PLoS ONE: Kimcellelinje EPHB2 Receptor Varianter i familiær Colorectal Cancer

Abstrakt

Familiær ophobning af kolorektal cancer forekommer i 15-20% af tilfældene, men anerkendt cancer syndromer forklarer kun en lille brøkdel af denne sygdom. Således det genetiske grundlag for størstedelen af ​​arvelig kolorektal cancer forbliver ukendt.

EPHB2

er for nylig blevet impliceret som kandidat tumorsuppressorgen i kolorektal cancer. Formålet med denne undersøgelse var at vurdere bidraget af

EPHB2

til arvelig kolorektal cancer. Vi screenet for kimcellelinje

EPHB2

sekvens varianter i 116 populationsbaserede familiære tilfælde kolorektal kræft ved DNA-sekventering. Vi derefter estimeret befolkningen frekvenser og karakteriseret de biologiske aktiviteter af

EPHB2

varianter identificeret. Tre nye ikke-synonyme missense ændringer blev opdaget. To af disse varianter (A438T og G787R) medfører væsentlige ændringer restkoncentrationer, mens det tredje fører til en konservativ substitution i det carboxyterminale SAM domæne (V945I). De tidligere to varianter blev fundet én gang i de 116 sager, mens V945I varianten var til stede i 2 tilfælde. Genotypebestemmelse af yderligere patienter med tarmkræft og kontrolpersoner viste, at A438T og G787R repræsenterer sjælden

EPHB2

alleler.

In vitro

funktionelle undersøgelser viser, at G787R substitution, beliggende i kinasedomænet, forårsager nedsat receptor-aktivitet og er derfor patogen, hvorimod A438T varianten bevarer sin receptorfunktion og sandsynligvis repræsenterer en neutral polymorfisme. Tumorvæv fra G787R variant tilfælde manifesteret tab af heterozygositet, med tab af vildtype allelen, understøtter en tumor suppressor rolle for

EPHB2

i sjældne tilfælde kolorektal cancer. Sjælden kønscellelinie

EPHB2

varianter kan bidrage til en lille brøkdel af arvelig kolorektal cancer

Henvisning:. Zogopoulos G, Jørgensen C, Bacani J, Montpetit A, Lepage P, Ferretti V, et al. (2008) Kimcellelinje

EPHB2

Receptor Varianter i familiær kolorektal cancer. PLoS ONE 3 (8): e2885. doi: 10,1371 /journal.pone.0002885

Redaktør: Jörg Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Tyskland

Modtaget: December 20, 2007; Accepteret: 3 juli 2008; Udgivet: 6 August, 2008

Copyright: © 2008 Zogopoulos et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Cancer Institute, National Institutes of Health under RFA # CA-96 til 011 (til SG) og gennem samarbejdsaftaler med medlemmer af Colon Cancer Family Registry og proteasehæmmere Indholdet af dette manuskript ikke nødvendigvis afspejler de synspunkter eller politik National Cancer Institute eller nogen af ​​de samarbejdende institutioner eller efterforskere i Colon CFR, heller ikke omtale af firmanavne, kommercielle produkter, eller organisationer indebærer godkendelse af den amerikanske regering eller Colon CFR. Cancer Care Ontario, som værtsorganisationen til ARCTIC Genome Project, erkender, at dette projekt blev delvist finansieret af Genome Canada gennem Ontario Genomics Institute, ved Genome Québec, den Ministère du Développement ÿconomique et Régional et de la Recherche du Québec og Ontario Institute for Cancer Research. GZ er en Scholar af Society of University Kirurger og en modtager af en Terry Fox Foundation Research Fellowship fra National Cancer Institute of Canada. TJH er en modtager af en kliniker-Scientist Award i Translational Research fra Burroughs Wellcome fonden

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kolorektal cancer er en almindelige malignitet i vestlige samfund, med 15-20% af tilfældene udviklet på grundlag af tilsyneladende genetisk disposition [1]. Men de anerkendte familiær kolorektal cancer syndromer-Familiær adenomatøs polypose (FAP), Arvelig Ikke-polypose Kolorektal Cancer (HNPCC) og

MYH

associeret polypose (MAP) -account for langt mindre end en tredjedel af nedarvet . kolorektal cancer og efterlod yderligere arvelige komponent af denne sygdom uforklarlige [1]

i langt de fleste kolorektale cancere, mutations aktivering af Wnt signalering pathway’en spiller en vigtig rolle i initiering tumorigenese [2] – [4 ]. Hyperaktivering af WNT signalering opstår oftest tidligt i adenom til carcinom sekvens som følge af inaktiverende mutationer i

APC

tumorsuppressorgen eller aktivere onkogen

β-catenin

mutationer. Disse genetiske ændringer fører til konstitutiv aktivering af β-catenin /TCF4 kompleks, der på sin side driver overekspression af Wnt signalering mål. Disse nedstrømseffektorer af WNT pathway omfatter gener med en afgørende rolle i udviklingen af ​​kolorektale tumorer, såsom

EphB

og

ephrin

gener [5], [6].

en rolle for

EPHB2

, et medlem af Eph receptortyrosinkinase familie, som et tumorsuppressorgen i kolorektal carcinogenese er blevet foreslået af flere nyere fund.

EPHB2

kort til en kromosomal region (1p36.1) ofte slettet i disse tumorer [7]. Desuden har immunhistokemiske undersøgelser vist, at ekspression af multiple EphB isoformer ofte undertrykt i invasive humane colorektale tumorer [8]. Desuden Alazzouzi

et al

. har for nylig vist en høj forekomst af

EPHB2

rammeskift mutationer i mikrosatellitmarkørerne ustabil kolorektale tumorer og afvigende

EPHB2

promotor methylering i både mikrosatellitmarkører stabile og ustabile neoplasmer [9]. Tab af EPHB2 udtryk i kolorektale tumorer er også blevet forbundet med dårligere prognose [10].

Mutationsanalyse inaktivering af

EPHB2

har været knyttet til prostata carcinogenese. Huusko

et al.

Nylig beskrev en række

EPHB2

mutationer i prostata tumorer og i celle-linjer [11], og en fælles nonsense mutation har været forbundet med prostatakræft i African American mænd med en familie historie af denne sygdom [12]. Disse resultater taget sammen med den etablerede rolle EphB receptorer i kolorektal cancer, fik os til at hypotesen, at germline

EPHB2

mutationer kan tegne sig for mindst en brøkdel af de genetiske ændringer ligger til grund for uforklarlige del af arvelig kolorektal cancer, og kan repræsentere en ny cancer syndrom forårsager genetisk disposition for kolorektal og prostatakræft. Derfor, i dette studie, vi screenet 116 populationsbaserede familiær kræfttilfælde kolorektale for kimcellelinje

EPHB2

mutationer. De 116 testede probander havde mindst én yderligere påvirkede første grads slægtning. Disse sager havde mikrosatellit stabile tumorer, og ikke opfyldte diagnostiske kriterier for FAP, HNPCC og MAP. Vi beriget også vores serie med personer, der mødte ovenstående kriterier inklusionskriterierne og havde personlige eller familiemæssige historier af prostatakræft. Vores resultater tyder på, at sjældne

EPHB2

alleler bidrager til en lille brøkdel af familiær kolorektal cancer.

Materialer og metoder

Undersøgelse Emner og DNA prøver

Biospecimens blev opnået fra Ontario familiær Colorectal Cancer Registry (OFCCR), et medlem af National Cancer Institute Cooperative Family Registre for tarmkræft Studies (https://epi.grants.cancer.gov/CFR/about_colon.html) [13]. Den OFCCR omfatter 3.770 kolorektal kræfttilfælde diagnosticeret i provinsen Ontario, Canada mellem 1997-2000, med en alder på tidspunktet for diagnosen på 20 til 74. alders- og køn-matchede kontrolpersoner med nogen personlig historie af tyk- og endetarmskræft blev rekrutteret telefonisk fra en liste over tilfældigt udvalgte boligområder telefonnumre til Ontario og fra populationsbaserede skatteansættelse ruller af Ontario Finansministeriet. Undersøgelsespersoner doneret en venøs blodprøve og perifere lymfocytter blev isoleret under anvendelse af Ficoll-Paque, i henhold til fabrikantens anbefalinger (Amersham Biosciences, Baie d’Urfé, Quebec, PQ, Canada). Phenol-chloroform-metoden blev anvendt til at isolere genomisk DNA fra lymfocytter og colorectal cancer-cellelinjer. QIAamp protokol (Qiagen Inc., Mississauga, Ontario, Canada) blev anvendt til at ekstrahere genomisk DNA fra paraffinindlejrede væv. Alle forsøgspersoner underskrevet skriftlig tilladelse til at deltage i en Mount Sinai Hospital Research Ethics bestyrelse godkendte forskningsundersøgelse.

EPHB2

Mutation Screening

Brug automatiseret sekventering (Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer , Foster City, CA, USA), vi screenet for kimcellelinje

EPHB2

(Entrez Gene ID: 2048; RefSeq: NM_004442, NM_017449) sekvens varianter i 116 familiære kolorektale sager (gennemsnitlig alder ved diagnose 54 år, interval 22 til 74 år, 59 hunner, 57 hanner). Vores analyse omfattede patienter med personlige (n = 6) og /eller slægtshistorie (far, n = 19; søskende, n = 23; halvsøskendes, n = 4) for prostatakræft. Patienter med FAP, HNPCC eller MAP blev udelukket. En række kolorektale cancer cellelinier (Caco2, Colo320DM, Colo320HSR, HT29, LS513, LS1034, SW837, SW948, SW1417, T84) blev også screenet. Vi sekventeret hele den kodende region og mindst 50 bp intron sekvens ved exon /intron-grænserne. PCR primersekvenser og betingelser er vist i tabel S1. Varianter identificerede nummereret i forhold til RefSeq NM_004442.

A438T, D679N og G787R allelfrekvenserne

En tilfældig stikprøve af sager og matchede kontroller fra OFCCR serien blev udvalgt til undersøgelser for at evaluere A438T, D679N og G787R allel frekvenser. Lymfocyt DNA-prøver fra en ekstra serie af OFCCR tilfælde (n = 364 for A438T, n = 1160 for D679N, n = 182 for G787R) og population-matchede kontroller (n = 384 for A438T, n = 1133 for D679N, n = 199 for G787R) blev testet for at vurdere befolkningens frekvenser af A438T, D679N og G787R varianter. Genotypebestemmelse analyser for de A438T, D679N og G787R varianter blev udviklet ved hjælp af fluorescenspolarisering-Single Base [14] og, Extension (FP-SBE), SNPstream [14] RFLP (Tabel S2).

Stamtavle og Tab af heterozygositet (LOH) Analyser

Test for adskillelse i familier probander transporterer A438T og G787R varianter blev udført ved direkte sekventering, enten ved hjælp af lymfocyt eller arkivering DNA fra paraffinindlejrede væv blokke. Tab af heterozygositet blev udført ved sekventering parrede tumorvæv /normalt arkivering DNA-prøver og sammenligning af sekvensen autoradiogrammer til et fald i intensiteten af ​​den ikke-muterede signal sammenlignet med den muterede sekvens (tabel S2). Disse reaktioner blev udført under anvendelse af Thermo Sequenase Radiomærket Terminator Cycle Sequencing Kit ifølge producentens protokol (USB Corporation, Cleveland, Ohio, USA)

Biokemisk karakterisering af A438T G787R Varianter

A438T

G787R

cDNA sekvens varianter blev genereret ved hjælp af PCR-baseret site-directed mutagenese og RefSeq NM_004442 (OriGene Technologies Inc., Rockville, MD, USA) som template. PCR-produkterne blev klonet ind i pcDNA3 (Invitrogen Canada Inc.) og sekvensverificeret. DU145 (en gave fra Dr. Irene Andrulis, Samuel Lunenfeld Research Institute) blev dyrket i MEM /10% FBS. Cellerne blev kortvarigt transficeret med de forskellige

EPHB2

cDNA konstruktioner (vildtype,

A438T

, eller

G787R

) ved hjælp af Lipofectamine 2000 (Invitrogen Canada Inc., Burlington, Ontario , Canada) ifølge producentens instruktioner. Fem timer efter transfektion blev mediet ændret til sult medium (MEM /0,5% FBS) i 16 timer. Celler blev derefter stimuleret med 2 ug /ml preclustered ephrin b1-Fc (ephrin b1-Fc, R anti-Fc-antistof, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, PA, USA) i 30min. Transficerede EPHB2 blev immunfældet ved hjælp anti-EPHB2 antiserum [15] og immunoblottedes med anti-phosphotyrosin (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, New York, USA) eller anti-EPHB2. Ekspression og immunopræcipitation af EPHB2 varianter for

in vitro Salg kinaseassays blev udført som ovenfor, bortset celler blev efterladt ikke-stimuleret før cellelyse og immunfældning, som tidligere beskrevet af Holland

et al

. [16] Geler blev analyseret og kvantificeret ved hjælp af en Storm phosphoimager (Molecular Dynamics Inc., Sunnyvale, Californien, USA).

Resultater

Mutationsanalyse screening af

EPHB2

gen i 116 patienter med familiær kolorektal cancer identificeret 3 hidtil ukendte missense nukleotidændringer og D679N varianten tidligere har foreslået Huusko

et al.

[11] at være patogene i prostatacancer (tabel 1). Tre ubeslægtede patienter viste sig at bære D679N allelen, diagnosticeret med tyktarmskræft i alderen 57, 59 og 67 år, hhv. efterfølgende analyse af yderligere emner tyder dog på, at D679N repræsenterer en sjælden neutral

EPHB2

polymorfi, da der blev observeret varianten allel på lignende frekvenser hos patienter med kolorektal cancer (11 ud af 1133) og befolkning-matchede kontroller (11 ud af 1160).

Vi har også screenet for

EPHB2

mutationer i 10 kolorektale cancer cellelinjer, og Caco2 viste sig at udtrykke en ny variant, R4Q (nt. 11 a → G), i tillæg til vildtype-EPHB2 receptor. Den R4Q aminosyresubstitution kan forårsage en ændring i signalpeptidet, hvilket kan føre til nedsat EPHB2 ekspression. Imidlertid immunpræcipitering med anti-EPHB2 antiserum, efterfulgt af immunoblotting under anvendelse af et antiphosphotyrosinantistof, viste, at trods bærer R4Q variant CAC02 cellelinien producerer en funktionel EPHB2 receptor (data ikke vist).

To af de tre nye ikke-synonyme varianter (A438T G787R) vi identificeret resultat i biokemisk betydelige og potentielt patogene ændringer restkoncentrationer. Resten påvirket af A438T substitution er beliggende i det ekstracellulære fibronectin type III domæne [17]. Da dette domæne kan være involveret i ligand binding, vi postulerede, at A438T variant kunne være faldet bindende aktivitet og signalfunktioner. Den G787R variant påvirker en rest i kinase domæne, og denne udskiftning kan derfor direkte påvirke receptorens kinase og biologiske aktivitet [18]. Det tredje nye variant (V945I) blev påvist hos to patienter, og fører til en konservativ substitution ved den yderste carboxyterminalen i SAM-domænet [19]; Vi har ikke karakteriseret denne allel videre.

A438T variant blev fundet i en patient, som havde to primære kræftformer. Han blev diagnosticeret med prostatakræft og en mikrosatellit stabil højresidig tyktarmskræft i alderen 61 og 64 år, henholdsvis (figur 1A, Familie 1). Probanden far gennemført også A438T variant og er det eneste andet familiemedlem med tyktarmskræft, blev han diagnosticeret med en mikrosatellit stabil sigmoid kræft i en alder af 76 år. Af de testede for denne missense ændring 6 upåvirkede familiemedlemmer, 3 fandtes at bære A438T variant (figur 1A). Sekventering analyser af parrede tumor-normal genomiske DNA-prøver afslørede tabet af vildtype

EPHB2

allel i koloncancer fra probanden, men ikke i coloncancer fra sin fader (data ikke vist). Faderens tumor manifesteret LOH af varianten, i stedet for vildtype-,

EPHB2

allel. Sidstnævnte observation kan afspejle den hyppige tab af 1p36.1 kromosomale område under tumorigenese [7], [8], og ikke den målrettede inaktivering af

EPHB2

locus af LOH.

+ /-, luftfartsselskab; – /-, Ikke-bærer; LOH +, kolorektal tumor væv blev fundet at manifestere LOH, med tab af vildtype-allel; Ca, kræft.

G787R variant blev opdaget i en patient med diagnosen endetarmskræft i en alder af 67 år (figur 1B, Familie 2). Denne tumor viste tab af vildtype-allel (figur 2). Patienten rapporterede også en historie af follikulært typen skjoldbruskkirtelkræft i en alder 73 år. Denne proband blev udvalgt til mutation screening på grund af en familie historie af kolorektal cancer på moderens side. Det fremgik imidlertid genotypebestemmelse data, at G787R-variant allel enten stammer på fædrene side eller er resultatet af en

de novo

mutation (figur 1B). Probanden datter er den eneste anden bærer af denne variant, og hun er i øjeblikket upåvirket i en alder af 45 år.

I forhold til intensiteten af ​​guanin bands i sekventeringsreaktionen, intensiteten af ​​guanin nukleotid i position 2359 er væsentligt reduceret i tumorprøven, hvilket antyder tab af vildtype allelen (G) i tumoren, men ikke i den tilstødende normale væv (pil viser nt. 2359).

Vi vurderede den allel frekvenser af A438T og G787R varianter ved screening af en ekstra række sager befolkningsbaserede kolorektal cancer og alder og køn matchede kontrolpersoner. Genotypebestemmelse resultater antyder, at disse to alleler er sjældne varianter (tabel 1). Hverken variant blev påvist i kontrolpersoner, og de blev ikke identificeret i yderligere tilfælde kolorektal cancer. For yderligere at evaluere mulige patogene rolle A438T og G787R receptor-varianter, vi kendetegnet deres indre tyrosinkinaseaktivitet.

Biokemisk karakterisering af A438T og G787R-isoformer viste, at, at G787R variant er funktionelt forringet, hvorimod A438T ændring sandsynligvis repræsenterer en neutral polymorfisme. DU145 celler, som ikke udtrykker en endogen funktionel EPHB2 receptor [11], blev kortvarigt transficeret med enten vildtype EPHB2 receptor eller en af ​​de to varianter. Vi fandt formindsket autophosphorylering af G787R-receptoren, men ikke A438T variant efter ephrinB1 stimulering sammenlignet med vildtype-receptor (figur 3A). Vi bekræftede, at G787R-receptoren er reduceret katalytisk aktivitet ved anvendelse af et in vitro kinaseassay. Evnen af ​​G787R receptoren til autophosphorylere eller at phosphorylere den enolase substratet var ca. 9-fold lavere end den for vildtype-receptor (figur 3B), hvilket viser, at G787R-mutationen ændrer receptoraktivitet og er ikke en sjælden neutral polymorfi.

Panel A: Formindsket autophosphorylering af EPHB2 G787R variant som reaktion på ephrinB1 stimulering. DU145-celler blev transient transficeret med cDNA-konstruktioner (tom vektor, vildtype, wt, A438T, G787R) og enten venstre ustimuleret (-) eller stimuleret (+) med preclustered ephrinB1-Fc i 30 minutter. EPHB2 blev immunpræcipiteret (IP) og immunblottet (IB) med antiphosphotyrosin (4G10) for at evaluere receptor autophosphorylering. Cellelysatet blev immunblottet med antiEPHB2 at fastslå, at der var lig transfektionseffektivitet. Panel B: Abolished kinaseaktiviteten af ​​EPHB2 G787R variant. In vitro kinaseassays blev udført ved anvendelse vildtype EPHB2 eller G787R immunpræcipitater og enolase som det exogene substrat. Før billeddannelse eller immonoblotting mod EPHB2 blev phosphorylerede proteiner separeret ved gelelektroforese og farvet med coomassie. Autoradiogram, der viser

32PγATP inkorporering i EPHB2 og enolase (øverste felt), anti-EPHB2 immunoblot (midterste panel) og lige belastning af enolase vises (nederste panel). Tabellen viser den relative kinase aktiviteten af ​​vildtype EPHB2 receptor (sat til 100%)

vs.

G787R variant.

Diskussion

Ef receptorfamilien er den største kendte undergruppe af receptortyrosinkinaser. Denne familie er yderligere opdelt i to forskellige klasser, EPHA (A1 til A10) og EphB (B1 til B6), baseret på deres bindingsaffiniteter for to membranforankrede ligand familier med de tilsvarende navne af type A (A1 til A5) og B (B1 til B3) ephriner [19], [20]. Efter ligandbinding, Eph-receptorer aktiverer celle repulsion veje til modulerer celle kompartmentalisering og beordrede cellemigration i flere forskellige biologiske processer [19].

Mus dyremodelstudier har vist, at i tyndtarmen, EphB-receptorer medierer intestinal stamcelleproliferation [21] samt epithelcellevandring og organisation sammen krypten-villus akse [5]. Da tab af mitotisk aktivitet kontrol, epitel mønster og væv arkitektur er kendetegnende for tumorigenese, forstyrrelse af normal EphB receptor-ekspression og funktion sandsynligvis fremmer kolorektal carcinogenese. Konstitutiv EphB receptor-ekspression kan stimulere tumor initiering ved at forstyrre proliferativ stamceller homeostase, og sekundær lyddæmpning af EphB receptor aktivitet kan tillade udvidelse af kræftceller, ud over de rumlige grænser pålagt af intakt EphB receptor funktion til at befolke tilstødende vævsstrukturer [5], [6 ], [21]. Til støtte for denne hypotese, har vi og andre for nylig vist en kausal rolle for EphB inaktivering i tumor progression [22]. Vi fandt, at

EphB2

eller

EphB3

tavshed i Apc

Min /+ mus resulterer i accelereret og mere aggressiv kolorektal tumorigenese.

I den aktuelle undersøgelse har vi screenet 116 populationsbaseret familiær tilfælde af kolorektal cancer for mutationer i en kandidat tumorsuppressorgen, EPHB2, og identificeret tre kandidatlande varianter (A438T, D679N, G787R), hvilket yderligere blev karakteriseret. Selvom A438T allel ikke blev observeret i kontrolpersoner og blev fundet at adskille med sygdom i Familie 1, biokemisk karakterisering antyder, at A438T er en sjælden neutral polymorfi; Vi kan ikke udelukke, at det påvirker mere subtile aspekter af EPHB2 signalering, såsom dannelsen af ​​højere ordens oligomerer. Den D679N variant er tidligere blevet rapporteret at være associeret med prostatacancer [11]. Selvom det fortsat muligt, at denne variant modulerer prædisposition for prostatacancer, vore data antyder, at det sker ved en population frekvens på ca. 1%, og at det ikke i sig selv, forøge modtageligheden for kolorektal cancer. Vi observerede D679N allel i et tilsvarende antal patienter med colorectal cancer og befolknings–matchede kontroller. I modsætning til disse sidstnævnte varianter, vore data antyder, at G787R variant er funktionelt kompromitteret og kan være en sjælden årsag til arvelig kolorektal cancer. Den G787R variant blev identificeret i en patient diagnosticeret med endetarmskræft på 67 år, og biokemisk karakterisering afslørede, at G787R substitution markant mindsker receptorens iboende kinase aktivitet.

Der har været to andre undersøgelser der undersøger bidrag kønscellelinie

EPHB2

mutationer til kolorektal cancer modtagelighed. Oba

et al.

Screenet for

EPHB2

mutationer i kolon tumorer og respektive normale colon væv fra 50 patienter med tyktarmskræft, og identificerede en intron 8 ændring i en enkelt tumor prøve, hvilket resulterer i en nonsense mutation. Men det er uklart, om dette er en somatisk mutation, da der ikke er tegn om denne genetiske ændring også blev observeret i den parrede normal colon prøve [23]. Denne undersøgelse identificerede også 15 sager med LOH involverer

EPHB2

gen og screenet for mutationer i de resterende

EPHB2

allel. Da mutationer i de resterende allel ikke blev identificeret, Oba

et al.

Foreslog, at

EPHB2

er ikke en klassisk tumorsuppressorgen. Men da kun 50 prøver af sandsynlige sporadiske tilfælde af kolorektal cancer blev analyseret, en tumor suppressor rolle for

EPHB2

kan ikke udelukkes. I en nyere undersøgelse, Kokko

et al.

Rapporterede en sammenslutning af tre nye varianter med kolorektal cancer [24]. blev observeret kønscellelinie missense ændringer resulterer i I361V, R568W og D861N i kolorektal cancer patienter, men ikke hos raske kontroller. Det er dog muligt, at disse tre varianter er sjældne neutrale polymorfier siden biologiske betydning af varianterne ikke blev evalueret under anvendelse direkte funktionelle assays. Patienterne screenet i de to sidstnævnte undersøgelser ikke nødvendigvis have væsentlige slægtshistorie af kolorektal cancer. I modsætning til disse to tidligere rapporter, blev vores undersøgelse designet til specifikt at vurdere betydningen af ​​kønscellelinie

EPHB2

mutationer hos patienter med familiær kolorektal cancer og ikke i sporadiske tilfælde. Trods studie design forskelle, sammen disse tre undersøgelser tyder på, at

EPHB2

germline mutationer er ikke almindelige hændelser i kolorektal cancer. er behov for yderligere undersøgelser af større stikprøvestørrelser at bekræfte denne observation.

Sammenfattende vi identificeret en kimlinie

EPHB2

variant (G787R) med formindsket biologisk aktivitet i en kolorektal cancer patient, og foreslår, at

EPHB2

mutationer bidrager til en lille brøkdel af arvelig kolorektal cancer. Den sjældenhed kønscellelinie

EPHB2

mutationer understøtter en mere betydningsfuld rolle for EPHB2 i kolorektal tumor progression frem i tumor initiering. Siden EphB receptorer (EPHB2, EPHB3 og EphB4) følger et lignende mønster af transkriptionel lyddæmpning i tarmkræft, alle EphB receptor familiemedlemmer sandsynligvis spille en lignende rolle i denne sygdom. Derfor EphB familien sandsynligvis udgør en mindre andel af genetisk anlæg for kolorektal cancer, men har en vigtig rolle i tumorudvikling. Selvom vores resultater tyder på, at

EphB

gen familie bør ikke rutinemæssigt screenes for germline mutationer i familiære tilfælde,

EphB

gener er kandidat tumorsuppressorer, sandsynligvis tegner sig for sjældne tilfælde af familiær kolorektal cancer .

Støtte Information

tabel S1.

doi: 10,1371 /journal.pone.0002885.s001

(0,06 MB DOC)

tabel S2.

doi: 10,1371 /journal.pone.0002885.s002

(0,05 MB DOC)

Tak

Forfatterne takker Dr. D. Daftary, Ms S. Holter, Ms A. Janson for deres hjælp med indsamling af data, og Ms. Joelle Fontaine, Ms T. Selander og Mount Sinai Hospital Biospecimen Repository for teknisk bistand.