PLoS ONE: Epiteliale og stromacelle- urokinaseplasminogenaktivatorreceptorfunktion Expression forskelligt korrelerer med overlevelse i Rektal Cancer Stages B og C Patients

Abstrakt

urokinaseplasminogenaktivatorreceptorfunktion (uPAR) er blevet foreslået som en mulig prognostisk faktor for colorectal cancer (CRC) patients overlevelse. Men CRC uPAR udtryk forbliver kontroversielt, især med hensyn til celletyper, hvor uPAR overudtrykkes (fx epitel (uPAR

E) eller stroma-associerede celler (uPAR

S)) og tilhørende prognostisk relevans. I denne undersøgelse, kunne to epitop-specifikke anti-uPAR monoklonale antistoffer (MAB) diskriminere udtryk for uPAR

E fra uPAR

S og blev anvendt til at undersøge denne sammenhæng med overlevelse etaper B og C endetarmskræft (RC) patienter. Ved hjælp af immunhistokemi blev MAbs # 3937 og R4 bruges til at diskriminere uPAR

E fra uPAR

S henholdsvis i de centrale og invasive frontale regioner af 170 B scenen og 179 trin C RC prøver. Kaplan-Meier og Cox regressionsanalyse blev anvendt til at bestemme association med overlevelse. uPAR-ekspression forekom i både epitel og stromale rum med differentiel ekspression observeret i mange tilfælde, hvilket indikerer uPAR

E og uPAR

S har forskellige cellulære roller. I de centrale og invasive frontale regioner, blev uPAR

E negativt forbundet med den samlede fase B overlevelse (HR = 1,9; p = 0,014 og HR = 1,5; p = 0,031, henholdsvis) gengiver resultater fra tidligere undersøgelser. uPAR

S ved den invasive fronten var forbundet med længere fase C overlevelse (HR = 0,6; p = 0,007), hvilket afspejler undersøgelser, der påviser, at makrofager peritumoural akkumulation er forbundet med længere overlevelse. Denne undersøgelse viser, at forskellige uPAR epitoper bør betragtes som udtrykt på forskellige celletyper under tumorprogression og på forskellige stadier i RC. Forstå, hvordan uPAR

E og uPAR

S udtryk påvirker overlevelse forventes at være et nyttigt klinisk prognostisk markør for trin B og C RC

Henvisning:. Ahn SB, Chan C, Dent AF, Mohamedali A, Kwun SY, Clarke C, et al. (2015) Epithelial og stromacelle- urokinaseplasminogenaktivatorreceptorfunktion Expression forskelligt korrelerer med overlevelse i Rektal Cancer Stages B og C Patienter. PLoS ONE 10 (2): e0117786. doi: 10,1371 /journal.pone.0117786

Academic Redaktør: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG

Modtaget: September 15, 2014 Accepteret: December 31, 2014; Publiceret: 18 feb 2015

Copyright: © 2015 Ahn et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

finansiering: Denne undersøgelse blev støttet med forskningsprojekt tilskud fra NHMRC (# 1.010.303), Cancer Råd NSW (RG10-04 RG08-16), og en Macquarie University MQSN tilskud. ; og støttes gennem den australske School of Advanced Medicine (ASAM), Macquarie University, Concord Repatriering General Hospital Diagnostisk Patologi, MQ Biofocus, og Biomolecular Frontiers forskningscentre. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Denne undersøgelse modtaget støtte fra Cancer Råd NSW. Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE politikker på datadeling og materialer.

Introduktion

De seneste data fra Verdenssundhedsorganisationen angiver kolorektal cancer (CRC) er den tredje mest almindelige malignitet (~ 1.36 millioner tilfælde på verdensplan i 2012) med en dødelighed på over 50% [1]. Den største årsag til kræft dødsfald er metastase. Klinisk-patologisk iscenesættelse af CRC viser et dramatisk fald i overlevelse mellem trinnene B og C, svarende til fravær versus tilstedeværelse af lymfeknudemetastaser [2]. På trods af sin kliniske relevans, de molekylære mekanismer der ligger til grund metastaser er stadig ikke fuldt karakteriseret og udvikling af nye målrettede strategier for at bekæmpe metastaser forblive undvigende.

plasminogenaktiveringssystem proteolytiske kaskade er en af ​​en række centrale biologiske processer involveret i kræft celleinvasion og metastase. Disse omfatter ekstracellulær matrix (ECM) nedbrydning muliggør frigørelse af tumorceller fra det oprindelige websted og penetration af basalmembranen, vækstfaktor aktivering og intracellulær signalering [3]. En glycosylphosphatidylinositol-forankret membranprotein kaldet urokinaseplasminogenaktivatorreceptorfunktion (uPAR) er central for denne kaskade. uPAR er en tri-domæne-protein (dvs. D1, 2 og 3), der danner en tyk-fingre handske-lignende receptor tilvejebringer en central lomme til bindingen af ​​dets kognate protease ligand, urokinase plasminogen aktivator (uPA) [4]. Indledende undersøgelser fokuseret på regulering af proteolyse (dvs. plasminogen og MMP aktivering) selvom uPAR. For nylig er det blevet vist, at op til 42 proteiner (9 ekstracellulære og 33 laterale interagerende partnere) angiveligt interagerer med uPAR [5]. Formen af ​​uPAR involverer et stort kontralateral ydre overflade, som er foreslået for at lette interaktion /s med mange af disse accessoriske proteiner [4]. Denne store repertoire af interaktioner antyder, at uPAR har udviklet en kompleks regulatorisk mekanisme til kontrol proteolyse, cellemigrering, proliferation, cellesignalering og andre aspekter af cellens opførsel. Faktisk er i det sidste årti, har omfattende dokumentation vist uPAR impliceret i celleadhæsion, proliferation, migration, væv remodellering og i reguleringen af ​​signalveje (fx MAP kinase, Ras veje) [3]. Det er vigtige elementer ikke blot allestedsnærværende udviklingsmæssige veje, men også kræft metastaser

uPAR udtryk i forskellige kræftformer er blevet grundigt undersøgt i løbet af de seneste to årtier, som afspejles af . 800 uPAR onkologi publikationer [6 ]. Men uPAR udtryk i kræft mikromiljø stadig kontroversielt, især med hensyn til de celle type /s, som uPAR overudtrykkes (fx uPAR udtryk i epithel (uPAR

E) eller stroma-associerede celler (uPAR

S)) [6,7]. Foreningen mellem uPAR og kræft blev først anerkendt i 1991 [8]. Siden da har talrige undersøgelser evalueret niveauerne af uPAR

E og uPAR

S i forskellige kræftformer ved hjælp af en lang række antistoffer [6,7]. Imidlertid har der været modstridende resultater. Specielt i CRC, Pyke

et al

., Fandt, at uPAR var stærkt udtrykt i tumor-infiltrerende makrofager, neutrofiler og eosinofiler (ved hjælp af immunhistokemi (IHC)), men kun svagt til moderat udtrykkes i neoplastiske tumorceller (anvendelse af monoklonalt antistoffer (MAb’er) mod humant uPAR kloner R2 og R4) [9]. Senere, en anden undersøgelse rapporterede, at uPAR-ekspression forekom hovedsageligt i tumor epitel stedet stroma (anvendelse af anti-uPAR MAb # 3937) [10]. På trods af denne tilsyneladende modsigelse, begge undersøgelser aftalt uPAR blev stærkt udtrykt i tumoren mikromiljø og blev koncentreret på tumoren invasive front. Yderligere undersøgelser af uPAR

E og uPAR

S i CRC [6,7,11-17] generelt enige om, at høj uPAR

E selvstændigt og negativt relateret til patientens overlevelse [11,12,15]. Seetoo

et al

. [12] foreslog, at uPAR (udtrykt primært i epitel) er en uafhængig prædiktor for levermetastaser og samlet patient overlevelse efter CRC resektion. Efter aftale, viste en nyere undersøgelse signifikant forhøjet uPAR i CRC tumorer på infiltrere tumor marginer, som blev forbundet med dårligere overlevelse [15]. Men data om uPAR

S i CRC er selvmodsigende i form af overlevelse forening. Det er blevet foreslået, at makrofager, som er en vigtig kilde til uPAR i stroma spiller en rolle i forebyggelsen af ​​hæmatogen metastase [16]. Desuden blev en omvendt sammenhæng mellem CRC levermetastaser og uPAR primær tumor stroma ekspression observeret [18]. Uden at den direkte korrelation uPAR

S med patientens overlevelse, er det velkendt, at CRC patienter med levermetastaser har betydeligt kortere overlevelse end dem uden. I modsætning hertil en nylig rapport foreslået, at både uPAR

E og uPAR

S negativt var forbundet med den samlede CRC patient overlevelse, samt med sygdomsfri overlevelse (DFS) [17]. Det er dog kun uPAR

S blev uafhængigt associeret med DFS i multivariabel analyse. Kollektivt, foreslår vi, at disse modstridende iagttagelser skyldes anvendelsen af ​​særlige MAb’er med forskellige uPAR epitop-specificitet, når uPAR er involveret i celle-specifikke protein-interaktioner. Faktisk blev de fleste uPAR

E eller uPAR

S studier udført med en enkelt MAb og vil derfor kun påvise specifikke uPAR domæne /s. Tidligere undersøgelser har vist, at uPAR kan være til stede i enten fuld længde, opløselige og /eller spaltede domæne former og disse kan være differentielt udtrykker epitoper identificeret ved specifikke MAb’er [19]. Derudover kan nogle epitoper maskeres når uPAR interagerer med accessoriske proteiner. Derfor, netop for at undersøge den prognostiske relevans af uPAR i kræft, bør MAbs afsløre forskellige centrale epitoper udtrykt på bestemte celletyper anvendes på identiske patologiske vævsprøver.

I denne undersøgelse under hensyntagen til spørgsmål vedrørende uPAR udtryk på forskellige celletyper, vi specifikt målte uPAR

E og uPAR

S tværs af en kohorte (n = 349) af ikke-metastatisk (fase B) og nodal-metastatisk (fase C) rektal cancer (RC) prøver. To kommercielt tilgængelige epitop-specifikt anti-uPAR MAb’er # 3937 (for uPAR

E) og R4 (for uPAR

S) blev anvendt til at probe serielle sektioner af RC væv microarrays (TMA). Inden for hver prøve, blev uPAR

E og uPAR

S målt i det centrale område, den invasive tumor foran og tilstødende ikke-neoplastisk slimhinde. Formålet var at vurdere sammenhænge mellem uPAR målinger og patologiske karakteristika tumoren og patienternes samlede overlevelse.

Materialer og metoder

Patient kohorte og tumor karakterisering

Data blev trukket fra et prospektivt register på hinanden følgende kolorektal cancer resektioner som blev indledt i 1971 på Concord Hospital, en offentlig videregående henvisning hospital i Sydney, Australien og indeholder detaljerede kliniske, operative, patologi, adjuverende behandling og opfølgning oplysninger [20,21]. Alle resektioner blev udført af specialiserede kolorektal kirurger anvender en standardiseret teknik [22]. Resektioner for endetarmskræft mellem 1988 og 2001 inklusive blev udvalgt til analyse, og alle ikke-afdøde patienter blev fulgt i mindst fem år. Kun adenokarcinomer blev inkluderet i registreringsdatabasen. Hvor flere tumorer var til stede, blev kun de mest avancerede fase læsion inkluderet. Patienter blev udelukket, hvis de havde tidligere colorektal cancer, inflammatorisk tarmsygdom eller familiær adenomatøs polypose coli. Den rektum blev defineret som herunder rectosigmoid krydset men eksklusive endetarmen. Over 90% af prøver blev undersøgt i henhold til en standard [2] protokol ved en enkelt patolog (R. C. Newland), som også revideret resten. Tumorstørrelse blev målt som den største overflade dimension og blokke blev taget til påvise maksimale direkte tumor penetration af tarmvæggen. Ekstra blokke blev taget for at demonstrere forholdet mellem tumor og andet vedhængende struktur eller væv samt linjer af resektion og fri serøse overflade. Venøs invasion, vurderet af hæmatoxylin og eosin farvning, blev registreret som involvering af tykke eller tyndvæggede vener, enten inden for eller uden for tarmvæggen. Når tvivl eksisteret, om en struktur involveret var en vene blev en negativ konstatering registreres. En apikal lymfeknude blev defineret som den mest proximale knude inden 1 cm af fartøjets ligering i spidsen af ​​en vaskulær stilken. Tumorer blev histologisk klassificeret som lav-, gennemsnit-eller høj kvalitet malignitet. Grade blev vurderet under hensyntagen til graden af ​​differentiering og anaplasia, arten af ​​tumor margin (skubbe eller infiltrere) og tilstedeværelse og fremtrædende vaskulær invasion. I avancerede fase tumorer andelen af ​​involverede lymfeknuder blev beregnet som en procentdel af det samlede antal knudepunkter høstet. Før 2002 blev rapporteret over 90% af prøver eller revideret af en enkelt patolog (R. C. Newland). Alle patologi funktioner analyserede blev set efter i hver prøve og deres tilstedeværelse eller fravær registreres eksplicit. Der var ingen manglende data på enhver variabel. Tumorer blev iscenesat ifølge den australske system for CRC klinisk-Patologisk Staging (ACP’er) [2]. De fire vigtigste faser i dette system (A, B, C, D) er direkte ækvivalente til de vigtigste faser (I, II, III, IV) af pTNM systemet [23], men, vigtigst, ACP’er adskiller sig ved at alle læsioner med makro- eller mikroskopisk tumor i enhver resektion margin er kodet som scenen D. CRC registreringsdatabasen på Concord Hospital gennemføres med godkendelse af sydvestlige Sydney sundhedsområde etiske komité (CH62 /6 /2011-136) med skriftlig tilladelse i overensstemmelse med kravene i NSW humant væv Act 1983 og NHMRC National erklæring om etisk adfærd i human Research 2007. undersøgelsen blev også godkendt af Macquarie University menneskelige etiske komité (# 5201100858).

TMA byggeri

Formalin-fikserede paraffin-embedded TMA blev konstrueret under anvendelse af et Advanced Tissue arrayer ATA-100 (Chemicon, Temecula, CA, USA). Fra originale rektale kræftvæv paraffinblokke blev kerner (1.5mm) taget fra udvalgte morfologisk repræsentative områder af centrale region af tumoren (undgå luminale overflader), den invasive foran tumoren og histologisk normal mucosa (1-2cm fra tumoren margin ) og opstillet i frisk gjort modtagende paraffinblokke.

IHC

TMA snit blev fremstillet og behandlet samtidig med de samme partier af antistoffer og reagenser, og farvning blev udført i en enkelt klinisk patologi laboratorium på en enkelt kørsel af alle prøver. To epitop-specifikke murine anti-humant uPAR MAb’er, # 3937 (American Diagnostica Inc. (ADI), Greenwich, CT, USA) og R4 (Dako, Glostrup, Danmark), blev anvendt til IHC. Farvning blev udført med et polymer-baserede IHC detection system på en Bond-Max Autostainer (Leica Biosystems, Melbourne, Australien) som beskrevet [24] med visse modifikationer. For # 3937 MAb-farvning, blev intet antigen hentning udført og 3.33μg /ml # 3937 blev anvendt til TMA sektioner. For R4 MAb-farvning, blev proteinase K (Leica Microsystems) anvendt til antigen-genvinding, koncentrationen af ​​R4 er 10 ug /ml. Negative kontrolglas blev inkuberet med isotype IgG1 (R 206 for fase B og 251 for trin C tumor. Resektion prøver til 77 (31 fra scenen B og 46 fra scenen C) gav ikke tilstrækkelig eller passende arkivmateriale for TMA byggeri. De resterende 175 trin B og 205 niveau C-prøver gav informativ IHC resultater, som varieres ved scenen, stedet og for uPAR

E, uPAR

S og uPAR

PT (peritumoural uPAR) udtryk. Efter at have udelukket dem uden informativ IHC, der forblev 170 patienter med stadie B og 179 med stadium C tumor, for hvem var tilgængelige data på mindst én af central eller frontal uPAR

E, uPAR

S eller uPAR

PT. Kliniske og patologi funktioner i disse patienter er vist i tabel 1. For trin B og C hver for sig og for uPAR vurderingerne separat vi sammenlignet patienter, der havde en TMA /IHC resultat med dem, der mangler et resultat med hensyn til de variable i tabel 1 og fundet kun tre statistisk signifikante forskelle (data ikke vist), hvorfra vi konkluderede, at patienter med en TMA /IHC resultat, som vi analyseret for denne undersøgelse ikke afviger væsentligt fra de udelukkede patienter, der havde ingen TMA /IHC resultat. I efterfølgende tabeller antallet af patienter analyseret varierer efter antallet, der skulle udelukkes på grund af manglende IHC resultater.

Detection og sammenligning af uPAR

E og uPAR

S i RC

Hovedformålet med denne undersøgelse var at korrelere uPAR

E og uPAR

S med patient overlevelse i etaper B og C RC. For at opnå dette, vi oprindeligt bestemt placering og ekspressionsniveauerne af uPAR

E og uPAR

S i RC væv ved hjælp af to epitop-specifikke anti-uPAR MAbs # 3937 og R4. Disse MAbs blev valgt, fordi # 3937 og # 3936 (begge fra ADI) var de mest almindelige kommercielt tilgængelige MAbs anvendes til uPAR

E afsløring, og R4 R2 (fra Dako og /eller samarbejdspartnere på Finsen Laboratory) blev mest brugt til at differentiere uPAR

S [6,7,9,10]. MAb # 3936 blev også testet for at opdage uPAR

E i vores undersøgelse: men vi ikke var i stand til at optimere en pålidelig antigen hentning metode til konsekvent påvisning af uPAR

E ved hjælp af denne MAb. Specifikt MAb # 3936 gav høj baggrundsfarvning eller ingen farvning afhængigt af de antigen-genvinding anvendte metoder og, endnu vigtigere, en isotypekontrol (lgG2a) også svagt farvet RC TMA (data ikke vist). Isotypekontrol MAb’er for # 3937 og R4 (dvs. IgG1) blev også testet med relevante antigen hentning metoder og ingen ikke-specifik binding blev observeret (data ikke vist). R2 blev ikke anvendt i denne undersøgelse.

IHC viste, at MAb # 3937 primært farves RC epitel og farves nogle stroma-associerede celler svagt. Omvendt R4 blev hovedsagelig begrænset til RC stroma-associerede celler med meget svag epitel farvning (fig. 1). Vigtigere er, i mange tilfælde differential farvningsmønstre af # 3937 og R4 blev observeret ved anvendelse af serielle sektioner fra den samme TMA, hvilket indikerer, at uPAR

E og uPAR

S differentielt blev udtrykt. For eksempel i nogle tilfælde blev uPAR overudtrykt i både epitel og stroma (Fig 1a . 1b), og i andre tilfælde uPAR blev svagt udtrykt i epitel men stærkt udtrykt i stroma (Fig 1c . 1d). Det modsatte blev også observeret (dvs. høj uPAR

E med svag uPAR

S;. Figur 1e 1f). For at sammenligne fordelingen mellem uPAR

E og uPAR

S, blev ekspressionsniveauerne vurderet ud fra farvning intensiteter (Fig 2a . 2b) for både det centrale og invasive tumor foran. I den centrale tumor, 33% (89/268) væv kerner havde omtrent lige udtryk for uPAR

E og uPAR

S, 48% (128/268) havde højere udtryk for uPAR

E og 19% (51/268) havde højere udtryk for uPAR

S. Sammenlignelige nøgletal blev observeret i den invasive tumor foran hvor 31% (106/338) havde lignende uPAR

E og uPAR

S udtryk, 41% (137/338) havde højere uPAR

E og 28% ( 95/338) havde højere uPAR

S

Billeder i rækker (dvs. (a) . (b) eller (c) (d) eller (e) (f) ) er de samme vævskerner fra serielle sektioner af væv microarray. (A) (B) repræsenterer stærke udtryk af både uPAR

E og uPAR

S. (C) (D) eksemplificerer delvis udtryk for uPAR

E og stærk uPAR

S hhv. Omvendt (e) (F) viser stærk uPAR

E og delvis uPAR

S henholdsvis

peritumoral accentuering af uPAR (dvs. uPAR

PT;. UPAR udtryk i stroma-associerede celler og koncentreret omkring tumoren epitel) repræsenteret i (c), farvet med R4.

uPAR i RC væv blev højt udtrykt i den invasive tumor foran i forhold til den centrale region for både epitel og stroma steder, konsekvent med andre cancertyper [6,7]. En Wilcoxon matchede par underskrevet rækker test viste, at farvning intensiteten af ​​både uPAR

E og uPAR

S var signifikant højere ved den invasive foran i forhold til den centrale tumor placering (uPAR

E, n = 255, s 0,001; uPAR

S, n = 257, s. 0,001)

Patient opfølgende

Ved afslutningen af ​​undersøgelsen (december 2011), af de 363 patienter, som havde informativ TMA /IHC resultat på uPAR

E eller uPAR

S, 243 blev afdøde, 111 var blevet fulgt til mellem 103 og 246 måneder (median 171 måneder) og 9 var blevet tabt for opfølgning efter en median på 56 måneder. Af de afdøde patienter, 117 døde af CRC, 117 i andre årsager og 9 fra ukendte årsager.

uPAR

E og overlevelse i fase B tumorer

centrale region. For etaper B og C kombineret, blev stærkere uPAR

E farvning forbundet med dårligere overlevelse (p = 0,004). Men når stratificeret efter scenen, denne forening varet stærkt for fase B (p = 0,002), men forsvandt for trin C (p = 0,589). Dette indikerer, at den prognostiske relevans af uPAR

E var begrænset til at iscenesætte B-patienter. Derfor blev kun sammenhængen mellem uPAR

E og overlevelse af fase B-patienter analyseret yderligere. Som det blev ikke observeret nogen signifikant forskel i overlevelse mellem de svage og moderate farvning kategorier, blev disse kombineres til en enkelt kategori “mellemliggende”. Overlevelse var markant dårligere i den mellemliggende gruppe end den negative gruppe (p = 0,035), men ikke signifikant forskellig mellem de mellemliggende og stærke grupper (p = 0,206). Således sidstnævnte blev kombineret i en enkelt positiv uPAR

E gruppe. Kaplan Meier analyse viste, at patienter i uPAR

E positive gruppe oplevede markant dårligere samlet overlevelse end i uPAR

E negative gruppe (figur 3a. P = 0,006). Multivariat analyse viste, at uPAR

E i den centrale tumor var en uafhængig negativ prognostisk indikator for den samlede overlevelse i fase B RC patienter efter justering for andre prognostiske variable (HR 1,9 [95% CI 1,1-3,1] Wald-p 0,014) ( tabel 2)

i fase b-patienter, (a):. samlet overlevelse var signifikant reduceret med uPAR

E positive i det centrale område af tumor (n = 125) og (b): med stærke uPAR

E i invasiv foran tumorer (n = 168). I fase C-patienter, (c): stærk uPAR

S i invasiv foran tumor (n = 179) var signifikant associeret med længere samlet overlevelse. (D): Positiv uPAR

PT i invasiv foran tumor (n = 179) blev også signifikant associeret med længere samlet overlevelse

Invasive front.. For trin B og C kombineret, var der ingen signifikant sammenhæng mellem uPAR

E og samlet overlevelse (p = 0,179). Patienter med stadium C tumorer havde ingen sammenhæng (p = 0,848), men

s

-værdi nærmede betydning i fase B (p = 0,087). I tilfælde sidstnævnte resultat var en funktion af små prøvenumre i nogle kategorier, dataene blev fornyet overvejelse ved at kombinere negativ, svag og moderat farvning, da deres tilknytning til den samlede overlevelse ikke signifikant forskellig (p = 0,294). Kaplan Meier-analyse af uPAR

E udtryk i den kombinerede gruppe viste patienter med stærke udtryk af uPAR

E havde en signifikant dårligere overlevelse (p = 0,017) (fig. 3b). Dette fortsatte efter multivariabel analyse justering for andre prognostiske variabler (HR 1,5 [95% CI 1,1-2,3] Wald-p 0,031) (tabel 2).

uPAR

S ved den invasive front og overlevelse i stadium C tumorer

Evaluering af uPAR udtryk i RC stroma-associerede celler, som anvendes to forskellige tilgange. For det første blev samlet stromal farvningsintensitet scoret som 0, 1, 2 og 3 (fig. 2b), på samme måde som uPAR

E. Sekundært tilstedeværelsen af ​​peritumoural accentuering; blev (uPAR

PT uPAR-ekspression i stroma men koncentreret omkring de tumorceller) i forhold til dens fravær (figur 2c.)

centrale region.. Samlet overlevelse blev ikke signifikant relateret til uPAR

S enten til trin B og C kombineret (p = 0,492), fase B alene (p = 0,071) eller trin C alene (p = 0,436). Tilstedeværelsen eller fraværet af uPAR

PT i den centrale tumor viste ingen signifikant sammenhæng med patientens overlevelse.

Invasive front. uPAR

S var ikke signifikant associeret med samlede overlevelse for kombineret trin B og C (p = 0,226) eller fase B alene (p = 0,641). Men inden scenen C, var der en generel tendens til stigende overlevelse som uPAR

S udtryk skred fra negativ til stærk (p = 0,015). Der var ingen overlevelse betydning mellem negativ og moderat, mens der var en signifikant forskel mellem moderat og stærk (p = 0,031). Derfor negativ til moderat farvning blev kombineret i en enkelt kategori og sammenlignet med stærkt udtryk. Stærk uPAR

S-ekspression signifikant associeret med længere samlet overlevelse (figur 3c;. P = 0,009). Efter justering for andre prognostiske variabler denne forskel varet (HR 0,6 [95% CI 0,4-0,9] Wald-p = 0,007) (tabel 3). Desuden scenen C patientgruppen med uPAR

PT til stede i den invasive foran tumorvæv viste også en længere overlevelsestid sammenlignet med patienter uden uPAR

PT (figur 3d;. P = 0,017) på multivariable analyser (HR 0,7 [95% CI 0,5-0,9] Wald-p 0,016) (tabel 3).

uPAR på de tilstødende ikke-neoplastiske slimhinde væv

for epitel uPAR udtryk på den tilstødende ikke -neoplastic slimhinde væv (n = 312), 36 sager viste stærk uPAR udtryk (19 i fase B og 17 i trin C), 58 sager havde moderat udtryk (28 i fase B og 30 i trin C), 81 sager havde svag udtryk (41 i fase B og 40 i trin C) og 137 tilfælde var negative (68 i fase B og 69 i trin C). I fase B, var der ingen sammenhæng mellem farvning intensitet og overlevelse (p = 0,700), mens i fase C var der ingen forskel i overlevelse mellem negativ, svag og mellemliggende. Den eneste betydelige forening var længere overlevelse for stærkt end for negative (p = 0,018), men da dette var baseret på kun 17 tilfælde med kraftig farvning, viste det sig unormalt, og kan være en type 1 fejl som følge af det lille antal. uPAR udtryk i stroma var næsten fraværende, med negative udtryk i 320 sager (156 i fase B og 164 i trin C) og kun moderat udtryk i 9 tilfælde (6 i fase B og 3 i fase C), utilstrækkelige uPAR udtryk prøver var tilgængelige for en omfattende statistisk analyse.

diskussion

Selvom den prognostiske relevans af uPAR i kræft er blevet grundigt undersøgt, betydelige uoverensstemmelser har gjort meget af arbejdet overbevisende. To store spørgsmål uløste: For det første, uoverensstemmelsen vedrørende celletyper hvor uPAR overudtrykkes (dvs. uPAR

E eller uPAR

S), og for det andet, den prognostiske relevans af uPAR i forskellige celletyper og forskellige stadier af tumorprogression. I denne undersøgelse har vi rettet den første paradoks ved at demonstrere, at der kan påvises uPAR-ekspression i forskellige celletyper under anvendelse af to epitop-specifikt anti-humant uPAR MAb’er # 3937 og R4. Disse antistoffer afgrænset mellem uPAR

E og uPAR

S ekspression i RC væv, der viser antigenekspression kunne differentielt detekteret i forskellige celletyper og tumor steder i de samme RC væv. Ved undersøgelse af uPAR

E og uPAR

S fra 349 trin B eller C RC væv, var vi i stand til at dechifrere den anden kontrovers, der afslører, at forhøjet uPAR

E i både den centrale region og invasive tumor foran negativt korreleret med fase B samlet overlevelse, mens forhøjet uPAR

S på invasive fronten positivt korreleret med stadium C samlet overlevelse.

anerkendelse af forskellige uPAR epitoper af forskellige antistoffer er en vigtig faktor, der skal overvejes, ikke kun for detektion i forskellige celletyper, men også til bestemmelse af den potentielle kliniske prognostiske relevans af uPAR. Der er flere anti-uPAR polyklonale antistoffer (pAb’er) og MAb’er som er blevet udviklet og undersøgt grundigt i kliniske anvendelser [6]. Af disse er MAb’er # 3937 (som # 3936) og R4 (som R2) anvendes hyppigst til uPAR

E og uPAR

S detektion henholdsvis og stå i centrum for uensartede resultater opnået ved forskellige laboratorier. Flere faktorer kan forklare specificiteten af ​​disse forskellige antistoffer, den primære er binding til forskellige “tilgængelig” epitoper afspejler potentielt forskellige roller uPAR i hver celletype. Som uPAR har 42 kendte interagerende partnere [5], er det også muligt, at antistoffet epitoper kan maskeres af andre uPAR interagerende partnere i forskellige celletyper. Den multifunktionelle natur uPAR er en funktion af dens interactome [3,5], og derfor uPAR påvist ved forskellige epitopspecifikke MAb’er kan have forskellige interagerende partnere, hvilket kan afspejle divergerende funktioner i diskrete celletyper. Dette koncept understøttes af, at befolkningen i opløselig uPAR (suPAR) i bestemte celletyper har vist diametralt ændret farvede mønstre afspejler funktionelle forskelle som følge af strukturelle variationer [25].