PLoS ONE: Angivelse af c-fos var forbundet med Clinicopathologic Karakteristika og Prognose i pancreas Cancer

Abstrakt

Det har længe været betragtet som kræft i bugspytkirtlen (PC) er en livstruende ondartet tumor. Således har meget opmærksomhed er blevet betalt for faktorer, især relative molekyler, forudsigende for prognose af PC. Imidlertid blev c-fos-ekspression i PC mindre undersøgt. Desuden sit samarbejde med clinicopathologic variable og prognose er fortsat ukendt. I den foreliggende undersøgelse blev ekspression af c-fos påvist ved væv microarray-baserede immunhistokemisk farvning i cancer og tilstødende væv fra 333 patienter med PC. Farvningsresultaterne blev korreleret med clinicopathologic parametre og samlet overlevelse. Endvidere blev prognostisk betydning af c-fos i delmængder af PC også evalueret. Det blev vist, at lav udtryk for c-fos var oftere i kræft end i tilstødende væv af PC (

P

0,001). Desuden var høj kræft c-fos udtryk signifikant associeret med tumor og T scenen, mens peri-neural invasion var af en borderline signifikant relevans. Log-rank test viste, at høj ekspression af c-fos i kræft væv var en betydelig markør for dårlig samlet overlevelse, ledsaget af nogle konventionelle clinicopathologic variabler, såsom køn, klasse, peri-neural invasion, T og N etaper. Mere vigtigt blev cancerøse c-fos-ekspression er identificeret som en uafhængig prognosticator i multivariat analyse. Endelig blev den prognostiske konsekvenser af c-fos-ekspression påvist i fire undergrupper af patienter med PC. Disse data antydede, at c-fos-ekspression var af relationer med progression og dystre prognose af PC

Henvisning:. Guo J-C, Li J, Zhao Y-P, Zhou L, Cui Q-C, Zhou W-X, et al. (2015) Angivelse af c-fos var forbundet med Clinicopathologic Karakteristika og Prognose i kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 10 (3): e0120332. doi: 10,1371 /journal.pone.0120332

Academic Redaktør: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, UNITED STATES

Modtaget: Oktober 17, 2014 Accepteret: 30 januar 2015; Udgivet: 19 Mar 2015

Copyright: © 2015 Guo et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National High Technology Research and Development Program (863 Program, 2014AA020609, https://program.most.gov.cn/), Kina. Den bidragyder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i bugspytkirtlen (PC) er en af ​​de fleste livstruende solide neoplasmer, fordi denne type malignitet bærer dødeligheden næsten lig med forekomsten [1]. Det blev for nylig sammenfattet, at en forbedring i den langsigtede prognose for PC, selvom kirurgisk resektion var mere og mere anvendt, blev ikke nået inden for to årtier [2]. Derfor udforskning af prognostiske markører for PC har været hotspot af undersøgelsen. Hidtil mange kliniske og patologiske dem, såsom lymfeknude-status, neural invasion, tumormarkørantigener niveauer og resektionsranden, blev identificeret [3-8]. På den anden side, blev virkninger af molekyler involveret i tumor patogenese og progression på prognosen for PC gradvist værdsat og for nylig revideret [9,10]. Selvfølgelig behøver flere molekylære prognosticators at blive opdaget

Det har været velkendt, at c-fos (den humane homolog af den retrovirale onkogen v-Fos), en af ​​de vigtigste bestanddele af aktivator protein (AP). – 1 kompleks, medierer kræft vækst, angiogenese, invasion og metastase, ved at regulere udtryk for down-stream-gener [11]. Resultaterne at c-fos-ekspression blev signifikant associeret med tilbagefald, metastase og dårlig prognose i skællede lungecancer, brystcancer og osteosarkom billede sit potentiale som proto-onkogen [12-14]. foreslog imidlertid andre data, at patienter med højt c-fos udtryk udført gunstig overlevelse i tyk-, æggestokkene og gastrisk kræft [15-18]. Således kan c-fos-ekspression og dens biologiske virkninger være vævstype-specifik. I PC, blev tidligere rapporteret helt andre positive satser for c-fos og dens negative associationer med maligne fænotyper, såsom lymfeknude metastaser og multiresistens, [19-22]. Men dens clinicopathologic og prognostiske betydninger i PC fortsat ukendt.

I den foreliggende undersøgelse, forfatterne til formål at løse de problemer, der er baseret på en stor kinesisk kohorte med PC.

Materialer og metoder

patienter

undersøgelsen kohorte bestod af 333 patienter med PC, herunder 206 mænd og 127 kvinder. Aldre lå fra 34 til 85 (median: 60) år. Patient udvælgelseskriterier: (1) Histologisk bevist adenocarcinom; (2) Kirurgisk resektion prøver til rådighed; (3) Clinicopathologic data til rådighed. Tabel 1 opsummerer clinicopathologic karakteristika patienterne. De parrede formalin-fikserede paraffin-indlejrede cancer og andet væv for patienter blev anvendt. blev opnået Den skriftlige informerede samtykke af alle patienter. Projektet (herunder godkendelsesproceduren) blev godkendt af den etiske komité i Peking Union Medical College Hospital.

Konstruktion af Tissue Microarray (TMA)

Tissue microarray byggeriet blev udført i overensstemmelse med metoder og standarder samme med de tidligere rapporteret [23]

immunhistokemisk farvning

En kanin anti-humane polyklonale antistof til c-fos (sc-52, fortynding:. 1: 50, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) og en totrins immunfarvning kit (EnVision

TM + kit, Dako, Danmark) blev anvendt til farvning. Den blokerende peptid (Santa Cruz) blev vedtaget for specificitet validering af det primære antistof. Objektglas blev farvet i overensstemmelse med fremgangsmåden, der tidligere blev anvendt [23]. Ikke-immune kaninserum ved samme fortynding blev vedtaget som den negative kontrol.

Evaluering af farvningsresultater

To uafhængige patologer, der var blindet til clinicopathologic og overlevelsesdata (QCC og WXZ) evalueret farvningsresultaterne. Den brune nukleare og /eller cytoplasma farvning blev defineret som den positivt signal. Ifølge tidligere foreslog [24], er forholdet mellem positive celler blev opdelt i tre kvaliteter (0-10%, grad 1; 10 ≥50%, grad 2; 50%, grad 3). På den anden side, blev farvningsintensitet også scoret til tre grupper (svage, score 1; moderate, score 2; intensiv, score 3). Den endelige karakter blev opnået ved multiplikation af positivt forhold kvalitet og intensitet score (vist i tabel 1), og adskilt i lav (endelige karakter 6). Og høje udtryk (endelige karakter ≥6)

Follow- op

Opfølgning (median: 14 måneder, range: 2 til 87 måneder) blev udført for 229 patienter, primært gennem ambulatoriet, telefon og mail. Under opfølgningen sigt har 170 patienter døde.

Statistisk analyse

McNemar test og Pearsons korrelationsanalyse blev brugt til at sammenligne c-fos udtryk mellem kræft og tilstødende ikke-kræft væv, og at vise sammenhængen mellem dem. Sammenhængen mellem c-fos udtryk og clinicopathologic egenskaber blev afsløret af Chi-square test. Kaplan-Meier-metoden og log-rank test blev anvendt til at estimere den samlede overlevelse og deres forskelligheder. Multivariate Cox regression (Proportional hazard model) blev udført til identifikation af uafhængige prognostiske faktorer. Alle analyser blev færdig ved statistisk programpakke SPSS11.5 (SPSS Inc., Chicago, IL). En

P Drømmeholdet værdi mindre end 0,05 blev defineret som statistisk signifikant.

Resultater

Angivelse af c-fos og dets tilknytning til Clinicopathologic Karakteristika i PC

det blev vist, at det positive signal hovedsageligt placeret i cellekernen, og bliver også set i cytoplasmaet (fig. 1). Efter behandling med det blokerende peptid, konstateringen af, at positivt signal forsvandt (S1 Fig.) Valideret specificiteten af ​​det primære antistof. Lave og høje udtryk blev fundet i kræft væv fra 167 og 166 patienter med PC, og tilstødende ikke-kræft væv fra 63 og 270 personer. Lav c-fos udtryk var mere almindelig i kræft end i tilstødende væv (

P

0,001, McNemar test). Der var signifikant sammenhæng mellem c-fos udtryk i kræft væv, og at i tilstødende ikke-cancer væv (

P

0,001, Pearsons korrelationsanalyse). Chi-square-analyse viste, at høje kræft c-fos-ekspression var signifikant hyppigere i ikke-hoved og T3 tumorer, sammenlignet med hoved og T1-2 dem, (tabel 2,

P

= 0,013 og 0,017). Desuden c-fos udtryk i kræft væv var marginalt signifikant sammenhæng med perineurale invasion (tabel 2,

P

= 0,069). Ekspression af c-fos i tilstødende væv var ikke relateret til clinicopathologic parametre inkluderet (data ikke vist).

(A) Høj ekspression i cancervæv (oprindelig forstørrelse x 200). (B) Høj udtryk i tilstødende ikke-kræftvæv (original forstørrelse × 200).

Prognostisk Betydningen af ​​c-fos i Whole Kohorte af PC

univariat analyse i hele kohorte af PC viste, at høj kræft c-fos-ekspression forudsagt forkortet samlet overlevelse (

P

= 0,020;. figur 2 og tabel 3), ud over køn, histologisk bedømmelse, perineural invasion, T og N stadier (

P

0,05; tabel 3). Multivariate Cox regression defineret c-fos udtryk som en af ​​uafhængige prognostiske indikatorer for samlet overlevelse af PC (

P

= 0,022; tabel 3).

Påvirkninger af c- fos Expression på Samlet overlevelse i delmængder af PC

Da den foreliggende undersøgelse evaluerede otte clinicopathologic variabler, patienterne blev inddelt i seksten delmængder. Univariate analyser defineret kræft c-fos udtryk som en væsentlig prædiktor for samlet overlevelse i fire dem, dvs. mandlige patienter, tumorer ≤4cm, N0 tumorer og dem uden perineurale invasion (

P

0,05;. Figur 3) . Cox regressionsanalyse konstateret, at c-fos udtryk i kræft væv var uafhængig prognostisk konsekvenser hos mænd, N0 tumorer og dem uden perineurale invasion (

P

0,05; tabel 4).

( A) Mandlige patienter (

P

= 0,006). (B) Tumorer ≤4cm (

P

= 0,026). (C) Tumorer uden peri-neurale invasion (

P

= 0,039). (D) N0 tumorer (

P

= 0,008). N, lymfeknude.

Diskussion

Som et vigtigt medlem af den fos familie af transkriptionsfaktorer, blev c-fos vist sig at være en vigtig regulator af proliferation, differentiering , angiogenese, invasion og metastase af cancer, gennem AP-1-relaterede mekanismer [11]. Det er dog interessant, at c-fos spiller forskellige, selv modsatte roller i forskellige kræftformer. I bryst- og blære kræftformer samt gliomceller [25-28], c-fos synes at have pro-onkogene egenskaber, i modsætning til i ovariecancer [29]. Selv i en samme slags malignitet, PC, resultater vedrørende udtryk og fænotyper af c-fos mangler at være inkonsekvent. Brug immunhistokemi for nogle få individer, Lee et al. [19] fandt, at c-fos blev stærkt udtrykt i PC væv, men blev kun observeret svag udtryk i et lille antal patienter indskrevet i en anden undersøgelse [20]. Desuden resultaterne, at c-fos blev nedreguleret i PC med lymfeknude metastaser og øget c-fos udtryk fremkaldt multiresistens 1 (MDR1) i PC celler angiver de komplekse roller molekylet i PC [21,22]. Andre undersøgelser, der viste, at c-fos bidrager til cellemotilitet [30] og fungerer som et af målene i nogle tumorsuppressorgener [31,32], støtte dets onkogent potentiale i PC. I den aktuelle undersøgelse blev udtryk for c-fos først opdaget for mere end 300 patienter med PC. Det er uventet, at lav c-fos udtryk er mere hyppige i kræft end i tilstødende ikke-cancer væv (McNemar s test). Derefter blev vist positive /potentielt positive associationer mellem høj c-fos udtryk og senere T stadium samt tilstedeværelsen af ​​perineurale invasion. Resultaterne indikerer, at c-fos kan spille vigtige roller i både initiering og progression af PC. Tidligere arbejde fandt, at c-fos-induceret inflammation-medieret tumorigenese [33]. Desuden blev kronisk pancreatitis (CP) kendt som en væsentlig ætiologisk faktor PC [34]. Derfor, om c-fos spiller en vigtig rolle i processen fra CP til PC kan være af interesse. Det blev foreslået, at K-ras, en afgørende muteret gen i både CP og PC, aktiveret Raf /MEK /ekstracellulær signal-reguleret kinase (ERK) vej gennem en kompleks kaskade [34], hvorimod ERK, en slags mitogenaktiveret protein (MAPK), var involveret i aktivering af c-fos [35]. Således kan høj c-fos udtryk i tilstødende ikke-kræft væv i den aktuelle undersøgelse giver en foreløbig fingerpeg om dens virkninger på konvertering fra betændelse til malignitet i bugspytkirtlen. På den anden side blev cancerøse c-fos-ekspression afslørede at være signifikant og marginalt signifikant associeret med T stadium og perineural invasion, hvilket indikerer, at dette transkriptionel faktor kunne være en promotor fra PC progression. Tilsammen støttet vores data, at c-fos tjener som en proto-onkogen i løbet fra malign transformation til progression i PC, anderledes med tidligere viser nedregulering af c-fos i PC med lymfeknude metastaser [21]. I fremtiden detaljerede udforskninger til fænotyper og relative mekanismer værd gøres.

Det blev vist, at c-fos var knyttet til dårlig eller god prognose i mange typer af kræft [12-18]. Imidlertid har sin indvirkning på udfaldet af PC ikke blevet belyst. Her rapporterer vi, at høj c-fos udtryk i cancer væv var forbundet med utilfredsstillende samlet overlevelse i både univariate og multivariate analyser, præsenterer sin magt som en stærk indikator for dyster prognose i PC. De resultater, c-fos var uafhængig prognostisk betydning i nogle undergrupper af PC styrke sin prognostisk rolle. Disse resultater, støttet af positive forhold mellem c-fos udtryk og maligne fænotyper af PC etableret i nærværende undersøgelse, er i overensstemmelse med dem, der stammer fra osteosarkom, lunge- og brystkræft [12-14]. Ingen tvivl om disse overlevelse analyseresultater viser også funktionen af ​​c-fos som en proto-onkogen.

Som konklusion viste vores data, at c-fos udtryk er relateret til progression og triste prognose for PC. Således kan dette protein være en roman molekylær producent af PC.

Støtte Information

S1 Fig. Specificitet validering af det primære antistof mod c-fos i bugspytkirtelkræft.

(A) med blokerende peptid (oprindelig forstørrelse x 200). (B) uden at blokere peptid (original forstørrelse × 200)

doi:. 10,1371 /journal.pone.0120332.s001

(TIF)