PLoS ONE: 20 (S) -Protopanaxadiol Hæmning af Progression og Vækst af kastrationsresistent Prostata Cancer

Abstrakt

kastrationsresistent progression af prostatacancer efter androgen afsavn behandlinger fortsat det mest kritiske udfordring i den kliniske ledelse af prostatacancer. Genopståen androgen receptor (AR) -aktivitet er en etableret drivkraft for kastrationsresistent progression, og opregulering af fuld-længde AR (AR-FL) og konstitutivt aktive AR splejsningsvarianter (AR-Vs) er blevet impliceret at bidrage til den genopståede AR-aktivitet. Vi rapporteret tidligere, at ginsenoside 20 (S) -protopanaxadiol-aglycon (PPD) kan reducere forekomsten af ​​både AR-FL og AR-Vs. I den foreliggende undersøgelse viste desuden vi, at virkningen af ​​PPD på AR ekspressions- og målgener var uafhængig af androgen. PPD behandling resulterede i en undertrykkelse af ligand-uafhængig AR transaktivering. Desuden PPD forsinket kastrationsresistent genvækst af LNCaP xenotransplantattumorer efter androgen deprivation og hæmmede væksten af ​​kastrationsresistent 22Rv1 xenotransplantattumorer med endogen udtryk for AR-FL og AR-Vs. Dette var ledsaget af et fald i serum prostata-specifikke antigen niveauer samt et fald i AR niveauer og mitose i tumorer. Især de 22Rv1 xenotransplantattumorer var resistente over for vækstinhibering af den næste generation af anti-androgen enzalutamide. Den foreliggende undersøgelse er den første til at vise den prækliniske effekt af PPD inhibering kastrationsresistent progression og vækst af prostatacancer. Resultaterne giver et rationale for at videreudvikle PPD eller dets analoger for prostatakræft terapi

Henvisning:. Cao B, Qi Y, Yang Y, Liu X, Xu D, Guo W, et al. (2014) 20 (S) -Protopanaxadiol Hæmning af Progression og Vækst af kastrationsresistent prostatakræft. PLoS ONE 9 (11): e111201. doi: 10,1371 /journal.pone.0111201

Redaktør: Jindan Yu, Northwestern University, USA

Modtaget: Juni 24, 2014, Accepteret: September 23, 2014; Udgivet: November 6, 2014

Copyright: © 2014 Cao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Cancer Institute of National Institutes of Health give R01CA188609, Department of Defense giver W81XWH-12-1-0112 og W81XWH-12- 1-0275, National Natural Science Foundation of China projekter 81.272.851, 30.973.587, 81.102.383, 81.302.206, og 81.430.087, Louisiana Board-of-Regents Grant LEQSF (2012-15) -Rd-A-25, Louisiana Cancer Research Consortium Fund, Tulane Cancer center Developmental Fund, og Tulane University School of Medicine Pilot Fund og Bridge Fund. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

androgen afsavn terapi, som forstyrrer androgen receptor (AR) signalering gennem kastration eller AR-antagonister, er den første linje behandling for dissemineret prostatacancer. Imidlertid progression til den for tiden uhelbredelig etape, betegnet kastrationsresistent prostatacancer (CRPC), uvægerligt forekommer [1]. Genopståen AR-aktivitet er en etableret drivkraft for terapeutisk svigt og kastrationsresistent progression [2], [3]. Prostatacancer kan tilpasse sig til androgen deprivation terapi ved at mutere AR, amplifikation /overekspression AR, opregulering konstitutivt aktive AR splejsningsvarianter (AR-Vs), som mangler det ligandbindende domæne, aktivering AR ved androgen-uafhængige mekanismer, og /eller forøge intra -tumoral androgen niveauer gennem

de novo

androgen syntese [4] – [17]. Som følge heraf er AR reaktiveret i CRPC selvom tumoren ikke længere reagerer på androgen deprivation terapi.

Flere nye lægemidler rettet mod AR reaktivering i CRPC er blevet udviklet, og to af disse er blevet godkendt af FDA til behandling af metastatisk CRPC,

dvs.

, androgen biosyntese inhibitor abirateron og potent AR antagonist enzalutamide [18], [19]. De indvarslede en ny æra af prostatakræft behandling. Men mange patienter meddelte terapi-resistent sygdom, og de fleste indledende responders udviklet resistens inden måneders terapi indledning, igen ledsaget af forøget prostataspecifikt antigen (PSA), hvilket indikerer reaktiveret AR signalering [18], [19]. En potentiel mekanisme af resistens over for abirateron og enzalutamide er blevet tilskrevet forøget ekspression af fuldlængde-AR (AR-FL) og AR-Vs [20] – [24]. Overekspression af AR-FL blev vist at sensibilisere receptoren for lave niveauer af androgen [25] og for at konvertere prostatakræft vækst fra en kastration-følsom over for en kastrationsresistent fase [10]. Forøget ekspression af AR-Vs blev vist at bibringe kastrationsresistent vækst af prostatatumorer [14], [15], [26] – [28], og at korrelere med ringe overlevelse af CRPC patienter [29]. Banker ned AR-FL eller AR-Vs af shRNA i xenograftmodeller kan forsinke progressionen af ​​prostatacancer til kastration resistens og /eller undertrykke væksten af ​​prostata tumor, der allerede nået til kastrationsresistent tilstand [15], [30] , [31]. Derfor bør terapeutiske metoder, der kan mindske tilgængeligheden af ​​både AR-FL og AR-Vs tilbyde betydelig fordel i at forebygge og hæmme prostatakræft tilbagefald efter androgen deprivation terapi.

ginseng rod er en af ​​de mest commonly- brugte lægeurter i den vestlige verden, især for kræft foranstaltninger [32]. Ginsenosides der betragtes som de vigtigste farmakologisk aktive ginseng bestanddele [33]. Vi har tidligere rapporteret, at en primær intestinal metabolit af ginsenosides, 20 (S) -protopanaxadiol-aglycon (PPD), er effektiv til nedregulering af ekspressionen og aktiviteten af ​​AR, herunder både AR-FL og AR-Vs, i humane prostatacancerceller [ ,,,0],34]. Faldet i AR-ekspression skyldes PPD-medieret reduceret transskription af AR genet, og øget proteasom-medieret nedbrydning af AR-FL og AR-V-proteiner [34]. Vi viste desuden, at PPD inhiberede også AR ekspression i prostata xenotransplantattumorer men ikke i de normale vært prostata [34]. I den foreliggende undersøgelse vurderede vi præklinisk potentialet for anvendelse af PPD at forbedre det terapeutiske resultat af androgen deprivation terapi.

Materialer og metoder Salg

cellelinier og reagenser

LNCaP og 22Rv1 celler blev opnået fra American Type Culture Collection i Passage 4. CWR-R1-celler blev tilvejebragt af Dr. Elizabeth M. Wilson og dyrket som beskrevet [35]. Celler, der anvendes i denne undersøgelse, var inden for 20 passager (~ 3 måneder af ikke-kontinuerlig dyrkning). PPD blev opnået fra Organic Chemistry Laboratory på Jilin Universitet, Changchun, Kina. Forbindelser af renhed på 98%, bestemt ved højtydende væskekromatograf, blev brugt i cellekultur-studier, og at der i 95% blev anvendt i dyreforsøg. Enzalutamide blev købt fra Selleck kemikalier (Houston, TX), og renheden af ​​ 99% blev bekræftet ved kernemagnetisk resonans

Western Blotting

Proceduren blev beskrevet tidligere [36].. Immunreaktive bånd blev kvantificeret ved densitometri og normaliseret til glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase (GAPDH). Følgende antistoffer blev anvendt:. Anti-GAPDH (Millipore), anti-AR (Millipore), og anti-AR-V7 (Precision Antibody)

Kvantitativ Reverse Transcription-PCR (QRT-PCR)

QRT-PCR blev udført som beskrevet [37]. De qPCR primer-probe sæt til PSA, transmembrane protease, serin 2 (TMPRSS2), og cyklin A2 (CCNA2) var fra IDT. Primersekvenserne for AR isoformer var som beskrevet [15].

reportergenassay

androgen-responsive element (ARE) -luciferase reporter plasmid, der indeholder tre gentagelser af ARE region ligeret i tandem til ildflueluciferase reporter [38], blev anvendt til måling AR

trans

-activating aktivitet. Det blev forbigående co-transficeres i celler med PRL-TK

Renilla

luciferase konstruktion (Promega) ved 20:01 forhold som beskrevet [39]. Dual luciferase assay blev udført pr producentens instruktion (Promega), og aktiviteten af ​​ildflue luciferase blev normaliseret til det færdige

Renilla

luciferase.

Tumor xenograftmodeller

Male nøgne mus blev opnået fra NCI Animal Production center på 5-6 ugers alderen. For kastrationsresistent progression model af LNCaP-tumorer blev mus inokuleret subkutant med 4 × 10

6 LNCaP-celler suspenderet i 50% Matrigel på højre flanke efter en uges tilpasning. Når tumorstørrelsen nåede ~ 100 mm

3, kastration blev udført

via

en scrotal tilgang. Dagen efter kastrering blev musene tilfældigt inddelt i to grupper og fik 40 mg /kg PPD i olivenolie eller olivenolie som kontrol gennem oral sondeernæring 6 dage om ugen. For kastrationsresistent 22Rv1 tumormodel blev mus kirurgisk kastreret efter en uges tilpasning, og fik lov til at komme sig i 3 dage, før de blev inokuleret subkutant med 4 × 10

6 22Rv1 celler på højre flanke. Dagen efter podning blev musene randomiseret og placeret på samme behandlingsregimer som beskrevet for LNCaP model. Tumordimensionerne og legemsvægte blev målt hver anden uge og ugentligt hhv. Tumor volumen blev beregnet som

0,524 x bredde

2 x længde

[40]. Ved afslutningen af ​​forsøget blev mus bedøvet med Ketamin /Xylazin, blod indsamles til serum PSA bestemmelse ved hjælp af kvantitativ ELISA (United Biotech), og aflivet ved CO

2. Tumorer blev fjernet, vejet og fikseret i 10% formalin i paraffin indlejring og histologiske analyser. Alle dyreforsøg blev godkendt af Tulane University Institutional Animal Care og brug Udvalg.

AR Immunohistokemiske Analyser

Immunhistokemi blev udført som beskrevet tidligere [34]. Som negativ kontrol blev det primære antistof erstattet med en ikke-immun IgG ved den samme koncentration, og blev detekteret nogen reaktivitet. Farvede sektioner blev scannet ved hjælp af Aperio ScanScope Scanner, og digitaliserede billeder blev analyseret med Aperio WebScope-integrerede algoritmer. For AR farvning blev billeder udtaget sekventielt gennem hver sektion med områder med nekrose, forberedelse artefakter, og kanter undgås. Intensiteten af ​​nuklear farvning blev kategoriseret til stærke, svage eller negative som bestemt ved Aperio Nuclear V9 algoritme. Phospho-histon H3-farvning blev kvantificeret som beskrevet [41]. Fem tilfældige mikroskopiske felter blev fanget for hver tumor sektion ved 10x forstørrelse, og antallet af phospho-histon-H3-positive celler blev manuelt talt.

Statistisk analyse

Den studerendes tosidet t test blev anvendt til at bestemme de gennemsnitlige forskelle mellem behandling og kontrol. Data er præsenteret som gennemsnit ± SEM.

Resultater

PPD nedregulering af AR-FL og AR-Vs i Androgen-berøvet Betingelse

Vi først vurderede effekten af ​​PPD på AR-FL og AR-V-protein-niveauer i kastrationsresistent 22Rv1 og CWR-R1 celler dyrket i androgen-berøvet tilstand. Disse to cellemodeller ekspres AR-FL sammen med tre -80-kDa store AR-Vs, nemlig AR-V7, AR-V1 (aka AR4), og AR-V4 (aka AR5) [15], [16]. Western blot analyser blev udført med et antistof, der genkender alle AR isoformer eller specifikke for AR-V7. Som den mest rigelige og aktive AR-V i cellerne [15], AR-V7 er den eneste AR-V, hvortil et specifikt antistof er blevet udviklet. Som vist i figur 1A og 1B, PPD nedreguleret både AR-FL og AR-Vs i en tidsafhængig måde, med ændringen i AR-Vs ligner den i AR-FL i 22Rv1 celler, men en smule større end den for AR -FL i CWR-R1-celler. Vi derefter undersøgt virkningen af ​​PPD på mRNA-niveauer af forskellige AR isoformer i disse celler dyrket i androgen-berøvet tilstand ved QRT-PCR. Som vist i figur 1C og 1D, PPD behandling også reduceret AR-FL og AR-V transkripter i begge cellemodeller. Interessant nok blev en beskeden, men statistisk signifikant stigning af AR-V1-ekspression observeres ved den tidlige tidspunkt i 22Rv1 celler. Imidlertid blev stigningen ikke opretholdes med længere behandling. Disse resultater indikerer, at PPD kan inhibere ekspressionen af ​​AR-FL og AR-Vs i androgen-berøvet tilstand

A B. Western blot-analyse af AR-proteiner med et antistof, der genkender alle AR isoformer eller specifikke for AR-V7 i 22Rv1 (A) eller CWR-R1-celler (B). Tallene i tabellerne angiver relative normaliserede intensiteter af AR proteinbånd i sammenligning med kontrolgruppen værdi på 100. C. QRT-PCR-analyse af mRNA-niveauer af AR-FL og AR-Vs i 22Rv1 celler. *,

P

0,05 fra kontrol. Celler blev dyrket i androgen-berøvet tilstand. PPD, 20 ug /ml. Fejl barer, SEM.

PPD Undertrykkelse af androgen-uafhængige AR aktivitet

AR-Vs mangler ligand-bindende domæne og besidder androgen-uafhængige konstitutive aktivitet [15], [16 ], [42]. PPD nedregulering af AR-Vs ville forventes at føre til undertrykkelse af androgen-uafhængig AR transaktivering. Vi dermed vurderede virkningen af ​​PPD på AR-aktivitet i 22Rv1 celler dyrket i androgen-berøvet tilstand ved reportergenanalysen. Som vist i figur 2A, blev androgen-uafhængig AR transaktivering deprimeret af PPD som en funktion af tiden. Ved 6 og 12 timer efter PPD behandling blev aktiviteten inhiberet med 36% og 66%, hhv. Vi fortsatte med at undersøge effekten af ​​PPD på endogene AR-målgener, den kanoniske mål PSA og TMPRSS2 samt AR-V-specifikt mål CCNA2 [20], [43], ved QRT-PCR på samme betingelse. I overensstemmelse med reportergenet resultat, alle mål (figur 2B 2C) viste en tidsafhængig reduktion af ekspression. Samlet set data påviste evnen hos PPD at inhibere androgen-uafhængig AR-FL og AR-V aktiviteter.

A. Reportergenassay viser PPD hæmning af androgen-uafhængige

trans

-activating aktivitet AR. 22Rv1 celler blev co-transficeret med ARE-luciferase-konstruktion og pRL-TK konstruktion, og aktiviteten af ​​den ildflueluciferase blev normaliseret ved det færdige

Renilla

luciferase. B C. QRT-PCR-analyser viser PPD formindske ekspressionen af ​​den kanoniske AR mål PSA og TMPRSS2 (B) og AR-V-specifikt mål CCNA2 (C) i 22Rv1 celler. *,

P

0,05 fra kontrol. Celler blev dyrket i androgen-berøvet tilstand. PPD, 20 ug /ml. Fejl barer, SEM.

PPD Hæmning af kastrationsresistent Progression af LNCaP tumorer

Vi derefter evaluerede effekten af ​​PPD på prostatakræft tilbagefald efter androgen deprivation terapi i LNCaP xenograft model . LNCaP er en androgen-afhængig human prostatacancer-cellelinie og udtrykker overvejende AR-FL [44]. Udviklingen af ​​LNCaP xenotransplantattumorer kræver androgener, og kastration medfører en initial decelereret vækst af xenotransplantater [45], [46]. Imidlertid ligner humane prostatakræft, xenotransplantaterne sidste ende blive kastrationsresistent og genoptage vækst [45] – [49]. Mandlige nøgne mus blev implanteret med LNCaP-celler på højre dorsale flanke. Kastration blev udført, når tumorerne nåede -100 mm

3. Kastrerede mus blev derefter opdelt i to grupper fik enten olivenolie som kontrol eller 40 mg /kg PPD gennem oral sondeernæring 6 dage om ugen. Behandlingen blev indledt dagen efter kastration.

I forhold til LNCaP tumorer dyrket i gonadedosis-intakte mus [45], [46], var der en opbremsning af tumorvækst i begge grupper i de første to uger af behandlingen som et første svar på kastration (figur 3A). De tumorer i kontrolgruppen genoptog vækst startende fra dag 17 i behandling som følge af erhvervelse af kastration modstand, mens tumorer i PPD-gruppen forblev små. Fra dag 25 var forskellen i den gennemsnitlige tumorstørrelse mellem de to grupper var statistisk signifikant. Ved afslutningen af ​​forsøget, den gennemsnitlige tumorstørrelse var 1000 mm

3 i kontrolgruppen, men 330 mm

3 i PPD-gruppen, hvilket indikerer ~67% hæmning af tumorvækst ved PPD. I tråd med dette resultat, den gennemsnitlige tumor vægte var 0,76 g og 0,32 gi kontrol- og PPD grupper, henholdsvis (figur 3B). I løbet af 42 dage periode af behandlingen, havde PPD ikke ud til at forårsage toksicitet hos musene som vist ved noget fald i kropsvægt i sammenligning med kontrolgruppen (figur 3C).

LNCaP-celler blev inokuleret i gonade-intakt nøgne mus og kirurgisk kastration blev udført, når tumorerne nåede -100 mm

3. Behandling med 40 mg /kg PPD gennem oral sondeernæring 6 dage om ugen blev indledt dagen efter kastration (n = 10). A. Mean tumorvolumener. B. Individuelle tumor vægte ved afslutningen af ​​forsøget. C. Mean mus legemsvægte. D. Mean serum PSA-niveau bestemt ved ELISA, normaliseret ved tumor vægte, ved afslutningen af ​​undersøgelsen. *,

P

0,05 fra kontrolgruppen. Fejlsøjler, er SEM.

prostatatumor tilbagefald efter kastration forbundet med forhøjede serum PSA-niveauer [50]. Vi målte niveauerne af PSA i museserum anvendelse af ELISA. Som vist i figur 3D, PPD tilskud ført til en næsten 50% fald i gennemsnitlig serum PSA-niveau, fra 173 ng /ml /g i kontrolgruppen til 97 ng /ml /g i PPD-gruppen. Niveauerne blev normaliseret ved tumor vægt. Således var faldet ikke en konsekvens af tumorvækst inhibering, men snarere en indikation af PPD suppression af AR reaktivering i tumorerne. Vi målte derefter AR-proteinekspression ved immunhistokemi i formalin-fikserede væv. Som vist i figur 4A, PPD behandling faldt procentdelen af ​​celler med stærke AR-farvning og samtidig øge procentdelen af ​​celler med negativ farvning. Dataene bekræftede derfor vores

in vitro

resultater, der viser effektiviteten af ​​PPD i nedregulere AR-niveau og aktivitet i CRPC celler

in vivo

.

Tumorer blev høstet i slutningen af forsøget i figur 3. A. AR immunhistokemisk farvning af tumorsektioner. Venstre panel, kvantificering af dataene. Højre paneler, repræsentative billeder. B. Phospho-histon H3 immunhistokemisk farvning af tumorsektioner. Venstre panel, kvantificering af dataene. Højre paneler, repræsentative billeder. C. H 0,05 fra kontrolgruppen. Fejllinjer, SEM.

Vi evalueres yderligere virkningen af ​​PPD på mitose i tumorerne via immunhistokemi under anvendelse af et antistof mod phospho-histon H3, en markør for mitose [41]. Som vist i figur 4B, PPD tilskud forårsagede et signifikant fald i det gennemsnitlige antal mitoser pr billedfelt. Hematoxylin og eosin (H 0,05 fra kontrolgruppen. Fejllinjer, SEM.

Tumorer blev høstet ved afslutningen af ​​forsøget i figur 5. A. AR immunhistokemisk farvning af tumorsektioner. Venstre panel, kvantificering af dataene. Højre paneler, repræsentative billeder. B. Phospho-histon H3 immunhistokemisk farvning af tumorsektioner. Venstre panel, kvantificering af dataene. Højre paneler, repræsentative billeder. C. Western blot-analyse af tumorerne ved hjælp af en pan-AR-antistof. Kvantificering af dataene blev præsenteret nedenfor blottene. D. H 0,05 fra kontrolgruppen. Fejllinjer, SEM.

Interessant enzalutamide, på hverken dosis, var i stand til at inhibere væksten af ​​22Rv1 tumorer (figur 7A), undertrykke serum PSA-niveauer i mus (figur 7D), inhiberer mitose (figur 8A) eller forårsage tilsyneladende histopatologisk ændring af 22Rv1 tumorer (Figur 8B). Ved afslutningen af ​​forsøget, var der en tendens til fald i tumorvægte med stigende dosis af enzalutamide (figur 7B). Men faldet var ikke statistisk signifikant, muligvis på grund af den lille stikprøve af forsøget. Ikke desto mindre faldet observeret med 10 mg /kg enzalutamide, det mest almindeligt anvendte dosis enzalutamide som er effektiv mod kastrationsresistent LNCaP xenograftmodeller [27], [51], [52], var temmelig marginal. Taget sammen tyder dataene på potentialet for anvendelse af PPD at inhibere væksten af ​​CRPC.

22Rv1 celler blev inokuleret i kastrerede nøgne mus. Når tumorerne nåede -100 mm

3, blev musene behandlet med 10 eller 30 mg /kg enzalutamide gennem oral sondeernæring 6 dage per uge (n = 4). A. Mean tumorvolumener. B. Individuel tumor vægt ved afslutningen af ​​forsøget. C. Mean mus legemsvægte. D. Mean serum PSA-niveau bestemt ved ELISA, normaliseret ved tumor vægte, ved afslutningen af ​​undersøgelsen. Enz, enzalutamide. Ingen af ​​behandlingsgrupperne viste statistisk forskel fra kontrolgruppen i nogen af ​​endepunkterne. Fejllinjer, SEM.

Tumorer blev høstet ved afslutningen af ​​forsøget i figur 7. A. Phospho-histon H3 immunhistokemisk farvning af tumorsektioner. Venstre panel, kvantificering af dataene. Højre paneler, repræsentative billeder. B. H & E farvning af tumorsektioner. Enz, enzalutamide. Fejl barer, SEM.

Diskussion

Vi viste tidligere, at PPD undertrykker androgen signalering gennem faldende ekspression af både AR-FL og AR-Vs [34]. I den foreliggende undersøgelse, vi udvidet indlæg for androgen-berøvet tilstand, viser androgen-uafhængig nedregulering af AR udtryk og transaktivering med PPD. Hvad vigtigere er, den foreliggende undersøgelse viste for første gang, potentialet for anvendelse af PPD at forbedre det terapeutiske resultat af androgen deprivation terapi. Vi viste, i xenograftmodeller, at PPD forhindrer eller forsinker udviklingen af ​​CRPC efter androgen deprivation og hæmmer væksten af ​​kastrationsresistent prostatatumorer med endogen ekspression af AR-FL og AR-Vs.

Stigning i serum PSA niveau anvendes som en markør for biokemisk tilbagefald efter behandling. Vi viste, at PPD tilskud fører til en reduktion i serum PSA niveauer. Desuden reduktionen er ikke blot en konsekvens af fald i tumor størrelser af PPD, da effekten er stadig signifikant efter normalisering af tumor vægt. Dataene i stedet angives evne PPD at undertrykke AR reaktivering i tumorer tilbagefald efter androgen deprivation og i tumorer, der er kastration resistent, derfor giver en mekanistisk basis for evnen af ​​PPD at inhibere kastration modstand.

dosis af PPD, der blev brugt i vores xenografundersøgelser var 40 mg per kg musenes kropsvægt. Baseret på kroppens overfladeareal konvertering [53], den humane ækvivalent dosis på 40 mg /kg PPD er 3,24 mg /kg. Dette svarer til en daglig dosis på 194 mg for en 60-kg voksen. Daglig tilskud af 2 g af ginseng ekstrakt til voksne med en gennemsnitlig vægt på 60 kg viste ingen negativ effekt i humane kliniske forsøg [54], [55]. Siden ginsenosides indholdet af ekstrakten var 14,5% [54], den daglige dosis af ginsenosides i disse forsøg var 290 mg. Således den dosis, som vi brugte i vores dyreforsøg er opnåeligt i menneske.

På trods af den lange påskønnelse af vigtigheden af ​​at målrette AR signalering for prostatakræft behandling, ingen terapi er blevet udviklet til dato til at målrette AR direkte til reducere dets tilgængelighed. Foruden PPD har flere andre forbindelser blevet vist præklinisk at reducere niveauerne af AR-FL og AR-Vs og at inhibere væksten af ​​CRPC celler [26], [56] – [61]. Disse forbindelser kan tjene som en effektiv modgift mod at overvinde modstand mod androgen deprivation terapi, især for resistens skyldes opreguleret ekspression af AR-Vs. På grund af mangel på ligand-bindende domæne, kan AR-Vs ikke målrettes af nuværende androgen deprivation behandlinger, herunder nye lægemidler abirateron og enzalutamide. Dette afspejles i vores data, der viser den manglende effektivitet af enzalutamide mod vækst af AR-V-udtrykkende 22Rv1 xenotransplantattumorer i kastreret vært. På den anden side, kan væksten af ​​disse tumorer inhiberes ved PPD ved en farmakologisk opnåelige dosis. Disse resultater understøtter potentialet for at bruge PPD i kombination med disse nye lægemidler til prostatakræft terapi. Fastlæggelse af de kombinatoriske effektiviteter og de bedste sekvenser af behandlinger er et område af vores igangværende forskning. Tilsammen resultaterne fra den aktuelle undersøgelse ikke kun give en begrundelse for at videreudvikle PPD eller dets analog til intervention af CRPC, men også underbygge reducere AR-FL og AR-V tilgængelighed som en brugbar fremgangsmåde til at forbedre terapeutisk resultat af androgen deprivation terapi .

tak

Vi takker Dr. Elizabeth M. Wilson på University of North Carolina for at give CWR-R1 celler.