PLoS ONE: rhizoma Paridis saponiner Undertrykker tumorvækst i en rotte model af N-Nitrosomethylbenzylamine-induceret Esophageal Cancer ved at hæmme cyclooxygenaser-2 Pathway

Abstrakt

rhizoma Paridis saponiner (RPS), en naturlig forbindelse, oprenset fra Rhizoma Paridis, har vist sig at hæmme kræft vækst in vitro og i dyremodeller af kræft. Men dens virkninger på kræft i spiserøret forbliver uudforsket. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge virkningerne af RPS på tumorvækst i en rottemodel af esophageal cancer og den molekylære mekanisme, der ligger virkningerne. En rotte model af kræft i spiserøret blev etableret af subkutan injektion af

N

-nitrosomethylbenzylamine (NMBA, 1 mg /kg) i 10 uger. RPS (350 mg /kg eller 100 mg /kg) blev administreret ved oral gavage én gang dagligt i 24 uger, der starter ved første NMBA injektion. RPS væsentligt reduceret størrelsen og antallet af tumorer i spiserøret af rotter udsat for NMBA og hæmmede levedygtighed, migration og invasion af esophageal kræftceller EC9706 og KYSE150 på en dosisafhængig måde (alle

P

0,01 ). Flowcytometri afsløret, at RPS-induceret apoptose og cellecyklus G2 /M anholdelse i esophageal kræftceller. Ekspressionen af ​​cyclooxygenaser-2 (COX-2) og cyclin D1 i rotte esophageal væv og esophageal cancer celler blev også signifikant reduceret med RPS (alle

P

0,01). Konsekvent, RPS også signifikant reduceret frigivelse af prostaglandin E2, en nedstrøms molekyle af COX-2 i en dosis-afhængig måde (

P

0,01). Vores undersøgelse tyder på, at RPS hæmme kræft i spiserøret udvikling ved at fremme apoptose og cellecyklusstop og hæmme COX-2-vejen. RPS kan være et lovende terapeutisk middel til esophageal cancer

Henvisning:. Yan S, Tian S, Kang Q, Xia Y, Li C, Chen Q, et al. (2015) rhizoma Paridis saponiner Undertrykker tumorvækst i en rotte model af

N

-Nitrosomethylbenzylamine-induceret Esophageal Cancer ved at hæmme cyclooxygenaser-2 Pathway. PLoS ONE 10 (7): e0131560. doi: 10,1371 /journal.pone.0131560

Redaktør: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, UNITED STATES

Modtaget: 8. januar 2015; Accepteret: 27. maj 2015; Udgivet: Juli 6, 2015

Copyright: © 2015 Yan et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. SY blev støttet af 2010 Tianjin videnskab og teknologi Plan Projekt Kina (10JCYBJC15100) ZL blev støttet af og National Natural Science Foundation of China (nr 30.973.383 https://www.nsfc.gov.cn/). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i spiserøret er den sjette hyppigste årsag til kræft død på verdensplan og den fjerde i Kina [1, 2]. I 2009 forekomsten af ​​sygdommen i Kina var 22,14 /100.000 og nåede endnu højere end 100 /100.000 i nogle områder, såsom Cixian i provinsen Hebei [2, 3]. Selvom dødeligheden af ​​kræft i spiserøret er faldet i løbet af sidste 30 år på grund af forbedring af økonomien og ændringer i livsstil, kræft i spiserøret forbliver fremherskende i landdistrikt i Kina og i kinesiske mænd [2, 3]. Kirurgisk indgreb er den primære behandling for kræft i spiserøret. Multimodal behandling med neoadjuverende kemoterapi eller kombineret kemo- og stråleterapi efterfulgt af kirurgi er også blevet anbefalet til lokalt fremskreden kræft i spiserøret [4]. Men patientresultater forbliver fattige og den samlede 5-års overlevelse er stadig mindre end 25% [1, 4]. Således effektive behandlinger for kræft i spiserøret er presserende behov.

Terapeutiske fordele ved traditionel kinesisk medicin til behandling af kræft er blevet mere og mere anerkendt for nylig [5]. Rhizoma Paridis Saponiner (RPS), et naturligt produkt oprenset fra almindeligt anvendte traditionel kinesisk lægeurt rhizoma Paridis, har vist sig at ikke kun inhibere leverfibrose og cirrose men også undertrykke væksten af ​​multiple typer af kræft i dyremodeller og cancerceller, herunder lunge-, ovarie-, lever-, og livmoderhalskræft [6-19]. Ud over at inhibere cancervækst, RPS også væsentligt reducerer migration og invasion af lungecancerceller og B16 melanomceller [8, 11, 19]. Endvidere Man et al. for nylig fundet, at administration af RPS kombinere med cyclophosphamid, et meget anvendt kemoterapeutisk middel, kan reducere toksiciteten af ​​cyclophosphamid i en musemodel for leverkræft [14]. Xiao et al. nylig rapporteret, at RPS inhiberede angiogenese i et xenotransplantat musemodel af ovariecancer [11].

Den molekylære mekanisme bag RPS-medieret anti-cancer effekter er også blevet udforsket grundigt. Resultater fra undersøgelser af forskellige typer af humane cancerceller viser konsekvent, at RPS inducerer apoptose i cancerceller ved at aktivere både caspase-afhængig og caspase-uafhængig apoptotiske veje og inhiberer migration og invasion ved at undertrykke den enzymatiske aktivitet og protein ekspression af matrixmetalloproteinaser (MMP ), såsom MMP-2 og MMP-9 [6-19]. Man et al. anvendes en gaskromatografi /massespektrometri metode til at sammenligne den metaboliske profil mus med leverkarcinom versus raske mus, og de fandt, at RPS administration øget lipid og glycerat men faldt glucoseniveauer i blodet af mus med leverkarcinom mens udøvede modsatte virkninger på disse metaboliske substrater hos raske mus, måske antyder, at RPS undertrykke udviklingen af ​​kræft ved at blokere energiforsyningen til kræftceller [15].

Selvom RPS er blevet testet i flere forskellige typer af kræft, dens virkninger på kræft i spiserøret forbliver ukendt. Denne undersøgelse havde til formål at udfylde denne viden hul. Her har vi undersøgt virkningerne af RPS på udviklingen af ​​kræft i en rotte model af

N

-nitrosomethylbenzylamine-induceret kræft i spiserøret og yderligere undersøgt den molekylære mekanisme bag effekten ved hjælp af humane kræft i spiserøret cellelinjer EC9706 og KYSE150.

Materialer og metoder

Etik Statement

Alle procedurerne vedrørende dyr vedligeholdelse og eksperimenter er i nøje overensstemmelse med den politik, Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) i Nankai Hospital . Den IACUC har godkendt denne undersøgelse. blev gjort alt for at minimere rotte lidelse.

Kemikalier

N-nitrosomethylbenzylamine (NMBA) blev syntetiseret ved Tianjin Institute of Pharmaceutical Research (Tianjian, Kina). Dimethylsulfoxid (DMSO) blev indkøbt fra Sigma (St. Louis, MO, USA). NMBA (150 mg) blev opløst i 10 pi DMSO og derefter fortyndet med steriliseret saltvand (0,9% NaCl) til en koncentration på 0,5 mg /ml til injektion. Rhizoma Paridis saponiner (RPS), som også er nævnt som polyphyllin og Chonglou saponin, blev ekstraheret fra Rhizoma Paridis (protokol nummer: 1.007.017) og opløst i steriliseret destilleret vand i en koncentration på 20 mg /ml. Kort fortalt blev 50 g Chonglou pulver blandet med 400 ml 75% ethanol i en én-liters rundbundet kolbe. Blandingen blev inkuberet i 90 ° C vandbad i 2 timer til at udtrække RPS. Opløsningen blev opsamlet. Proceduren Ekstraktionen blev gentaget yderligere 2 gange med friske 75% ethanol hver gang. Opløsningen fra hver ekstraktion var pool sammen, filtreret og koncentreret ved helt at fjerne ethanol under anvendelse af en hastighed vakuum til fordampning. Den koncentrerede ethanol-fri RPS opløsning blev overført til en fordampning skålen og helt tørret i strømmen ved at inkubere fordampning skålen i en 100 ° C vandbad. Den RPS tørre magt blev anvendt i undersøgelsen.

Dyr

F344 rotter (5 uger gamle) blev købt fra dyreforsøg Center of Academy of Military Medical Science (Beijing, Kina) . Rotterne (5 pr bur) blev huset i et rent rum med fri adgang til standard gnaverfoder og vand. Rotterne blev holdt i en 12 timers lys /12 timer mørke-cyklus i 2 uger før de blev anvendt i forsøg. Alle rotterne blev vejet to gange om ugen under eksperimentet.

Rat model af NMBA-induceret kræft i spiserøret og RPS administration

F344 hanrotter blev tilfældigt opdelt i følgende 3 grupper (n = 10 pr gruppe): raske kontrolgruppe, hvor rotter blev subkutant injiceret med saltopløsning indeholdende den samme mængde DMSO som den, der anvendes til rotter udsat for NMBA; NMBA gruppe, hvori rotter blev subkutant injiceret med NMBA ved 1 mg /kg; NMBA + RPS gruppe, hvori rotter blev subkutant injiceret med NMBA ved 1 mg /kg og administreret oralt med RPS. Det eksperimentelle design for etablering af rottemodellen og RPS administration er illustreret i figur 1. Kort beskrevet blev rotter i NMBA og NMBA + RPS grupper subkutant injiceret med 1 mg /kg NMBA 5 gange per uge i 5 uger og derefter med en reduceret frekvens på 1 mg /kg NMBA gang om ugen i yderligere 5 uger. Rotte legemsvægt blev registreret to gange om ugen i 14 uger. To rotter i NMBA + RPS-gruppen døde i uge-10 og uge-15, henholdsvis på grund af fejlagtigt administrere RPS ind i luftvejene. Alle andre dyr overlevede og blev aflivet ved afslutningen af ​​24 uger via administration af chloralhydrat (3 ml /kg). Spiserøret blev udskåret og undersøgt under et lysmikroskop. Tumorer større end 1 mm i diameter, blev talt. Mængden af ​​læsionerne blev beregnet ved hjælp af standardformlen: volumen = længde × bredde × højde × 0,52. En del af esophageal væv blev fikseret i 10% formalinopløsning og indlejret i paraffin for H 1: 200 fortynding i 1 x TBST), COX-2 (Cell Signaling Technology, USA; 1: 1000 fortynding i 1 x TBST), eller CyclinD1 (Cell Signaling Technology, USA; 1: 1000 fortynding i 1 x TBST) i 1 time ved stuetemperatur. Membranerne blev derefter vasket grundigt, efterfulgt af inkubation med et gede anti-kanin IgG konjugeret med peberrodsperoxidase (Cell Signaling Technology, USA) ved en fortynding på 1: 5000 i 1,5 timer ved stuetemperatur. Mærkede proteiner blev visualiseret med en forøget kemiluminescens-metoden (Millipore Corporation, Billerica, USA). For kvantificering blev intensiteterne af protein signaler evalueret med Mængde ét system (Bio-Rad, Hercules, USA). Eksperimentet blev gentaget mindst 3 gange.

prostaglandin E2 (PGE2) ELISA

Celler blev dyrket ved tætheden af ​​2 × 10

5 /brønd i plader med 6 brønde i serum -fri medier indeholdende RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Cellekultursupernatanten blev opsamlet og centrifugeret ved 12, 000rpm for 10 min, og supernatanten blev opsamlet. Niveauet af PGE2 i den cellefrie supernatant blev bestemt ved ELISA-kit ifølge protokollen tilvejebragt af producenten (Cusabio, Wuhan, Kina). Eksperimentet blev gentaget mindst 3 gange.

Statistisk analyse

Data er præsenteret som gennemsnit ± standardafvigelse (SD) og analyseret ved hjælp af statistiske analyse software SPSS11.5. Sammenligning blev analyseret ved envejs ANOVA.

P

værdier var 2 sidet og

P

0,01 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

RPS hæmmede tumorvækst for kræft i spiserøret hos rotter

Alle 10 rotter overlevede 10 uger NMBA eksponering og NMBA injektion dramatisk induceret tumor udvikling i spiserøret hos rotterne. Overfladen af ​​spiserøret i rotter udsat for NMBA blev dækket med tumorbyrde med forskellige størrelser (fig 2A). RPS på 350 mg /kg reduceret antallet markant (3,5 ± 1,58 vs 1,4 ± 1,11,

P

0,01, figur 2A og 2B) og gennemsnitlig størrelse af tumorer (17,71 ± 9,16 mm

3 vs 6,47 ± 5,86 mm

3,

P

0,01, figur 2A og 2C) på spiserøret. Histopatologisk undersøgelse af de esophageal væv afslørede, at NMBA eksponering førte til skællede epitelial hyperplasi (Fig 2A), og antallet af papillomer og carcinomer i NMBA gruppe var betydeligt højere end NMBA + RPS gruppe, selvom forskellene mellem de 2 grupper ikke var statistisk signifikante (fig 2D). Low-dosis RPS (100 mg /kg) påvirkede ikke tumorstørrelse (NMBA eksponering gruppe: 15,0 ± 11,9 mm

3 vs. NMBA + RPS gruppe: 17,6 ± 9,9 mm

3,

P

0,05) og antallet af tumorer (NMBA eksponering gruppe: 3,5 ± 1,0 vs. NMBA + RPS gruppe: 3,3 ± 1,6,

P

0,05) i rotter udsat for NMBA

A. Fotografier og H 0,01. # Repræsenterer signifikant forskel mellem NMBA + RPS gruppe vs NMBA gruppe,

P

0.01.

RPS hæmmede levedygtighed, migration og invasion af esophageal kræftceller

For at undersøge den molekylære mekanisme bag RPS-medieret hæmning af esophageal udvikling kræft, vi først undersøgt effekterne af RPS på opførslen af ​​esophageal kræftceller. Vores resultater viser, at RPS behandling signifikant hæmmede levedygtighed, migration og invasion af esophageal kræftceller EC9706 og KYSE150 i en dosisafhængig måde (figur 3,

P

0,01).

EN. RPS hæmmede levedygtigheden af ​​esophageal kræftceller. Efter inkubation natten over blev celler i plader med 96 brønde behandles med RPS ved 0, 2,5, 5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 40, eller 60 pg /ml i 48 timer og derefter inkuberet med 20 pi MTT ( 5 mg /ml) i 4 timer. Absorbansen ved 550 nm blev målt i en mikropladelæser. Procentdelen af ​​levedygtighed i forhold til kontrollerne uden RPS blev beregnet. Hver koncentration blev testet med 6 gentagelser i hvert eksperiment n = 3. B. RPS reduceret invasionen af ​​esophageal cancerceller. Celler blev dyrket i Transwell kammer (5 x 10

4 /kammer, 8 um porestørrelse og overtrukket med 1 mg /ml Matrigel) indeholdende serumfrie medier med RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i det øvre kammer og RPMI-1640 medium + 10% FCS i de nedre kamre i 48 timer. Den gennembrudte celler ved den nedre overflade af filteret blev fikseret og talt under et mikroskop. I alt 5 områder af hvert kammer blev tilfældigt udvalgt og blev anvendt det gennemsnitlige celleantal af de 5 felter, n = 3. * og # betegner signifikant forskel på 5, 10, og 20 ug /ml RPS forhold til 0 ug /ml RPS i EC9706 celle- og KYSE150 celler, henholdsvis

P

0,01. C. Billeder af sårheling af EC9706 celler, 20 x. D. Billeder af sårheling af KYSE150 celler, 20 x. E. RPS reducerede migration af EC9706 celler. F. RPS reducerede migration af KYSE150 celler. I alt 5 ridser blev anvendt til hver koncentration af RPS. Celler blev dyrket i serumfrie medier med RPS ved 0, 3,25, 7,5, eller 15 ug /ml i EC9706 celler, eller ved 0, 5, 10 eller 20 ug /ml for KYSE150 i 24 timer. Sår blev fotograferet under en fase-kontrast omvendt mikroskop, og den procentvise udbedring blev beregnet som (bredde ved 0h -bredde på 24 n) /bredde ved 0h * 100%, n = 3. * repræsenterer signifikant forskel mellem RPS på bestemte koncentration vs 0 mg /ml,

P

0.01.

RPS induceret apoptose og cellecyklus arrest i esophageal cancerceller

RPS-medieret hæmning af levedygtighed, migration og invasion foreslog, at RPS kunne blande sig i apoptose og cellecyklus i esophageal kræftceller. Faktisk vores flowcytometri resultater viste, at RPS ved koncentrationen på 10 ug /ml eller højere signifikant øget andelen af ​​apoptotiske celler i både EC9706 og KYSE150 celler (figur 4,

P

0,01). Konsekvent, RPS i samme koncentration markant øgede andelen af ​​celler i G2 fase (figur 5,

P

0,01), hvilket antyder, at RPS behandling inducerer G2 /M standsning af cellecyklus i esophageal cancerceller. Andelen af ​​EC9706 celler i S-fase blev ikke væsentligt påvirket af RPS, hvorimod RPS reducerede procentdelen af ​​KYSE150 celler i S-fase på en dosis-afhængig måde, hvilket indikerer, at Kyse 150 cellevæksten blev inhiberet af RPS (figur 5). Endvidere blev ekspressionen af ​​cyclin D1 i esophageal cancerceller markant reduceret med RPS behandling (Fig 6A). Vi undersøgte også cyclin D1-ekspression i esophageal væv hos rotter. Sammenlignet med raske kontrol, NMBA eksponering dramatisk induceret cyclin D1 udtryk i esophageal væv; mens RPS administration reducerede signifikant NMBA-induceret overekspression af cyclin D1 (Fig 6B og 6C,

P

0,01). Disse resultater understøtter endvidere, at RPS blander sig i cellecyklus i esophageal cancerceller.

Celler blev behandlet med RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Både de vedhæftede celler og de flydende celler i medierne blev opsamlet ved centrifugering ved 1000 g i 5 min. Celler var end inkuberet med 5 uL Annexin V-FITC og 10 uL PI i 15 min i mørke, fortyndet i 200 uL PBS, og analyseret på BD FACS Calibur flowcytometer. Apoptose blev analyseret ved hjælp FlowJo software, n = 3.

Celler, der anvendes til at analysere apoptose blev også analyseret for cellecyklus hjælp FlowJo software, n = 3. * og # repræsenterer signifikant forskel på 5, 10, og 20 pg /mL RPS forhold til 0 mg /ml RPS i EC9706 celle og KYSE150 celler, henholdsvis

P

0.01.

A. RPS reducerede ekspressionen af ​​COX-2 og cyclin D1 i esophageal cancerceller. EC9706 celler blev behandlet med RPS ved 0, 7,5, eller 15 ug /ml i 24 timer. KYSE150 celler blev behandlet med RPS ved 0, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Cellerne blev derefter høst og lyseres. Proteinekstrakt (30 ug) blev separeret ved SDS-PAGE og overført til nitrocellulosemembraner. Membranerne blev probet med kanin-anti rotte β-actin, COX-2, eller cyclin D1. Repræsentative billeder blev præsenteret. B. RPS reducerede ekspressionen af ​​COX-2 og cyclin D1 i esophageal væv. Esophageal væv fra rotter blev homogeniseret og proteinekstrakt (30 ug) blev separeret ved SDS-PAGE og overført til nitrocellulosemembraner. Membranen blev probet med kanin-anti rotte β-actin, COX-2, eller cyclin D1. Repræsentative billeder præsenteres. C. Densitometri analyse af western blot i B. Gennemsnitlige værdier på 5 rotter præsenteres, n = 5. * repræsenterer signifikant forskel mellem NMBA gruppe vs sund kontrolgruppe,

P

0,01. # Repræsenterer signifikant forskel mellem NMBA + RPS gruppe vs NMBA gruppe,

P

0,01. D. RPS faldt udgivelsen af ​​PGE2 fra esophageal kræftceller. Celler blev dyrket i serumfrit medium indeholdende 0, 5, 10 eller 20 ug /ml RPS i 24 timer. Kultursupernatanterne blev opsamlet og centrifugeret ved 12, til 000 rpm i 10 min fjerne cellerester. Niveauet af PGE2 i supernatanterne blev bestemt ved ELISA-kit ifølge protokollen tilvejebragt af producenten, n = 3. * og # betegner signifikant forskel på 5, 10, og 20 ug /ml RPS forhold til 0 ug /ml RPS i EC9706 celle- og KYSE150 celler, henholdsvis

P

0.01.

RPS undertrykt cyclooxygenaser-2 ekspression og prostaglandin E2 frigivelse i esophageal kræftceller

COX-2 pathway lidelse har været forbundet med kræft i fordøjelsessystemet [21]. Således testede vi, om RPS kan påvirke COX-2 reaktionsvejen i esophageal cancer. Vores Western blot resultater viser, at RPS behandling væsentligt reduceret COX-2 ekspression i esophageal kræftceller EC9706 og KYSE150 (Fig 6A). NMBA eksponering markant forøget COX-2 ekspression i esophageal væv rotte, mens RPS administration faldt betydeligt NMBA-medieret COX-2 overekspression (Fig 6B og 6C,

P

0,01). Konsekvent, frigivelse af PGE2, en downstream molekyle af COX-2, blev også nedreguleret ved RPS i en dosisafhængig måde i de esophageal kræftceller (Fig 6D,

P

0,01). Alle de oprindelige data er vist i S1 tabel.

Diskussion

I denne undersøgelse fandt vi RPS betydeligt undertrykt tumor udvikling i en rotte model af NMBA-induceret kræft i spiserøret og hæmmede levedygtighed, migration og invasion af humane esophageal kræftceller EC9706 og KYSE150. Disse resultater er i overensstemmelse med resultaterne på andre typer af kræft, yderligere støtte anti-cancer effekter af RPS [6-19]. Vores undersøgelse viste også, at RPS induceret apoptose i esophageal cancerceller. RPS har vist sig at opregulere ekspressionen af ​​pro-apoptotiske proteiner, såsom aktiv caspase-3, aktive caspase-9, og Bax i ikke-småcellet lungecancerceller, hepatomaceller xenotransplantater, ovariecancerceller og Hela-celler, hvilket indikerer, at RPS inducerer apoptose ved mitokondrisk apoptosecyklus [7, 12, 13, 17, 18].

Udover at inducere apoptose, vi også fundet RPS forårsaget cellecyklus G2 /M standsning i esophageal cancerceller. Konsekvent, Xiao et al. rapporterede, at RPS forfremmet dramatisk G2 /M fase anholdelse i humane ovariecancer celler SKOV3 [13], og Jiang et al. viste, at RPS inducerede G2 /M anholdelse i ikke-småcellet lungekræft celler [7]. I denne undersøgelse har vi undersøgt yderligere ekspressionen af ​​cyclin D1, et protein spiller en kritisk rolle i cellecyklus, og vi fandt, at NMBA eksponering markant stimuleret cyclin D1-ekspression i rotte esophageal væv og RPS reducerede signifikant overekspression af cyklin D1 i både esophageal væv og esophageal kræftceller. Disse resultater bekræfter endvidere, at RPS inhiberer tumorudvikling ved at inducere apoptose og fremme cellecyklus G2 /M standsning i cancerceller.

rolle COX-2 reaktionsvejen i cancerudvikling og progression er velkendt. Over-ekspression af COX-2 og prostaglandiner er forbundet med udviklingen af ​​forskellige former for kræft, og deres ekspressionsniveauer repræsenterer aggressivitet af cancer progression [21]. I human esophageal cancer, mærket overekspression af COX-2 er blevet observeret i esophageal pladeepithel men ikke i normale væv [22]. Rollen af ​​COX-2 reaktionsvejen i esophageal cancer er også understøttet af epidemiologiske og prækliniske undersøgelser, der påviser, at COX-2-inhibitorer reducere risikoen for kræft i spiserøret [23]. I denne undersøgelse fandt vi, at NMBA dramatisk stimuleret COX-2-ekspression i esophageal væv af rotter og RPS nedsatte signifikant NMBA-medierede COX-2 over-ekspression. RPS også markant reduceret COX-2-ekspression og PGE2 frigivelse fra esophageal kræftceller EC9706 og KYSE150. Således er vores resultater viser, at RPS kunne være en COX-2-hæmmer.

Selvom voksende antal undersøgelser af celler linjer og dyremodel af forskellige former for kræft viser klart anti-cancer og andre gavnlige virkninger af RPS sådan som reducerer toksiciteten af ​​kemoterapeutiske midler, bør toksicitet og neurofarmakologiske bivirkninger af RPS ikke overses. Liu et al. rapporterede, at en enkelt oral administration af RPS udøvede bivirkninger på den generelle adfærd og dødelighed hos mus med en

LD

50

værdi på 2182,4 mg /kg i mus [24]. Derudover har de også viste, at RPS ved koncentrationer på 100, 250 og 500 mg /kg signifikant undertrykt gastrisk tømning, men påvirkede ikke intestinal transit i mus [24].

LD

50 værdi på RPS for rotter er stadig ukendt. Dosis af 350 mg /kg RPS i denne undersøgelse, som er 16% af

LD

50 værdi for mus, viste sig at være sikkert for rotter. Bortset fra, at 2 rotter i NMBA + RPS-gruppen døde på grund af forkert administrere RPS ind i luftvejene, alle de andre rotter i gruppen overlevede. Ingen åbenlyse toksiske virkninger blev observeret i vores undersøgelse. Vi vil teste lavere dosis RPS, f.eks 200 mg /kg, i rottemodellen af ​​esophageal cancer og undersøge toksiciteten af ​​RPS i rotter i fremtidige undersøgelser.