PLoS ONE: Kræft Associated fibroblaster i fase I-IIIA NSCLC: Prognose virkning og deres Korrelationer med Tumor Molekylær Markers

Abstrakt

Baggrund

Cancer associerede fibroblaster (CAFS) menes at regulere tumor vækst og metastase. Fibroblast aktiverende protein 1 (FAP-1) er en markør for fibroblast aktivering og af mange anerkendt som den vigtigste markør for CAF. Alpha glatmuskelactin (α-SMA) er en generel myofibroblastdifferentiering markering, og kan bruges til at identificere CAF. Denne undersøgelse undersøger den prognostiske betydning af FAP-1 og α-SMA i ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) patienter og korrelerer deres udtryk til 105 undersøgte i samme kohorte proteiner.

Metoder

Tumor prøver fra 536 NSCLC patienter blev opnået og væv mikro-arrays blev bygget. Immunhistokemi blev brugt til at evaluere ekspressionen af ​​FAP-1 og α-SMA og udforske deres indvirkning på overlevelse og forbindelse med andre tumor molekylære markører i NSCLC patienter.

Resultater

Høj udtryk for FAP- 1, men ikke α-SMA, i pladecellecarcinom (SCC, P = 0,043, HR = 0,63 95% CI 0,40-0,99) var signifikant associeret med øget sygdomsspecifik overlevelse. FAP-1 og α-SMA blev ikke signifikant korreleret til hinanden. Analyser af FAP-1 og α-SMA forbundet med andre tumor-relaterede proteiner afslørede histotype-specifik sammenligningstabeller mønstre.

Konklusion

Tilstedeværelsen af ​​FAP-1-udtrykkende CAF er en indikator for positivt resultat for NSCLC-SCC patienter. Desuden korrelation analyser tyder FAP-1 og α-SMA at mærke forskellige delmængder af fibroblaster og deres foreninger med andre tumor-relaterede proteiner afviger i henhold til histologisk undertype

Henvisning:. Kilvaer TK, Khanehkenari MR, Hellevik T al-Saad S, Paulsen EE, Bremnes RM, et al. (2015) Cancer Associated fibroblaster i fase I-IIIA NSCLC: Prognostisk virkning og deres Korrelationer med Tumor molekylære markører. PLoS ONE 10 (8): e0134965. doi: 10,1371 /journal.pone.0134965

Redaktør: Donald Gullberg, Universitetet i Bergen, Norge

Modtaget: April 27, 2015; Accepteret: 15 juli 2015; Udgivet: 7 August, 2015

Copyright: © 2015 Kilvaer et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Den fulde data -sæt vil ikke blive offentliggjort som mange patienter er stadig i live og Nord-Norge er lille nok til enkelte patienter kan identificeres gennem deres data-parametre og dermed bryde patient fortrolighed. Nogle relevante data er tilgængelige i papir og støtte Information filer

Finansiering:. Disse forfattere har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

Ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) er en af ​​de førende årsager til kræft forbundet død på verdensplan, med både høj forekomst og dødelighed [1]. Aktuelle behandlingsstrategier består af bred tumor resektion med tilskud af radio- og /eller kemoterapi for undergrupper af patienter med dårlig prognose [2]. NSCLC er en heterogen sygdom, herunder pladecellekræft (SCC) og adenocarcinom (ADC) som de dominerende histologiske undergrupper, hvilken behandling-wise bruges til at blive betragtet som en enkelt enhed. Men ny dokumentation fra molekylær markør analyser, angive den molekylære baggrund af NSCLC undertyper at afvige [3]. Omfattende analyser af genetiske ændringer har afsløret distinkte NSCLC undertyper, der kan målrettes med moderne behandlingsmetoder. Men disse nye og spændende strategier har endnu ikke implementeret i en adjuverende at forbedre den samlede overlevelse NSCLC patienter [3].

I løbet af de sidste to årtier, en stigende bevidsthed om kræft som en kompleks og heterogen sygdom er steget. Dette faktum har flyttet fokus for kræftforskning fra en reduktionistisk opfattelse herunder kun maligne celler til også at omfatte den støttende stromale væv omkring tumoren. For tyktarms-, bryst- og lungekræft den prognostiske betydning af immunceller infiltrerer intratumoral stroma menes at supplere og endda overgå de etablerede TNM mellemstationer algoritmer [4-6]. Et andet grundlæggende aktør i det stromale rum er kræft forbundet fibroblaster (cafeer). Fibroblaster omfatter en meget heterogen og multi-funktionelle cellepopulation, som spiller vigtige regulatoriske roller i sårheling, fosterudvikling og kræft initiering og udbredelse [7]. Ved cancer, har talrige undersøgelser dokumenteret vigtigheden af ​​gensidige interaktioner mellem maligne celler og CAF [7]. Hertil kommer, CAF regulerer vigtige elementer i tumoren forbundet stroma herunder ECM, angiogenese, rekruttering og aktivering af immunceller og rekruttering af perifere stamceller [7,8]. Det generiske navn “CAF” omfatter et bredt sæt af celler, der kan have forskellig oprindelse og funktioner. Således udtrykket “CAF” kan henvise til tumor hjemmehørende fibroblaster, aktiveret fibroblast, peritumorale fibroblaster, myofibroblaster, pericytter og andre mesenkymale celler afledt af cirkulerende stamfædre eller efter epitelial eller endotel trans-differentiering. Traditionelt har CAF blevet identificeret ved deres udbredte ekspression af alfa-glatmuskelactin (α-SMA), men på grund af den bemærkelsesværdige cellulære heterogenitet; a-SMA udtryk alene vil ikke identificere alle CAF [7,8]. Derfor andre CAF markører i brug er vimentin, fibronectin, fibroblast-specifikt protein 1 (FSP-1), fibroblast aktiverede protein 1 (FAP-1) og PDGFR-α /β [8,9]. FAP-1 er en membran-forankret serinprotease, som er selektivt udtrykt af stromale og mesenkymale celler under sårheling, fibrotiske reaktioner, inflammatoriske tilstande og tumorudvikling [8]. På grund af den forbigående ekspression af denne markør under aktivering, har FAP-1 blevet anvendt i mange undersøgelser til at identificere aktiverede tumor fibroblaster [8].

Flere undersøgelser har knyttet tilstedeværelsen af ​​forskellige funktionelle undergrupper af CAF i primær NSCLC med negativ prognose, herunder CAF

α-SMA og CAF

TGF-β i en kohorte af blandet NSCLC [10] og CAF

Podoplanin i lunge ADC [11-13] og SCC [14]. Derudover har tilstedeværelsen af ​​CAF

Podoplanin i lymfeknudemetastaser af nodal fase 2 lunge SCC patienter blevet forbundet med en højere sats for mediastinal tilbagefald [15,16]. Kun en lille undersøgelse (n = 59) har undersøgt forekomsten af ​​CAF

FAP i NSCLC og fundet en sammenhæng med dårligere prognose [17].

Vi har tidligere evalueret 105 molekylære tumorrelaterede proteiner i en kohorte af ikke-valgte reseceret fase i-IIIA NSCLC patienter. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge den prognostiske betydning af CAF

FAP og CAF

α-SMA i NSCLC, og at korrelere deres tilstedeværelse med ekspressionen af ​​andre molekylære markører tumor.

Materiale og Metoder

1. Patienter og kliniske prøver

Primær tumorvæv fra 536 patienter diagnosticeret med, og kirurgisk resektion for trin I-IIIA NSCLC på University Hospital of North-Norge og Nordland Central Hospital fra 1990 til 2010 blev inkluderet i denne undersøgelse. Dette repræsenterer en udvidelse og opdatering af en tidligere eksisterende kohorte herunder patienter med de samme kriterier fra 1990 gennem 2004 [18]. De inkluderede patienter blev iscenesat i henhold til den 7. udgave af UICC TNM klassifikation og klassificeret i henhold til den nye patologiske klassifikation af lungecancer [19]. I alt 633 patienter blev registreret fra hospitalet databaser. Af disse 97 blev udelukket fra undersøgelsen på grund af: strålebehandling eller kemoterapi før kirurgi (n = 15), anden malignitet inden for fem år før NSCLC diagnose (n = 39), utilstrækkelige paraffinindlejrede faste væv blokke (n = 25) og adenocarcinom

in situ

(AIS), forud for 2011 klassificeret som bronchoalveolær karcinom

in situ

(BAC) 3 cm på revision (n = 18). Således 536 med komplet medicinske journaler og tilgængelige formalin-fikseret paraffinindlejrede (FFPE) væv blokke var støtteberettigede.

Denne rapport indeholder opfølgende data fra 1. oktober

st 2013. median opfølgning af overlevende var 73 måneder (interval 0-267).

2. Micro array Byggeri

Alle patientprøver blev revideret uafhængigt af to patologer. De mest repræsentative områder, der indeholder både tumor og intratumoral stroma, blev markeret på hematoxylin og eosin (H /E) slides og stikprøven for vævet mikro-array (TMA) blokke. TMA’erne blev samlet under anvendelse af et væv-arraying instrument (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, USA). Den detaljerede metode har tidligere [20] blevet rapporteret. Kort fortalt vi brugte en 0,6 mm stilet til prøve fire replikater kerner fra hver af undersøgelsens prøver.

For at inkludere alle kerneprøver blev 12 TMA blokke bygget. Multiple 4-um snit blev skåret med en Micron mikrotom (HM355S) og farvet med specifikke antistoffer til immunhistokemi (IHC) analyse.

3. Immunhistokemi

Immunhistokemi (IHC) analyser for FAP-1were udført på Ventana Discovery-Ultra automatiseret immunostainer (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ). Afparaffinering og indbygget antigen-genvinding blev udført i 24 minutter ved ca. 100 ° C med CC1 reagens, som er et EDTA-baserede proprietære Ventana opløsning (pH 8,0-8,5). FAP-1anti-kanin polyklonale antistof (Ab53066, Abcam, fortynding 1/50) blev anvendt og inkuberes i 32 minutter. Objektglas blev udviklet ved anvendelse Ultramap anti-kanin-HRP (Cat # 760-4315, Ventana) og blev påvist under anvendelse ChromoMap DAB (Kat # 760-159, Ventana).

IHC assays for α-SMA blev farvet på Ventana Benchmark-ultra (Ventana Medical Systems Inc.). Epitopgenfinding udførtes med CC1 opløsning i 8 minutter. Den α-SMA-monoklonalt museantistof (cat # 760-2833, Ventana, klon 1A4) blev inkuberet ved 37 ° i 32 minutter og iagttages med det Ultraview DAB Detection kit. Endelig, for at visualisere kernerne, objektglas blev modfarvet med Ventana Hematoxylin II reagens i 8 minutter, efterfulgt af en Bluing reagens i 4 minutter.

To forskellige styringer til vores farvningsmetode blev anvendt. For det første kontrollerer farvning af sektionerne med et isotype-matchet kontrol antistof uden det primære antistof. For det andet blev multipel organvæv mikro-array som positive og negative kontroller væv anvendes til at verificere specificiteten af ​​farvningen i hver farvningsprocedure. De positive kontroller væv omfattede normal lever og bryst carcinom for FAP-1 og tillæg og karvæggen for alpha-SMA; Negative kontroller væv blev prøver af normal pancreas, lunge, bryst, tonsil og nyre for både Fap og α-SMA.

4. Antistof validering

Mus-monoklonalt anti-humant α-SMA antistof blev købt fra Ventana (kat # 760-2833, Ventana, klon 1A4). Dette antistof er blevet udsat for omfattende kvalitetskontrol og valideringsprocedurer af producenten, som sikrer korrekt og specifik farvning af antigenet i paraffinindstøbt væv. Polyklonalt kanin-anti-human FAP-1-antistof blev indkøbt fra Abcam (Cat #:. Ab53066). Specificitet test af dette antistof blev udført in-house ved western blot. Antistof blev testet mod helcelleekstrakter fra flere CAF cellelinier og fra lungerne tumorcellelinie A549. Western blots viste et enkelt bånd på ca. 70 kDa i proteinekstrakter fra CAF (Fig 1D). Dette antistof er tidligere blevet testet på isolerede CAF ved IHC [21].

A) IHC-analyse af TMA kerner fra NSCLC-patienter repræsenterer forskellige stromale celle scorer for ekspression af FAP-1 og α-SMA. I) Lav stromal FAP-1; II) Høj stromale FAP-1; III) Lav stromal α-SMA; IV) Høj stromal α-SMA. B) TMA kontrol af sunde lungevæv viser stærk FAP-1 positivitet i normale lungemakrofager, C) TMA kontrol af sunde lungevæv viser nogle svage til mellemliggende α-SMA-farvning, D) Western blot for FAP-1, der viser en klar 70 kDa bånd. Forkortelser: FAP-1, fibroblast aktiverende protein; a-SMA, alfa-glatmuskelactin.

5. Scoring af Immunhistokemi

repræsentant og levedygtige sektioner væv blev revideret ved hjælp af en (Leica DM 2500 “Leica Microsystems Ltd., CH9435 Heerbrugg, Schweiz). Baseret på indledende, forfatter Al-Saad etableret en semi-kvantitativ score for hver markør. Glassene blev scoret for FAP-1 i det samlede materiale og α-SMA i den opdaterede materiale (sager fra 2005 gennem 2010) af forfattere Rakaee Khanehkenari og Martinez. a-SMA havde tidligere været scorede for sager fra 1990 gennem 2004 . den dominerende farvning intensitet i procentdelen af ​​positive celler i intraepithelial stromale rum blev scoret som følger:. 0 = ingen farvning, 1 = 1-10%, 2 = 11-50% og 3 = 50% Ved vurdering en given kerne, blev observatørerne blindet for de snesevis af andre variable og til resultatet. Vi har ikke observere nogen farvning af tumor epitelceller til enten α-SMA eller FAP-1. det er svarer til rapporter fra andre undersøgelser [22].

høj ekspression blev defineret som den optimale skæringspunkt skelne høje /lave grupper efter overlevelse. Høj ekspression blev defineret som en score 0,5 (FAP-1) og . 2 (α-SMA)

6. Statistiske metoder

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp RStudio 0.98.1091 med R-version 3.1.1.1 [23] og biblioteker “overlevelse” [24], “bil” [25], “ggplot2” [26], “gridExtra” [27], “Hmisc” [28] og “IRR” [29].

IHC scores fra hver observatør blev sammenlignet for interobserver pålidelighed ved hjælp af en to-vejs tilfældige effekter model med absolut aftale definition og Cohens kappa-statistik med lige vægt. Den intraclass korrelationskoefficient (pålidelighed koefficient) og Cohens kappa blev opnået fra disse resultater.

Chi-square og Fischers Nøjagtige tests blev anvendt til at undersøge sammenhængen mellem molekylær markør udtryk og clinipathological variabler og for at kontrollere, om der var forskelle i markør udtryk i den originale og opdaterede patient kohorte. Spearman`s rang-korrelation blev anvendt til at undersøge sammenhængen mellem markør udtryk. På grund af det store antal korrelation analyser blev Bonferroni-metode for P-værdier udført for disse analyser.

univariat overlevelse analyser blev udført under anvendelse af Kaplan-Meier-metoden. Statistiske forskelle mellem overlevelseskurverne blev vurderet ved log-rank test. Sygdomsspecifikke overlevelse (DSS) blev defineret som tiden fra operation til lungekræft dødsfald. Multivariat analyse, ved hjælp af Cox proportional hazard model, blev udført for at vurdere den uafhængige værdi forbehandling variabler i nærvær af andre variable. Kun variable med P . 0.25 fra univariate analyser eller på anden måde menes at være vigtig, blev udforsket i Cox regressionsanalyse

signifikansniveau der anvendes for overlevelse analyser var P 0,05

7. Etisk Clearance

Undersøgelsen blev godkendt af det regionale udvalg for medicin og sundhed Etik (Nordnorge, UNN: protokol ID: 2011/2503) og behovet for samtykke blev givet afkald unødvendig. Indsamling og opbevaring af den kliniske database blev godkendt af National Datainspektionen. Rapporteringen af ​​klinisk-patologiske variabler, overlevelsesdata og biomarkør udtryk blev gennemført i overensstemmelse med de retningslinjer bemærkning.

Resultater

1. Klinisk-patologisk variabler

klinisk-patologisk variabler er sammenfattet i tabel 1. Median alder på tidspunktet for diagnosen blev 67,2 år, og 32% af patienterne var kvinder. Den histologiske fordeling af de 536 sager var 289 planocellulært karcinom (SCC), 201 adenocarcinomer (ADC) og 46 udifferentierede karcinomer (NOS). Ud over kirurgisk resektion, 64, 89 og 12 patienter fik adjuverende strålebehandling, kemoterapi og radiochemotherapy henholdsvis.

2. Interobserver Pålidelighed og Tests for Forskelle i Expression

De intraclass korrelationskoefficienter og Cohens kappa var 0,759 (P 0,001) og 0,598 (P 0,001) for FAP-1 og 0.790 (P 0,001) og 0,657 (P 0,001) for α-SMA. Ingen forskel i udtrykket for FAP-1 (P = 0,284) eller α-SMA (P = 1,000) blev observeret efter tidsperiode (original vs opdateret kohorte).

3. Overlevelse Analyser

Tabel 1 opsummerer virkningen af ​​klinisk-patologiske variabler og undersøgte markører i den samlede gruppe, og stratificeret i histologiske undergrupper. Fig 2 panel A-F viser overlevelseskurverne for FAP-1 og α-SMA lav

vs

høj ekspression i den samlede kohorte og stratificeret i SCC og ADC undergrupper. Høj ekspression af FAP-1 var en signifikant positiv markør for overlevelse i SCC undergruppe (P = 0,043). Hverken FAP-1, eller α-SMA-ekspression i tumor stroma var væsentlige uafhængige variable i multivariate analyser

Forkortelser:. SCC, pladecellekræft; ADC, adenocarcinom; FAP-1, fibroblast aktiverende protein; a-SMA, alfa-glatmuskelactin.

4. Ekspression af FAP-1 og α-SMA og deres Korrelationer

FAP-1 og α-SMA-ekspression blev lokaliseret i cytoplasmaet i stromale celler (Fig 1A). Af note, blev FAP-1-ekspression ikke begrænset til fibroblastlignende celler som intratumorale og sunde lungevævsmakrofager kraftigt blev farvet med antistoffet (Fig 1B). Men ved vurderingen kernerne, makrofag udtryk for FAP-1 blev ikke taget i betragtning. S1 Tabel sammenfatter sammenslutninger af FAP-1 og α-SMA med klinisk-patologiske markører. Efter korrektioner for multiple test sås ingen signifikante associationer.

Tabel 2 opsummerer de signifikante korrelationer af FAP-1 og α-SMA med tumor-relaterede proteiner tidligere analyseret i denne patient kohorte. S2 Tabel navne alle markører, der indgår i korrelationen analyser (n = 105). Efter korrektioner for multipel testning, blev der signifikante korrelationer observeret mellem FAP-1 og de følgende markører: stromale udtryk for HIF2 (r = 0,26), LDH5 (r = 0,25), foxp3 (r = 0,23), CSF1R (r = 0,26) og miR21 (r = 0,27) og tumor celle ekspression af p21 (r = 0,30) i den samlede kohorte; stromale udtryk for CSF1R (r = 0,29) og mir21 (r = 0,31) i SCC undergruppe; stromal ekspression af HIF2 (r = 0,42) og tumor celle ekspression af MCT3 (r = -0,42) i ADC undergruppe. α-SMA viste ingen signifikante sammenhænge, ​​hverken i hele materialet, og heller ikke i undergrupper, efter korrektioner for flere tests blev gennemført.

Diskussion

Den foreliggende undersøgelse blev indledt for at udforske potentielle prognostiske effekt af CAF i NSCLC, og de eksisterende korrelationer af disse celler med andre relevante tumor biologiske markører. I en nylig gennemgang, Cortez et al. fremhævet fire funktionelle CAF delmængder ifølge ekspression af effektormolekyler og receptorer; CAF

FAP, CAF

FSP1, CAF

PDGFR-α og CAF

PDGFR-β [8]. Betydelig indsats er blevet afsat til at udforske den rolle, CAF undertyper i NSCLC. Den mest studerede undertype, CAF

Podoplanin, har været forbundet med kortere samlet overlevelse for både ADC og SCC lungekræftpatienter [11-14], og deres tilstedeværelse i mediastinum lymfe-node metastaser øger risikoen for mediastinal recidiv [15,16 ]. På grund af CAF heterogenitet og manglen på en enkelt universel markør, valgte vi at identificere CAF af to af de mest anvendte markører, der udelukker hvilende fibroblaster fra CAF, nemlig FAP-1 og α-SMA. I modsætning til tidligere rapporter om CAF og NSCLC, finder vi, at CAF

FAP er prædiktorer for gunstig prognose i SCC undergruppe. Interessant nok i vores undersøgelse FAP-1 og α-SMA-ekspression ikke korrelerer med hinanden, hvilket indikerer, at disse markører identificere forskellige cafs undertyper. Endelig vores undersøgelse afdækker interessante sammenhænge mellem CAF

FAP og andre molekylære markører tumor, at støtte i at forstå mekanismerne bag den observerede effekt i prognosen. Så vidt vi ved denne undersøgelse udgør den største evaluering af CAF

FAP og CAF

α-SMA i NSCLC.

1. CAF

FAP i NSCLC

Liao et al. udforskede rolle CAF

FAP i en lille serie af 59 NSCLC patienter og fundet højere niveauer af FAP udtrykker stromaceller at være en uafhængig indikator for dårlig samlet overlevelse [17]. I modsætning hertil fandt vi, i et større patient kohorte, tilstedeværelsen af ​​CAF

FAP at forudsige øget sygdomsspecifik overlevelse i SCC, men ikke i ADC patienter. Den definerede rolle CAF

FAP er dårligt forstået, og deres tilstedeværelse er blevet undersøgt i andre tumor grupper med forskellige resultater. Ved invasiv duktal carcinom i brystet, er CAF

FAP forbundet med øget overlevelse, mens i ADC i bugspytkirtlen og rektum de er forbundet med nedsat overlevelse [30-32]. Disse resultater, i overensstemmelse med vores undersøgelse, viser, at CAF

FAP interagere med tumorceller og andre aktører i tumoren mikro-miljø i differentierede måder alt efter konteksten, tumor scenen og væv af oprindelse. Forskellen mellem vores undersøgelse og Liao undersøgelsen kunne forklares ved deres ringere antal inkluderede patienter, brug af hel-slide undersøgelser

vs

TMA kerneprøver, eller forskelle i patientkohorter ellers forsvundet.

det er klart, vores TMA baseret undersøgelse kan ikke direkte forklare mekanismerne i disse observerede virkninger. Alligevel omfattende korrelation analyser (tabel 2) i vores patient kohorte afslører stærke positive associationer mellem CAF

FAP og stromal ekspression af kolonistimulerende faktor-receptor 1 (CSF1R) og mikro-RNA 21 (miR21) i SCC og stromal ekspression af hypoxi-induceret faktor 2 (HIF2) i ADC og stærk negativ association med tumorcelle ekspression af monocarboxylat transportør 3 (MCT3) i ADC. Stromal CSF1R kunne udtrykkes både i makrofager og myeloide dendritiske celler (DC) [33]. Tilstedeværelsen af ​​typen M1 cytotoksiske makrofager kunne forklare overlevelse fordel, vi observerer i CAF

FAP SCC patienter, af makrofager direkte rettet mod tumorceller. CSF1R positive DC’er er i stand til at tage op antigen og deres tilstedeværelse kan indikere en lokal immun-respons [33]. miR21 beskrives generelt som en kræftpsykologisk miR og udtrykkes i de fleste faste cancere [34]. En nylig undersøgelse har etableret en forbindelse mellem miR21 udtryk og CAF formationer og kunne forklare den positive korrelation ses i vores kohorte af SCC patienter [35]. Vi har tidligere identificeret høj stromale miR21 udtryk til at forudsige dårlig overlevelse for en delmængde af NSCLC patienter [36]. I denne undersøgelse de lave miR21 udtrykker gruppe bestod kun 21 patienter, som kan muligvis forklare den observerede øget overlevelse i SCC undergruppe, selvom en moderat stærk sammenhæng med miR21 overholdes.

Tidligere resultater har vist høj stromale udtryk for HIF2 at være en gunstig indikator for prognose af SCC, men ikke ADC, mens tumorcelle ekspression af MCT3 var relateret til prognose uanset histologiske undergrupper [37,38].

strategier er blevet udviklet til at udnytte tilstedeværelsen FAP udtrykkende stromaceller i behandlingen af ​​cancer. Disse kan inddeles i to kategorier i) disse at mål og neutraliserer CAF

FAP direkte og ii) dem, der udnytter FAP udtryk i stromale tumorceller til at levere et lægemiddel til tumorstedet [39-43]. Vores resultater indikerer, at for NSCLC-patienter, og især i SCC undergruppe, kan den første fremgangsmåde være til skade.

2. CAF

α-SMA i NSCLC

α-SMA er generelt accepteret som en myofibroblastdifferentiering markering, selvom mærkningen er uspecifikke og andre celletyper, såsom pericytter kan også farves [8]. Chen et al. udforskede roller CAF

α-SMA og CAF

TGF-β i en lille gruppe af 78 NSCLC patienter i alle stadier og histologier bruger hele tumor væv dias. De fandt CAF

α-SMA at være en uafhængig indikator for negative udfald [10]. I vores undersøgelse tilstedeværelsen af ​​CAF

α-SMA viste ikke nogen prognostisk information, hverken i den samlede population, eller i subpopulationer baseret på histologi. Forskellen i resultatet kunne forklares ved de forskellige tilgange, der anvendes (hel slide vs TMA) eller af de forskellige antal patienter i de kohorter. Endvidere kunne ætiologien af ​​tilfælde lungekræft også være forskellige. Antages det, at Chen et al. hovedsageligt omfattede patienter fra Suzhou regionen, som er et tæt befolket og meget industrialiserede område, er det tænkeligt, at undersøgelsen omfattede et større antal patienter med rygning-relateret lungekræft. Desværre har Chen undersøgelsen ikke oplysninger om rygning status. I modsætning hertil vores undersøgelse rekrutteret patienter fra det nordlige-Norge, et tyndt befolket område med næsten ingen forurenende industri, og kun 18 ud af 536 af de inkluderede patienter aldrig havde røget. Det ville være interessant at undersøge, hvordan CAF

α-SMA reagerer på forskellige stimuli (f.eks. Rygning

vs

industriel forurening).

Af interesse, ingen signifikante korrelationer (efter korrektion for multiple test) blev observeret mellem tilstedeværelsen af ​​CAF

α-SMA og andre tumor-relaterede proteiner tidligere undersøgt i vores patient kohorte.

Konklusion

i NSCLC, vores resultater viser, at tilstedeværelsen og prognostisk betydning af CAF undertyper er forskellige histologiske undergrupper og at tilstedeværelsen af ​​CAF

FAP kan være gavnligt for overlevelsen af ​​NSCLC SCC patienter. Disse resultater er i modsætning til en anden lille studie af CAF

FAP i NSCLC. Denne forskel er vigtig, da CAF

FAPtargeting strategier bliver udviklet. Udnyttelsen af ​​sådanne strategier i NSCLC patienter, især i SCC undergruppe, bør anvendes med omhu, indtil disse resultater er yderligere valideres og udforsket i

in vitro

i

in vivo

tumor modeller af både SCC og ADC NSCLC.

Støtte Information

S1 Arkiv. Komprimeret version af S1 og S2 Borde

doi:. 10,1371 /journal.pone.0134965.s001

(ZIP)

S1 Table. Korrelationer mellem FAP-1 og α-SMA og klinisk-patologiske variabler

Doi:. 10,1371 /journal.pone.0134965.s002

(DOCX)

S2 bord. Liste over markører undersøgt i vores kohorte

doi:. 10,1371 /journal.pone.0134965.s003

(ODS)