PLoS ONE: KRAS mutationer i Primary Kolorektal Cancer tumorer og relaterede Metastaser: en potentiel rolle i Forudsigelse af Lung Metastasis

Abstrakt

Baggrund

KRAS

mutationer i kolorektal cancer primære tumorer forudsige resistens over for anti-epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) monoklonalt antistof hos patienter med metastatisk colorectal cancer, og dermed udgør en sand indikator for EGFR-aktivering status.

Metodologi /vigtigste resultater

KRAS

mutationer blev retrospektivt undersøgt ved hjælp polymerase kædereaktioner og efterfølgende sekventering af codon 12 og 13 (exon 2) i 110 patienter med metastatisk colorectal tumorer. Disse undersøgelser blev udført under anvendelse af vævsprøver fra både den primære tumor og deres relaterede metastaser (93 lever, 84%, 17 lung, 16%). Alle patienter fik adjuvans 5-fluorouracil-baserede polychemotherapy efter resektion af metastaser. Ingen modtog anti-EGFR-behandling. Mutationer i

KRAS

blev observeret i 37 (34%) af primære tumorer og i 40 (36%) af beslægtede metastaser, hvilket gav et 94% niveau af konkordans (kappa indeks 0,86). Patienter med primære tumorer besidder

KRAS

mutationer havde en kortere sygdomsfri overlevelse periode efter metastaser resektion (12,0 vs. 18,0 måneder P = 0,035) end dem, der ikke gjorde. En højere procentdel af

KRAS

mutationer blev fundet i primære tumorer i Patiens med lungemetastaser end hos patienter med levermetastaser (59% vs. 32%, p = 0,054). For yderligere at evaluere denne konklusion vi analyseret 120 ekstra patienter med inoperabel metastatisk kolorektal cancer, som tidligere har haft deres primære tumorer evalueret for

KRAS

mutationsstatus til kliniske formål. Separat, analysen af ​​disse 120 patienter viste en tendens til en højere grad af

KRAS

mutationer i primære tumorer fra patienter med lungemetastaser, selvom det ikke nåede statistisk signifikans. Tilsammen gruppen af ​​230 patienter viste, at

KRAS

var muteret signifikant oftere de primære tumorer i patienter med lungemetastaser (57% vs. 35%, p = 0,006).

Konklusioner /betydning

Vores resultater tyder på en rolle for

KRAS

mutationer i tilbøjeligheden af ​​primære kolorektale tumorer at metastaserer til lungerne

Henvisning:. Cejas P, López-Gómez M, Aguayo C, Madero R, de Castro Carpeño J, Belda-Iniesta C, et al. (2009)

KRAS

Mutationer i Primary Kolorektal Cancer tumorer og relaterede Metastaser: en potentiel rolle i Forudsigelse af Lung Metastase. PLoS ONE 4 (12): e8199. doi: 10,1371 /journal.pone.0008199

Redaktør: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanien

Modtaget: September 1, 2009; Udgivet: 18. december 2009

Copyright: © 2009 Cejas et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde modtaget tilskud støtte fra Amgen, Red Tematica de Investigación Cooperativa en cancer (RTICC, RD06-0020-1022), Fundación Mutua Madrileña og fra Fundación para la Investigación Biomedica del Hospital Universitario La Paz (FIBHULP), Madrid, Spanien. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kolorektal cancer (CRC) er en af ​​de mest almindelige ondartetheder og en af ​​de førende årsager til kræft-relaterede dødsfald i udviklede lande [1]. Fjernmetastase er den vigtigste dødsårsag i CRC patienter. Afhængigt af den fase af den primære tumor, forekommer levermetastaser i 20% til 70% af patienterne, og lungemetastaser i 10% til 20% af patienterne [2]. Kirurgisk resektion fortsat den eneste potentielt helbredende for patienter med metastaserende CRC. Men kurativ resektion er muligt på mindre end 25% af patienter med stadium IV sygdom [3], og mindre end 5% af patienter med inoperabel metastatisk CRC er i live efter 5 år. Der gøres en stor indsats for at forbedre prognosen for patienter med metastaserende CRC, især i udviklingen af ​​nye terapeutiske strategier. Den epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) signalvejen er blevet et centralt mål for terapeutisk intervention, fordi to monoklonale antistoffer rettet mod EGFR er blevet vigtige redskaber i forvaltningen af ​​fremskreden sygdom: cetuximab og panitumumab [4], [5]. EGFR aktiverer proliferative og anti-apoptotiske signalveje, såsom phosphatidylinositol 3′-kinase /Akt og Ras /Raf /mitogenaktiveret proteinkinase (MAPK) veje [6]. Aberrant aktivering af EGFR pathway i CRC kan skyldes enten EGFR overekspression eller mutations aktivering af downstream elementer af EGFR pathway [7].

KRAS

er et lille GTP-bindende protein, transducerer signaler fra aktiverede celleoverfladereceptorer til kernen. Konstitutiv

KRAS

aktivering ved punktmutationer i codon 12 og 13 i exon 2 er blevet beskrevet som en vigtig årsag til EGFR pathway overaktivering [7], [8]. Forekomsten af ​​

KRAS

mutationer i kolorektale tumorer varierer fra 35% til 45% [9], og

KRAS

mutationer synes at forekomme tidligt i carcinogenese [10]. Derfor

KRAS

mutationsstatus mellem primære tumorer og deres relaterede levermetastaser er blevet rapporteret en høj grad af overensstemmelse i [11], [12]. De seneste data har vist en sammenhæng mellem

KRAS

mutationsstatus i den primære tumor og modstandsdygtighed over for cetuximab og panitumumab i patienter med metastaserende CRC [13], [14]. Men sammenhængen mellem

KRAS

mutationsstatus og prognosen er kontroversiel for patienter med metastaserende CRC, som ikke er behandlet med anti-EGFR-antistoffer, med nogle undersøgelser, der rapporterer en forbindelse mellem

KRAS

mutationer og dårlig prognose [15], og nogle rapportering ingen sammenhæng [12]. Interessant, den største multicenter undersøgelse udført på sammenhængen mellem

KRAS

mutation og prognose, som omfattede 3439 CRC patienter, viste, at tilstedeværelsen af ​​en glycin-til-valin-mutation ved kodon 12 i

KRAS

signifikant nedsat progressionsfri og samlet overlevelse satser uanset behandling modtaget [16].

Vi søgte at belyse sammenhængen mellem

KRAS

mutationsstatus, clinicopathologic faktorer, prognose, metastaser mønster og overensstemmelse mellem den primære tumor og matchede metastaser hos patienter med metastaserende CRC.

Resultater

Patient Kendetegn

Vi retrospektivt analyseret prøver fra 110 primære tumorer og 110 tilsvarende metastatiske steder for tilstedeværelse af

KRAS

mutationer i codon 12 og 13. den mest almindelige metastatisk websted var leveren, som var det metastatiske websted i 93 prøver (84%). Lungen var den metastatiske sted i de resterende 17 prøver (16%). Metastaser optrådte synkront med det primære læsion i 57 tilfælde og metachronously i 53 tilfælde. Det primære tumorsted var colon i 79 patienter og endetarmen i 31 patienter. Patienten gruppe omfattede 32 kvinder og 78 mænd. Median alder var 64 år (29-86). Alle kræftformer var adenokarcinomer og blev gradueret efter WHOs kriterier (tabel 1).

KRAS

Mutationer og histopatologisk Parametre

Mutationer i

KRAS

blev påvist i 37 (34%) primære tumorer og i 40 (36%) relateret metastatiske læsioner, med en 94% stigning af overensstemmelse mellem primære og metastatiske prøver (kappaindeks 0,86). Uoverensstemmelse blev observeret hos 7 patienter. Fem patienter havde

KRAS

mutationer i metastaser (fire med levermetastaser og et med lungemetastaser) og vildtype

KRAS

i den primære tumor, mens de to andre patienter havde

KRAS

mutationer kun i den primære tumor (1 med levermetastaser og 1 med lungemetastaser)

Der var lidt varians mellem mutationen typen stede i den primære tumor og dens metastaser:. alle, men fire patienter havde samme mutation i både de primære og metastatiske prøver. De typer af mutationer er opsummeret i tabel 2. Der var ingen sammenhæng mellem typen af ​​mutationer og enhver klinisk-patologisk parameter.

Ingen associationer mellem

KRAS

mutationer og histopatologiske karakteristika blev observeret ( tabel 3).

KRAS

Mutationer og Prognose

Vores resultater viser lavere sygdomsfri overlevelse efter metastaser resektion hos patienter, hvis tumorer havde en

KRAS

punktmutation i den primære tumor; median sygdomsfri overlevelse var 12 måneder hos patienter med

KRAS

mutationer i deres tumorer og 18 måneder hos dem uden

KRAS

mutationer (p = 0,035) (Figur 1). Den multivariate analyse viste, at den mest betydningsfulde uafhængige prædiktor for sygdomsfri overlevelse var

KRAS

mutationsstatus (multivariat HR = 2,068; 95% CI, 1,136-3,766, P = 0,018) (tabel 4). Ingen association blev fundet mellem total overlevelse og

KRAS

mutationsstatus (figur 1).

Kurver for sygdomsfri overlevelse (A) og samlet overlevelse (B) i henhold til

KRAS

status.

KRAS

Mutationer og metastatisk site

muterede

KRAS

blev påvist i en højere andel af primære tumorer af Patiens med lungemetastaser end i dem med levermetastaser (59% vs. 32%, p = 0,054). Når stratificeret efter oprindelsen af ​​den primære tumor (tyktarmen eller endetarmen), af de 10

KRAS

-mutated primære tumorer hos patienter med lungemetastaser, 7 var colon oprindelse (70%), mens de andre 3 opstod i rectum (30%). Statistisk analyse viste, at colon primære tumorer hos patienter med lungemetastaser var signifikant mere tilbøjelige til at have

KRAS

mutationer end colon primære tumorer hos patienter med levermetastaser (P = 0,046), mens rektal primærvalg havde en lignende frekvens på

KRAS

mutationer hos patienter med lunge eller levermetastaser (tabel 5). For yderligere at undersøge tilstedeværelsen af ​​

KRAS

mutationer som indikator for lunge metastase, vi undersøgte også en serie af 120 patienter med inoperabel metastaserende CRC. De primære tumorer i disse patienter var blevet analyseret for tilstedeværelse af

KRAS

mutationer ved et centralt laboratorium før cetuximab administration. Af de 120 metastatiske patienter, 86 havde levermetastaser og 34 havde lungemetastaser. Derudover var der en tendens i retning af en højere andel af

KRAS

mutationer i primære tumorer hos patienter med lungemetastaser end i dem med levermetastaser, selvom det ikke nåede statistisk signifikans (56% vs. 38%; P = 0,1027). Når vi analyserede hele serien af ​​230 patienter, hyppigheden af ​​

KRAS

mutationer i de primære tumorer i patienter med lungemetastaser var signifikant højere sammenlignet med levermetastaser (57% vs. 35%, p = 0,006). Når patienterne blev stratificeret efter primær tumor oprindelse, kun patienter med colon primær tumor oprindelse viste en signifikant højere frekvens af

KRAS

mutationer i primære tumorer hos patienter med lungemetastaser i forhold til dem med levermetastaser (59% vs. 34 %;. P = 0,019) (tabel 6)

diskussion

prognosen for patienter med metastaserende CRC er forbedret siden indførelsen af ​​nye terapeutiske midler, såsom anti- EGFR-antistoffer [17]. Denne terapeutiske succes fremhæver betydningen af ​​at modvirke EGFR vej til at styre fremskreden sygdom. Afvigende aktivering af EGFR-vejen til tider sker ved mutations aktivering af

KRAS

. Nylige kliniske forsøg har vist, at tilstedeværelsen af ​​aktiverende mutationer i

KRAS

identificerer patienter, der er ikke responderede at cetuximab [13] eller panitumumab [14]. Faktisk er baseret på disse resultater, mutationsanalyse af

KRAS

er nu anbefalet af Den amerikanske Food and Drug Administration (FDA) før cetuximab eller panitumumab administration til patienter med metastaserende CRC. Mutationsanalyse af

KRAS

almindeligvis udført på den primære tumor, fordi det ofte er den eneste tilgængelige væv. Desuden er værdien af ​​at udføre denne analyse på den primære tumor yderligere understøttet af beviser for, at

KRAS

punktmutationer forekomme tidligt i CRC carcinogenese [10]. Men de seneste data viste en øget hyppighed af mutationer i lymfeknudemetastaser sammenlignet med deres tilknyttede primære tumorer [18]. Med dette i tankerne,

KRAS

i metastaserne er blevet foreslået det potentielle behov for rebiopsy og analyse af [9]. Andre nylige undersøgelser har rapporteret en høj grad af konkordans i

KRAS

mutationsstatus mellem primære tumorer og deres relaterede levermetastaser [11], [12], [19]. Resultaterne fra vores serie af 110 patienter er fuldstændig enige med disse rapporter, både i hyppigheden af ​​

KRAS

mutationer i primære tumorer, hvilket var 34% i vores undersøgelse, og i høj grad af overensstemmelse mellem primær tumorer og deres tilknyttede metastaser. Alle disse resultater bekræfter, at analysen af ​​

KRAS

mutationsstatus i den primære tumor er en passende surrogat markør for

KRAS

mutationsstatus i metastaser. Vores undersøgelse omfatter en analyse af både lever og lungemetastaser. Så vidt vi ved, er dette den første undersøgelse for at analysere primære kolorektale tumorer og deres relaterede lungemetastaser og korreleret

KRAS

mutationsstatus baseret på både klinisk-patologiske funktioner og overlevelsesdata. Leveren og lungerne er begge almindelige steder af CRC metastaser. Sekundært til deres respektive anatomiske fordeling blodkar, lungemetastaser er mere almindelige med rektale cancere og levermetastaser er hyppigere med tyktarmskræft. Men nogle tyktarmskræft patienter oplever lungemetastaser uden tegn på tidligere levermetastaser. Denne uforklarlig anatomiske mønster af metastase, observeret med stigende hyppighed på grund af mere præcise diagnoser baseret på højeffektive CT scanninger [20], tyder på en ejendommelig biologisk mekanisme af carcinogenese eller en speciel modtagelighed lungeparenkym til tumorer i disse patienter. Vores resultater viser en højere procentdel af

KRAS

mutationer i primære tumorer hos patienter med lungemetastaser sammenlignet med dem med levermetastaser (59% vs. 32%). Desuden, når vi stratificeret vores resultater baseret på den primære tumor site, kun tumorer af colon oprindelse havde en signifikant højere frekvens af

KRAS

mutationer i primære tumorer hos patienter med lungemetastaser. Derimod viste rektal primære tumorer en lignende frekvens på

KRAS

mutationer hos patienter med lungemetastaser end i dem med levermetastaser. For yderligere at analysere dette fund studerede vi en selvstændig serie af primære tumorer fra patienter med inoperabel metastatisk CRC og undersøgt forholdet mellem

KRAS

mutationsstatus i den primære tumor og stedet for tumormetastaser. Hos disse patienter,

KRAS

mutationsstatus i den primære tumor er tidligere analyseret for kliniske formål før cetuximab administration. Statistisk analyse af hele serien (230 patienter) viste, at

KRAS

er oftere muteret i de primære tumorer i patienter med lungemetastaser sammenlignet med patienter med levermetastaser (57% vs 35%, p = 0,006). Når resultaterne er stratificeret efter til stedet for den primære tumor, den analyse, vi udførte herunder alle 230 patienter bekræftede de resultater, vi opnåede med den mindre stikprøve på 110 patienter: at den signifikant øget hyppighed af

KRAS

mutationer i primære tumorer hos patienter med lungemetastaser blev begrænset til de primære tumorer, der stammer i tyktarmen. Dette fund tyder på, at EGFR-aktivering kan tillade colon tumorceller til reden fortrinsvis i lungeparenkymet undgå et indledende trin af levermetastaser. En tidligere undersøgelse, der evaluerede

KRAS

status i primære kolorektale tumorer og ikke-matchede lever- og lungemetastaser viste overensstemmende resultater med vores undersøgelse og afslørede en højere forekomst af

KRAS

mutationer i lungemetastaser end i levermetastaser (57% vs 50%) [21]. Men i denne undersøgelse, en stor forskel i

KRAS

aktivering mellem de primære og metastatiske tumorer kunne have været maskeret ved fraværet af relaterede primære og metastatiske prøver. Dette fund har klinisk betydning, fordi det kan føre til identifikation af patienter, der er mere tilbøjelige til at udvikle lungemetastaser baseret på

KRAS

analyse af den primære tumor. Disse patienter bør potentielt modtage en mere grundig klinisk oparbejdning, herunder en thorax scanning, hvilket ikke altid er inkluderet i standard kliniske oparbejdning for CRC.

Vores resultater viser også, at tilstedeværelsen af ​​

KRAS

mutationer er en uafhængig prognostisk faktor i forudsigelsen af ​​sygdomsfri overlevelse (nå statistisk signifikans). Konstitutiv aktivering af Ras-Raf-MAP-kinase-vejen er kendt, som giver det proliferative og udspredende fordel for tumorceller. Der eksisterer imidlertid uenighed om den prognostiske rolle KRAS-mutationer i CRC. Den største kliniske studie designet til at analysere den prognostiske værdi af

KRAS

status var RASCAL undersøgelse, som viste, at en glycin-til-valin mutation i codon 12 øgede risikoen for tilbagefald og død med 30%, uanset den form for terapi indgives [16]. Men en nylig undersøgelse udført med et lille antal patienter ikke gengive dette resultat og viste ikke nogen indflydelse på

KRAS

mutationer på overlevelse [12]. Således er den prognostiske værdi af

KRAS

mutationsstatus stadig kontroversielt. Vores resultater er i overensstemmelse med RASCAL studiet og foreslå en dårligere prognose for patienter med

KRAS

-mutated primære tumorer, med en signifikant sammenhæng mellem

KRAS

mutationsstatus og en kortere sygdomsfri overlevelse . Derimod blev ingen sammenhæng fundet mellem

KRAS

status og samlet overlevelse. Dette kan forklares ved administration af kemoterapi efter tilbagefald. Den multivariate analyse viser, at tilstedeværelsen af ​​

KRAS

mutationer er en uafhængig prognostisk faktor i forudsigelsen af ​​sygdomsfri overlevelse (nå statistisk signifikans), hvilket understreger relevansen af ​​

KRAS

mutationsstatus i den foreliggende serie af patienter. Angående en potentiel indflydelse af mutationen type på prognose, vores resultater, i modsætning til RASCAL undersøgelsen, viser ingen forskelle med hensyn til mutation type. Selvfølgelig den potentielle værdi af

KRAS

mutationer som en prognostisk faktor vist i denne undersøgelse skal tages med forsigtighed på grund af den begrænsede og særlige serier af patienter evalueret.

Sammenfattende, vores resultater tyder på, at

KRAS

-mutated primære CRC tumorer tendens til at metastaserer oftere til lungerne og er forbundet med en højere sats for tilbagefald efter resektion af metastaser. Dette resultat kunne være af klinisk interesse med hensyn til opfølgning af patienter med

KRAS

-mutated primære CRC tumorer, og dermed fortjener yderligere undersøgelse.

Metoder

Etik Erklæring

Etisk Komité La Paz Universitetshospital i Madrid, Spanien, godkendt den aktuelle undersøgelse. Alle patienter blev informeret og givet samtykke skriftligt.

egnede patienter

Et hundrede og ti patienter med metastaserende CRC med tilgængelige primær tumor og parrede metastatiske prøver blev udvalgt fra en database af patienter fra La Paz University Hospital i Madrid. Denne undersøgelse blev godkendt af sygehusets etiske komité. Patienterne blev diagnosticeret med metastaserende CRC mellem 1997 og 2007. Af de 326 tilfælde af metastatisk CRC diagnosticeret i denne periode, studere inklusion var begrænset til dem med helbredende metastaser resektion, tilgængelige vævsprøver (både fra den primære tumor og relaterede metastaser), tilgængelige opfølgende data efter metastaser fjernelse, og vellykket

KRAS

mutationsstatus analyse. Den mediane opfølgning efter operationen var 10 måneder (interval: 0-144 måneder). Alle tumorer blev histologisk bekræftet at være kolorektale adenokarcinomer. Desuden patologi rapporterne oplysninger om tumorstedet, tumorstørrelse, patologiske stadium tumorklassificering (baseret på graden af ​​histologiske differentiering), tilstedeværelse eller fravær af lymfeknudemetastase, tumorvækst mønster (infiltrativ eller ekspansiv), tilstedeværelse eller fravær af vaskulær og lymfe invasion, og nærvær eller fravær af tumor lymfocytiske infiltrater. Den primære fase er blevet klassificeret i 4 faser i henhold til WHO kriterier. Antallet og størrelsen af ​​metastaser blev bestemt ved diagnostisk billeddannelse, enten med abdominal og bækken computertomografi eller med magnetisk resonans. Metastase resektion blev udført, da der ikke var tegn på ekstra-leversygdom, sikrer nok fungerende resterende lever efter resektion (ca. 25% -30% af normal lever volumen) for at give leverfunktion postoperativt, justeres på grundlag af eksisterende leversygdom såsom skrumpelever eller hepatitis. Metastatiske prøver blev opnået fra enten leveren eller lungerne. Disse metastatiske prøver blev opnået fra enten synkrone eller metachronous læsioner. Patienterne fik en af ​​tre forskellige kemoterapi efter metastaser resektion (beskrevet i tabel 1).

Efter opdagelsen af ​​uoverensstemmelse mellem

KRAS

mutationer i lever- og lungemetastaser, en ekstra serie af 128 metastatiske CRC patienter (86 med levermetastaser, 34 med lunge metastase, og 8 med andre typer af mutationer (disse sidste 8 patienter blev ikke medtaget i den statistiske analyse) fra La Paz Hospital blev prospektivt indsamlet mellem 2007 og 2009, for at validere hypotesen af en højere

KRAS

mutationer hos patienter med lungemetastaser. Disse patienter havde inoperabel metastatisk sygdom.

KRAS

status i den primære tumor blev bestemt for kliniske formål forud for cetuximab administration. den eneste klinisk-patologiske data indsamlet for disse patienter var stedet for den primære tumor (colon vs endetarmen).

KRAS

analyse blev udført ved hjælp af TheraScreen K-RAS mutation testsæt (DXS Diagnostiske Innovations) af et uafhængigt centralt laboratorium i Madrid efter producentens anvisninger.

DNA Extraction

paraffinindlejrede primære tumorprøver (n = 110) og metastatiske tumorprøver (n = 110) indeholdende mindst 70% af tumorcellerne blev udvalgt til hver patient. Tissue blokke var makro-dissekeres ved hjælp af en sikkerhed kniv, når prøverne var mindre end 70% beriget med tumorceller. Metastatiske tumorer var placeret i leveren (n = 93) og lungerne (n = 17). DNA blev isoleret fra 15 7-um paraffinsnit. Vævssnit blev afparaffineret med xilol og rehydreret med nedgraderet alkoholer. Væv blev fordøjet med proteinase K, og DNA blev isoleret ved anvendelse af en MasterPure DNA Kit (Epicentre, Biotechnologies). I hvert tilfælde blev negative kontroller opformeret ved PCR og indgår i forsøget.

KRAS

Mutation Analyse

En polymerase-kædereaktion (PCR) blev udført for at forstærke 139 bp af exon 2 i KRAS bruger specifikke primere (venligst doneret af Dr. Laurent-Puig laboratorium) og under PCR betingelser tidligere [15] beskrevet. PCR primer sekvenser /betingelser er tilgængelige efter anmodning. Effektiviteten og kvaliteten af ​​amplificeringen PCR blev bekræftet ved at køre PCR-produkterne på en 2% agarosegel. En negativ kontrol, der indeholder alle komponenter af PCR bortset templaten blev inkluderet i hver PCR-reaktion. DNA amplificerede produkter blev oprenset under anvendelse af et QuickStep TM 2 96-brønds PCR Purification Kit (Edge Biosystems, Gaithersburg, MD), ifølge producentens anvisninger. Amplification produkter blev to retninger sekventeret via fluorescens farvestof terminator metode i en multi-kapillær DNA sequencer brug af ydelser fra den videnskabelige park i Madrid (Madrid, Spanien). Tilstedeværelse af mutation blev accepteret, da det kromatografisk top højde var 25% eller højere toppen af ​​vildtype reference.

Statistiske Analyser

Fishers eksakte test blev anvendt til at undersøge sammenhængen mellem

KRAS

mutationsstatus og forskellige klinisk-patologiske træk. Overensstemmelse mellem den primære tumor og beslægtede metastaser blev analyseret ved anvendelse af kappa-indekset, og uoverensstemmelse blev analyseret under anvendelse af McNemars test af symmetri. Sygdomsfri overlevelse og samlet overlevelse analyser blev beregnet efter den Kaplan Meier-metoden, og overlevelseskurverne blev sammenlignet ved hjælp af log-rank test. Sygdomsfri overlevelse blev defineret som tiden fra kirurgisk resektion af metastaser indtil tidspunktet for dokumenteret tumor progression eller død. En Cox proportionel risiko multivariat regressionsanalyse blev udført. P 0,05 blev betragtet som signifikant. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS-version 12.0 (Chicago, IL, USA).

Tak

Vi takker Esther Díaz og María de Miguel for ekspert teknisk bistand.