PLoS ONE: Forekomsten af ​​JC virus i kinesiske patienter med kolorektal Cancer

Abstrakt

Baggrund

JCV er en DNA-polyomavirus meget godt tilpasset til mennesker. Selv JCV DNA er blevet påvist i kolorektale cancere (CRC), sammenhængen mellem JCV og CRC forbliver kontroversiel. I Kina har tilstedeværelsen af ​​JCV infektion i CRC patienter ikke blevet rapporteret. Her undersøgte vi JCV infektion og viral DNA-load i kinesiske CRC patienter og for at bestemme, om JCV DNA i perifert blod (PB) kan anvendes som en diagnostisk markør for JCV-relaterede CRC.

Metodologi /vigtigste resultater

tumorvæv, ikke-kræft tumor-tilstødende væv og PB prøver blev indsamlet fra 137 CRC patienter. Desuden blev 80 normale colorektale vævsprøver fra patienter uden CRC og PB prøver fra 100 raske frivillige også høstet som kontroller. JCV DNA blev påvist ved nested PCR og objektglas-baserede dot blotting. Viralt DNA belastning af positive prøver blev bestemt ved kvantitativ realtids-PCR. JCV DNA blev påvist i 40,9% (56/137) af CRC væv på en viral belastning på 49,1-10,3 × 10

4 kopier /ug DNA. Tredive-fire (24,5%) ikke-kræft kolorektale væv (192,9 til 4,4 × 10

3 kopier /ug DNA) og 25 (18,2%) PB prøver (81,3 til 4,9 × 10

3 kopier /ug DNA) fra CRC patienter var positive for JCV. Tumorvæv havde højere niveauer af JCV end ikke-kræft væv (

P

= 0,003) eller PB prøver (

P

0,001). Ingen sammenhæng mellem tilstedeværelsen af ​​JCV og demografiske eller medicinske egenskaber blev observeret. Den JCV forekomst i PB prøver var signifikant associeret med JCV status i vævsprøver (

P

0,001). Eleven (13,8%) normale kolorektale væv og syv (7,0%) PB prøver fra raske donorer var positive for JCV.

Konklusioner /Betydning

JCV infektion er ofte til stede i kolorektale tumorvæv af CRC patienter. Selvom sammenhængen mellem JCV tilstedeværelse i PB prøver og JCV status i vævsprøver blev identificeret i denne undersøgelse, om PB JCV detektion kan tjene som en markør for JCV status CRC kræver yderligere undersøgelse

Henvisning:. Mou X, Chen L, Liu F, Lin J., Diao P, Wang H et al. (2012) Forekomsten af ​​JC virus i kinesiske patienter med kolorektal cancer. PLoS ONE 7 (5): e35900. doi: 10,1371 /journal.pone.0035900

Redaktør: Herman Tse, The University of Hong Kong, Hongkong

Modtaget: November 30, 2011; Accepteret: 23. marts 2012; Udgivet: 11 maj, 2012 |

Copyright: © 2012 Mou et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev finansieret af tilskud fra Kinas National Science and Technology Major Project No. 2012ZX10002006-003, National Basic Research program Kina (973-programmet) nr 2007CB513001, og en Qiu Shi professorat fra Zhejiang University til CX. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

John Cunningham virus (JCV) er en allestedsnærværende, lille, ikke-kappeklædte polyomavirus med en lukket, cirkulær, dobbeltstrenget DNA-genom, der ofte bor i nyrerne hos raske individer og udskilles i urinen af en stor del af den voksne befolkning. JCV infektion er subklinisk og fører til livslang latens, men kan reaktiveres når immunsystemet er svækket [1] – [3]. JCV er associeret med sygdommen primært hos immunkompromitterede individer og dens replikation i gliaceller kan føre til progressiv multifokal leukoencefalopati (PML), en ofte dødelig sygdom i centralnervesystemet [4]. Ligesom andre polyomavira, JCV koder for en version af et stort T-antigen, som kan binde til og inaktivere tumorsuppressorproteiner p53 og pRB og forstyrre adskillige celle-signalveje [5] – [7]. Endvidere er der påvist JCV genomisk DNA-sekvenser og T-antigen ekspression i en lang række humane tumorer celletyper herunder oligodendrocytter, astrocytomer, glioblastomer, ependymomer, og de fleste andre typer af hjernetumorer [8], hvilket indikerer, at JCV infektion kan være forbundet med human carcinogenese.

For nylig JCV blev også fundet i ikke-neurale kræftformer, såsom gastrisk [9] og lungekræft [10]. JCV infektion blev først rapporteret som en potentiel risikofaktor for tarmkræft (CRC) i et værk af Laghi et al. [11], som fandt, at 96% af CRC væv var positive for JCV DNA-sekvenser. Efterfølgende har andre undersøgelser blevet offentliggjort viser, at JCV sekvenser blev fundet i 26% -88,9% af CRC væv, med stikprøvestørrelser spænder fra 18 til 105 [12] – [15]. I modsætning hertil har andre undersøgelser efterfølgende vist, at intet påviseligt JCV DNA var til stede i kolorektale væv indikerer ingen sammenhæng mellem JCV og colon neoplasi [16] – [17]. JCV prævalens i forskellige CRC prøvesæt kan skyldes forskelle i assay følsomheder tværs undersøgelser, forurening mellem prøver eller geografiske placeringer af den udvalgte population. Selv demonstration af tilstedeværelsen af ​​tumor virale komponenter er det første skridt til at karakterisere rolle JCV i CRC carcinogenese, supplerende beviser, såsom høj virusmængde, er nødvendigt at støtte en kausal rolle. Imidlertid har kun to undersøgelser nævnt den virale belastning JCV i CRC [11], [15]. I betragtning af de kontroversielle rapporter om ætiologien af ​​JCV i CRC, fremgår det, at sammenhængen mellem JCV infektion og CRC skal undersøges nærmere.

Mange undersøgelser har vist, at der kan påvises JCV DNA eller antigener i det perifere blod (PB) eller serum. Virale komponenter detekteres i blodet har historisk været formodes at stamme fra metastaseret kræftceller eller fra virus-holdige cellerester kaste fra en lokal infektion websted [18]. Selvom to prospektive studier case-kontrol er blevet udført for at bestemme sammenhængen mellem JCV seropositivitet og CRC udvikling [19] – [20], der har været nogen rapport, der beskriver forekomsten af ​​JCV DNA i blodet hos CRC patienter udgivet til dato. I denne undersøgelse undersøgte vi forekomsten af ​​JCV i kinesiske CRC patienter til at bestemme en potentiel forbindelse. Desuden har vi undersøgt, om JCV DNA i PB er velegnet som en diagnostisk markør for JCV-relaterede CRC.

Metoder

Etik erklæring

Dette projekt blev godkendt af den etiske Udvalg for First Affiliated Sygehus, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou, Kina. Skriftligt informeret samtykke blev leveret af patienter og kontrolpersoner.

Kliniske prøver

Alle kliniske prøver blev opnået mellem maj 2007 og oktober 2011 Fra patienter indlagt på First Affiliated Sygehus, College of Medicine, Zhejiang University (Hangzhou, Kina). Tumorvæv, ikke-kræft tumor-tilstødende væv og PB prøver fra 137 tilfældige CRC patienter (betyder patientens alder, 62,99, rækkevidde, 27-86 år) blev indsamlet mindre end tre måneder efter CRC diagnose. Patienter, der gennemgår kirurgi for tilbagefald blev udelukket. Ikke-kræft tumor-tilstødende væv blev opsamlet fra et område -15 cm distalt fra tumoren. Desuden 80 kolorektal væv fra ikke-patologisk slimhinde af patienter, der gennemgår koloskopi for evaluering af funktionelle lidelser såsom diarré eller forstoppelse relateret til kræft eller inflammatorisk tarmsygdom (IBD) og 100 PB prøver fra raske donorer upon fysisk undersøgelse med ingen historie af kræft eller polyp diagnose blev indsamlet som kontroller. Vævsprøver blev delt; ene side blev holdt til histopatologisk analyse, og den anden overført til kryorør, straks frosset i flydende nitrogen og opbevaret ved -196 ° C til yderligere analyse. Alle prøve oplysninger er registreret i en prøve samling database.

DNA-ekstraktion

Omkring 50 mg af hver vævsprøve blev homogeniseret i en 2 ml sterilt rør med 1 ml 0,09% natriumchloridopløsning hjælp en elektrisk homogenisator (PRO Videnskabelige, Oxford, CT, USA). For at minimere krydskontaminering mellem prøver, blev proben vasket i frisk sterilt vand tre gange, 40% hydrogenperoxidopløsning to gange, 75% ethanol to gange og opvarmet i en 95% ethanol brænder i 3 min mellem prøverne. Fire hundrede mikroliter af hver PB prøve blev anvendt til DNA-isolering. DNA’et af hver prøve blev ekstraheret under anvendelse af MasterPure DNA Purification Kit (Epicentre Biotechnologies, Madison, WI, USA) ifølge producentens anvisninger. For at bekræfte integriteten af ​​DNA ekstraheret, PCR under anvendelse glyceraldehyder phosphat-dehydrogenase (GAPDH) primere blev foretaget som tidligere beskrevet [21].

Nested PCR for JCV genom

Nested PCR-amplifikation blev udført ved anvendelse et sæt primere for T-antigen som tidligere beskrevet [13]. Kort beskrevet blev 173 bp mål for JCV T-antigen første amplificeret ved hjælp af primerne JCT-1F (5′-AGT CTT TAG GGT CTT CTA-3 ‘) og JCT-1R (5’-GGT GCC AAC CTA TGG AAC AG-3 ‘). Første runde PCR betingelse blev denatureret ved 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 30 cykler af denaturering ved 95 ° C i 15 s, annealing ved 55 ° C i 30 s og ekstension ved 72 ° C i 30 s. Nested PCR blev udført ved anvendelse af 2 pi af første runde produkt som en skabelon, med primerne JCT-1F og JCT-2R (5’-TGA AGA CCT GTT TTG CCA TG-3 ‘). Den nestede PCR betingelse blev denatureret ved 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 30 cykler af denaturering ved 95 ° C i 15 s, annealing ved 60 ° C i 30 s og ekstension ved 72 ° C i 30 s. Den nestede PCR-procedure amplificerede en 110 bp målsekvens. For at undgå potentielle PCR falsk-positive resultater, blev to vand kontroller inkluderet for første runde PCR og nested PCR. Hvis en kontrol af de to vand kontroller gav en falsk-positiv i nested PCR, hele sæt af PCR og nested PCR blev genstartet med ny reagens. For hver prøve blev 1 pi DNA amplificeret ved nested PCR. Fire mikroliter af hver amplifikationsprodukter blev analyseret ved elektroforese på 2% agarosegel og ethidiumbromidfarvning.

objektglas-baserede dot blotting

indlejrede-PCR-produkterne blev oprenset med MinElute PCR Purification Kit (QIAGEN, Hilton, Tyskland) og til sidst elueret i 10 pi EB buffer (10 mM Tris-CI, pH 8,5). Rensede DNA-prøver blev blandet med ét volumen DMSO, og plettet på overflader aminosilan dias (CapitalBio, Beijing, Kina) som tre gentagelser med en SmartArrayer spotter (CapitalBio, Beijing, Kina). Efter bagning i 1 time ved 80 ° C blev objektglassene skyllet i 0,2% SDS i 5 minutter og rengøres ved vask med ddH

2O. TAMRA-mærket oligonukleotidprobe (JCT-probe, 5′-GTT GGG ATC CTG TGT TTT CAT CAT C-3 ‘) blev købt fra Invitrogen (Shanghai, Kina) og fortyndet til en koncentration på 10 uM. Hybridisering blev udført ved 45 ° C i 2 timer. Objektglassene blev vasket i 2 x SSC /0,2% SDS ved 42 ° C i 5 minutter, og endelig i ddH

2O ved 42 ° C i 5 min. Objektglassene blev tørret ved hjælp af centrifugering og scannet med et GenePix 4100 scanner (Axon, Union, USA). Billeder blev analyseret med GenePix Pro 5.0 software (Axon).

Kvantificering af viral belastning ved real-time PCR

En SYBR Green real-time PCR-fremgangsmåden blev anvendt til bestemmelse JCV virusmængde i prøver som beskrevet af Chapagain [22]. Specielt anvendtes primere RT-JCT-F (5′-AGA GTG TTG GGA TCC TGT GTT TT-3 ‘) og RT-JCT-R (5′-GAG AAG TGG GAT GAA GAC CTG TTT-3’) blev anvendt i real-time PCR rettet mod en sekvens af T-antigen-gen, der producerer en 78 bp produkt under reaktionen. JCV viral belastning kvantificering blev udført i Bio-Rad CFX96 Real-time PCR Detection System anvendelse af 200 ng template-DNA, 10 pi SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Dalian, Kina) og 4 pmol af hver af forward og revers primere. Termisk cyklisering blev påbegyndt med en første denatureringstrin ved 95 ° C i 30 s, efterfulgt af 40 cykler ved 95 ° C i 5 s og 60 ° C i 15 s, og amplifikation fluorescens blev overvåget ved 60 ° C ved slutningen af ​​hver cyklus. En standardkurve blev konstrueret ved anvendelse af serielle fortyndinger (1,0 til 10

7 kopier af JCV DNA) af JCV T-antigen plasmid. Tre gentagelser blev udført for hver prøve og real-time PCR blev analyseret under anvendelse Bio-Rad CFX Manager-software. De midlede kopi numre i prøverne blev beregnet i henhold til standardkurven og blev repræsentere som kopier af viralt DNA pr mikrogram genomisk DNA.

Statistiske metoder

Demografiske karakteristika blev sammenlignet mellem CRC patienter (C) og kontroller (ikke-CRC patienter (N) eller raske donorer (H)) ved hjælp af

Students t

-test for numeriske variabler og χ

2 test for kategoriske variable. Sex, eksponering tobak, alkohol, bopæl, familie historie af CRC blev patogene scene og tumorsted sammenlignet mellem JCV-positive og -negative CRC-patienter, der bruger den χ

2 test. Differentiering status blev sammenlignet mellem JCV-positive og -negative CRC patienter, som brugte Fishers eksakte test. Den nøjagtige logistisk regressionsmodel, justeret for alder, blev anvendt til at estimere associationen mellem JCV infektion og CRC. R statistisk software (v 2.12.0, www.r-project.org/) blev anvendt til statistisk analyse. I alle analyser, en

P

-værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

Demografiske karakteristika af 137 CRC patienter, 80-CRC ikke patienter og 100 raske donorer. er til stede i tabel 1. CRC patienter var ældre end ikke-CRC patienter (

P

0,001), men blev ikke observeret nogen forskel mellem CRC patienter og raske donorer. Familie historie CRC var mere udbredt blandt CRC patienter vers ikke-CRC patienter eller raske donorer, men forskellene var ikke statistisk signifikant (

P

= 0,491 for C vs N,

P

= 0,162 for C vs H).

Alle prøver var positive for GAPDH kontrol, hvilket indikerer tilstrækkelig integritet af prøverne. De negative kontroller i begge runder af PCR viste ingen tegn på forurening reagens. Brug af nested PCR blev JCV T-antigen nukleotidsekvens påvises i 40,9% (56 af 137) af tumorvæv og 24,8% (34 af 137) af tumor-tilstødende væv fra CRC patienter (figur 1). PCR-produkterne blev bekræftet som autentiske JCV sekvenser ved glas-slide array analyse (figur 1B). Vi fandt begge matchede par af tumorvæv og ikke-kræftvæv fra 17,5% (24 af 137) af CRC patienter var positive for JCV DNA. 23,4% (32 af 137) og 7,3% (10 af 137) af patienterne havde JCV DNA kun i tumorvæv eller ikke-kræft tumor-tilstødende væv, henholdsvis (figur 1C). 18,2% (25 af 137) i PB prøver fra CRC patienter var positive for JCV DNA. En signifikant højere JCV tilstedeværelse blev observeret i CRC væv sammenlignet med ikke-kræft tilstødende væv (eller 2,089; 95% CI, 1,213-3,636;

P

= 0,007) og PB prøver (OR, 3.084; 95% CI, 1,729-5,619;

P

0,001). JCV tilstedeværelse i PB prøver var positivt associeret med JCV status i vævsprøver (

P

0,001); men det var relateret til patientens alder, køn, eksponering tobak, alkohol, bopæl, familie historie af CRC, patologisk stadium og tumor site, men havde tendens til at stige med differentieringen af ​​CRC væv, selv om denne tendens ikke var statistisk signifikant (Tabel 2 ). Sammenlignet med væv fra CRC patienter, kun 13,8% (11 af 80) af kolorektale væv fra ikke-CRC patienter havde påviselige JCV DNA. I den ikke-parameter statistisk analyse, JCV frekvenser i CRC patienter og ikke-CRC patienter var signifikant forskellige. Siden en alder af de to grupper adskilte sig, blev sammenhængen mellem JCV infektion og CRC estimeret ved nøjagtig logistisk regressionsanalyse, korrigeret for alder. Den OR af JCV tilhørende CRC risiko var statistisk signifikant (OR, 6,611; 95% CI, 2,928 til 14,929;

P

0,001). Blandt PB prøver fra 100 raske frivillige, fandt vi, at kun 7% (7 af 100) var positive for JCV DNA, hvilket var lavere end den JCV positive procentdel i PB prøver fra CRC patienter (OR, 0,339, 95% CI, 0,118 -0,852;

P

= 0,021)

(A) 110 bp fragment blev amplificeret fra DNA isoleret fra matchede prøver af kolorektal cancer (øvre) og normal tumor tilstødende væv (lavere) med. nested PCR. M: DL 2000 DNA Marker (Takara); P: positiv kontrol; N1: første runde negativ kontrol; N2: anden runde negativ kontrol. (B) Billeder fra JCV indlejrede-PCR-produkt arrays. Indlejrede-PCR-produkter af tumorvæv (venstre) og normal tumor tilstødende væv (højre) blev plettet på overflader aminosilan objektglas som tre gentagelser, hybridiseret med TAMRA-mærket oligonukleotidprobe og endelig visualiseret ved AXON scanner. (C) Antallet af JCV-positive prøver i 137 matchede par af tumorvæv, ikke-kræft tilstødende tumorvæv og PB prøver fra CRC patienter.

Viral belastning i JCV-positive prøver fra CRC patienter blev bestemt ved en kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR). Den virale belastning i tumorvæv varierede fra 49,15 til 1,03 × 10

4 kopier /ug DNA (gennemsnit ± SD, 3795.64 ± 3054,58). Faktisk de absolutte kopi numre for JCV DNA i CRC tumorer var lavere end 1 kopi pr celle. Lav JCV virusmængde blev observeret i 34 JCV-positive, ikke-kræft, tumor-tilstødende væv (interval, 192,85-4,44 × 10

3 kopier /ug DNA; gennemsnit ± SD, 1470.09 ± 887,12) og 25 PB prøver ( rækkevidde, 81,30 til 4962,99 kopier /ug DNA; middelværdi ± SD, 945.17 ± 1140,39). Tumorvæv havde signifikant højere niveauer af JCV DNA end ikke-kræft tumor-tilstødende væv og PB prøver (figur 2). Salg

JCV positive prøver bestemt ved nested PCR blev analyseret under anvendelse QRT-PCR. Blots repræsenterer gennemsnit kopi numre (3 replikat brønde) af JCV DNA for tumorvæv, ikke-kræft væv og PB henholdsvis og barer repræsenterer den beregnede medianer.

P

-værdier blev beregnet ved hjælp af Wilcoxon test.

Diskussion

I nærværende undersøgelse blev JCV påvist i 40,9% af CRC væv og 24,8% af ikke-kræft colorektale væv, som var i den mellemliggende position T-antigen sats i tidligere undersøgelser (tabel 3). Flere potentielle årsager tegner sig for den manglende enighed blandt disse undersøgelser, herunder potentiel forurening under prøvetagning og proces under DNA ekstraktion og PCR-amplifikation. Mange undersøgelser har ikke indberettet nogen skridt til at styre falsk positive resultater [11] – [12], [14]. I den foreliggende undersøgelse, vi undgået falsk-positive resultater som nævnt i vores tidligere undersøgelse [21]. Følsomheden af ​​metoden er kritisk, da et lavt JCV virusmængde i kolorektal væv er blevet dokumenteret [15]. Immunhistokemi, PCR, nested PCR og q-RT-PCR er blevet anvendt til påvisning af JCV [11], [14] – [15], [23]. JCV DNA blev fundet i 1% og 0% af CRC væv i to store undersøgelser [16] – [17] ved brug af en generel PCR-assay, som er kendt for at have lavere følsomhed. Nested PCR er et yderst følsomt teknik til påvisning JCV. Der er fundet mindre PCR-mål, der skal lettere amplificeret end lange sekvenser til JCV detektion [11]. Som beskrevet af Hori et al. [13] anvendte vi en nested PCR med primersæt rettet mod en 110 bp JCV T-antigen sekvens, som var i stand til at detektere så få som 1 kopi af JCV DNA (data ikke vist). Det har været en hypotese det supersnoede topologi af stærkt homologe JCV DNA kan begrænse PCR amplifikation effektivitet [11]. Men vi ikke bruge topoisomerase I behandling før PCR-amplifikation som beskrevet af Laghi et al. [11], hvilket kan føre til en lidt lavere hastighed på JCV infektion. Alder, køn, region og livsstil i en udvalgt population kan alle bidrage til varierende satser JCV infektion (tabel 3). Den amerikanske CRC befolkning var oftest valgt i tidligere undersøgelser, hvor JCV DNA blev fundet i 0% -96% af CRC væv [11], [14], [16] – [17], [24]. Modstridende resultater er blevet rapporteret af to italienske forskergrupper [12], [25]. Hori et al. [13] og Lin et al. [23] identificerede JCV i 26,1% og 86,4%, henholdsvis CRC væv fra asiatiske befolkninger. I vores undersøgelse blev JCV DNA påvist i 49,6% af de kinesiske CRC patienter.

Vi undersøgte yderligere tilstedeværelse af JCV DNA i væv fra ikke-CRC patienter. I visse højrisikopatienter, såsom dem med polyp eller IBD, forekomsten af ​​CRC er væsentligt højere. Derfor blev patienter, der gennemgår koloskopi for polyp og IBD udelukket fra kontrol kohorte før prøvetagning. Andre end alder, var der ingen baseline karakteristisk signifikant forskellig mellem CRC og ikke-CRC patienter. Men justering for alder ikke ændre sammenhæng mellem JCV infektion og CRC. Ved at kombinere med observationen af ​​højere forekomst af JCV i tumorvæv fra CRC patienter, foreslår vi, at JCV er korreleret med CRC og kan deltage i CRC carcinogenese eller alternativt virus inficerer tumorceller lettere end ikke-kræftceller.

i den foreliggende undersøgelse blev der ikke sammenhæng mellem tilstedeværelsen af ​​JCV og demografiske eller medicinske karakteristika såsom alder, køn, uddannelse, klinisk fase, og tumor websted observeret, hvilket var i overensstemmelse med andre undersøgelser [13], [15] . Interessant fandt vi, at væv fra CRC patienter, som fik kemoterapi før prøvetagning havde højere incidens af JCV infektion sammenlignet med de patienter uden kemoterapi, selvom forskellen ikke var signifikant (tabel 2). Associationen mellem immunsuppression og forøget modtagelighed for infektion er godt anerkendt. Som påvist ved Selgrad et al. [26] i en retrospektiv undersøgelse blandt levertransplanterede patienter, immunsupprimerede patienter har en signifikant højere forekomst af JCV forhold til immunkompetente kontroller. Kemoterapi narkotika kan inhibere immunresponset og muliggøre reaktivering af potentielt oncogene vira. CRC patienter med en familie historie har en højere forekomst af JCV T-Ag-DNA, som er i overensstemmelse med resultaterne beskrevet af Vilkin et al. [27]. JCV infektion er normalt en asymptomatisk infektion og almindeligt forekommer i senere barndom og ungdom, hvorefter virus forbliver latent i nyrerne. Udover den immune tilstand nævnt ovenfor, kunne genetisk baggrund også være forbundet med modtagelighed JCV infektion i CRC.

Den virale belastning i vævsprøver kunne indikere rolle JCV i CRC carcinogenese. I den foreliggende undersøgelse blev JCV virusmængde i positive prøver fra CRC patienter bestemt ved q-RT-PCR. JCV viral kopiantal viste sig at være højere i tumorvæv sammenlignet med ikke-kræft tumor tilstødende væv, hvilket er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser [11], [15]. Men de absolutte kopiantal i væv var så lav, at kun en lille del af kolorektale epitelceller viste sig at være inficeret med JCV. Dette resultat understøtter de forbigående virkninger af JCV i cellulær transformation, da det kan afbrydes eller dens genom kan gå tabt under cancer progression ( “hit-and-run” transformation) [28]. En JCV infektion indføre T-antigenet kunne nemt forklare starten af ​​som den, der tidligere er foreslået for den velkendte adenom-carcinom sekvens [29] kromosomal ustabilitet i flertrins carcinogenese,.

Så vidt vi ved denne undersøgelse er den første analyse af JCV DNA i PB fra CRC patienter. Vi viste, at JCV infektion er almindelig i PB prøver fra CRC patienter og angivet JCV status i vævsprøver. I modsætning til tidligere seroepidemiological undersøgelser, kan vores resultater ikke anvendes til at forudsige risikoen for CRC fordi alle prøver blev indsamlet inden tre måneder efter diagnose [19] – [20]. Tilstedeværelsen af ​​JCV i PB af CRC patienter højere end i PB raske donorer. Disse resultater støttede forslaget om, at JCV DNA i PB prøver kunne være en gyldig biomarkør for JCV-relaterede CRC diagnose. medicinske egenskaber for raske donorer, blev der imidlertid registreret primært gennem selvrapportering som kan føre til misklassifikation. Vigtigere, JCV næsten altid forbliver latent i nyrerne og kan let påvises i urinen [1] – [3]. Selvom den virale DNA i blodbanen er almindeligt anset for at stamme fra celler kaste fra tumorvæv, oprindelsen af ​​JCV i PB prøver fortsat ukendt.

Som konklusion, JCV infektion præsenterer almindeligt i CRC patienterne og måske at være en risikofaktor for CRC. Vi foreslår løbende molekylære, cellulære og

in vivo

studier for at belyse de mekanismer, JCV carcinogenese at afgøre, om JCV er en agens af CRC. Selvom vi fundet JCV DNA i PB prøver kunne tjene som en biomarkør for JCV-relaterede CRC, er yderligere store populationsbaserede undersøgelser opfordres til at evaluere denne forening.

Tak

Forfatterne takker Xiaoyi Chen, Li Yuan, Yiming Tang, og Xutao Hong for deres tekniske support, Michael Brownstein for hans kritisk læsning af vores manuskript.