95% CI = 3,6-21,7, tabel 2). Tab af membranøs E-cadherin og β-catenin, når det tages som en fænotype (E-cad

– /β-cat M

-) korreleret signifikant med avanceret tumor stadie (p = 0,004, OR = 3,2, 95% CI = 1,4-7,1), nodal metastaser (p = 0,005, OR = 3,1, 95% CI = 1,4-6,9) og sen klinisk udvikling (p 0,001, OR = 5,5, 95% CI = 2,2-13,4). Chi-Square trendanalyse viste signifikant tab af membranøs E-cadherin og β-catenin (E-cad

– /β-cat M

-) i forskellige stadier af oral carcinogenese (normal, hyperplasi, dysplasi og invasive cancer ; p

trend = 0,008). Endvidere tab af E-cad

– /β-cat M

– immunopositivitet var signifikant forbundet med reduceret sygdomsfri overlevelse [median DFS = 14 måneder i forhold til p-catenin og E-cadherin membran positive tumorer med median sygdomsfri overlevelse på 71 måneder. (p 0,001; HR = 4,7; 95% CI = 2,1-10,1)] (Figur 2C)

associering mellem E-cadherin, β-catenin og ALCAM Expression i Oral Læsioner

for at undersøge betydningen af ​​ALCAM i biologiske udvikling af invasiv cancer og metastaser, er det vigtigt at bestemme dens korrelation med forstyrrelser i ekspressionen af ​​adherens junction komponenter. Foreninger blandt protein udtryk for E-cadherin, β-catenin og ALCAM blev bestemt (tabel 2) som ALCAM proteinekspression var også blevet analyseret i samme kohorte af patienter i en tidligere undersøgelse [17]. Tab af β-catenin membranøs ekspression viste sig at være signifikant associeret med samlet (p = 0,018; OR = 3,3, 95% CI = 1,2-8,8, tabel 2) og cytoplasmiske (p = 0,008; OR = 3,6, 95% CI = 1,4-9,3, tabel 2) ALCAM ekspression.

Blandt de analyserede hyperplasier (n = 56) i denne undersøgelse, tab af membranøs E-cadherin blev fundet at være signifikant associeret med tab af β-catenin-ekspression (p lt 0,001, OR = 24,0, 95% CI = 5,6-102). Tab af β-catenin membranøs ekspression viste sig at være signifikant associeret med samlede ALCAM ekspression (p = 0,017; OR = 4,5, 95% C.I. = 1,2-16,0). Tab af membran E-cadherin og β-catenin taget sammen som én fænotype (E-cad

– /β-catM

-) korreleret signifikant med overordnet ALCAM immunopositivitet i hyperplasi. Blandt de analyserede dysplasier (n = 20), blev fundet tab af β-catenin membranøs udtryk, der skal signifikant associeret med ALCAM cytoplasmatisk immunopositivitet (p = 0,05; OR = 9,0, 95% Cl = 1,0 til 100)

associering mellem E-cadherin, β-catenin og ALCAM ekspression i OSCC

Associations blandt ALCAM, E-cadherin og β-catenin udtryk blev bestemt i OSCC (tabel 2). Tab af E-cadherin membranøs ekspression viste sig at være signifikant associeret med cytoplasmatisk ALCAM ekspression (p = 0,038, OR = 2,2, 95% C.I = 1,0-5,0). Tab af β-catenin membran udtryk signifikant korreleret med generelle ALCAM udtryk (p = 0,001, OR = 3,9, 95% CI = 1,7-9,0), og cytoplasmatisk ALCAM immunopositivitet (p = 0,002, OR = 3,7, 95% CI = 1,6 8.7). Tab af membran E-cadherin og β-catenin når det tages som en fænotype (E-cad

– /β-cat M

-). Korreleret signifikant med overordnede og cytoplasmatisk ALCAM immunopositivitet i OSCC (tabel 2)

uafhængige prædiktorer for overgang fra normal til OL og Kræft Fænotype

for at bestemme de uafhængige prædiktorer for overgang fra normal til OL, var logistisk regressionsanalyse udføres på en trinvis måde. Af disse variabler, er de parametre, der opstod betydelig i univariate og multivariate analyser opsummeret i tabel 3. ALCAM cytoplasmatisk udtryk (p = 0,024, OR = 11,6; 95% CI = 1,4-98,2) opstået for at være den mest betydningsfulde fænotype for overgang normal mundslimhinden til OL. Tab af membranøs β-catenin udtryk dukket op som den mest betydningsfulde prædiktor for overgangen fra hyperplastiske til dysplastiske læsioner (p = 0,01, OR = 4,2, 95% C. I. = 1,3-12,6). Multivariat logistisk regression analyser viste, at tab af membranøs E-cadherin udtryk er den mest betydningsfulde fænotype for overgang OL til OSCC (p = 0,02, OR = 2,0; 95% CI = 1,1-3,7)

klinisk resultat af patienternes

uafhængige prædiktorer for kliniske parametre, tumor byrde, lymfeknudeinvolvering og klinisk fase af OSCC.

for at bestemme de uafhængige prædiktorer for kliniske parametre, tumor byrde, lymfeknudeinvolvering og klinisk fase, blev logistisk regressionsanalyse udføres på en trinvis måde for E-cadherin, β-catenin og ALCAM enkeltvis eller i kombination, i 105 OSCCs (tabel 3). β-catenin membran tab (p = 0,001, OR = 4,2; 95% CI = 1,8-10,2) og β-catenin nuklear /cytoplasmatisk akkumulering (p = 0,027, OR = 3,1; 95% CI = 1,1-8,3) var de mest betydelige prædiktorer for øget tumor byrde. β-catenin membran tab (p = 0,003, OR = 3,8; 95% CI = 1,6-9,3) og samlet ALCAM udtryk /β-catenin nukleare /cytoplasma akkumulation (p = 0,025, OR = 3,4, 95% CI = 1,2-9,7 ) var de væsentligste prædiktorer for nodal metastaser. Kombinerede markører, ALCAM ekspression /β-catenin nuklear /cytoplasmatisk akkumulering (p = 0,006, OR = 9,9, 95% CI = 1,9-51,5) og β-catenin tab membran (p 0,001, OR = 8,7; 95% CI = 3,3 -22,8) var de væsentligste prædiktorer for sent klinisk fase (tabel 3).

foreningen af ​​ændringer i E-cadherin, β-catenin og ALCAM udtryk med resultatet sygdom.

betydelig foreningen blev observeret mellem reduceret sygdomsfri overlevelse og tumor stadie [p = 0,03; Hazard Ratio (HR) = 2,5; 95% C.I. = 1,1-5,6].

For mulig additiv prognostisk kapacitet Kaplan-Meier overlevelsesanalyse og Cox ‘proportionale hazard model blev brugt til at analysere forskellige kombinationer af potentielle biomarkører for at vurdere den sammenslutning af ændringer i forskellige biomarkører med kliniske resultater . Selvom flere kombinationer blev fundet at være signifikant (tabel 3), den mest betydningsfulde fænotype, der opstod som negativ prognosticator var: øget cytoplasmatisk ALCAM udtryk + tab af membranøs E-cadherin; ALCAM C

+ /E-cad

– (p 0,001; HR = 4,8; 95% CI = 2,2-9,9, figur 2D). (Tabel 3)

Baseret på vores data,