PLoS ONE: kinesisk urtemedicin Undertrykker Invasion-Fremme Kapacitet Cancer-associerede fibroblaster i pancreas Cancer

Abstrakt

Kræft i bugspytkirtlen er stadig en af ​​de førende årsager til kræft-relaterede dødsfald på grund af aggressiv vækst, høj metastatisk satser i den tidlige fase og manglen på en effektiv terapeutisk tilgang. Vi har tidligere vist, at Qingyihuaji (QYHJ), en syv-urt kinesisk medicin formel, udviste signifikante anti-cancer effekter i bugspytkirtelkræft, der er forbundet med ændringer i tumormikromiljøet, især inhibering af cancer-associeret fibroblast (CAF) aktivering. I den foreliggende undersøgelse, genereret vi CAF og parrede normale fibroblast (NF) kulturer fra resektion humane pancreas cancer væv. Vi observerede, at CAF udviste en forbedret evne til at fremkalde kræft i bugspytkirtlen celle migration og invasion i forhold til NFS, mens QYHJ-behandlede CAF udstillet nedsat migration og invasion-fremmende kapacitet in vitro. Resultaterne af yderligere analyser viste, at sammenlignet med NFS, CAF udviser øget CXCL1, 2 og 8 udtryk, der bidrager til de forbedrede invasion-fremmende kapacitet på disse celler, mens QYHJ behandling betydeligt undertrykt CAF sprednings aktiviteter og produktion af CAF-afledte CXCL1, 2 og 8. Disse in vitro observationer blev bekræftet i musemodeller af human pancreascancer. Tilsammen disse resultater antydede, at undertrykke tumor-fremmende evne CAF gennem kinesisk urtemedicin dæmper bugspytkirtelkræft celleinvasion

Henvisning:. Chen L, Qu C, Chen H, Xu L, Qi Q, Luo J et al. (2014) kinesisk urtemedicin Undertrykker Invasion-Fremme Kapacitet Cancer-associerede fibroblaster i kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 9 (4): e96177. doi: 10,1371 /journal.pone.0096177

Redaktør: Donald Gullberg, Universitetet i Bergen, Norge

Modtaget: 31 oktober 2013; Accepteret: April 4, 2014; Udgivet: 29 April, 2014

Copyright: © 2014 Chen et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af National Science Fundation Kina (81001061, 81370068, 81273953, 81173461); Shanghai Nature Science Fund, Shanghai, Kina (09ZR1406800); Ph.d.-programmer Foundation of Undervisningsministeriet i Kina (20090071120076); Shanghai Videnskab og Teknologi Udvalg Rising-Star Program (11QA1401300); Medicinske Talents Uddannelsesprogram for Sundhed Bureau of Shanghai (XYQ2011008); og Fudan University Zhuo-Xue program. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

på grund af aggressiv vækst og en høj metastatisk sats i den tidlige fase, kræft i bugspytkirtlen er stadig en yderst dødelig ondartet sygdom [1], og kun ca. 10-20% af kræft i bugspytkirtlen er resektabel på tidspunktet for diagnosen [ ,,,0],2]. Gemcitabin har været standard behandling for fremskreden kræft i bugspytkirtlen; dog median overlevelse er 5-6 måneder, med den hyppige udvikling af kemo-resistens under behandlingen [3]. Således, pancreascancer fortsat en forfærdelig sygdom, og der er et presserende behov for yderligere undersøgelser for at afsløre de molekylære mekanismer i tumorinvasion og metastase til at udvikle en effektiv terapeutisk tilgang til at forebygge og /eller behandle af pancreascancer.

cancer associeret fibroblaster (cafeer), fremherskende bestanddele af tumor stroma, er blevet ekstraheret fra flere invasive humane carcinomer, herunder pancreascancer [4], [5], [6]. Bugspytkirtelkræft duktalt adenokarcinom er kendetegnet ved en omfattende stromale reaktion kaldet desmoplasia [7]. I tumoren stroma, CAF er den primære celletype, som spiller en vigtig rolle i tumorudvikling [5]. CAF udskiller flere faktorer, herunder CXC, CC-kemokiner, og andre inflammatoriske mediatorer, der fremmer proliferation, invasion og metastase af cancerceller. Desuden har akkumulerende beviser vist, at CAF spille en central rolle i erhvervelsen af ​​resistens i tumor terapi [8], som negativt påvirker kliniske resultater [9], [10]. Derfor hæmme aktiveringen af ​​CAF kan udgøre en potentiel terapeutisk tilgang til kræft i bugspytkirtlen behandling.

QYHJ, en syv-urt kinesisk medicinsk formel, der bruges til behandling af kræft i bugspytkirtlen i Kina, hæmmer både tumorvækst og metastase i nøgne mus modeller af bugspytkirtelkræft [11], [12], [13]. Hertil kommer, at kombineret brug af QYHJ med konventionel vestlig medicin forlænger overlevelsestid hos patienter med levermetastaser fra kræft i bugspytkirtlen [14]. Men den underliggende molekylære mekanisme er stadig uklar.

Her har vi vist, at CAF udviste en forbedret evne til at fremkalde kræft i bugspytkirtlen celle migration og invasion i forhold til NFS, mens QYHJ-behandlede CAF udstillet nedsat migrations- og invasion-fremmende kapacitet in vitro. Desuden viste vi, at sammenlignet med NFS, CAF udtrykker høje niveauer af CXCL1, 2 og 8, der bidrager til den forbedrede invasion fremmende kapacitet af disse celler. Således kunne QYHJ behandling undertrykke spredningsaktiviteter og CXCL1, 2 og 8 ekspressionsniveauer i CAF. Tilsammen disse resultater tyder på, at undertrykke tumor-fremmende evne CAF med kinesisk urtemedicin dæmper bugspytkirtelkræft celle invasion.

Materialer og metoder

Etik Statement

Alle dyr forsøg blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra National Institutes of Health for Pleje og anvendelse af forsøgsdyr. Undersøgelsen Protokollen blev også godkendt gennem Udvalget om brugen af ​​levende dyr i undervisning og forskning, Fudan University, Shanghai. Ved afslutningen af ​​undersøgelsen blev alle dyr halshugget gennem rygmarven separation på nuchae for at minimere lidelser. Fibroblasterne blev isoleret fra resekterede væv af to patienter med pancreatiske ductale adenocarcinomer (PDAC). Før prøvetagning blev skriftligt informeret samtykke opnået fra hver patient i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer, og undersøgelsen blev godkendt gennem udvalgene for etisk gennemgang af forskning på Fudan University Shanghai Cancer Center.

cellelinjer og mus

den humane pancreas cancercellelinie Capan1 og BxPC3 blev opnået fra American Type Culture Collection og dyrket i Dulbeccos modificerede Eagle-medium (DMEM; Gibco, Carlsbad, CA) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS; Gibco, Carlsbad, CA) ved 37 ° C med 5% CO

2. Morfologien af ​​Capan1 cellelinien blev regelmæssigt vurderet, og cellerne blev testet for fravær af mycoplasma-kontaminering (MycoAlert, Lonza, Rockland, ME, USA). De Capan1 og BxPC3 cellelinier ved de 30-40 passager blev anvendt i vores studie.

BALB /c-nu /nu nøgne mus i alderen 4-6 uger blev opnået fra Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina), har til huse i laminar flow kabinetter under specifikke patogenfrie betingelser og forudsat mad og vand

ad libitum

.

isolering af CAF og parrede forbund

stromacellers fibrolasts blev isoleret som tidligere beskrevet [15]. Kort beskrevet blev kirurgisk resektion bugspytkirtelkræft væv opnået fra to patienter med pancreatisk duktalt adenokarcinom. Skriftligt informeret samtykke blev opnået før vævet kollektion. Den friske pancreas tumorvæv og tilstødende normalt væv (mindst 2 cm fra den ydre tumor margin) blev hakket i 1-3 mm

3 fragmenter og spaltet med 0,25% trypsin ved 37 ° C i 30 minutter. De resulterende fragmenter blev centrifugeret ved 600 x g i 5 minutter og vasket en gang med DMEM indeholdende 10% føtalt bovint serum. Vævsfragmenterne blev efterfølgende udpladet og inkuberet ved 37 ° C. Dyrkningsmediet blev skiftet to gange om ugen i 3-4 uger. Under disse betingelser blev fibroblaster eksplanteret fra vævsfragmenter mens andre celler hovedsagelig var tilbageholdt i vævet. Fibroblaster dannet flere lag kolonier spredes på dyrkningsskålen. Efter 3-4 uger dyrkede celler blev groft trypsiniseret og re-belagte i T25 dyrkningskolber (passage én). Fibroblasterne blev derefter sub-dyrket i yderligere 2-3 passager, indtil kulturerne var fri for forurening af epitelceller og efterfølgende holdt i DMEM suppleret med 10% føtalt bovint serum, 2% penicillin og streptomycin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) . Cellerne blev dyrket ved 37 ° C i en fugtig atmosfære indeholdende 5% CO

2.NF og CAF-stammer blev anvendt ved 4-5 passager.

Immunhistokemi og immunofluorescens

Immunhistokemi (IHC) blev udført som tidligere beskrevet [16]. Kort fortalt blev tumor- vævsprøver fikseret i 10% formalin og indlejret i paraffinvoks. Ufarvede 3-um snit blev efterfølgende skåret fra paraffinblokke for IHC-analyse. Snittene blev farvet med de følgende antistoffer: kanin anti-vimentin (1:200), kanin-anti-α-SMA (1:100), kanin-anti-CXCL1 (1:100), kanin-anti-CXCL2 (1:200) og kanin-anti-CXCL8 (01:25) ved 4 ° C natten over. Snittene blev inkuberet med sekundære antistoffer, og avidin-biotin peroxidase-kompleks blev anvendt ifølge producentens instruktioner (Vector Laboratories, CA, USA). Et immunoglobulin-negativ kontrol blev anvendt til at udelukke ikke-specifik binding. To uafhængige efterforskere og en patolog, som alle blev blindet til modellen /behandling type til den række af prøver, udført alle procedurer. Til kvantitativt evaluere CAF-inducerede proliferative aktivitet i hver gruppe, vi beregnet forholdet mellem arealet positive for vimentin og α-SMA-farvning til det samlede areal i histologiske sektioner fra ti felter under lysmikroskopi (200 x) [11].

i immunfluorescensfarvning, cellerne blev fikseret med 4% paraformaldehyd og inkuberet med anti-Pan-CK (1:100), anti-α-SMA (1:100), anti-vimentin (1:100) , anti-E-cadherin (1:100), anti-CD31 (1:200) og anti-D2-40 (1:100) ved 4 ° C natten over. Cellerne blev efterfølgende inkuberet med fluorescens-konjugeret sekundært antistof i 1 time. Efter vask blev cellerne monteret med montering medium indeholdende DAPI (Vector Laboratories). En negativ kontrol, hvori det primære antistof blev udeladt, blev anvendt til at teste for antistofspecificitet. Billederne blev taget med et konfokalt Leica fluorescens mikroskop.

Narkotika og reagenser

QYHJ, en syv-urt kinesisk medicinsk formel, bestod

Scutellria barbata Hotel (Ban zhi lian) ,

Heydyotis diffusa Hotel (Bai hua hun hun cao),

Amorphophallus kiusianus

(hun liu gu),

Coix Lacryma-JOBI Hotel (Yi ren),

Gynostemma pentaphyllum

(Jiao gu lan),

Ganoderma luncidum

(Ling zhi) og

Amomum cardamomum Hotel (Bai dou kou), blev fremstillet som tidligere beskrevne måleapparatur [11], [12], [13]. Kort fortalt blev QYHJ pulver opnået fra Jiang-yin Tianjiang Pharmaceutical Co, Ltd For at sikre standardisering og opretholde interbatch pålidelighed QYHJ blev en højtydende væskekromatografi (HPLC) kromatografisk fingeraftryk udviklet til kvalitetskontrol. De fingeraftryk kromatogrammer af QYHJ formel er vist i vores tidligere rapport [17]. Den endelige afkog af QYHJ blev udarbejdet efter opløsning af plantestoffer pulver i destilleret vand til den ønskede koncentration. Den daglige dosering til kanin og nøgne mus var 15 g /kg og 18 g /kg, beregnet efter følgende menneske-kanin eller human-muse transfer formel: Db = Da × (Rb /Ra) × (Wb /Wa ) 2/3, hvor D, R, og W repræsenterer dosering, form koefficient, og kropsvægt henholdsvis og a og b repræsenterer mennesker og mus eller kanin, henholdsvis. Human rekombinant CXCL1, 2 og 8 blev opnået fra PeproTech (Rocky Hill, NJ, USA). Den anti-CXCR1 blokerende antistof blev opnået fra R den konditionerede medium var frisk overført uden opbevaring.

For at få CM fra QYHJ-behandlede CAF blev isolerede CAF udsået på T25-flasker (1 × 10

6 celler) og dyrket i DMEM indeholdende 10% QYHJ- Indeholder Serum eller ctrl-indeholdende Serum. Fireogtyve timer senere blev mediet fjernet, og cellerne blev vasket to gange med PBS. Celler blev efterfølgende inkuberet med 5 ml frisk DMEM-medium i yderligere 48 timer. CM blev efterfølgende høstet som beskrevet ovenfor.

enzymmaerket (ELISA) assay

serum CXCL1, 2 og 8 koncentrationer blev målt under anvendelse af en ELISA som tidligere beskrevet [17]. Blodprøven blev opbevaret ved stuetemperatur i 30 minutter, centrifugeret (12000 x g) i 15 min, og kryopræserveret ved -80 ° C. Koncentrationerne blev målt under anvendelse af et sandwich-ELISA-kit (DuoSet; R 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS 15.0 softwarepakke.

Resultater

Generering af cancer-associeret fibroblast (CAF) kulturer

Vi udvundet fibroblaster fra resektion eksemplarer af to pancreas ductusceller adenokarcinomer. De tumormasser blev dissocieret, og forskellige celletyper blev adskilt til opnåelse af populationer af CAF. Vi isolerede også en anden population af fibroblaster fra en noncancerous region i bugspytkirtlen mindst 2 cm fra den ydre tumor margin i hvert af de samme to patienter. Vi betegnes disse celler “normale fibroblaster (NFS).” Alle forsøg blev udført gennem sammenligninger mellem CAF og de tilsvarende forbund og derved undgå forudindtagethed grund af interindividuel forskelle. Renheden af ​​de dyrkede fibroblastceller blev verificeret gennem immunfarvning under anvendelse vimentin og PDGFR-β (mesenchymal cellemarkør) og E-cadherin og cytokeratin (CK) (epitelcelle markør). Derudover blev D31 og D2-40 anvendes til at udelukke den endotel oprindelse (figur 1A og figur S1). Alle cellekulturer blev vimentin og PDGFR-β positive og 91% til 100% E-cadherin, cytokeratin, CD31 og D2-40 negativ. Sammenlignet med NFS, de etablerede CAF udtrykte høje niveauer af alpha glatmuskelactin (α-SMA), en markør for aktiverede fibroblaster, udtrykkes typisk i CAF men ikke normale hvilende fibroblaster. Disse observationer blev yderligere bekræftet gennem Western blot-analyse (figur 1B). Tilsammen vores resultater viste, at vi med succes etableret parret CAF og NF kulturer fra human PDAC.

A. Fibroblaster blev ekstraheret fra resektion væv af to pancreatiske duktale adenocarcinomer. Renheden af ​​de dyrkede fibroblastceller blev verificeret gennem immunofluorescens til påvisning Pan-CK (rød), E-cadherin (grøn), vimentin (rød), α-SMA (rød), PDGFR-β (rød), CD31 (rød) og D2-40 (rød). Cellekernerne blev modfarvet med DAPI (blå). Positive væv til CD31 og D2-40 immunfarvning kontrol er blevet brugt (figur S1). B. Western blot-analyse bekræftede ekspressionsmønsteret for markørerne anvendt i A.

pancreascancer celler behandlet med konditioneret medium fra QYHJ-behandlede CAF viste nedsat invasion

CAF bidrager til invasive og metastatiske proces i human pancreascancer [5]. I denne undersøgelse undersøgte vi migration og invasion-fremkaldende virkninger af CAF på humane bugspytkirtelkræftceller hjælp transwell kamre med eller uden Matrigel belægning. Transwell assays viste, at det konditionerede medium (CM) fra kontrol-behandlede CAF udviste en forøget kapacitet til induktion bugspytkirtelkræft cellemigration og invasion (figur 2 og figur S2). Dernæst vurderede vi virkningerne af QYHJ på CAF-induceret cellemigration og invasion, blev CM fra QYHJ eller kontrol-behandlede CAF høstet og virkningerne af dette medium på bugspytkirtelkræft cellemigration og invasion blev også evalueret. Vi observerede, at CM fra QYHJ-behandlede CAF udviste nedsat migration og invasion-fremme evner sammenlignet med den af ​​kontrol-behandlede CAF (figur 2 og figur S2), disse resultater antydede, at QYHJ behandling kan undertrykke pancreascancer cellemigration og invasion gennem målretning CAF .

migration cellen og invasion kapacitet bugspytkirtelkræftceller behandlet med konditioneret medium (CM) fra NFS, Ctrl-behandlede CAF og QYHJ-behandlede CAF blev sammenlignet ved hjælp transwell kamre med eller uden Matrigel belægning. Antallet af celler, der rejste gennem membranen blev talt i 10 felter under et × 20 objektivlinse. Original forstørrelse, × 200. Resultaterne repræsenterer de midler ± SD af værdierne opnået i tre uafhængige forsøg. Statistisk signifikans blev beregnet ved anvendelse af ANOVA. *

P

. 0,05

QYHJ hæmmer udskillelsen af ​​CXCL1, 2 og 8 danner CAF

CAF direkte stimulere tumorcelleproliferation gennem forskellige vækstfaktorer, hormoner og cytokiner i en kontekst-afhængig måde [5]. Vi har tidligere vist, at CAF fremme migration og invasion af Capan1 celler in vitro, og denne egenskab blev inhiberet efter behandling med QYHJ. Dernæst forsøgt at identificere de potentielle molekyler, der medierer sammenhængen mellem fibroblaster og cancerceller. Tidligere undersøgelser har vist, at medlemmerne af CXC chemokin underfamilier, herunder GRO1 (CXCL1), GRO2 (CXCL2) og IL-8 (CXCL8), er blandt en af ​​de mest up-regulerede gener identificeret i CAF forhold til forbund i pancreas cancer [21]. Derfor undersøgte vi ekspressionen af ​​disse faktorer i CAF og parret NFS. Vi observerede, at CAF udviser øget CXCL1, 2 og 8 mRNA og proteinekspression i forhold til NFS. Derudover observerede vi, at QYHJ behandling undertrykte signifikant ekspressionen af ​​CXCL1, 2 og 8 i begge CAF cellelinier (figur 3A-B). ELISA-assay bekræftede også, at CAF behandlet med QYHJ udskilles lavere niveauer af CXCL1, 2 og 8 i mediet (figur 3C). Disse resultater foreslog derfor, at QYHJ hæmmer ekspressionen af ​​CXCL1, 2 og 8 i CAF.

A-B. CAF blev behandlet med QYHJ-indeholdende Serum eller ctrl-indeholdende Serum i 48 timer. Cellerne blev derefter høstet, og ekspressionen af ​​CXCL1, 2 og 8 blev evalueret under anvendelse real-time PCR (A) og western blotting (B). C. De isolerede CAF blev udsået i T25 kolber (1 × 10

6 celler) og dyrket i DMEM indeholdende 10% QYHJ-holdige Serum eller ctrl-indeholdende Serum. Fireogtyve timer senere blev mediet fjernet, og cellerne blev vasket to gange med PBS. Cellerne blev efterfølgende inkuberet med 5 ml frisk DMEM-medium i yderligere 48 timer. Mediet blev efterfølgende høstet, og CXCL1, påvistes 2 og 8 koncentrationer gennem ELISA. ANOVA blev anvendt til bestemmelse af den statistiske signifikans. *

P

. 0,05

QYHJ hæmmede CAF proliferation in vitro

Tidligere undersøgelser har indikeret, at antallet af CAF i stroma er signifikant associeret med den dårlig differentiering og prognose af kræft [22], [23], [24], og reducerede CAF numre blev også observeret, når tumoren blev behandlet [11]. Vores hypotese derfor, at QYHJ påvirker CAF proliferation. In vitro proliferation assay viste, at QYHJ behandling hæmmede udbredelsen af ​​CAF i begge cellelinier (figur 4), hvilket bidrager til den undertrykte CXC-kemokin sekretion fra CAF.

Ca. 5 × 10

3 CAF i 0,1 ml blev udpladet i duplikerede brønde af 96-brønds plader. Efter inkubation natten over blev suspensionen fjernet og overført til DMEM, der indeholder 10% QYHJ-holdige Serum eller ctrl-indeholdende Serum. De celleproliferation indeks blev vurderet dagligt ved hjælp af Cell Counting Kit-8. Resultaterne er præsenteret som gennemsnit ± standardafvigelse af værdier opnået i tre uafhængige forsøg. *

P

0.05.

CXCLs øget migration og invasion af humane bugspytkirtelkræftceller

CXC chemokiner har været forbundet med kræft celle invasion i mange typer af humane kræftformer [25]. Som vi har observeret, at CAF udviste forøget CXC chemokiner ekspression og sekretion, vi bekræftet, hvorvidt opreguleret sekretion af CXC chemokiner bidrager til øget kapacitet til induktion bugspytkirtelkræft cellemigration og invasion. Vi testede effekten af ​​CXC chemokiner på celle migration og invasion hjælp transwell kamre med eller uden Matrigel belægning. Tilsætningen af ​​rekombinant humant CXCL1, 2 og 8 forøges både migration og invasion af Capan 1-celler i Transwell assays. Endvidere inhiberingen af ​​CXC kemokinsignalering hjælp receptorantagonister signifikant blokeret CXC kemokin-induceret cellemigration og invasion (figur 5 og figur S3). Salg

Migration og invasion-assays blev udført på Capan1 celler behandlet med vehikel, 100 /ml CXCL1, 2 og 8, eller deres antognists 20 ug /ml anti-CXCR1 antistof og 400 nM SB 225002 som anført, ved anvendelse af Transwell cellekamrene. Antallet af celler, som invaderede membranen blev talt i 10 felter under × 20 objektivlinsen. Original forstørrelse, × 200. Resultaterne er præsenteret som gennemsnit ± standardafvigelse af værdier opnået i tre uafhængige forsøg. Den statistiske signifikans blev beregnet ved anvendelse af ANOVA. *

P

0.05.

QHYJ behandling hæmmer tumorigenese og udtryk for CXCL1, 2, 8 in vivo

For yderligere at bekræfte effekten af ​​QYHJ på CAF spredning aktivitet og CXCLs produktion in vivo, vi etableret mus xenograftmodeller vha Canpan1 celler. Musene blev tilfældigt opdelt i QYHJ og kontrolgrupper, som blev behandlet med QYHJ (0,2 ml, via sonde, daglig) eller normalt saltvand som kontrol hhv. Vi observerede, QYHJ behandling resulterede i reduceret tumorvækst (figur 6A). I overensstemmelse med resultaterne af in vitro analyser, QYHJ reduceret CAF proliferation i tumorer (figur 6B). Desuden IHC bekræftede, at tumorer behandlet med QYHJ udviste den reducerede ekspression af CXCL1, 2 og 8 (figur 6D). Derfor er vores resultater foreslog, at QHYJ behandling hæmmet CAF spredning og udtryk for CXCL1, 2, og 8, potentielt afspejler de anti-cancer effekter af QHYJ i bugspytkirtelkræft.

A. Virkning af QYHJ på tumorvækst i et subkutant transplanteret tumormodel. Capan1 celler (2 × 10

6cells i 200 ml) blev injiceret subkutant i den højre armhule af hver BALB /c-nu /nu nøgne mus. Den næste dag blev musene behandlet oralt med eller uden QYHJ. De gennemsnitlige tumorvolumener af vehikel-behandlede (saltvand) og QYHJ-behandlede tumorer blev målt. Middelværdien ± standardafvigelse blev bestemt i hver behandlingsgruppe. De tumorvækstkurver er vist i det øverste panel, og fotografier af subkutant transplanterede tumorer fra begge grupper er vist i det nederste panel. T-test blev anvendt til at bestemme den statistiske signifikans. *

P

.05 Sammenlignet med den QYHJ-behandlede gruppe. B. IHC farvning for vimentin og α-SMA på sektioner af tumorer til at evaluere CAF proliferative aktiviteter. En pil angiver fibroblast og pilespids angiver bugspytkirtelkræft celle. Original forstørrelse, 200 ×. CAF proliferative aktiviteter (til højre) blev kvantitativt evalueret efter beregning af forholdet mellem vimentin eller α-SMA antistof-positiv farvning område til det samlede areal i hvert felt, og den gennemsnitlige værdi fra ti felter under 200 × mikroskopi er angivet. *

P

0,05. C. IHC farvning under anvendelse af anti-CXCL1, 2, og 8-antistoffer blev udført ved anvendelse af sektioner af transplanterede tumorer. Original forstørrelse, × 200. De positive satser CXCL1, 2 og 8 i tumorer er vist til højre. T-test blev anvendt til at bestemme den statistiske signifikans. *

P

0.05.

Diskussion

I denne undersøgelse viste vi, at QYHJ hæmmer kræft i bugspytkirtlen celle invasion og metastase ved at målrette CAF, især produktionen af ​​CXCL1, 2 og 8. Disse resultater yderligere bekræftet vores tidligere spekulationer om, at celler i tumor mikromiljø kunne tjene som afgørende mål for kinesisk urtemedicin [11].

Traditionel kinesisk medicin (TCM) er baseret på en unik teori dannet i lone tids praktisk erfaring. For de sidste tusind år har TCM blevet udbredt i Kina, og mere end 90% af moderne kinesiske kræftpatienter har fået TCM terapi under behandlingen [26]. For nylig er TCM blevet anvendt i udlandet og er godt accepteret i mange lande, især til behandling af onkologiske [27]. TCM er baseret på begrebet holisme, overvejer det indbyrdes forhold mellem den menneskelige krop og det omgivende miljø på makroniveau. På mikroskopisk skala, mener vi den holistiske forhold mellem kræftceller og mikromiljø. Faktisk har de seneste undersøgelser har bekræftet, at tumorceller ikke handler isoleret, men snarere overleve i en rig mikromiljø leveres af residente fibroblaster, inflammatoriske celler, endotelceller, pericytter, leukocytter, og den ekstracellulære matrix [28]. Som kræft skrider frem, er det omgivende mikromiljø aktiveret, coevolving gennem løbende parakrin kommunikation, for at støtte carcinogenese [29]. Kræft i bugspytkirtlen er karakteriseret ved en omfattende stromale reaktion kaldet desmoplasia [7]. CAF er den primære celletype i tumorstroma, og betydningen af ​​en rolle for CAF i tumorudvikling er godt accepteret [5]. Derfor, som kræft ikke længere betragtes som en diskret enhed kun defineret gennem de træk af kræftceller i tumor, i sidste ende påvirker hele organismen, TCM tilbyder en holistisk tilgang til at regulere integriteten af ​​alle kroppens funktioner og samspillet mellem mennesker og omgivende miljø.