Abstrakt
Baggrund
for at undersøge den prædiktive betydning af
KRAS
,
BRAF, PIK3CA
mutationsstatus,
AREG- ereg
mRNA-ekspression, PTEN proteinekspression og hududslæt i metastatisk kolorektal cancer (mCRC ) patienter behandlet med cetuximab indeholder bjærgning kemoterapi.
Metoder
Primære tumorer fra 112 FRK patienter blev analyseret. Det værste toksicitet huden under behandlingen blev registreret.
Resultater
KRAS
,
BRAF
PIK3CA
mutationer var til stede i 37 (33%), 8 (7,2%) og 11 (9,8%) tilfælde, henholdsvis blev PTEN tabt i 21 (19,8%) tilfælde,
AREG
ereg
blev overudtrykt i 48 (45%) og 51 (49%) tilfælde. I hele studiepopulationen, tid til tumor progression (TTP) og samlet overlevelse (OS) var signifikant lavere hos patienter med
KRAS Hotel (
s
= 0,001 og
s
= 0,026, henholdsvis) eller
BRAF
(
s
= 0,001 og
s
0,0001, henholdsvis) mutant tumorer, nedregulering af
AREG
(
s
= 0,018 og
s
= 0,013, henholdsvis) eller
ereg Hotel (
s
= 0,002 og
s
= 0,004 henholdsvis) og grad 0-1 hududslæt (
s
0,0001 og
s
0,0001 henholdsvis). I
KRAS
wt patienter TTP og OS var signifikant lavere hos patienter med
BRAF
(
s
= 0,0001 og
s
0,0001 henholdsvis) mutant tumorer, nedregulering af
AREG Hotel (
s
= 0,021 og
s
= 0,004, henholdsvis) eller
ereg Hotel (
p
= 0,0001 og
s
0,0001, henholdsvis) og grad 0-1 hududslæt (
s
0,0001 og
s
0,0001 henholdsvis). TTP var signifikant lavere hos patienter med
PIK3CA
mutationer (
s
= 0,01) eller tabt PTEN (
s
= 0,002). Multivariat analyse viste
KRAS
(Hazard Ratio [HR] 4.3,
s
0,0001),
BRAF
mutation (HR: 5.1,
s
0,0001),
ereg
lav udtryk (HR: 1,6,
s
= 0,021) og fravær af alvorlig /moderat hududslæt (HR: 4.0,
s
0,0001) og tilstedeværelsen af undifferantited tumorer (HR: 2.2,
s
= 0,001) blev afsløret som selvstændige prognostiske faktorer for nedsat OS
konklusioner
Disse resultater understreger, at
KRAS-BRAF.
mutationer og
ereg
udtryk kan bruges som biomarkører for at vælge patienter, der gennemgår anti-EGFR behandling yderligere
Henvisning:. Saridaki Z, Tzardi M, Papadaki C, Sfakianaki M, Pega F , Kalikaki A, et al. (2011) Virkningerne af
KRAS, BRAF, PIK3CA
Mutationer, PTEN,
AREG, ereg
Expression og udslæt i ≥2
nd Linje Cetuximab-terapi af kolorektal cancer patienter. PLoS ONE 6 (1): e15980. doi: 10,1371 /journal.pone.0015980
Redaktør: Meenhard Herlyn, Wistar Institute Program, USA
Modtaget: September 23, 2010; Accepteret: December 1, 2010; Udgivet: 20 Jan 2011
Copyright: © 2011 Saridaki et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres
Finansiering:. Dr. Z. Saridaki er en modtager af en kretensiske Association for Biomedical Research (CABR) forskning fællesskab. Ingen nuværende eksterne finansieringskilder til denne undersøgelse
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser
Introduktion
På trods af de fremskridt, der gøres i forvaltningen af metastatisk kolorektal cancer (mCRC) i løbet af de sidste par år, at sygdommen stadig et stort folkesundhedsproblem i den vestlige verden med en anslået 146,970 nye CRC tilfælde og 49,920 dødsfald for 2009 i USA [1].
To monoklonale antistoffer rettet mod EGFR (anti-EGFR MoAb’er), både ved binding til det ekstracellulære domæne, og således, hvilket fører til inhibering af dens nedstrøms signalering, har det kimære IgG1 moAb cetuximab og fuldt humaniseret IgG2 moAb panitumumab, trådte klinisk praksis ved mCRC indstilling og har vist sig at tilvejebringe en beskeden klinisk fordel i forbehandlede patienter, enten anvendt alene eller i kombination med kemoterapi [2] – [5]. Ikke desto mindre fra starten klart, at ikke alle patienter drager fordel af iblanding af disse midler i kombinationerne behandling; faktisk, ikke-randomiserede retrospektive studier [6] – [11] samt retrospektiv analyse af prospektive randomiserede forsøg [12] – [16] vist, at tilstedeværelsen af
KRAS
mutationer var prædiktive for resistens over for anti- EGFR MoAb’er terapi og var forbundet med en dårligere prognose og kortere overlevelse. Baseret på denne viden, en primær tumor
KRAS
mutationsstatus er nu obligatorisk for behandling af metastatisk sygdom med en anti-EGFR moAb (European Medicine Agency – EMEA-HC-741 og HC-558 og US Food and Drug Administration – FDA ansøgning nr (BLA) 125084 og nr (BLA) 125.147)
Det er dog ikke alle patienter med
KRAS
WT tumorer drage fordel af anti-EGFR MoAbs behandling, betydning. at yderligere genetiske determinanter for resistens eksisterer [7], [9], [17] – [19]. Faktisk fra tre sporadiske FRK retrospektive undersøgelser [20] – [22],
BRAF
V600E mutation er blevet vist at identificere en undergruppe ( 10%) af patienterne, der ikke kun foreliggende modstand mod anti-EGFR MoAbs terapi, men er også karakteriseret ved særlig ugunstig prognose uanset behandling administration [20] – [22]. Selv ikke helt klart endnu,
PIK3CA
-mutant tumorer synes at udlede ingen eller ringe gavn af anti-EGFR MoAbs behandling [20], [23] – [26].
Udover
KRAS-BRAF-PIK3CA
mutationsstatus, EGFR epiregulin (
ereg
) og ampiregulin (
AREG
) ligander ‘udtryk i primære CRC tumorer har vist signifikant forudsige kliniske resultat i
KRAS
WT FRK patienter behandlet med cetuximab, hvilket indikerer ligand-drevet autokrine onkogen EGFR signalering [27], [28]. Desuden PTEN (phosphatase og tensin homolog) proteinekspression, og specifikt dens tab, synes at være forbundet i en række undersøgelser med resistens over for behandling med anti-EGFR MoAb’er behandling [21], [29] – [31]. Desuden fra et klinisk synspunkt, den eneste parameter, der har været konstant forbundet med en høj sandsynlighed for respons, forlænget progressionsfri overlevelse (PFS) og overlevelse (MOS) til anti-EGFR MoAbs behandling er udvikling af huden udslæt [2], [5], [32].
Kliniske parametre synes at være utilstrækkelige til patientudvælgelse, men, biomarkører ‘analyser er allerede blevet indarbejdet i behandlingen af CRC patienter. Formålet med denne undersøgelse var at samtidig fastslå og undersøge den kliniske relevans af alle kendte biomarkører,
KRAS
exon 2,
BRAF
V600E,
PIK3CA
exon 9 og 20 mutationsstatus i forbindelse med
AREG
,
ereg
mRNA-ekspression, PTEN immunhistokemisk proteinekspression, samt, hududslæt udvikling i FRK patienter behandlet med cetuximab indeholder bjærgning kombinationskemoterapi.
materialer og metoder
Patient befolkning og studiedesign
Et hundrede og tolv patienter i træk, med histologisk bekræftet mCRC og tilgængelig tumor materiale til molekylær analyse, som blev behandlet med cetuximab indeholder bjærgning kemoterapi ved Institut for Medicinsk Onkologi, University Hospital of Heraklion (Kreta, Grækenland) mellem 1/2005 – 12/2008, blev indrulleret. Undersøgelsen blev godkendt af den etiske og videnskabelige komitéer fra University General Hospital i Heraklion og alle patienter gav deres skriftligt informeret samtykke til brug af vævet materiale til translationel forskning.
Patienternes evaluering blev udført ved baseline og hver fjerde cyklusser af kemoterapi. Patienternes sygdomsstatus blev kodet, uden kendskab til laboratorieanalyse.
Tissue udvælgelse, DNA og RNA-ekstraktion
formalin-fikseret, blev paraffinindlejrede (FFPE) tumor sektioner gennemgået af en patolog ( MT) at bekræfte diagnosen og definere tumor-berigede områder for dissektion. Ti serielle sektioner af 5 um tykkelse blev farvet med nuklear fast red (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og skrabe dissektion under et binokulært mikroskop blev udført for prøver med ≥80% tumorceller; for prøver med 80% maligne celler, mikrodissektion med den piezoelektriske Eppendorf microdissector (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) blev udført. DNA-ekstraktion blev udført med anvendelse af Epicentre® Bioteknologi MasterPure ™ Complete DNA og RNA Purification Kit ifølge producentens instruktioner (Epicentre, Madison, WI, USA) efter de isolerede cancerceller blev lyseret i buffer indeholdende proteinase K ved 60 ° C i 72 timer. Til RNA-ekstraktion blev cancerceller resuspenderet i 400 pi RNA lyseringsbuffer suppleret med 300 mg proteinase K (QIAGEN, Valencia, CA, USA) og inkuberet ved 60 ° C i 16 timer, indtil vævet var fuldstændig solubiliseret. RNA blev oprenset ved Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og efterfølgende behandlet med DNase (DNΑ- fri, Ambion, Austin, TX, USA) for at undgå genomisk DNA-kontaminering og opbevaret ved -80 ° C indtil brugt.
KRAS
og PIK3CA mutationsanalyse
KRAS
og PIK3CA mutationsanalyse blev udført af Sanger sekventering efter PCR-amplifikation af KRAS exon 2 og PIK3CA exon 9 og 20. PCR-betingelser med primere sæt, som tidligere er blevet rapporteret [22].
BRAF
mutationsanalyse
V600E
BRAF
mutation blev påvist ved real-time PCR under anvendelse af allel metode diskrimination som tidligere beskrevet [33], [34]. Kort fortalt blev DNA ekstraheret fra tumorceller amplificeret ved anvendelse af et sæt primere og to hydrolyseprodukter prober i ABI PRISM 7900T Sequence Detection System (AB; Applied Biosystems, Forest City, CA, USA). De to hydrolyseprodukter prober blev mærket ved 5 med VIC og FAM fluoroforer reportere for wt og den mutante allel, hhv. SDS 2.3 software blev anvendt til analyse af resultaterne.
AREG
ereg
mRNA-ekspression
SuperScript III revers transkriptase (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) blev anvendt til fremstilling cDNA fra 50 ng samlet RNA for hvert gen analyseret som tidligere beskrevet [35]. Relativ cDNA kvantificering for
AREG, ereg
og begge
β-actin
PGK
som interne referenceformål gener blev udført ved hjælp af ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (AB), som tidligere beskrevet [35]. De primere og probe sæt blev designet ved hjælp Primer Express 2.0 Software (AB), i henhold til Ref Seq NM_001657.2 for
AREG
og NM 001.432,2 for
ereg Hotel (http: //www. ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink). Sekvensen af primerne og 5 ‘mærket fluorescerende reporter-farvestof (6FAM) prober for alle reference- og målgener er vist i tabel 1.
Relativ genekspression kvantificering blev udført ifølge den sammenlignende Ct metoden under anvendelse af
β-actin
PGK
som endogene kontrol og kommercielle RNA kontroller (Stratagene, La Jolla, CA, USA) som kalibratorer. De endelige resultater blev bestemt som følger: 2
– (ACt prøve-ACt kalibrator), hvor ΔC
T værdier af kalibrator og prøve blev bestemt ved at trække C
T værdi af målgenet fra middelværdien værdien af begge referencepunkter gener. I alle eksperimenter, tre eksemplarer kun med en standardafvigelse (SD) i Ct værdi 0,25 blev accepteret. Desuden har genomisk DNA-kontaminering af hver prøve blevet udelukket ved ikke-revers transkription af RNA [35].
PTEN-proteinekspression
tre- til 4-
μ
m tumor vævssnit af paraffinindlejrede prøver fra hver patient blev udvalgt for PTEN IHC-farvning ved anvendelse af 17.a monoklonalt muse-antistof (1:25 fortynding, NeoMarkers; ThermoFisher Scientific Inc, Fremont, CA), som tidligere beskrevet [28], [36]. Efter afparaffinering og læskning af sektioner blev antigener afsløret ved opvarmning i EDTA-buffer. Immunfarvning blev udført under anvendelse af UltraVision LP storskalaproduktion Detection System AP Polymer (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Negative kontrolglas blev fremstillet ved at udelade primært antistof. Prostatakræft og endotelceller blev anvendt som eksterne og interne positive kontroller, henholdsvis.
PTEN farvning var overvejende cytoplasmatisk. Som tidligere beskrevet [28], intensitet blev scoret efter en fire enstrengede system: 0, ingen farvning; 1, svag; 2, moderat; og 3, stærk. En, to eller tre ekstra point blev tilskrevet hvis procentdelen af positive var 25%, 25-50% eller 50%, hhv. De prøver med en kumulativ score på ≥4 blev karakteriseret som positiv [28].
Study Design og Statistisk analyse
Den foreliggende undersøgelse var en retrospektiv analyse har til formål at udforske den prædiktive værdi af omfattende biomarkører analyse i resultatet af patienter med mCRC behandlet med cetuximab og kemoterapi som bjærgning behandling. Alle tilgængelige biopsier af den primære tumor med mere end 100 celler per sektion blev inkluderet i analysen. RT-qPCR-analyse gav værdier, der blev udtrykt som forholdet mellem to absolutte målinger (gen af interesse: gennemsnit af interne referenceformål gener). har været brugt CART analyse til vurdering af cut-off punkter
AREG
ereg
mRNA-ekspression, for at klassificere sager i grupper af en afhængig (TTP og MOS) variabel. Prøver med mRNA-ekspression over eller lig med skæringspunktet blev betragtet som prøver med høj ekspression, mens dem med værdi under medianen som prøver med lav ekspression. Foreninger mellem
KRAS, BRAF
,
PIK3CA
mutation status,
AREG
ereg
mRNA ekspression og PTEN IHC udtryk med baseline-karakteristika blev vurderet ved hjælp af Fishers eksakte test for kategoriske variabler eller logistisk regression for kontinuerlige variabler. Spearman eksakte test blev anvendt til at vurdere sammenhængen mellem
AREG
ereg
mRNA-ekspression. Tid til tumor progression (TTP) og samlet overlevelse (OS) blev målt fra datoen for cetuximab indeholder behandling linje indledning til den første radiografisk dokumentation for sygdomsprogression eller død, henholdsvis. Kaplan-Meier kurver blev brugt til at beskrive andelen af patienter, der forblev fri for arrangementer over opfølgningsperioden. Foreninger mellem prognostiske faktorer og TTP eller OS blev undersøgt ved hjælp af Cox proportionel risiko regressions modeller. Alle indberettede
p
-værdier er tosidet og ikke korrigeret for flere test.
Resultater
Patientdemografi
mutationsstatus for
KRAS
exon 2,
BRAF
exon 15 og
PIK3CA
exon 9 og 20 blev bestemt i alle 112 konsekutive patienter med mCRC mens.
AREG
ereg
mRNA-ekspression blev bestemt i 106 og 105 patienter, hvor tumor materiale forelå henholdsvis mens PTEN udtryk blev evalueret i 106 patienter. Alle patienter blev behandlet med cetuximab i kombination med kemoterapi (73% i kombination med irinotecan, 27% med Oxaliplatin) som salvage behandling (tabel 2). Sixty-seks (59%) patienter havde modtaget behandling i 2
nd line indstilling og de resterende 46 (41%) som 3
rd linje behandling. Der var ingen patient, der modtog anti-EGFR MoAbs i 1
st line indstilling. Sygdom karakteristika var typiske for mCRC i den vestlige verden; patienternes gennemsnitsalder var 66 år og 60% af dem var mænd (Tabel 2). De mediane PFS fra 1
st linie behandling var 8,9 måneder (95% CI 8,1-9,9), og den mediane tid fra tilbagefald til tidligere behandling linje indtil cetuximab administration var 1,1 måneder (95% CI 0,7-1,8).
mutationsstatus og udtryk værdier resultater
KRAS
mutationer blev påvist i 37 (33%),
BRAF
mutationer i otte (7,2%) og
PIK3CA
mutationer i 11 (9,8%, 8 i exon 9 og 3 i exon 20) primære tumorer, hhv.
KRAS
BRAF
mutationer var gensidigt udelukkende, mens tre tumorer udført både
KRAS
og
PIK3CA
mutationer.
AREG
ereg
blev overudtrykt i 48 (45%) og 51 (49%) patienter, henholdsvis, mens PTEN blev scoret som negativ (dvs. tab af funktion) i 21 (19,8 %) patienter (figur 1A og 1B). Når
PIK3CA
mutationer og PTEN udtryk blev analyseret sammen, aktivering af vejen (defineret som tab af PTEN eller
PIKECA
mutation) blev påvist i 25 (23,5%) patienter. En tendens til nedsat forekomst af
KRAS
mutationer i rektale tumorer blev observeret (
s
= 0,097) siden 31 af de 83 (37%) tumorer placeret i tyktarmen og seks af de 29 ( 20%) tumorer placeret på rektum rummede et
KRAS
mutation. Der var ingen sammenhæng mellem tilstedeværelsen af
KRAS
mutationer med patienternes køn, alder ( 70 år versus ≤70 år), fase ved diagnose, histologisk kvalitet, mucinous status, PTEN tab og
AREG Z –
ereg
udtryk (alle
s
-værdier 0,05). Også, blev der observeret en statistisk signifikant sammenhæng mellem tilstedeværelsen af
BRAF
mutationer og den histologiske bedømmelse (godt /moderat versus udifferentieret) (
s
= 0,049) og
ereg
mRNA nedregulering (
s
= 0,013). Der var ingen sammenhæng mellem tilstedeværelsen af
BRAF
PIK3CA
mutationer med patienternes køn, alder ( 70 år versus ≤70 år), scene på diagnose, tumor placering , mucinous status, PTEN tab og
AREG
udtryk (i begge tilfælde alle
s
-værdier 0,05)
Panel a:. Prøve af en moderat differentieret adenocarcinom tyktarmen scoret som PTEN positive (x100) Panel a:. Prøve af en moderat differentieret adenocarcinom i colon scoret som PTEN negativ (x100)
Virkningen af mutationsstatus og udtryk værdier om resultatet af bjærgning cetuximab Salg
Resultater i hele patienternes befolkning (tabel 3).
tabel 3 og 4 opsummerer virkningen af genetiske ændringer på resultatet af cetuximab-holdige bjærgning behandling. Median TTP af hele gruppen af patienter var 4,9 måneder (95% CI 4,1-5,7) og de tilsvarende median samlet overlevelse (OS) 14,5 måneder (95% CI 10,0-18,9). TTP og OS var signifikant lavere blandt patienter, hvis tumorer udført
KRAS
mutationer (3,1 vs. 6,4 måneder,
s
= 0,001 og 10,6 vs. 16,3 måneder,
s
= 0,026, henholdsvis) (figur 2A og 2B). Ligeledes TTP og OS var signifikant lavere blandt patienter, hvis tumorer udført
BRAF
mutationer (2,1 vs. 5,2 måneder,
s
= 0,001 og 4,3 vs. 15,1 måneder,
p
0,0001 henholdsvis) (figur 3 og 4). Der var ingen signifikant sammenhæng i form af TTP efter
PIK3CA
mutationsstatus eller PTEN udtryk i alle behandlede patienter (4,9 vs. 5. 7 måneder,
s
= 0,427 og 5,2 vs. 6,03 . måned,
s
= 0,102, henholdsvis) (figur 4A og 4B); på samme måde, var der ingen forskel i forhold til median OS mellem patienter med
PIK3CA
mutant (13,6 måneder) og vægt (15,0 måneder) primære tumorer (
s
= 0,44, figur 5A), som samt mellem patienter med tabt (14,3 måneder) eller normal (15,1 måneder) PTEN funktion (p = 0,82, figur 5B). Ikke desto mindre, når
PIK3CA
mutationsstatus og PTEN udtryk blev taget i betragtning sammen, aktivering af vejen gennem
PIK3CA
mutationer og /eller PTEN tab var korreleret med en tendens til nedsat TTP hos alle patienter (3,8 vs. 5,0 måneder,
s
= 0,051) (figur 4E), mens der ikke blev observeret nogen forskel i median OS (13,9 vs. 14,5 måneder,
s
= 0,878) (figur 5E)
Panel A:. Tid til Tumor Progression (TTP) Panel B: Median samlet overlevelse (OS)
Panel A:. Tid til Tumor Progression (TTP) i hele patienternes befolkning. Panel B: Median samlet overlevelse (OS) i hele patienternes befolkning Panel C: Tid til Tumor Progression (TTP) hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel D: Median samlet overlevelse (OS) hos patienter med
KRAS
WT primære tumorer
Panel A:. I henhold til
PIK3CA
mutationer status i hele patienter “befolkning. Panel B: ifølge PTEN ekspression i hele patienternes befolkning. Panel C: efter PIK3-PTEN aksen aktivering status (
PIK3CA
mutationer status og PTEN udtryk) i hele patienternes befolkning. Panel D: i henhold til
PIK3CA
mutationer status hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel E: ifølge PTEN udtryk hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel F: ifølge PIK3-PTEN akse aktivering status (
PIK3CA
mutationer status og PTEN udtryk) hos patienter med
KRAS
WT primære tumorer
Panel A. : i henhold til
PIK3CA
mutationer status i hele patienternes befolkning. Panel B: ifølge PTEN ekspression i hele patienternes befolkning. Panel C: efter PIK3-PTEN aksen aktivering status (
PIK3CA
mutationer status og PTEN udtryk) i hele patienternes befolkning. Panel D: i henhold til
PIK3CA
mutationer status hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel E: ifølge PTEN udtryk hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel F: ifølge PIK3-PTEN akse aktivering status (
PIK3CA
mutationer status og PTEN udtryk) hos patienter med
KRAS
WT primære tumorer
En stærkt signifikant sammenhæng mellem
AREG
ereg
mRNA ekspression blev observeret (Spearman ρ
2 = 0,736,
s 0,001
). I hele gruppen af patienter,
AREG
mRNA overekspression var signifikant korreleret med øget TTP og OS (5,0 vs. 3,8 måneder,
s
= 0,018 og 20,2 vs. 10,7 måneder,
p
= 0,013, henholdsvis]) (figur 6A og 6B). Desuden
ereg
mRNA overekspression blev også korreleret signifikant med øget TTP og OS (6,1 vs. 3,6 måneder,
s
= 0,002 og 17,6 vs. 10,7 måneder,
s
= 0,004, henholdsvis) (figur 7A og 7B)
Panel A:. Tid til Tumor Progression (TTP) i hele patienternes befolkning. Panel B: Median samlet overlevelse (OS) i hele patienternes befolkning Panel C: Tid til Tumor Progression (TTP) hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel D: Median samlet overlevelse (OS) hos patienter med
KRAS
WT primære tumorer
Panel A:. Tid til Tumor Progression (TTP) i hele patienternes befolkning. Panel B: Median samlet overlevelse (OS) i hele patienternes befolkning Panel C: Tid til Tumor Progression (TTP) hos patienter med
KRAS
wt primære tumorer. Panel D: Median samlet overlevelse (OS) hos patienter med
KRAS
WT primære tumorer
Tabel 3 og figur 8A og 8B demonstrere forskellene i TTP og OS ifølge
KRAS-BRAF
mutationsstatus og
AREG
udtryk. Det er vist, at den
KRAS-BRAF
WT og
AREG
overekspression profil blev korreleret signifikant med øget TTP og OS i forhold til enhver anden kombination. Tilsvarende viser figur 8C og 8D og tabel 3 viser forskellene i TTP og OS i henhold til
KRAS-BRAF
mutationsstatus og
ereg
udtryk; igen, blev
KRAS-BRAF
WT og ereg overekspression profil korrelerede signifikant med øget TTP og OS i forhold til enhver anden kombination
Panel A:. Tid til Tumor Progression (TTP) i henhold til
KRAS-BRAF
mutationer status og
AREG
mRNA-ekspression. Panel B: Median samlet overlevelse (OS) i henhold til
KRAS-BRAF
mutationer status og
AREG
mRNA-ekspression. Panel C: Tid til Tumor Progression (TTP) i henhold til
KRAS-BRAF
mutationer status og
ereg
mRNA. Panel D Median samlet overlevelse (OS) i henhold til
KRAS-BRAF
mutationer status og
ereg
mRNA.
Endelig har vi korreleret effekten af cetuximab induceret hud udslæt med resultatet behandling. Patienter med svær eller moderat (grad 2-3) hududslæt præsenteret betydeligt højere TTP (7,5 måneder) sammenlignet med dem med mild (grad 1) (4,5 måneder;
s
0,0001) og ingen hududslæt (2,3 måneder,
s
0,0001), samt øget OS (24,1 vs. 13,2 måneder,
s
0,0001, og versus 4,9 måneder,
p
0,0001) (tabel 3 og figur 9A og 9B)
Panel A: Tid til Tumor Progression (TTP) i henhold til den værste hududslæt kvalitet udviklet under behandlingen med cetuximab + kemoterapi.. Panel B: Median samlet overlevelse (OS) i henhold til den værste hududslæt kvalitet udviklet under behandlingen med cetuximab + kemoterapi
Resultater i
KRAS
WT patienters befolkning (tabel. 4)
Når kun
KRAS
WT sager blev analyseret patienter, hvis tumorer udført
BRAF
mutation havde endnu mere markant lavere TTP og OS (TTP:. 2.1 vs. 6.4 måneder,
s
0,0001; OS: 4.3 vs. 16,3 måneder,
s
0,0001) (figur 3C og 3D) sammenlignet med resultaterne i hele befolkningen. Hertil kommer, når kun det
KRAS
WT sager blev anset, nedsat TTP var signifikant associeret med tilstedeværelsen af
PIK3CA
mutation (4,3 vs. 6,4 måneder,
s
= 0,01) (Figur 4C) og PTEN nedregulering (3,7 vs. 5,0 måneder,
s
= 0,002) (figur 4D). Ikke desto mindre, i denne særlige gruppe af patienter med
KRAS
WT tumorer, blev ingen signifikant korrelation fundet i median OS mellem patienter med eller uden
PIK3CA
mutationer (13,5 vs. 16,3 måneder henholdsvis; p = 0,345) og dem med nedreguleret eller funktionelle PTEN (15,3 vs. 14,5 måneder, respektivt; p = 0,862) (figur 5C og 5D). Men, i
KRAS
WT patienter, når
PIK3CA
mutationsstatus og PTEN udtryk blev taget i betragtning sammen, en signifikant nedsat TTP blev observeret med aktiveringen af vejen gennem
PIK3CA
mutationer og /eller PTEN tab, sammenlignet med dets inaktiverede tilstedeværelse med vægt
PIK3CA
og /eller funktionelle PTEN (3,8 vs. 6,4 måneder,
s
= 0,001) (Figur 4F); omvendt kan en sådan sammenhæng ikke afsløres i form af median OS (13,9 vs. 16,2 måneder;
s
= 0,987). (Figur 5F)
I
KRAS
WT patienter,
AREG
mRNA overekspression var signifikant korreleret med øget TTP og OS (5,8 vs. 4,3 måneder,
s
= 0,021 og 23.2 vs. 10,7 måneder,
s
= 0,004, henholdsvis) (figur 6C og 6D), samt,
ereg
mRNA overekspression (7,0 vs 3,8 måneder,
s
= 0,0001 og 20.2 vs. 10,5 måneder,
s
. 0,0001, henholdsvis) (figur 7C og 7D)
univariate og Multivariat analyse
så vidt TTP var bekymret, den univariate analyse (tabel 3 og 4) demonstrerede signifikante sammenhænge med: i)
KRAS
mutationer (
s
= 0,001); ii)
BRAF
mutationer (
s
= 0,001); iii)
AREG
mRNA-ekspression (
s
= 0,018); iv)
ereg
mRNA-ekspression (
s
= 0,002) og v) udvikling af moderat alvorligt hududslæt (
s
0,0001). Desuden TTP i
KRAS
wt patienter var signifikant korreleret med
PIK3CA
mutation (
s
= 0,01), PTEN udtryk (
s
= 0,002 ) og
PIK3CA
-PTEN akse aktivering (
s
= 0,001). Hvad OS var bekymret den univariate analyse (tabel 3 og 4) viste signifikante sammenhænge med: i)
KRAS
mutationer (
s
= 0,026); ii)
BRAF
mutationer (
s
0,0001); iii)
AREG
mRNA-ekspression (
s
= 0,013); iv)
ereg
mRNA-ekspression (
s
= 0,004) og v) udvikling af moderat alvorligt hududslæt (
s
0,0001). Endelig blev tumor differentiering (ikke-differentierede tumorer) signifikant korreleret med nedsat median OS (Hazard Ratio: 1,9;
s
= 0,003)
I den multivariate analyse,
KRAS
(HR 4.3,
s
0,0001),
BRAF
(HR 5.1,
s
0,0001) mutation og lav
ereg
mRNA-ekspression (HR 1.6,
s
= 0,021) dukket op som uafhængige faktorer forbundet med nedsat TTP. Desuden fraværet af svær og moderat (grad 2-3) hududslæt dukket op som godt, som en uafhængig prognostisk faktor for faldet TTP (HR 4.0,
s
0,0001) (tabel 5). Desuden
KRAS
(HR 2,9,
s
= 0,01),
BRAF
(HR 3,0,
s
= 0,001) mutation og lav
ereg
mRNA-ekspression (HR 1.7,
s
= 0,021) dukket op som uafhængige faktorer forbundet med nedsat OS. Desuden tumor differentiering grad 3 opstod, så godt, som en uafhængig prognostiske faktorer for reduceret OS (HR 2.2,
s
= 0,001). Desuden fraværet af svær og moderat (grad 2-3) hududslæt opstod som en selvstændig prognostisk faktor for nedsat OS (HR 3.7,
s
0,0001, henholdsvis). (Tabel 5)
Salg
Diskussion
Efter opdagelsen af
KRAS
mutationer i forbindelse med anti-EGFR MoAbs modstand,
KRAS
mutations karakterisering af FRK tumorer er, i øjeblikket , præfabrikerede i rutinemæssigt før enhver beslutning behandling. Selv om tilstedeværelsen af
KRAS
mutationer er en specifik prædiktiv biomarkør for mangel på anti-EGFR MoAbs effekt [6] – [9], [14], [37] der er overbevisende dokumentation for, at yderligere genetiske begivenheder er involveret i denne proces, eftersom omkring halvdelen af
KRAS
wt patienter er resistente over for en sådan behandling [38]. Desuden har flere biomarkører blevet foreslået i forbindelse med
KRAS
mutationer som prædiktive markører for effektiviteten af anti-EGFR MoAb’er herunder
BRAF
[19], [22] eller
PIK3CA
mutationer [21], EGFR-ligander overekspression [23], [27], PTEN proteinekspression [28] og EGFR kopiere numre [10], [11]. I den aktuelle undersøgelse evaluerede vi den prædiktive betydning af andre almindelige mutationer observeret i CRC i samarbejde med PTEN protein udtryk og EGFR-ligander (
ereg
og
AREG)
mRNA-ekspression samt virkningen af hududslæt i en kohorte af patienter med mCRC behandlet med anti-EGFR plus kemoterapi som bjærgning behandling. Så vidt vi ved er dette den første undersøgelse, som kombinerer alle disse parametre sammen.
Leave a Reply
Du skal være logget ind for at skrive en kommentar.