PLoS ONE: WNT7A forordning ved miR-15b i æggestokkene Cancer

Abstrakt

WNT signalering er godt kendt for at spille en vigtig rolle i reguleringen af ​​udvikling, celledeling og celledifferentiering i en bred vifte af normal og cancervæv. På trods af den rigdom af viden om, hvornår og hvor de forskellige

Wnt

gener udtrykkes og nedstrøms hændelser under deres kontrol, der er overraskende lidt offentliggjort dokumentation for, hvordan de er reguleret. Vi har for nylig rapporteret, at aberrerende WNT7A observeres i serøse ovariecarcinomer, og WNT7A er den eneste ligand accelererende ovarietumor progression gennem CTNNB1 (β-catenin) /TCF-signalering i fravær af CTNNB1 mutationer. I den foreliggende undersøgelse, rapporterer vi, at

WNT7A

er et direkte mål for

miR-15b

kræft i æggestokkene. Vi viste, at en luciferase reporter indeholder den formodede bindingssted på

miR-15b

i

WNT7A

3′-UTR blev signifikant undertrykt af

miR-15b

. Mutation af den formodede bindingssted

miR-15b

i

WNT7A

3′-UTR restaureret luciferaseaktivitet. Desuden

miR-15b

var i stand til at undertrykke øgede TOPFLASH aktivitet ved WNT7A, men ikke dem fremkaldt af S33Y. Derudover

miR-15b

dosisafhængigt faldt

WNT7A

udtryk. Når vi evaluerede den prognostiske betydning af

WNT7A

miR-15b

udtryk ved hjælp TCGA datasæt, en signifikant omvendt korrelation, hvor høj ekspression af

WNT7A

og lav udtryk af

miR-15b

var forbundet med reducerede overlevelsesrater for patienter med ovariecancer. Behandling med decitabin dosisafhængigt forøget

miR-15b

udtryk, og lyddæmpning af

DNMT1

signifikant forøget

miR-15b

udtryk. Disse resultater tyder på, at

WNT7A

er post-transkriptionelt reguleret af

miR-15b

, som kunne nedreguleret ved promotor hypermethylering, potentielt via DNMT1, i kræft i æggestokkene.

Henvisning: MacLean JA II, konge ML, Okuda H, Hayashi K (2016) WNT7A forordning ved miR-15b i kræft i æggestokkene. PLoS ONE 11 (5): e0156109. doi: 10,1371 /journal.pone.0156109

Redaktør: Kwong-Kwok Wong, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, UNITED STATES

Modtaget: Marts 21, 2016 Accepteret: 9 maj 2016; Udgivet: 19 maj, 2016

Copyright: © 2016 MacLean et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:.. Dette arbejde blev finansieret af National Institutes of Health CA179214

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

MicroRNA (miRNA) er små ikke-kodende RNA, der regulerer genekspression ved post-transkriptionel mRNA lyddæmpning. De der er reguleret af miRNA involverer en række biologiske pathways, og deres fejlregulering er et fælles træk ved human cancer [1-3]. MIR-15 familien omfatter seks meget konserverede medlemmer,

miR-15a

,

miR-15b

,

MIR-16-1

,

MIR-16- 2

,

miR-195

og

miR-497

, der er grupperet på tre forskellige kromosomer [4, 5].

miR-15a /16-1

klynge, blev oprindeligt rapporteret som målet for 13q14 sletninger eller nedregulering i kronisk lymfatisk leukæmi (CLL) [6]. Konkret

miR-15a

miR-16-1

direkte regulere

BCL2

, som er en anti-apoptotisk onkogen [7], og dermed fungere som tumorsuppressorer ved at inducere apoptose [8]. Yderligere undersøgelser har vist, at

miR-15a

miR-16-1

fungerer som formodede tumorsuppressorer ved at målrette

BCL2

,

BMI1 CCND1

,

MCL1

Wnt3a

i CLL, melanom, samt kolon, blære, æggestokkene og prostatakræft [4, 9, 10].

miR-15b-service /

miR-16-2

klynge, som er beliggende i 3q25, er også blevet rapporteret til at handle i tumor undertrykkelse ved at målrette

BCL2

,

BM1

,

CCND1

SUZ12

[11-13]. Reduktion af

MIR-15b

blev observeret i CLL, melanom, gastrisk og kemoresistent tunge cancer, samt cancer stamceller [11-15]. Sletning af

miR-15b

miR-16-2

fremmer B-celle patogenese [11]. Således de direkte mål for MIR-15 familiemedlemmer vil sandsynligvis være kritiske onkogener.

Vi har for nylig rapporteret, at opregulering af WNT7A (unikt blandt 19 Wnt ligander) resulterer i hurtigere udvikling og progression af kræft i æggestokkene (OvCa), og spiller en kritisk rolle i tumorudvikling medieret af WNT7A /CTNNB1 signalvejen [16, 17]. Vores undersøgelser indikerer endvidere, at

FGF1

er en direkte nedstrøms target i WNT7A /CTNNB1 signalering, og at denne vej har potentiale som et terapeutisk OvCa target [16]. En af vores resultater viste klart, at høj ekspression af

WNT7A

FGF1

blev korreleret i OvCa, især i serøse carcinomer, og generelt dårlig patient overlevelse [16]. , WNT7A koder således en potent onkogen faktor relevans for OvCa. Men vi ved stadig ikke kender svaret på, hvorfor WNT7A bliver specifikt overudtrykt i serøs OvCa.

I den foreliggende undersøgelse, rapporterer vi, at rigelige WNT7A, til stede i OvCa, er post-transkriptionelt nedreguleret af

miR-15b

. Til støtte for sin rolle i kræft hæmning, OvCa patienter havde dårlig samlet overlevelse i gruppen med høj ekspression af

WNT7A

og lav udtryk for

miR-15b

. Desuden er vores resultater viser, at DNMT1 modulerer

miR-15b

transskription gennem promotor methylering.

Materialer og metoder

Reagenser og plasmider

3′ UTR segmenter af det endogene

WNT7A

genet og dets mutantform blev amplificeret ved PCR og subklonet i pMIR-RAPPORT vektor (Thermo Fisher) under anvendelse af Spel og HindIII restriktionssites at generere pMIR-

WNT7A

og pMIR-

WNT7A

mutation 3′-UTR-holdige plasmider. Decitabin (5’aza-2′-deoxycytidin, alias: 5-aza-2′-dC),

mir

Vana miRNA mimic (negativ kontrol og HSA-miR-15b-5p), DNMT1 siRNAs, præ- miR-15b ekspressionskonstruktioner og Dual Luciferase Reporter Assay System blev købt fra Cayman Chemical, Thermo Fisher, Qiagen, System Biosciences og Promega henholdsvis.

Cellelinjer

OVCAR3, OVCAR5, SKOV3, og ES2 celler blev erhvervet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). OVCAR4 celler blev begavet fra Dr. Joanna Burdette (University of Illinois i Chicago). KURAMOCHI, OVKATE og OVSAHO blev købt fra JCRB celle bank (Osaka, Japan). SKOV3.ip1 celler blev indkøbt fra cellen bank på The University of Texas MD Anderson Cancer Center. Alle celler blev bekræftet af kort tandem repeat (STR) analyse og passeret inden for 6 måneder efter modtagelsen. Alle celler blev testet rutinemæssigt for celleproliferation og BrdU-inkorporering samt forurening med mycoplasma. Alle cellelinjer udviste lignende morfologi, karakteristiske vækstrater, og forblev negativ for forurening med mycoplasma i alle eksperimenter. OVCAR4, KURAMOCHI, OVKATE og OVSAHO celler blev dyrket i RPMI 1640 med 10% FBS og penicillin /streptomycin, og andre celler blev dyrket i DMEM med 10% FBS, 2 mM glutamin og penicillin /streptomycin. Alle cellelinier blev dyrket i en fugtig inkubator ved 37 ° C og konstant 5% CO

2.

Kvantitativ realtids-PCR (qPCR) assay

Totalt RNA blev ekstraheret fra celler , og cDNA blev syntetiseret fra total RNA ved hjælp af High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit fra Thermo Fisher. Relativ genekspression blev bestemt ved SYBR green (Bio Rad) inkorporering under anvendelse af en Bio-Rad myCycler som tidligere [18] beskrevne. Micro RNA blev ekstraheret fra celler under anvendelse Pure Link miRNA isolation kit (Thermo Fisher), og cDNA blev syntetiseret ved hjælp miScript II RT Kit (Qiagen). Relativ miRNA ekspression blev bestemt ved miScript SYBR Green PCR-kittet (Qiagen), og MIR-15b og SNORD68 specifikke primere (Qiagen). En tabel med oligonukleotider anvendt til hvert gen er præsenteret i S1 tabel.

celledeling og adhæsionsassays

celleproliferation, blev vedhæftning og migration analyser udføres efter vores tidligere beskrevne metoder [16, 17] . For at vurdere celleproliferation blev celler podet i 24-brønds plader og talt 24, 48 og 72 timer efter grevinde II FL Automated Cell Counter (Thermo Fisher) med trypanblå udelukkelse. For at vurdere celleadhæsion blev celler podet i 24-brønds plader og høstet efter 4 timers inkubation.

statistiske analyser

Alle eksperimentelle data blev udsat for envejs ANOVA og forskelle mellem de enkelte midler var testet af en Tukey multiple-range test med Prism 5.0 (Graphpad). QPCR data blev korrigeret for forskelle i prøve lastning ved hjælp af

RPL19

data som kovariat. Tests af betydning blev udført under anvendelse af de relevante fejlleddene ifølge forventningen om middelkvadraterne for fejl. En p-værdi på 0,05 eller derunder blev betragtet som signifikant. Data er præsenteret som betyder med standardfejl af middel (SEM). Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at beregne overlevelsesrater og blev evalueret ved log-rank test med en TCGA datasæt blev TCGA-OV, der indeholdt 554 primære tumorer i æggestokkene med afsluttede datasæt, udvalgt til overlevelse analyse.

resultater

WNT7A udtryk i OvCa celler afhængigt af genetiske baggrund eller funktioner

Når vi rapporteret den kliniske betydning af WNT7A under malign transformation af OvCa viste vores resultater, at

WNT7A

blev højt udtrykt i serøse carcinomaer, den mest almindelige /aggressive undertype af OvCa [16, 17]. Således kunne afvigende WNT7A induceres ved unormal genetiske baggrund eller korreleret med aggressive tegn i OvCa. Når vi undersøgte

WNT7A

ekspressionsniveauer i OvCa celler, rigelige

WNT7A

( 1000 gange) blev observeret i invasive eller high-grade serøse OvCa celler (SKOV3.ip1, KURAMOCHI, OVCAR4 og OVSAHO, S1 fig). Bemærk: KURAMOCHI, OVCAR4 og OVSAHO celler er for nylig blevet bekræftet som high-grade serøse OvCa cellelinjer ved genomisk profilering [19]. SKOV3.ip1 celler besidder yderst invasive og metastatiske funktioner, da disse celler isoleres fra ascitesvæskerne [20]. ES2, OVCAR3 og OVCAR5 celler besidder genomiske profiler, der delvist ligner serøse OvCa tumorer.

WNT7A er et direkte mål for miR-15b

Vi undersøgte transkriptionel aktivering af

WNT7A

promotor ved hjælp af luciferase reporter analyser, men vores sletning analyser afslørede ingen kritiske steder eller potentielle regulatorer inden for en afstand på 10 kb op- eller ned-stream af

WNT7A

promoter (data ikke vist) . Derfor er vi udsat for

WNT7A

3′-UTR til en i silico analyse ved hjælp af 3 forskellige algoritmer (Targetscan, PicTar og Miranda) at identificere formodede miRNA frø-matchende sekvenser. Alle tre søgemaskiner opdaget

miR-15a

,

miR-15b

MIR-195

konsensus bindende sekvenser (Fig 1A) i 3′-UTR af

WNT7A

(fig 1B). Vi næste evaluerede prognostiske effekt af

WNT7A

og /eller

miR-15b

udtryk ved hjælp TCGA datasæt (total patient nummer er 554). Mens høj ekspression af

miR-15b

(n = 278) viste en god prognose (P = 0,0394) sammenlignet med lavt udtryk for

miR-15b

(n = 276),

WNT7A

viste ingen korrelation (høj ekspression af WNT7A, n = 279 vs. lav = udtryk for WNT7A, n = 275, P = 0,2364). En signifikant omvendt korrelation, hvor høj ekspression af

WNT7A

og lav udtryk for

miR-15b

(n = 147 vs n = 146 af lav-ekspressionen af ​​

WNT7A

og høj ekspression af

miR-15b

) var forbundet med nedsat overlevelsesraten for patienter med ovariecancer ved log-rank test (P = 0,0297, figur 1C). BEMÆRK: høj ekspression af

WNT7A

/

miR-15b

n = 132 og lav ekspression af

WNT7A

/

miR-15b

n = 129 blev ikke medtaget i omvendt korrelationsanalyse. Der blev imidlertid ikke omvendt korrelation ses mellem

WNT7A

miR-15a

eller

miR-197 Hotel (data ikke vist). Derfor har vi fokuseret på

miR-15b

for yderligere analyser. Derudover undersøgte vi den omvendte korrelation mellem

BCL2

miR-15b

, som

BCL2

er en af ​​de velkendte mål for miR-15 familie og fungerer som et onkogen. Men ingen signifikant sammenhæng mellem

BCL2

miR-15b

om overlevelsesraten for æggestokkene kræftpatienter bruger TCGA-OV datasæt (P = 0,2760) blev observeret, hvilket antyder, at

WNT7A

er en mere relevant kritisk mål for

miR-15b

med hensyn til OvCa.

(a) Bioinformatik forudsigelse af miRNA samspil med seedede sekvenser fra 3′-UTR af

WNT7A

hjælp af tre forskellige algoritmer. (B) Skematisk af formodede

miR-15b

bindende sekvens i

WNT7A

3′-UTR. (C)

WNT7A

eller

BCL2

miR-15b

udtryk omvendt korrelerer med overlevelse beregnet TCGA-OV datasæt (i alt n = 554, høj

WNT7A

/

miR-15b

, n = 132; høj

WNT7A

/lav

miR-15b

, n = 147; lav

WNT7A

/høj

miR-15b

, n = 146; lav

WNT7A

/

miR-15b

, n = 129) af Kaplan-Meier-metoden ved hjælp af Prism 5.0. P-værdi blev bestemt af den lange rank test.

Vi brugte Targetscan 7.0 [21], for at identificere

miR-15b

målsteder i

WNT7A

3′-UTR og fundet en formodet

miR-15b

bindingssted (fig 1B). For at undersøge, om

miR-15b

binder sig til denne sekvens blev OvCa celler transficeret med pMIR-RAPPORT plasmid indeholdende formodede bindingssted på

miR-15b

i

WNT7A

3′-UTR, og

mir

Vana miRNA mimic (negativ kontrol eller MIR-15b), og derefter luciferase reporter-aktivitet blev målt (fig 2A). Luciferaseaktivitet blev signifikant undertrykt af

MIR-15b

forhold til negativ kontrol. I den tidligere undersøgelse har vi vist, at WNT7A aktiverer den kanoniske CTNNB1 signalvejen [16, 17]. For at afgøre, om

miR-15b

hæmmer WNT7A indsats, vi undersøgte CTNNB1 transkriptionel aktivitet med TOPFLASH reporter konstruktion (figur 2B). Vi fandt, at

miR-15b

betydeligt undertrykt TOPFLASH reporter aktivitet. Når TOPFLASH aktivitet blev forøget med WNT7A eller S33Y-muteret CTNNB1 (en etableret positiv kontrol for aktivering af TOPFLASH reporter) i ES2 celler, at ydmyge eller undetectably besidder endogene WNT7A,

miR-15b

var i stand til at undertrykke øget niveauer af TOPFLASH aktivitet ved WNT7A, men ikke dem fremkaldt af S33Y (fig 2B). Desuden mutation af formodede bindingssted

miR-15b

i

WNT7A

3′-UTR (5’TGCTGCT3 “til 5’TaaTGCT3«) genoprettede luciferaseaktiviteten tidligere undertrykt af

miR-15b

(fig 2C). Til støtte for disse resultater,

miR-15b

dosisafhængigt faldt

WNT7A

mRNA-niveauer i OvCa-celler (figur 3). Disse resultater tyder på, at

WNT7A

udtryk er direkte reguleret af

miR-15b

i OvCa. Fordi

BMI1

BCL2

er blevet rapporteret som target gener af

miR-15b

i kræft [12, 13], deres mRNA-niveauer i OvCa blev også undersøgt. Mens

miR-15b

var i stand til at mindske

BCL2

,

BMI1

blev ikke reguleret af

miR-15b

i OvCa celler.

(A) Luciferase reporter analyse af

WNT7A

3′-UTR i SKOV3.ip1 og OVSAHO celler 48 timer efter transfektion af

miR-15b

eller negativ kontrol efterligne. Forskellige bogstaver angiver reporter aktiviteter, der har statistisk signifikant (P 0,05) forskelle i middelværdier aktiviteter. (B) TOPFLASH reporter analyse i SKOV3.ip1 og OVSAHO celler 48 timer efter transfektion af

MIR-15b

eller negativ kontrol efterligner (venstre). TOPFLASH reporter analyse i ES2 celler 48 timer efter transfektion af

miR-15b

efterligner, WNT7A eller S33Y med negative kontroller (efterligner eller pcDNA3.1, højre). (C) Luciferase reporter analyse af

WNT7A

3′-UTR, mutation af

WNT7A

3′-UTR eller pMIR-RAPPORT vektor i SKOV3.ip1 og OVSAHO celler 48 timer efter transfektion af

miR-15b

eller negativ kontrol efterligne.

data blev sat til baggrund på 1 i forhold til at styre niveauer. Forskellige bogstaver angiver udskrifter, der har statistisk signifikant (P 0,05). Forskelle i gennemsnitlige ekspressionsniveauer

MIR-15b hæmmer celledeling og vedhæftning

rolle

miR- 15b

som en tumor suppressor er blevet karakteriseret, som tab af

mIR-15b

i mus fører til udvikling af B-celle-malignitet [11], og overekspression af

mIR-15b

undertrykker udbredelse metastaser hjælp tungen kræft xenografter [12]. I den foreliggende undersøgelse

MIR-15b

overudtrykkende OvCa celler blev tidsafhængigt mindre proliferativ (Fig 4A), og reduceret celleadhæsion (Fig 4B), hvilket indikerer, at

MIR-15b

fungerer også som tumorsuppressor i OvCa.

(A) Cell proliferation eller (B) vedhæftning med enten

miR-15b

udtrykke eller kontrol celler.

mIR-15b er reguleret af promotor hypermethylering

Vores nuværende resultater tyder på, at rigelig udtryk for

WNT7A

er sandsynligvis fremkaldt på grund af nedregulering af

miR-15b

. Den prognostiske betydning af OvCa patienter med omvendt korrelation af

WNT7A

miR-15b

yderligere understøtte denne hypotese. Derfor testede vi muligheden for, at

miR-15b

måske nedreguleret i OvCa gennem promotor hypermethylering. Behandling med en inhibitor af DNMTs, 5-aza-2’dC, dosisafhængigt forøget

miR-15b

udtryk og faldt

WNT7A

udtryk i OvCa celler (Fig 5A). Når vi undersøgte ekspressionsniveauerne af tre aktive DNMT isoformer (

DNMT1

,

DNMT3A

og

DNMT3B

) i 5-aza-2’dC (5 uM) behandlede OvCa celler, kun

DNMT1

blev reduceret i SKOV3.ip1 og OVCAR4 celler (fig 5B), hvilket indikerer, at DNMT1 kunne være funktionelt at methylere

miR-15b

. Faktisk nedregulering af

DNMT1

signifikant forøget

miR-15b

udtryk i OvCa celler (Fig 5C), tyder på, at

miR-15b

er potentielt nedreguleret, især i høj WNT7A-udtrykkende celler, ved promotor hypermethylering via DNMT1 i OvCa.

(A) 5-aza-2′-dC behandling inducerer

miR-15b

udtryk (til venstre) og aftager

WNT7A

udtryk (til højre) i OvCa celler. Cellerne blev behandlet med 5-aza-2′-dC i 3 dage, og

miR-15b

eller

WNT7A

blev vurderet ved qPCR forhold til 0 pM kontrol (sat til baggrundsniveauet for 1 i hver celle). Forskellige bogstaver angiver transkripter, der har statistisk signifikant (P 0,05). Forskelle i gennemsnitlige ekspressionsniveauer

Diskussion

WNT signalering er godt kendt for at spille en vigtig rolle i cancer biologi [22 ]. Mens CTNNB1 er nøglen mediator af WNT signalering, har vi påvist, at WNT7A er den eneste ligand aktiverende intakt CTNNB1 /TCF signalering (dvs. i celler, der mangler aktivering ved mutation af CTNNB1), især den serøse OvCa subtype [16, 17]. På trods af den rigdom af viden om angivelse af forskellige Wnt ligander og downstream begivenheder under deres kontrol, der er overraskende lidt offentliggjort dokumentation for, hvordan

Wnt

gener reguleres, og hvorfor nogle medlemmer er opreguleret i specifikke tumortyper. For nylig,

Wnt3a

, som fremmer tumorigenese via accelereret cellulær proliferation og invasion [23], viser sig at være reguleret direkte af

miR-15a /16-1

klynge, og opregulering af

Wnt3a

er omvendt korreleret med nedsat

miR-15a

miR-16-1

i avanceret prostata tumorer [10]. I den foreliggende undersøgelse, bioinformatik frø-matchende programmer identificeret tre højt konserverede miR-15 familiemedlemmer,

miR-15a

,

miR-15b

miR-195

, som kunne være kritiske regulatorer af

WNT7A

. Men hverken

miR-15a

heller

miR-195

udstillet betydelige omvendte korrelationer med

WNT7A

i OvCa patient overlevelse datasæt. ,

WNT7A

udtryk er således mest sandsynligt underlagt regulering af

miR-15b

i OvCa.

Tidligere arbejde i CLL har vist tumor suppressor aktivitet

miR-15a /16-1

klynge er afhængig af undertrykkelse af

BCL2

[8].

BCL2

er også blevet rapporteret som et direkte mål for

miR-15b

bruge en model af narkotika resistente gastriske cancerceller [13]. Det er blevet karakteriseret som

miR-15b /16-2

knockout mus udvikler B-celle malignitet, mens BCL2 svagt opreguleret i B-celler fra knockout mus [11]. Vores resultater viste, at

miR-15b

undertrykt

BCL2

udtryk i OvCa celler. Men ingen invers korrelation mellem

BCL2

miR-15b

blev observeret i analysen af ​​patientens overlevelse i OvCa. Disse resultater tyder på, at reguleringen af ​​BCL2 af

miR-15b

har mindre indvirkning på æggestokkene tumorigenese.

handlinger

miR-15b

som en tumor suppressor er blevet klart påvist i patogenesen af ​​B-celler i CLL [11]. Desuden overekspression af

miR-15b

hæmmer udbredelsen metastase via epitel-mesenkymale overgang i modellen af ​​kemoterapi tungen kræft celle xenografter [12]. Nedregulering af

miR-15b

forekommer i brystkræft stamceller, og overekspression af

miR-15b

hæmmer deres vækst og differentiering [15]. Inhibering af celleproliferation målretning af cyclin D1, og induktion af apoptose ved

MIR-15b

er også rapporteret [11-14, 24]. Vores resultater yderligere støtte

miR-15b

‘s tumorsuppressorfunktion og tilføje hæmning af OvCa celledeling og celleadhæsion til sin liste over relevante tumorer.

I den foreliggende undersøgelse, viste vi, at 5-aza-2′-dC, en inhibitor af DNMT aktivitet, øget

miR-15b

udtryk. Tilsvarende faldt

DNMT1

blev observeret ved behandling af 5-aza-2′-dC, og lyddæmpning af

DNMT1

øget

miR-15b

i OvCa celler. Øget DNMT1 niveauer er blevet rapporteret i OvCa, med lavere udtryk i primære fase I /II tumorer og peak udtryk forekommer på stadie III /IV [25]. DNMT1-medieret promotor hypermethylering inducerer reduktion af E-cadherin og skrider invasiv træk ved OvCa [26]. Der er én rapport undersøger sammenhængen mellem ændring i kopi nummer på den kromosomale placering af

miR-15b

og ændringerne i

status miR-15b

promotor methylering for bryst-, ovarie-, hoved og hals , lunge og nyre cancer under anvendelse TCGA datasæt [27]. Denne gruppe fundet signifikant sammenhæng mellem

miR-15b

udtryk og kopiere nummer variation på disse loci, samt mellem

miR-15b

udtryk og methylering niveauer i de relevante typer kræft og de fælles data fra alle typer kræft. Bemærk: Der er ingen methylering data er tilgængelige for kræft i æggestokkene i TCGA (kun udtryk og kopi nummer ændring). Endvidere promotorområdet af

MIR-16-2

, som er til stede i en klynge med

MIR-15b

lokaliseret på kromosom 3q25, methyleres i polycytæmi vera CD34 + celler [28]. Selvom den epigenetiske regulering af

miR-15b

i OvCa stadig at blive undersøgt, kan DNMT1 være en af ​​de regulerende myndigheder til at undertrykke

miR-15b

.

Sammenfattende vi fandt, at

WNT7A

direkte reguleret af

miR-15b

i OvCa. Som WNT7A aktiverer tumorvækst og progression i OvCa via WNT7A /CTNNB1 signalvejen [16, 17], nedregulering af

miR-15b

tillader afvigende

WNT7A

udtryk er yderligere understøtte virkningen af ​​WNT7A og dens mekanismer i OvCa.

Støtte Information

S1 fig. . Relative

WNT7A

udtryk blev vurderet ved qPCR i OvCa celler

Data udtrykkes som fold over ES2 ekspressionsniveauerne, som var den nærmeste baggrund og arbitrært sat til 1.

doi: 10,1371 /tidsskrift. pone.0156109.s001

(EPS)

S1 Table. Primere til qPCR

doi: 10,1371 /journal.pone.0156109.s002

(PDF)

Tak

Vi takker Dr. Manjeet Rao (The University of Texas Health Science Center ved San Antonio) for at give pMIR-RAPPORT vektor, og Dr. Joanna Burdette (University of Illinois i Chicago) for at levere de OVCAR4 celler.