PLoS ONE: B-vitaminer, Methionin og alkoholindtag og risiko for tyktarmskræft i relation til BRAF mutation og CpG Island Methylator Fænotype (CIMP)

Abstrakt

Baggrund

Et-carbon stofskifte synes at spille en vigtig rolle i DNA-methylering reaktion. Tyder på, at et lavt indtag af B-vitaminer eller højt alkoholforbrug øger tyktarmskræft risiko. Hvordan man-carbon næringsstoffer påvirker CpG øen methylator fænotype (CIMP) eller

BRAF

mutation status i tyktarmskræft er fortsat usikker.

Metoder

Ved hjælp hændelse tyktarmskræft i et stort prospektive kohorte af kvinder (Nurses ‘Health Study), vi bestemt

BRAF

status (N = 386) og CIMP status (N = 375) med 8 CIMP-specifikke markører [

CACNA1G

,

CDKN2A

(p16),

CRABP1

,

IGF2

,

MLH1

,

NEUROG1

,

RUNX3

og

SOCS1

], og 8 andre CpG øer (

CHFR

,

HIC1

,

IGFBP3

,

MGMT

, MINT -1, MINT-31, P14, og

WRN

). Vi undersøgte sammenhængen mellem indtagelse af én-carbon næringsstoffer og alkohol og tyktarmskræft risiko, af

BRAF

mutation eller CIMP status.

Resultater

Højere indtag folat var forbundet med en tendens til lav risiko for CIMP-lav /0 tumorer [total folat indtag ≥400 mg /dag vs. 200 pg /dag; den multivariate relative risiko = 0,73; 95% CI = 0,53-1,02], mens samlede indtag folat havde ingen indflydelse på CIMP høje tumor risici (P

heterogenitet = 0,73). Hverken vitamin B

6, methionin eller alkoholindtagelse syntes at differentielt påvirke risici for CIMP-høj og CIMP-lav /0 tumorer. Brug af 16-markør CIMP panel ikke væsentligt ændrer vores resultater. B-vitaminer, methionin eller alkoholindtagelse påvirkede ikke tyktarmskræft risiko forskelligt af

BRAF

status.

Konklusioner

Denne molekylære patologisk epidemiologi undersøgelse tyder på, at lavt indtag af folat niveau kan være forbundet med en øget risiko for CIMP-lav /0 colontumorer, men ikke fra CIMP-høje tumorer. Men forskellen mellem CIMP-høj og CIMP-low /0 kræftrisiko var ikke statistisk signifikant, og yderligere undersøgelser er nødvendige for at bekræfte disse observationer

Henvisning:. Schernhammer ES, Giovannucci E, Baba Y, Fuchs CS , Ogino S (2011) B-vitaminer, Methionin og alkoholindtag og risiko for tyktarmskræft i relation til

BRAF

Mutation og CpG Island Methylator Fænotype (CIMP). PLoS ONE 6 (6): e21102. doi: 10,1371 /journal.pone.0021102

Redaktør: Qian Tao, Den kinesiske University of Hong Kong, Hongkong

Modtaget: 10. januar, 2011; Accepteret: 20 maj 2011; Udgivet: 27 juni 2011

Copyright: © 2011 Schernhammer et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af USA National Institutes of Health (NIH) [P01 CA87969 (til S. Hankinson), P01 CA55075 (til W. Willett), P50 CA127003 (til CSF), K07 CA122826 (til SO), R01 CA151993 (til SO)], den Bennett Family fond for målrettede behandlinger Research; og underholdning Industriens Fond gennem National Kolorektal Cancer Research Alliance. Indholdet er alene forfatternes ansvar og repræsenterer ikke nødvendigvis de officielle synspunkter NCI eller NIH. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

DNA-methylering er en vigtig epigenetisk mekanisme i gendæmpning og prægning [1], [2], [3]. Afvigende epigenetisk inaktivering af tumor undertrykkere af CpG ø hypermethylering er almindeligt observeret i humane maligniteter. Den CpG ø methylator fænotype (CIMP) er kendetegnet ved tilbøjelighed til udbredt CpG island hypermethylering [4], [5]. Høj grad af CIMP (CIMP-høj) er en klar fænotype i kolorektal cancer, der er forbundet med høj alder, kvindelige køn, proksimal tumor placering, mikrosatellit ustabilitet,

BRAF

mutation, og højt niveau tumor LINE-1 methylering [6], [7], [8], [9]. Imidlertid ætiologiske faktorer for CIMP-høj stort set spekulative. På trods af en stærk forbindelse mellem CIMP og

BRAF

mutation i kolorektal cancer [5], [6], [7], [8], den hypotese, at

BRAF

mutation forårsager afvigende CpG ø methylering [10] har været meget kontroversiel [11]. For nylig har DNMT3B opstået som en af ​​årsagerne til CpG ø metylering i tumor [12], [13], [14]; ikke desto mindre, sammenhængen mellem DNMT3B og CIMP i kolorektal cancer er mest beskedne [13] og tumor CpG ø methylering synes at være påvirket af andre faktorer.

Folinsyre og relaterede vitaminer B

2, B

6 og B

12, er afgørende for DNA-methylering og produktion af purin- og pyrimidin-nukleotider, der er nødvendige for DNA-syntese. Betydelig epidemiologisk evidens tyder på, at en lav-folat kost er forbundet med en øget risiko for colorectal cancer [15], [16], [17]. Ligeledes alkoholforbrug øger tyktarmskræft risiko [18], sandsynligvis gennem sine anti-folat virkninger [19]. Vi har for nylig vist, at tilstrækkelig indtagelse folat og lavt forbrug af alkohol er beskyttende mod LINE-1 hypomethylated tyktarmskræft, men ikke mod LINE-1 hypermethylerede tyktarmskræft [20]. Mens en nylig undersøgelse viste en sammenhæng mellem folat og CpG ø methylering i normal kolorektal væv [21], hvor folat eller andet indtag B vitamin påvirker CpG ø methylering eller

BRAF

mutation i tumor forbliver mindre godt forstået, og litteratur er noget begrænset [22], [23], [24], [25].

Vi har derfor vurderet, om indflydelsen af ​​folat på risiko tyktarmskræft afveg ifølge CIMP og

BRAF

status. Til dette formål anvendte vi tumorprøver fra en prospektiv kohorte undersøgelse, som har tidligere vist, at folatindtaget omvendt var forbundet med risiko for tyktarmskræft [26]. Tilgængeligheden af ​​detaljerede og ajourførte oplysninger om folat indtag og tumor prøver inden denne kohorte tilladt en mere omfattende undersøgelse af effekten af ​​folat indtag på risikoen for at udvikle CIMP-høje og ikke-CIMP-høje tyktarmskræft samt af

BRAF

mutationsstatus. Specificitet i sammenhængen mellem folat og tyktarmskræft til bestemte tumor fænotyper vil yderligere styrke tilfældet for kausalitet og vil give vigtig indsigt i de kræftfremkaldende mekanismer folatmangel.

Materialer og metoder

forsøgspersoner

Nurses ‘Health Study (NHS) blev oprettet i 1976, da 121,701 amerikanske kvindelige sygeplejersker, 30 til 55 år, gennemført en mail spørgeskema [27]. Opfølgning inden kohorten øjeblikket overstiger 92%. Vi sendt toårige spørgeskemaer til opdatere oplysninger og identificere nydiagnosticerede tilfælde af kræft. I 1980 blev NHS spørgeskema udvidet med en valideret vurdering af kost, og opdaterede kosten vurderingerne er blevet foretaget hvert fjerde år [28]. De institutionelle anmeldelse bestyrelser på Brigham and Women ‘s Hospital og Harvard School of Public Health godkendt denne undersøgelse og godkendelsesproceduren.

Vurdering af næringsstoffer

kosten forskellige næringsstoffer, herunder folat, vitamin B

6, B

12, og methionin blev vurderet ved selvadministrerede semikvantitative mad frekvens spørgeskemaer (SFFQ), som blev afsluttet i 1980, 1984, 1986, 1990, 1994 og 1998. Næringsstoffer indtag blev beregnet ved at gange rapporterede hyppighed af indtagelse af hver af de angivne fødevarer vare ved næringsindholdet i den angivne portion størrelse og derefter summen af ​​disse produkter til alle fødevarer. Oplysninger om multivitamin brug og brug af andre kosttilskud blev også opsamlet, herunder oplysninger om hvilket mærke navn og type. En omfattende database over supplement formulering blev derefter anvendt til at beregne specifikke bidrag næringsstoffer fra disse supplerende kilder. Disse næringsstoffer bidrag blev efterfølgende sat til den specifikke indtag af næringsstoffer fra fødevarer til at beregne et dagligt indtag for hver kvinde. Denne metode til kosten vurdering er blevet grundigt valideret og pålidelighed vurderes [28]. Korrelationskoefficienten var 0,55 for sammenhængen mellem samlede indtag folat beregnet ud fra 1980 spørgeskema og erythrocyt folat koncentrationer målt i 1987 i denne kohorte [29]. Endvidere vitamin B

6 indtag som vurderet i 1980, 1984, og 1986 SFFQs er blevet vist at korrelere med en uges kost optegnelser, med korrelationer i området fra 0,54 til 0,58 [28], [30].

Vurdering af andre Kovariater

Alkoholforbrug var summen af ​​værdierne for tre typer af drikkevarer: øl, vin og spiritus. Vi overtog et ethanolindhold på 13,1 g for en 12-ounce (38-dl) kan eller flaske øl, 11,0 g for en 4-ounce (12-dl) glas vin, og 14,0 g for en standard del af spiritus. I valideringsstudier, korrelationskoefficienten for sammenhængen mellem alkoholforbrug stammer fra 1980 SFFQ og gennemsnittet af fire en uges kost optegnelser var 0,90 [31]. Andre risikofaktorer for tyktarmskræft, såsom motion og body mass index er generelt blevet vurderet hvert andet år om de vigtigste spørgeskemaer.

Konstatering af tyktarmskræft Cases og tumorvæv

Indkøb

Vi inkluderet tyktarmskræft rapporteret på de halvårlige spørgeskemaer mellem returnering af 1980 spørgeskema og 1. juni 2004. med tilladelse fra undersøgelsens deltagere blev tyktarmskræft bekræftet gennem læger ‘gennemgang af sygeplejerskernes journaler. Hvis tilladelse blev nægtet, forsøgte vi at bekræfte selvrapporterede kræft med en ekstra brev eller telefonopkald. Vi søgte også National Død Index til at identificere dødsfald blandt de nonrespondents til hver toårig spørgeskema. Edb Nationale Død Index er en meget følsom metode til at identificere dødsfald i denne kohorte [32]. For alle dødsfald, der kan tilskrives tyktarmskræft, vi anmodet om tilladelse fra familiemedlemmer (med forbehold for statslig regulering) for at gennemgå de medicinske journaler. Vi har med held fået enheder, for 58% af tilfældene (n = 527) i løbet af 22 års opfølgning i NHS. Der var ingen signifikant forskel i demografiske eller eksponering variabler mellem sager med tilgængelige væv og dem uden tilgængelige væv [33].

Genomisk DNA-ekstraktion og sekventering af

BRAF

Genomisk DNA fra paraffinindlejret væv blev ekstraheret, og hele genomet amplifikation blev udført ved PCR under anvendelse af tilfældige 15-mer primere [34]. PCR og sekventering målrettet til

BRAF

codon 600 blev udført som beskrevet tidligere [35].

Real-time PCR (MethyLight) til kvantitativ DNA methylering

For at bestemme CIMP status vi kvantificerede DNA-methylering i otte CIMP-specifikke promotorer. Bisulfitbehandling på genomisk DNA og efterfølgende real-time PCR (MethyLight) [36] blev valideret og udført som tidligere beskrevet [37]. De otte CIMP-specifikke promotorer, som vi kvantificerede (

CACNA1G

,

CDKN2A

(p16),

CRABP1

,

IGF2

,

MLH1

,

NEUROG1

,

RUNX3

, og

SOCS1

) [5], [38] blev udvalgt fra screening af 195 CpG øer [5], [39] . CIMP-high blev defineret som ≥6 /8 methylerede markører ved hjælp af otte-markør CIMP panel, og CIMP-low /0 blev defineret som 0/8 til 5/8 methylerede markører, ifølge de tidligere fastsatte kriterier [38]. I sekundære analyser, vi tilføjet otte flere markører (

CHFR

,

MGMT

,

P14

,

WRN

,

HTC1

,

MINT1

,

MINT31

,

IGFBP3

) [7] for en 16-markør panel. Ved hjælp af denne 16-markør panel, vi skabt to kategorier af CIMP (CIMP-høj defineret som ≥11 /16 denatureret markører, og CIMP-low /0 som 0/16 til 10/16 denatureret markører). Overensstemmelse af CIMP-høj diagnose mellem de 8-markør og 16-markør paneler var høj. (0,97; k = 0,89) [7]

Statistisk analyse

Vi ekskluderede kvinder, der ikke fuldstændig baseline 1980 kosten spørgeskema eller optagede usandsynlige kosten data (n = 29.279), rapporterede en baseline historie af kræft (bortset fra ikke-melanom hudkræft, n = 3627), inflammatorisk tarmsygdom, arvelig nonpolyposis tyktarmskræft, eller en familiær polypose syndrom ( n = 103), eller døde før baseline (n = 1). Efter disse udelukkelser, 88,691 kvinder var berettiget til analyse og påløbne opfølgende tid begynder den måned afkast af deres baseline spørgeskema og slutter den måned diagnosen tyktarmskræft, død af andre årsager, eller juni 1, 2002, alt efter hvad kom først. I en tidligere analyse af denne kohorte blev folat indtag signifikant associeret med risiko for tyktarmskræft, men havde ingen indflydelse på risikoen for endetarmskræft [26]; som et resultat, vi ikke overveje hændelse endetarmskræft blandt undersøgelsens deltagere i denne analyse. Ligesom rektal kræfttilfælde blev tilfælde af tyktarmskræft, som vi ikke kunne kvantificeres DNA methylering censureret fra analyserne på datoen for deres diagnose og ikke medtaget, da endepunkter.

Vi beregnede forekomst af tyktarmskræft for deltagerne i en bestemt kategori af folat indtag ved at dividere antallet af hændelsen sager med antallet af personår. Vi beregnede relative risici (RR) ved at dividere incidensraten i en kategori af incidensraten i referencen kategori og brugte Cox proportionel risiko modellering for at kontrollere for flere variabler samtidigt og at beregne 95% konfidensintervaller (CI). Med undtagelse af folat, vitamin B

6, methionin, og alkohol, som vi brugte baseline oplysninger i vores primære analyser, brugte vi den mest opdaterede information for alle kovariater før hver toårig interval.

for at sammenligne den specifikke effekt af indtagelse af folat og andre næringsstoffer på tyktarmskræft risiko i henhold til CIMP og

BRAF

status, vi ansat en tidligere beskrevet metode konkurrerende risikoanalyse udnytte dobbeltarbejde metode Cox regression [40], [41]. Denne metode tillader estimering af separate regressionskoefficienter for næringsstof indtag stratificeret af typen af ​​resultatet [f.eks CIMP-høj kræft vs CIMP-low /0 kræft;

BRAF

mutation (+) vs. (-)]. Vi vurderede den statistiske signifikans af samspillet mellem Risikoestimaternes efter tumortype ved hjælp af en sandsynlighed kvotientkriteriet at sammenlignet den model, der er tilladt for separate sammenslutninger af folat og andre næringsstoffer i henhold til CIMP /

BRAF

status med en model der antaget en fælles forening. Vi konservativt fortolket statistiske signifikans af fund på grund af flere test hypotese. For at tage hensyn til flere test (fem en-carbon næringsstoffer blev undersøgt) vi justeret vores signifikansniveau til p = 0,01 (= 0,05 /5). Vi brugte SAS-version 9.1.3 (Cary, NC) for alle analyser. Alle P-værdier er tosidet.

Resultater

Blandt 88,691 kvinder indgår i disse analyser, dem med en baseline folat indtag på mindre end 200 mg /dag var lidt mere tilbøjelige til at ryge og til være stillesiddende, sammenlignet med kvinder med 400 mg daglig folat indtag eller mere (tabel 1). De var også mindre tilbøjelige til at bruge aspirin eller postmenopausale hormoner regelmæssigt. Desuden kun 8% af kvinder med mindre end 200 pg /dag folat indtagelse brugte multivitaminer, mens blandt dem med 400 ug folat eller mere dagligt, 84% rapporterede nuværende brug multivitamin. Yderligere oplysninger er blevet rapporteret andetsteds [42].

Vi dokumenterede 375 indfaldende tilfælde af tyktarmskræft tilgængelige til at kvantificere DNA methylering løbet 1,861,934 personår. Anvendelse af DNA methylering assays af disse 375 coloncancere, blev 87 (23%) tumorer fundet at være CIMP-høj. Tilsvarende

BRAF

mutationsstatus var tilgængelig for 386 tilgængelige hændelse kolon kræfttilfælde dokumenteret løbet 1,861,927 personår, hvoraf 86 (22%) var

BRAF

muteret.

Som i vores tidligere undersøgelser [18], [26], [43], [44], observerede vi en omvendt sammenhæng mellem folat og vitamin B

6 indtag og tyktarmskræft risiko blandt alle tilfælde i vores kohorte (tabel 1 og 2 ).

Vi evalueres yderligere indflydelse af en-carbon næringsstoffer på risiko tyktarmskræft ifølge CIMP status i tyktarmskræft. Samlet set ingen af ​​sammenslutninger undersøgte nået statistisk signifikans ved den konservative signifikansniveau (p = 0,01). For total indtag folat (tabel 2), til gavn for forbruget over 200 ug pr dag syntes at være begrænset til CIMP-lav /0 kræftformer. I forhold til kvinder med mindre end 200 pg folat per dag, den multivariate RR for udviklingen af ​​CIMP-lav /0 tyktarmskræft blandt dem, rapportering 400 mg eller mere af folat indtag per dag var 0,73 (95% CI, 0,53-1,02; P for trend = 0,15) selvom statistisk signifikans blev ikke nået. I modsætning hertil alt folat indtag havde ingen indflydelse på risikoen for CIMP-høje tumorer (RR, 0,98; 95% CI, 0,54-1,77).

Vi undersøgte yderligere påvirkning af vitamin B

6 og B

12 indtag ifølge CIMP status (tabel 2). Fordelen ved vitamin B

6 indtag også syntes begrænset til CIMP-lav /0 kræft (multivariat RR 0,77; 95% CI, 0,48-1,23 sammenligne ekstreme kvintiler), mens B

6 indtag havde ingen indflydelse på risikoen af CIMP-høje tumorer. Der var imidlertid ingen differentiel effekt af vitamin B

12 på tyktarmskræft risiko ved tumor- CIMP status og ingen af ​​de observerede foreninger nåede statistisk signifikans.

Vi undersøgte også indflydelsen af ​​methionin indtag og alkoholindtag efter til CIMP status (tabel 2). Der syntes at være en moderat større reduktion i risikoen for CIMP-høje cancere med stigende methionin indtag. Vi har ikke oplever en betydelig indflydelse af alkohol indtag på risiko tyktarmskræft, og effekten syntes ikke at variere alt efter CIMP status.

Når du bruger vores 16-markør panel, samlet, resultater forblev uændret (data ikke vist).

Tilsvarende for

BRAF

mutation status, ingen af ​​de undersøgte næringsstoffer viste en signifikant effekt samlet, eller ved mutationsstatus (tabel 3).

Discussion

Vores nuværende undersøgelse er en prototypisk studie i “

Molekylær Patologisk Epidemiologi

“, begrebet, som for nylig er blevet beskrevet og konsolideret ved Ogino et al. [45]. Det repræsenterer et relativt nyt, specialiseret inden for epidemiologi baseret på det molekylære klassificering af kræft. I molekylær patologisk epidemiologi, er en kendt eller mistænkt ætiologisk faktor undersøgt i forhold til en specifik somatisk molekylær ændring, med henblik på at få indblik i den kræftfremkaldende mekanisme [45]. Antag, en given ætiologisk faktor (livsstil, kost, miljømæssige eller genetiske) antages at forårsage en vis somatisk molekylær forandring. Hvis vi kan påvise en konkret sammenhæng mellem ætiologisk faktor, og den molekylære forandringer, kan det bevis for kausalitet. Hertil kommer, for en person, der har en tilbøjelighed til en specifik somatisk molekylær forandring fører til kræft, kan vi være i stand til at udvikle en personlig forebyggende foranstaltning, der er rettet mod specifikke molekyler eller veje [45]. Derfor kan molekylær patologiske epidemiologi forskning bidrage til at dechifrere den kræftfremkaldende proces samt optimering af forebyggende strategier [45].

I denne prospektive kohorteundersøgelse, fandt vi forslag til både lav folat og vitamin B

6 indtag at være forbundet med en øget risiko for CIMP-lav /0 coloncancere men ikke med den for CIMP-høje tumorer. Højden i risiko var hovedsagelig begrænset til deltagere med de laveste niveauer af folat og vitamin B

6 indtag. Derudover observerede vi, at effekten af ​​et højere indtag methionin på tyktarmskræft risiko beskedent afveg tumoral CIMP status, med det gavnlige virkning af methionin, der hovedsageligt begrænset til CIMP-high cancer. Der var ingen forskel i effekten af ​​folat eller B-vitaminer på tyktarmskræft stratificeret af

BRAF

status. Desuden er ingen af ​​de observerede foreninger nåede statistisk signifikans.

Mekanistisk, fremgår det plausibelt, at kronisk folatmangel kan være involveret i CpG ø methylering [46]. I en japanske befolkning, reduceret aktivitet af enzymet methylentetrahydrofolatreduktase (MTHFR) på grund af

MTHFR

codon 429 variant (rs1801131) og derved svække folatmetabolismen, er blevet forbundet med CIMP-høje tumorer i den proksimale colon [ ,,,0],47]. I en kaukasisk population, genetisk variation i

MTHFR

rs1801131 variant synes at øge risikoen for CIMP-høje kolon tumorer [48], [49] selv om dette ikke er blevet bekræftet af Holland kohorteundersøgelse oplysninger [22] , [50]. Forholdet mellem

MTHFR

SNP og CIMP i tyktarmskræft er stærk i kombination med lav folat og methionin indtag samt høj alkoholforbrug [49], [51]. En nyere undersøgelse tyder på, at lav ekspression af gamma-glutamyl hydrolase (GGH) er stærkt forbundet med CIMP-høje tumorer, hvilket giver yderligere støtte til en rolle af en-carbon metabolisme i denne fænotype [52].

A forudgående case-kontrol undersøgelse af 1.154 kolon tumorer vurderede indflydelsen af ​​en-carbon indtag af næringsstoffer på CIMP samt

BRAF

status i disse tumorer og fandt dem ikke at være forbundet med enten CIMP-høj eller

BRAF

mutation [51]. Men i forhold til vores aktuelle undersøgelse, nonquantitative methylering-specifik PCR på en anden CpG ø panel, og en mindre streng definition af CIMP-høj (2 eller flere af 5 markører methylerede) blev anvendt i denne undersøgelse. Interessant, forfatterne bemærkede også, at fedme var forbundet med en dobbelt risiko for at få en ikke-CIMP-high tumor [51]. I vores undersøgelse, efter nøje justering for fedme, både folat og vitamin B

6 (indtagelse af, som er stærkt korreleret i vores befolkning) var forbundet med risiko for CIMP-lav /0 tumorer.

I en anden sag-casestudie i Nederlandene Kohorte, kolorektal cancer patienter i lav folat /høj alkoholindtagelse gruppe er mere tilbøjelige til at have promotor hypermethylering end patienter i høj folat /lav alkohol gruppe [53]. Især har den nederlandske Kohorte vist en mulig sammenhæng mellem vitamin B

6 og

MLH1

methylering [22], og en omvendt sammenhæng mellem

MTR

rs1805087 polymorfi og CIMP hos mænd [22 ].

i en af ​​den seneste undersøgelse for at evaluere sammenhængen mellem stofskiftet én-carbon og tyktarmskræft ved CIMP /

BRAF

status, til dato, udnytte en indlejret tilgang case-kontrol inden for Nordsverige Sundhed og sygdom undersøgelse (190 tilfælde og 1:2 matchede kontroller) [24], van Guelpen et al. viser en lavere risiko for CIMP-lav /CIMP-høje kolorektale tumorer med meget lave folatniveauer. Kollektivt, der er akkumulerende beviser for den hypotese, at en balance mellem forskellige metaboliske mellemprodukter med methyl-gruppe påvirker locus-specifikke CpG ø metylering reaktion. Ved hjælp af data fra en forhindring adenom forsøg med folinsyre og aspirin endelig højere RBC folat niveauer, men ikke højere forbrug kosten folat, var forbundet med højere methylering niveauer [21].

Udover påvirkning af én-carbon næringsstoffer , tyder på, at den lokale DNA-sekvens kontekst kan påvirke samling af en methylering reaktion maskiner og locus-specifik DNA-methylering. Undersøgelser har vist, at

cis

-virkende elementer forårsager allelspecifik metylering i det mammale genom [54], [55], [56]. Således germline variationer i

cis

virkende elementer kan påvirke epigenetisk status, herunder DNA-methylering.

MLH1

rs1800734 promotor SNP har været forbundet med

MLH1

promotor methylering [57], [58] og MSI [59] i kolorektal cancer. En anden undersøgelse har vist, at

MGMT

rs16906252 promotor SNP er stærkt forbundet med

MGMT

promotor methylering og tab af udtryk i kolorektal cancer [60], og med

MGMT

methylering i perifere blodceller og normal colon mucosa hos personer uden kolorektal cancer [61], [62]. Det er endnu ikke undersøgt, om disse eller andre

cis

virkende germline varianter interagere med andre én-carbon-relaterede faktorer til at ændre modtagelighed for afvigende DNA methylering.

Vores undersøgelse har flere vigtige styrker. For det første fordi vi samlet detaljerede, ajourførte oplysninger om en række kosten og livsstil kovariater relevante for kolon carcinogenese løbet 22 års opfølgning og med høje opfølgende satser, var vi i stand til at undersøge langsigtede engagementer i én-carbon næringsstoffer og at tage hensyn til vigtige forstyrrende faktorer. For det andet, vores undersøgelse er potentielle, fjerne bekymringer om forskellen recall bias, især med hensyn til vores dietary vurderinger. Resterende bias fra eksponering misklassifikation var derfor sandsynligt nondifferential af natur, at påvirke vores resultater kun mod nul. Endvidere har vi med succes koblet disse næringsstoffer-som vurderes via en semikvantitativ mad frekvens spørgeskema (SFFQ) -til andre relevante endpoints i tidligere analyser, hvilket indikerer, at målefejl er ikke stor nok til at skjule nogen reelle foreninger.

Begrænsninger af note vedrører folat befæstning, som blev obligatorisk i 1998 [63]. Vi har flere vurderinger af én-carbon indtag af næringsstoffer før befæstning. Endvidere vores resultater forblev uændret, når begrænset til sager, som blev indgået forud for folat befæstning (1998), som også er blevet påvist i tidligere analyser [20], [42], [64]. Andre begrænsninger og forbehold specifikke for molekylær patologisk epidemiologi generelt er blevet diskuteret andetsteds [45]

Vi kan ikke udelukke muligheden for resterende confounding som en potentiel forklaring på vores resultater.; ikke desto mindre, i vores multivariate analyser, som omfattede mange kendte eller mistænkte risikofaktorer for tyktarmskræft, de multivariate risiko estimater ikke afviger væsentligt fra de aldersbetingede justeret resultater. Endvidere kunne vi ikke få tumorvæv fra alle tilfælde af bekræftet tyktarmskræft påvist i Nurses ‘Health Study kohorte, men risikofaktorer i disse tilfælde ikke mærkbart forskellige fra dem i tilfælde med tumorvæv rådighed. Endelig, selv før mandat befæstning i 1998 [63], vores deltagere havde stadig relativ høj folat og vitamin B

6 niveauer. Det er derfor muligt, at vi måske har fundet endnu stærkere foreninger i nærværende undersøgelse, hvis vores folat niveauer ville have inkluderet en endnu lavere rækkevidde.

Sammenfattende viser vi, at den reducerede risikoen for tyktarmskræft er forbundet med propfuld folat status er noget begrænset til CIMP-lav /0 cancere. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at belyse den nøjagtige mekanisme af en abnormitet i én-carbon stofskifte fører til afvigende CpG ø methylering.

Tak

Vi vil gerne takke Caroline Niu til programmering støtte, og deltagerne i Nurses ‘Health Study for deres samarbejde og deltagelse.