PLoS ONE: A Cell-Permeable Fusion Protein Baseret på Clostridium botulinum C2 toksin til levering af p53 Tumorsuppressor til kræftceller

Abstrakte

Gensplejsede bakterielle protein toksiner er attraktive systemer til levering af exogene proteiner i cytosolen af ​​pattedyrceller. Den binære C2 toksin fra

C. botulinum

har vist sig som stærke levering køretøj, der hviler på dets binding /translokation komponent C2IIa og genetisk modificerede adapter domænenavn C2IN der handler i fællesskab for at udløse celle optagelse. P53 tumor suppressor protein har en afgørende funktion i at undertrykke carcinogenese og ofte inaktiveret af forskellige mekanismer i humane tumorceller. Derfor konstrueres vi en C2IN-p53-fusionsprotein, som internaliseres til kræftceller ved C2IIa. Til dette formål blev C2IN-p53 fusionskonstruktion overudtrykt i

E. coli

med god opløselighed, oprenset ved heparin-affinitetschromatografi og protein identitet blev bekræftet ved immunoblotting. Vi demonstrerede, at fusionsproteinet er i stand til at binde til p53 konsensus-DNA med høj affinitet i en p53-specifik måde

in vitro

. Dernæst blev internaliseringen af ​​C2IN-p53 overvåget i HeLa-celler ved celle fraktionering og immunoblotanalyse, der afslørede en C2IIa-medieret translokation af fusionsproteinet i cytosolen. Optagelsen blev også vist i A549 og Saos-2-celler med samme effektivitet. Disse resultater blev yderligere bekræftet af konfokal immunfluorescens analyser af C2IN-p53 /C2IIa-behandlede HeLa og A549 celler, viser overvejende cytoplasmatisk lokalisering af fusion konstruktion

Henvisning:. Fahrer J, Rausch J, Barth H (2013) En celle-Permeable Fusion Protein Baseret på

Clostridium botulinum

C2 Toxin for levering af p53 Tumorsuppressor til kræftceller. PLoS ONE 8 (9): e72455. doi: 10,1371 /journal.pone.0072455

Redaktør: Mark Isalan, Center for Genomic forordning, Spanien

Modtaget: Juni 2, 2013; Accepteret: 18 juli 2013; Udgivet: September 5, 2013