PLoS ONE: Kombineret Hæmning af epidermal vækstfaktor receptor og cyclooxygenase-2 fører til større Anti-tumor aktivitet af Docetaxel i Advance Prostata Cancer

Abstrakt

epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) og cyclooxygenase-2 ( COX-2) spiller en kritisk rolle i sygdommens progression, tilbagefald og terapeutisk modstand fremskreden prostatacancer (PSA). I dette papir, vi evalueret for første gang, den terapeutiske fordel af blokering EGRF og /eller COX-2 (under anvendelse af gefitinib og NS-398, henholdsvis) med hensyn til forbedring af effektiviteten af ​​den konventionelle kliniske kemoterapeutisk lægemiddel docetaxel in vitro og vivo. Vi viste, at EGFR og COX-2-ekspression var højere i metastatiske end ikke-metastatiske PCA væv og celler. Docetaxel, alene eller i kombination med gefitinib eller NS-398, resulterede i et lille fald i celle levedygtighed. De tre lægemiddelkombination nedsat cellelevedygtighed i et større omfang end docetaxel alene eller i kombination med gefitinib eller NS-398. Docetaxel resulterede i en beskeden stigning i apoptotisk celle i metastatiske og ikke-metastatiske cellelinier. NS-398 markant forbedret docetaxel-induceret celle apoptose. Kombinationen af ​​de tre lægemidler forårsagede endnu mere markant apoptose og resulterede i større undertrykkelse af invasiv potentiale end docetaxel alene eller sammen med gefitinib eller NS-398. Kombinationen af ​​alle tre lægemidler resulterede også i en mere markant fald i NF-KB, MMP-9 og VEGF-niveauer i PC-3M-celler. Disse in vitro resultater blev understøttet af in vivo-undersøgelser viser, at docetaxel i kombination med gefitinib og NS-398 signifikant mere effektiv end nogen enkelt middel. Baseret på tidligere præklinisk forskning, konkluderer vi, at samtidig blokerer EGFR og COX-2 ved gefitinib og NS-398 sensibiliserer avancerede PCA celler til docetaxel-induceret cytotoksicitet.

Henvisning: Lin J, Wu H, Shi H, Pan W, Yu H, Zhu J (2013) Kombineret hæmning af epidermal vækstfaktor receptor og cyclooxygenase-2 fører til større Anti-tumor aktivitet af Docetaxel i Advanced Prostatakræft. PLoS ONE 8 (10): e76169. doi: 10,1371 /journal.pone.0076169

Redaktør: Wendy J. Huss, Roswell Park Cancer Institute, USA

Modtaget: Marts 27, 2013; Accepteret: August 21, 2013; Udgivet: 14 oktober, 2013 |

Copyright: © 2013 lin et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Arbejdet har støttet af Videnskab og Teknologi projektplanlægning af Nanjing, Kina (201.201.088). URL bidragyder hjemmeside er https://202.127.12.44/XMSB/Show_JBXXB.jsp?XMBH=2012sc315043 DJXH=20121069. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatacancer (PCA) er den mest almindelige malignitet, og er en af ​​de førende årsager til dødsfald blandt ældre mænd [1]. Svarprocenten på radikal prostatektomi og hormon ablation terapi er høj i patienter diagnosticeret med lokaliserede og androgenafhængige kræftformer. Imidlertid er progressionen til hormon-refraktær prostatakræft (HRPC) og /eller knoglemetastaser forbundet med sygdomstilbagefald og dårlig patientoverlevelse [2-4]. Faktisk progression af prostatacancer til androgenuafhængighed fortsat en primær barriere for at forbedre patientens overlevelse, som det er forbundet med komplekse underliggende cellulære ændringer.

Docetaxel betragtes som standard kemoterapeutisk middel for patienter med HRPC og i dem med klinisk tegn på metastaser. Det er blevet rapporteret at forbedre livskvaliteten og tilbyder smertelindring, men det er forbundet med minimal en median overlevelse på kun 12 til 19 måneder fra behandlingens start. Dette understreger behovet for afprøvninger, som undersøgte, hvordan du optimerer konventionelle kemoterapeutiske regimer hos patienter med HRPC eller avanceret PSA.

Undersøgelse de molekylære mekanismer, der ligger til grund for PCa progression, vil bidrage til at identificere de formodede terapeutiske target gener involveret i apoptose. Det vil også bidrage til at belyse den mekanisme ansvarlig for vækst og cellesignalering [5-8]. EGFR og COX-2 er begge blevet vist at bidrage til en vedvarende vækst i avanceret HRPC i enten fravær eller nærvær af lave koncentrationer af androgen [9-11].

EGFR ofte overudtrykt i humane cancere. Prækliniske data tyder på, at EGFR signalveje aktiverer androgen receptorer under betingelserne for klinisk androgen deprivation. Dette hænger sammen med overgangen fra androgen-responsive til hormonresistent fænotype, hvilket resulterer i en mere aggressiv klinisk resultat [10,11]. EGFR derfor antages at være af primær terapeutisk betydning, på grund af dets overekspression i avanceret PCa og dens rolle som et lægemiddelmål. Tidligere undersøgelser har vist, at aktivering af EGFR forbedrer evnen af ​​androgenreceptorer at øge PCa proliferation. Derimod blev hæmning af EGFR vist sig at forbedre effektiviteten af ​​docetaxel i behandlingen af ​​metastatisk PCa [12,13].

cyclooxygenaser katalyserer dannelsen af ​​prostaglandiner er involveret i tumor initiering og /eller progression. COX-2 er blevet vist at fremme inflammation, som direkte kan bidrage til udviklingen af ​​PCa [14]. Det er også blevet vist, at COX-2-induceret PGE2 aktiverer cellesignalerende involveret i proliferation og derved direkte fremmer tumorcellevækst. Andre undersøgelser har vist, at COX-2 er overudtrykt i PCa og at dens niveau af udtryk korrelerer med Gleason score, kræft progression og tilbagefald [15,16]. I de senere år har COX-2-inhibitorer i kombination med kemoterapeutiske lægemidler blevet vurderet med behandling af fremskreden PSA. Disse agenter øge effekten af ​​androgen tilbagetrækning og fremme løsningen af ​​skelet læsioner [17,18]. Det er generelt accepteret, at COX-2 bidrager til PCa og der er stigende tegn på, at COX-2-hæmmere kan være gavnlig i behandlingen af ​​PSA.

Tidligere undersøgelser har bekræftet, at høj COX-2-ekspression i PCa er korreleret med docetaxel modstand, og at inhibering af COX-2 hæmmer tumorvækst markant og forbedrer effekten af ​​docetaxel [19,20]. Baseret på disse observationer er det muligt, at tilsætningen af ​​selektive inhibitorer af EGFR og COX-2 kan repræsentere en hidtil ukendt terapeutisk fremgangsmåde til forbedring af behandlingen af ​​metastatisk PSA. I den foreliggende undersøgelse, fremsatte vi den hypotese, at samtidig blokade af EGFR og COX-2 veje under anvendelse gefitinib og NS-398 kunne forbedre de cytotoksiske virkninger af docetaxel i avancerede PCa in vitro og in vivo. Den anti-proliferative, anti-invasiv, og apoptose induktion virkninger af de tre midler, alene og i kombination, blev bestemt in vitro og in vivo og de underliggende molekylære mekanismer blev undersøgt.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Alle forsøg med dyr blev udført med godkendelse af Nanjing Medical University Ethics Committee. Den kliniske undersøgelse blev godkendt af den etiske komité i Nanjing Medical University. Skriftligt informeret samtykke blev opnået for alle fag, før deltagelse i undersøgelsen.

Tumor prøver og cellelinier

PCA prøver fra 37 primære adenocarcinom sager blev inkluderet i undersøgelsen. I alle tilfælde to uafhængige patologer revideret prøverne for at udelukke andre patologiske typer. Alle prøver blev opnået ved transuretral resektion af prostata, radikal prostatektomi eller nål-biopsi på Nanjing BenQ Hospital og Nanjing First Hospital, mellem 2010 og 2012. Kirurgisk iscenesættelse af tumorer blev udført i henhold til Jewett-Whitmore kriterier. Den mediane alder af patienterne var 69 år (interval 58 til 79 år).

Den menneskelige prostatakræft-cellelinier LNCaP, PC-3M og DU-145 anvendes i undersøgelsen blev købt fra American Type Culture Collection og blev opretholdt i RPMI-1640 dyrkningsmedium indeholdende 10% føtalt bovint serum, 26 mmol /l NaH

2 CO

3 (pH 7,4), 1% L-glutamin og antibiotika (100 IU /ml penicillin-100 pg /ml streptomycin) ved 37 ° C i 5% CO

2. RPMI 1640 og andre kultur materialer blev leveret af Gibco. Salg

Reagenser og antistoffer

Gefitinib, NS-398, docetaxel og MTT blev købt fra Sigma. Annexin V-FITC blev leveret af Gibco. Antistoffer mod human VEGF og MMP-9 blev opnået fra R 1, 1 og 1 repræsenterede henholdsvis synergi, additivitet og antagonisme [21]

In vitro og in vivo data blev analyseret under anvendelse af Students t-test.. EGFR og COX-2-ekspression i ikke-metastatiske og metastatisk PCA væv blev sammenlignet ved hjælp af Pearsons chi-square test .. Værdier af p 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

EGFR. og COX-2 protein niveauer i prostata cancer væv

EGFR var positiv i syv ikke-metastatiske PCA væv (43,8%) og i 18 (85,7%) vævsprøver fra patient med metastatisk PCa (

P

0,01). Intensitet farvning for COX-2 blev set i 18 metastatisk (85,7%) og ni ikke-metastatiske PCA væv (56,3%, P = 0,11). EGFR og COX-2 positiv co-ekspression blev fundet i 16 metastatiske væv (76,2%) og i fire (25,0%) ikke-metastatiske PCA væv (P 0,01). Resultaterne er vist i figur 1 og tabel 1.

Snit blev undersøgt under et mikroskop, og immunreaktivitet blev indikeret ved mørkebrun farvning. Repræsentative sektioner af prostatakræft vævsprøver fås ved henvendelse til originale forstørrelser af × 200 og × 400.

Stage

n

Number (%) patienter

EGFR + COX 2+

EGFR + COX-2

EGFR-COX-2 +

EGFR-COX-2

A + B164 (25,0%) 3 (18,8%) 5 (31,2%) 4 (25,0%) C + D2116 (76,2%) 2 (9,5%) 2 (9,5%) 1 (4,8%) tabel 1. Den positive ekspression af EGFR og COX-2 i ikke-metastaserende og metastaserende prostatacancer.

Patologisk iscenesættelse af PCa blev defineret i henhold til Whitmore-Jewett iscenesættelse system followsA (i øvrigt opdagede PCA), B (begrænset PCA), C (invasion til tilstødende organer) D (fjernmetastaser eller lymfeknude involvering) .Jewett fase A og B blev defineret som ikke-metastatisk og fase C eller D som metastatisk. CSV Hent CSV

Baseline udtryk og aktivering af EGFR og COX-2 protein i PC-3M og DU-145 celler

Den basale niveau af det samlede EGFR, p-EGFR og COX-2 blev målt i PC-3M og DU-145-celler. Vi derefter undersøgt, om EGF blev forbundet med en stigning disse niveauer. Resultaterne indikerede, at aktiveret /phosphoryleret EGFR (p-EGFR), EGFR og COX-2-protein blev udtrykt i begge cellelinier (figur 2A). p-EGFR og COX-2-ekspression blev øget væsentligt i de to cellelinier ved tilsætning af EGF, men EGFR var uændret. Ændringen i p-EGFR /EGFR-forholdet var dosisafhængig (figur 2B).

Celler dyrket i 1% FBS blev udsat for 0, 10 og 100 ng /ml EGF i 24 timer som beskrevet i Materialer og Metoder. De resulterende cellulære proteiner blev underkastet SDS-PAGE og Western blot-analyse for at bestemme proteinniveauer af p-EGFR, EGFR og COX-2 (figur 2A). Western blot for β-actin er vist som lastning kontrol. Den relative proteinniveau for p-EGFR /EGFR og COX-2 er vist i figur 2B.

antiproliferativ virkning induceret af docetaxel alene eller i kombination med gefitinib og NS-398

MTT-assays blev anvendt til at evaluere anti-proliferative effekt af de tre lægemidler alene eller i kombinationer, i PC-3M og DU-145-celler. I indledende eksperimenter, vi etableret koncentration-respons kurver for hvert lægemiddel for at bestemme den koncentration, som producerede mindre end 30% vækstinhibering i PCA cellelinjer (data ikke vist). Baseret på disse kurver, bestemte vi, at koncentrationerne af docetaxel (0,01 mmol /l), gefitinib (20 mmol /l), eller NS-398 (100 pmol /l) var passende til brug i kombination eksperimenter. Co-inkubation med gefitinib eller NS-398 let forøgede cytotoksiske virkning af docetaxel. Men de tre lægemiddelkombination inducerede en større end additiv virkning på cellevækst-inhibering i begge cellelinier, som var meget mere udtalt end den, der ses med et eller to lægemidler kombinationer (figur 3). Analyse af kombinationsbehandlingen i PC-3M og DU-145-celler viste, at kombinationen indeks for tre agenter kombinationen var 1 antyder en synergistisk virkning (tabel 2 og 3)

Koncentrationen-respons respons for. hvert lægemiddel blev anvendt til at bestemme koncentrationen, der inducerede en passende antiproliferativ virkning til anvendelse i kombinationsterapi (data ikke vist). Celler blev udsat for docetaxel (0,01 mmol /l), NS-398 (100 pmol /L) og gefitinib (20 pmol /l) alene eller i kombination i 24 timer. Værdier er middel ± SD af fire uafhængige forsøg. * P 0,05, ** P 0,005 ***, P 0,001 i forhold til kontrol værdier.

Cellelinjer

G (uM)

D (nM)

Fa

CI

N (uM)

D (nM)

Fa

CI

PC-3M1050.2151.1535050.2110.98220100.2801.049100100.3080.72640200.3631.118200200.3881.023DU-1451050.1861.8395050.2640.96620100.2651.114100100.3830.92440200.3251.092200200.5850.956Table 2. Effekt af gefitinib (G) eller NS-398 (N) i kombination med docetaxel (D) i PC-3M og DU-145 celler.

CSV Hent CSV Cellelinjer

G (uM)

N (uM)

Dl (nM)

Fa

CI

PC-3M105050.3020.74520100100.4650.71240200200.6610.699DU-145105050.2640.96620100100.4230.78340200200.6210.872Table 3. Virkning af gefitinib (G), NS-398 (N) og docetaxel (D) kombination i PC-3M og DU-145-celler.

Kombinationsbehandlinger med gefitinib (10, 20, og 40 uM), NS 398 (50, 100, og 200 uM), og docetaxel (5, 10, og 20 nM) i PC-3M og DU-145. Cellelinier blev evalueret ved MTT-assayet. Fa: Fraktion af vækst påvirke af narkotika-eksponerede celler sammenlignet med kontroller. CI, kombinationsindeks. Fa og CI blev beregnet under anvendelse CalcuSyn software. CSV download CSV

cytotoksiske virkning induceret af docetaxel, gefitinib, og NS-398

Flowcytometrisk analyser blev anvendt til at bestemme celle apoptose induceret af enhver lægemiddel alene eller i kombination. Antallet af apoptotiske celler blev kvantificeret (figur 4A og C). Både docetaxel og gefitinib, men ikke NS-398, øgede antallet af apoptotiske celler sammenlignet med det, der ses i ubehandlede PCA-celler (figur 4B og D). Docetaxel i kombination med gefitinib eller NS-398, blev forbundet med en stigning i antallet af apoptotiske celler sammenlignet med docetaxel alene (figur 4B og D). De tre lægemiddelkombination resulterede i en signifikant højere antal apoptotiske celler end nogen enkelt lægemiddel eller to lægemidler kombination (figur 4B og D).

Efter inkubation med forskellige lægemidler blev cellerne fremstillet som beskrevet i Materialer og metoder og apoptotisk sats blev vurderet ved FACS analyser. A og C: Repræsentative dot plots illustrerer dataene nær middelværdien af ​​grupper i B og D. B og D. Apoptose sats blev beregnet ud fra UR (ikke-levedygtige apoptotiske eller nekrose celle sats) og LR (tidlig apoptotisk celle sats) forening. Repræsentative resultater fra tre separate forsøg. * P 0,05, ** P 0,005 ***, P. 0,001 sammenlignet med kontrolværdierne

Tab af invasive evne fremkaldt af docetaxel, gefitinib, og NS-398

Et in vitro invasion assay blev anvendt til at evaluere den invasive evne i PC-3M og DU145 celler. Den invasive potentiale blev bestemt ved at beregne antallet af celler, som er ført igennem en Matrigel invasion kammer. Som vist i figur 5A og C, eksponering af celler til 0,005 pmol /L docetaxel, 10 pmol /L gefitinib, eller 50 pmol /L NS-398 inhiberede signifikant deres invasive evne (figur 5B og D).

celler var ubehandlede (kontrol) eller eksponeret i 24 timer til 0,005 pmol /L docetaxel (D), 10 pmol /L gefitinib (G) eller 50 umol /LNS-398 (N), alene eller i kombination under in vitro invasion assays, udført under anvendelse af Transwell kamre kamre som beskrevet i Materialer og Metoder. Ved slutningen af ​​den 24 timer assayet blev de invaderende celler farvet og talt ved fasekontrastmikroskopi (x 200). Repræsentative resultater viser det gennemsnitlige antal celler invaderer gennem Matrigel indsætte membranen i fem tilfældige mikroskopfelter. * P 0,05, ** P 0,005, ***, P. 0,001 sammenlignet med kontrolværdierne

Udsættelse for docetaxel i kombination med gefitinib eller NS-398 markant reduceret antallet af DU-145 celler gennemtrænger Matrigel sammenlignet med docetaxel alene (figur 5D), men ingen forskel blev set i de PC-3M-celler (Figur 5B). De tre lægemiddelkombination viste en supra-additiv inhiberende virkning på celleinvasion evne, som var stærkere end nogen to-drug kombination (figur 5B og D).

NF-KB, MMP-9 og VEGF-ekspression ændringer induceret af docetaxel, gefitinib, og NS-398

Protein og mRNA og blev kvantificeret til at undersøge, om NF-KB, MMP-9 og VEGF, var involveret i cellulære reaktioner på docetaxel, gefitinib eller NS-398. Resultaterne i figur 6A og 6B, viser, at docetaxel, gefitinib og NS-398 hver for sig nedreguleret NF-KB, MMP-9 og VEGF-mRNA-ekspression i både PCA cellelinier. NF-KB-mRNA-ekspression var mere markant nedreguleres, når celler blev udsat for lægemiddelkombinationer. De tre lægemiddelkombinationer viste en stærkere inhiberende virkning end de to lægemiddelkombinationer (figur 6A og B). Salg

Celler dyrket i 1% FBS blev eksponeret for 0,01 pmol /L docetaxel (D), 20 pmol /L gefitinib (G) eller 100 pmol /LNS-398 (N), alene eller i kombination, eller med DMSO som kontrol i 24 timer. NF-KB, MMP-9 og VEGF mRNA (A og B) og proteinniveauer (C og D) blev målt som beskrevet i Materialer og Metoder. Værdier er angivet som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg.

Hverken gefitinib eller NS-398 havde nogen additiv virkning på docetaxel-induceret nedregulering af MMP-9 og VEGF-mRNA-ekspression (figur 6A og B ). Imidlertid co-inkubering med alle tre midler resulterede i mere markant inhibering af MMP-9 og VEGF-niveauer sammenlignet med enkelt eller to lægemidler kombination i PC-3M-celler (figur 6A), men ikke i DU-145-celler (figur 6B),

Western blotting blev foretaget for at estimere proteinniveauer af NF-KB MMP-9 og VEGF efter udsættelse for hvert af lægemidlerne. Som vist i figur 6C og 6D, at tilsætningen af ​​docetaxel gefitinib og /eller NS-398 i dobbelt og tredobbelt kombination ændret NF-KB, MMP-9 og VEGF proteinniveauer i begge cellelinier. Disse resultater er generelt i overensstemmelse med mRNA’et ændringer bortset fra ændringer i NF-KB-protein efter udsættelse for en kombination af docetaxel og NS-398, (figur 6C og D). Taget sammen tyder disse resultater på, at den gavnlige reaktion PC-3M-celler til eksponering for docetaxel, gefitinib og NS-398 kombination, er påvirket af en reduktion i NF-KB, MMP-9 og VEGF (figur 6C).

Virkninger af gefitinib, NS-398 og docetaxel på prostata tumorvækst in vivo

docetaxel i kombination med gefitinib eller NS-398 hæmmede tumorvækst og til en betydeligt højere grad end i ubehandlede kontroller eller dyr behandlet med et enkelt lægemiddel (figur 7). I disse dobbelte kombinationsgrupperne kun en beskeden stigning i tumorstørrelse blev registreret ved slutningen af ​​eksperimentet 6 uger efter tumorcelleinjektion og 2 uger efter behandlingen er stoppet. Kombineret behandling med to lægemidler eller med alle tre lægemidler var veltolereret; ingen vægttab eller andre tegn på akut eller forsinket toksicitet blev observeret.

Mus blev injiceret i dorsale flanke med PC3M celler. Efter 7 dage (gennemsnitlig tumorstørrelse: 0,2 cm

3), mus blev behandlet som beskrevet i Materialer og metoder sektion. Ændring i tumorvolumen blev evalueret efter udsættelse for Doc, gefitinib og NS-398 alene eller i kombination. Data er vist som middelværdi ± SD.

Diskussion

Docetaxel spiller en vigtig rolle i behandlingen af ​​fremskreden PSA. Imidlertid resulterer ofte langvarig behandling i bivirkninger og kemoterapi modstand, hvilket resulterer i sygdomstilbagefald og ringe overlevelse. I et forsøg på at overvinde resistens, de seneste undersøgelser har fokuseret på lav-dosis docetaxel i kombination med andre lægemidler eller på tavshed nogle gener [22-25].

EGFR og COX-2 er over-udtrykt i en række maligniteter inklusive PSA. En voksende mængde beviser for, at EGFR og COX-2 signalsystemer aktiviteter spiller en afgørende rolle i udviklingen af ​​maligne sygdomme. Begge veje, derfor tilbyde attraktive mål for anticancer terapi og chemoprevention [5-8,26,27]. Derfor EGFR og COX-2-hæmmere er blevet undersøgt for kemoterapi og kræft forebyggelse [28-31].

Over-ekspression af EGFR og COX-2 og samspillet mellem EGFR-signalering og COX-2-aktivitet har været impliceret som kausale faktorer for kræft [32,33]. I vores in vitro og in vivo undersøgelser viste vi signifikant opregulering af EGFR og COX-2-ekspression i avanceret PCa væv (tabel 1) og i tilsvarende cellelinjer (figur 2). Det er tidligere blevet rapporteret, at aktivering eller overekspression af EGFR [12,13] og COX-2 [20] er korreleret med docetaxel modstand. Dette førte os til at spekulere, at samtidig målretning EGFR og COX-2 kan være en mere effektiv terapeutisk strategi til at overvinde docetaxel modstand end målretning enten signalvejen separat.

Vores resultater viser, at samtidig blokerer EGFR med gefitinib og COX-2 med NS-398 i PCA-celler udsat for lav dosis docetaxel resulterede i en gavnlig virkning på cellevækst inhibering (figur 3). Median effekt analyse ved hjælp af CI metode Chou og Talalay bekræftet en moderat synergistisk vekselvirkning mellem disse tre stoffer i både PCA cellelinier (tabel 2 og 3). I cellen apoptose og invasion-assays var den kombinerede virkning af de tre lægemidler smule større end additiv i de to cellelinier. Disse resultater stemmer overens med resultaterne af MTT proliferation test, hvilket antyder, at denne hidtil ukendte kombination af lægemidler kan være effektive til at forebygge tumorvækst og fjerne metastaser.

Vi viste også, at kombinationen tre lægemiddel blev associeret med markant celle apoptose (figur 4) og tab af invasiv evne (figur 5). I en tidligere undersøgelse gefitinib havde ingen enkelt-agent-aktivitet, men dens kombination med docetaxel var forbundet med den samme svarprocent i avanceret PCa som docetaxel monoterapi [7]. Det har også vist sig, at cyclooxygenase-2-inhibering forøger docetaxel-induceret apoptose [17], som er i overensstemmelse med resultaterne i vores undersøgelse. Men langsigtet, høj-dosis behandling med denne kombination er forbundet med toksicitet og bivirkninger, der forhindrer dets anvendelse i klinisk praksis. Høj dosis docetaxel er forbundet med nervesystemslædering, hæmatopoietisk undertrykkelse og kemoresistens som gør det un velegnet til mange patienter med fremskreden sygdom

vigtigt, viste vi, at tilsætning af en EGFR-inhibitor og COX-2 specifik inhibitor til lavdosis docetaxel regimer kan give en strategi for reduktion af dosisrelaterede bivirkninger. Samtidig målretning EGFR og COX-2 syntes at sensibilisere PCA-celler over for virkningerne af docetaxel in vitro. Vores resultater in vivo var i overensstemmelse med disse in vitro-resultater, hvilket indikerer, at kombineret behandling er overlegen i forhold til enkelt- eller dobbeltstrenget agent terapi. Kombinationen af ​​to lægemidler eller alle tre lægemidler, blev tålt godt. Ingen akut eller forsinket toksicitet blev observeret i nogen af ​​dyrene.