PLoS ONE: Syntetisk miRNA-Slåmaskiner Målretning miR-183-96-182 Cluster eller miR-210 hæmme væksten og Migration og inducere apoptose i Blære Cancer Cells

Abstrakt

Baggrund

MikroRNA’er (miRNA) fungerer som endogene regulatorer af biologiske adfærd af menneskelige kræftformer. Flere naturlige ikke-kodende RNA’er er rapporteret at inhibere miRNA ved baseparring interaktioner. Disse fænomener rejser spørgsmål om evne kunstig anordning til regulering miRNA. Formålet med denne undersøgelse er at skabe syntetiske enheder, der er målrettet en enkelt miRNA eller en miRNA klynge og at kende deres terapeutiske virkninger på fænotyper af blære kræftceller.

Metodologi /vigtigste resultater

Tandem udbulede miRNA bindingssteder blev indsat i 3′-utranslaterede region (UTR) i SV-40-promotor-drevet Renilla luciferase genet til konstruktion af to “miRNA-slåmaskiner” til undertrykkelse af mIR-183-96-182 klynge eller mIR-210. En tredje enhed med tandemgentagelse sekvenser ikke komplementære til alle kendte miRNA blev frembragt som en ikke-målrettet kontrol. I funktionelle analyser blev blærekræft T24 og UM-UC-3-celler transficeret med hver af de tre enheder, efterfulgt af assays til detektion af deres virkninger. Luciferaseassays viste, at aktiviteterne i de luciferase journalister i miRNA-plæneklippere blev reduceret til 30-50% af den målrettede kontrol. Brug Real-Time qPCR, ekspressionsniveauerne af target miRNA viste sig at blive reduceret 2-3 gange med den tilsvarende miRNA-plæneklipper. Cellevækst, apoptose, og migration blev testet ved MTT-assay, flowcytometri assay og in vitro scratch-assay, hhv. Cell væksthæmning, øget apoptose og nedsat motilitet blev observeret i miRNA-plæneklippere-transficeret blære cancerceller.

Konklusioner /Betydning

Ikke kun et enkelt mål miRNA men også hele medlemmer af en target miRNA klynge kan blokeres ved hjælp af denne modulære design strategi. Anti-cancer virkninger har de syntetiske miRNA-plæneklippere i blærekræft cellelinjer. miR-183/96/182 klynge og MIR-210 er vist at spille onkogene roller i blærekræft. Et potentielt nyttigt syntetisk biologi platform for miRNA tab af funktion undersøgelse og behandling af kræft er blevet etableret i dette arbejde

Henvisning:. Liu Y, Han Y, Zhang H, Nie L, Jiang Z, Fa P, et al. (2012) Syntetisk miRNA-Slåmaskiner Målretning miR-183-96-182 Cluster eller miR-210 hæmme væksten og Migration og inducere apoptose i Blære Cancer Cells. PLoS ONE 7 (12): e52280. doi: 10,1371 /journal.pone.0052280

Redaktør: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hongkong

Modtaget: August 31, 2012; Accepteret: November 12, 2012; Udgivet: 17. december 2012