PLoS ONE: humant papillomvirus typespecifikke Udbredelse i livmoderhalskræft Screening Befolkning tjekkisk Women

Abstrakt

Baggrund

Infektion med højrisiko human papillomavirus (HPV) type er blevet anerkendt som en kausal faktor for udviklingen af ​​livmoderhalskræft og en række andre maligniteter. I dag, vacciner mod HPV, meget effektiv i forebyggelsen af ​​vedvarende infektion og forstadier til kræft, er tilgængelige for den rutinemæssige kliniske praksis.

Målsætninger

De oplysninger om forekomsten og typespecifikke HPV fordeling i populationen af ​​hvert land er afgørende for overvågningen af ​​typespecifikke prævalens HPV ved starten af ​​vaccination mod HPV.

Metoder

Kvinder deltager i et forebyggende gynækologisk undersøgelse, som havde ingen historie unormal cytologisk fund og /eller operation for celleforandringer i livmoderhalsen læsioner blev indskrevet. Alle prøver blev testet for tilstedeværelsen af ​​HPV ved High-Risk Hybrid Capture 2 (HR VK2) og ved en modificeret PCR-reverse line blot assay med bredspektrede primere (BS-RLB).

Resultater

cervikale smears af 1393 kvinder blev analyseret. I 6,5% af kvinderne, blev påvist atypiske cytologiske fund. I alt 28,3% (394/1393) af kvinderne var positive for enhver HPV-type af BS-RLB, 18,2% (254/1393) af HR VK2, og 22,3% (310/1393) af BS-RLB for HR HPV-typer. Hos kvinder med atypiske fund prævalensen for HR og eventuelle HPV-typer var signifikant højere end hos kvinder med normale cytologiske fund. Samlet set blev påvist 36 forskellige HPV-typer, med HPV 16 er den mest fremherskende (4,8%). HPV positivitet faldt med alderen; den højeste udbredelse var 31,5% i aldersgruppen 21-25 år.

Konklusioner

Vores forsøgspersoner repræsentere den virkelige screening befolkning. HPV prævalens i denne population i Tjekkiet er højere end i andre lande i Østeuropa. Også spektret af de mest udbredte HPV-typer afviger fra dem rapporteret af andre, men HPV 16 er, samstemmende, den mest udbredte type. Landespecifikke HPV typespecifikke prævalens giver baseline oplysninger, som vil gøre det muligt at måle effekten af ​​HPV-vaccination i fremtiden

Henvisning:. Tachezy R, Smahelova J, Kaspirkova J, Salakova M (2013) human papillomavirus type -specifikke Udbredelse i screening for livmoderhalskræft Befolkning af tjekkiske kvinder. PLoS ONE 8 (11): e79156. doi: 10,1371 /journal.pone.0079156

Redaktør: Daniela Flavia Hozbor, Universidad Nacional de La Plata, Argentina

Modtaget:. 21 juni 2013; Accepteret: September 26, 2013; Udgivet: November 12, 2013 |

Copyright: © 2013 Tachezy et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af tilskud NS 10 /656-3 /2009 og ved tilskud NT 12372 fra sundhedsministeriet i den Tjekkiske Republik. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Biopticka laboratorium er en privat virksomhed, der leverer rutinemæssig patologisk, cytologiske og molekylærgenetiske diagnostik af menneskelige kliniske prøver. Den medforfatter, Jana Kaspirkova, er en molekylær genetiker som er ansvarlig for hensigtsmæssig prøvetagning og der har bidraget til dataanalyse. Der er ikke nogen potentiel interessekonflikt vedrørende undersøgelsens resultater, og hun bekræfter, at dette ikke ændrer tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Humane papillomavirus (HPV ) er små DNA-virus, som inficerer mucosale og hud epitel. I øjeblikket er kendt mere end 170 HPV-typer, 13 klassificeret som høj risiko og 7 som formentlig HPV-typer højrisiko. De lav risiko (LR) HPV-typer forårsager godartede læsioner, mens høj risiko (HR) HPV-typer er blevet etableret som ætiologiske agenter for livmoderhalskræft (CC) [1,2]. Udover livmoderhalskræft, HR HPV har kræftfremkaldende virkninger på flere andre anatomiske steder i kvinder og mænd [3]. HPV’er er i øjeblikket den mest almindelige virale seksuelt overførte infektioner på verdensplan, men fordelingen af ​​forskellige genotyper varierer befolkninger og geografiske regioner [4]. I en metaanalyse af 1 million kvinder med normale cytologiske fund, den anslåede globale HPV prævalens var 11,7%, og der var væsentlige forskelle mellem kontinenter. Men fem HPV-typer var konsekvent den mest udbredte: HPV 16, 18, 52, 31 og 58, uanset den geografiske placering. I Europa blev den højeste udbredelse findes i østlandene [5]. Dataene fra Tjekkiet offentliggjort før [6] ikke indgik i metaanalysen, fordi undersøgelsen ikke opfyldte inklusionskriterierne på grund af en uhensigtsmæssig udvælgelse af kvinder med normale cytologiske fund, da de blev rekrutteret på et hospital baseret indstilling. Prævalensen af ​​HPV i denne gruppe var høj (23%), men ligner andre østlige lande. prævalens Høj HPV blev rapporteret at korrelere med høj forekomst af CC med to undtagelser, sydlige Asien og Østeuropa [5]. Men i Tjekkiet forekomsten af ​​CC er konsekvent meget høj, 16,1 /100 000 kvinder (europæisk standard) i 2010, på trods af, at betydelige finansielle ressourcer er rettet mod forebyggelse af livmoderhalskræft. Årsagerne er primært en manglende koordinering og overvågning, der fører til over-screening af et mindretal af kvinder, mens størstedelen af ​​målgruppen er under-screenet eller ikke afskærmet på alle [7]. Alderen anbefales af den tjekkiske Gynækologisk og obstetrisk Society for første undersøgelse af kvinder efter debut af seksuel liv er 15 år, og der er ingen begrænsning med hensyn til screening alder er angivet i programmet for livmoderhalskræft forebyggelse af kræft i Tjekkiet. Men kvinderne i alderen 25 til 60, som ikke deltog i undersøgelsen i de sidste to år bør inviteres af sygesikringen selskab [8].

HPV afsløring er blevet vist som en robust, reproducerbar og følsom test for visitation af kvinder med abnorme cytologiske resultater og for opfølgning af kvinder behandlet for celleforandringer i livmoderhalsen læsioner. Desuden HPV detektering er også for nylig blevet vist sig at være en følsom og omkostningseffektiv test til identifikation af risikopatienter primære livmoderhalskræft screeningsprogrammer [9,10]. To profylaktiske papillomavirus vacciner, bivalente og quadrivalent, er til rådighed for primær forebyggelse af HPV-associerede sygdomme [11]. Evalueringen af ​​typespecifikke prævalens HPV i befolkningen før begyndelsen af ​​rutine vaccination og overvågning af mulige ændringer i typen fordelingen er vigtigt både for udvælgelsen af ​​de diagnostiske tests og til vurdering af den potentielle lokale virkninger af HPV-vacciner på forebyggelse af HPV-associerede sygdomme hos kvinder og mænd.

Materialer og metoder

studiepopulation

I Tjekkiet screening intervallet er et år. Kvinder med atypisk cytologisk og /eller colposcopical fund er planlagt til opfølgning eksamen i 3-6 måneder interval. HPV påvisning og typning blev udført i kvinder, der havde deres tidligere gynækologisk undersøgelse mere end et år siden, og som ikke havde nogen historie af atypiske eller patologiske fund på livmoderhalsen og ingen tidligere behandling for celleforandringer i livmoderhalsen læsioner.

Alt i alt, prøver af 1393 kvinder (gennemsnitsalder 33,5 år aldersgruppe 14 – 79 år) blev udvalgt fra bredden af ​​prøver af biopsi Laboratory i Pilsen, Tjekkiet. Disse prøver blev leveret af gynækologer, der behandler patienter i 5 af 14 forskellige distrikter i Tjekkiet i perioden mellem januar 2010 og december 2011. Disse placeringer omfatter både store byer og landområder. Prøver i Sample Transport Medium (STM) (Qiagen, Hilden, Tyskland) blev sendt til det nationale referencelaboratorium for Papillomavirus (NRL PV) under identifikationsnummer laboratorium nummer (lab-ID) til hinder for personlig identifikation af forsøgspersoner i NRL PV. Undersøgelsen var dobbeltblind. De mennesker, der udfører HPV-DNA-detektion og typning var ikke klar over de cytologi resultater og cytologists blev blindet for HPV DNA resultater. De cytologiske Resultaterne var tilgængelig under lab ID for den endelige analyse.

Cytologisk klassificering.

Klassificeringen cytologiske blev udført i henhold til Bethesda 2001 opdatering [12]. Med henblik på denne undersøgelse blev de cytologiske fund grupperet i fire kategorier: normal, mindre (hvis atypiske planocellulære celler af ukendt betydning /ASC-US /og /eller atypiske kirtelceller, ikke andetsteds specificeret /AGC-NOS /blev opdaget) , mild (hvis //blev opdaget lav kvalitet planocellulære intraepithelial læsioner LSIL), eller svær (hvis atypiske planocellulære celler, kan ikke udelukke high-grade planocellulære intraepithelial læsion /ASC-H /og /eller atypiske kirtelceller, favorisere neoplasi /AGC- NEO /, og /eller high-grade planocellulære intraepithelial læsioner /HSIL /) blev påvist).

Etik erklæring.

Undersøgelsen blev godkendt af etik udvalg af Institut for Hæmatologi og blodtransfusion. Behovet for samtykkeerklæring blev frafaldet af den etiske komité, fordi prøverne blev udvalgt anonymt fra banken af ​​prøver af biopsi Laboratory i Pilsen, Tjekkiet (https://www.biopticka.cz/).

data tilgængelighed.

undersøgelsen kildedata vil blive stillet til rådighed på anmodning, i overensstemmelse med de principper, som National Research Council US National Academies (National Academies Press, 2003).

HPV afsløring og genotypebestemmelse

Hybrid Capture 2 assay (VK2).

En 200 pi portion fra hver prøve Transport Medium (STM) (Qiagen, Hilden, Tyskland) prøve blev opbevaret ved -20 ° C indtil yderligere behandles (se nedenfor). Alle prøver blev testet ved hjælp af Hybrid Capture® 2 High-Risk HPV-DNA-test (HR VK2) (Digene Corporation, Gaithersburg, MD). Denne test muliggør påvisning af 13 HR HPV-typer (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 og 68). Testning blev udført i overensstemmelse med producentens anvisninger. Tærsklen for positiv HPV betegnelse var en relativ lys enhed /cutoff (RLU /CO) forholdet mellem ≥1.0.

PCR og hybridisering.

Celler fra en 200 pi portion af hver SMS prøve blev pelleteret ved centrifugering, og DNA blev ekstraheret under anvendelse af QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) ifølge den producentens protokol. Den endelige eluering af DNA fra søjlen blev udført af 100 pi af elueringspufferen.

Tilstedeværelsen og integritet af det humane DNA blev bekræftet ved PCR med primerne MS3 /MS10bio specifikke for beta-globin-genet [13].

Amplifikationen blev udført i en PCR thermocycler (PTC 200, MJ Research Inc., Waltham, MA, USA) med en blanding af bredspektret BSGP5 + primere og 5′-enden biotinmærkede BSGP6 + primere, der amplificerer de 150 bp fragment af L1-genet [13]. Halvtreds mikroliter af PCR-blandingen indeholdt 4 pi det isolerede DNA, 50 mM KCI, 10 mM Tris HCI, pH 8,3 (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Tyskland), 200 uM af hvert deoxynucleosidtriphosphat, 3,5 mM MgCl2, 1 U af DNA AmpliTaq Gold polymerase (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Tyskland), 10 pmol af hver af de ni BSGP5 + primere, og 20 pmol af hver af de tre 5′-biotinyleret BSGP6 + primere (MWG-Biotech AG, Ebersberg, Tyskland). Efter indledende denaturering ved 94 ° C i 4 minutter, hver af de 40 cykler bestod af denaturering ved 94 ° C i 20 sekunder, primerannealing ved 38 ° C i 30 sekunder, og kædeforlængelse ved 71 ° C i 80 sekunder. Ved afslutningen blev inkubering ved 71 ° C i 4 minutter udført. Efter amplifikation blev 10 pi af PCR-produktet analyseret på en vandret 3% agarosegel (NuSieve 3: 1 agarose, FMC BioProducts, Rockland, ME).

I genotypebestemmelse, den omvendte line blot-hybridisering (RLB) blev anvendt [14]. Den RLB metode kan identificere 37 forskellige HPV-typer i samme assay. Sekvenser af alle prober, bortset redesignet ifølge Schmitt [15] (HPV type 16, 39, 59, og 82, og universelle prober U1 og U2), blev beskrevet før [14]. Alle prober blev covalent bundet med det 5′-terminale aminogruppe til en aktiveret negativt ladet Biodyne C-membran og hybridiseret med biotinylerede PCR-produkt. Efter vask blev membranen inkuberet med peroxid-mærket streptavidin-konjugat ved 42 ° C i 60 minutter. For kemiluminiscerende påvisning af hybridisering DNA blev membranen inkuberet i ECL påvisning væske (Amersham Biosciences, Uppsala, Sverige) og eksponeret for LumiFilm (Roche, Indianapolis, IN) i 5 minutter.

Prøverne positive ved HR VK2 men negative ved BS-RLB blev testet ved PCR med konsensus primere MY09 /MY11 og HMB01 som specificeret før [16]. Positive prøver blev typebestemt ved sekventering som vist nedenfor.

HPV-sekventering.

De prøver der ikke havde hybridiseret på RLB men havde påvist en klar bånd på agarosegel blev underkastet DNA nukleotidsekventering for at bestemme den nøjagtige HPV-genotype. Fyrre mikroliter af PCR-produktet blev skåret ud fra 2% agarosegel (NuSieve GTG agarose, FMC BioProducts, Rockland, ME, USA), oprenset ved anvendelse af MinElute Gel Extraction kit (Qiagene, Hilden, Tyskland), og sekventeret med ” BigDye Terminator Primer Cycle Sequencing kit “(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Analysen blev udført på et automatiseret ABI PRISM 3500 sekventeringssystem (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), og sekvenserne blev analyseret af kulørtheder software og evalueres af BLAST-softwaren (http: //www.ncbi.nlm.nih .gov /BLAST /).

Lineær Array HPV genotypeundersøgelse (LA).

Prøver med afvigende resultater ved HR VK2 og PCR-metoder (se ovenfor) blev testet med LA (Roche). Denne test muliggør påvisning af 37 HR og LR HPV-typer (HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56 , 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 (MM9), 81, 82 (MM4), 83 (MM7), 84 (MM8), IS39, og CP6108). Afprøvningen blev udført i overensstemmelse med producentens anvisninger. Fra det ekstraherede DNA, blev det samme beløb som for BS-RLB metoden (4 pi) anvendes.

Statistiske analyser

Multiplicer inficerede prøver var dem, der var blevet opdaget to eller flere HPV-typer. Sådanne prøver blev talt som positive for én type HPV og også blandt positive for de andre. De typespecifikke HPV prævalens er udtrykt i procent af alle testede for HPV fag, og dermed repræsenterer udbredelsen HPV i enten enkelte eller flere infektioner. For at udtrykke den repræsentation af hver type i enkelte og multiple infektioner, blev hver prøve tildelt i proportionale fraktioner til bestemte genotyper men tælles kun én gang [17]. Forskellen i HPV prævalens i gruppen af ​​kvinder med normale cytologiske resultater blev sammenlignet med de kvinder med atypiske resultater (ASC-US /AGC-NOS, AGC-NEO /LSIL, ASC-H /HSIL) med 95% konfidensintervaller ( CI) under anvendelse af GraphPad InStat (version 3.00) (GraphPad Software, San Diego, CA). For kontingenstabeller, blev standard chi i anden test og Fishers eksakte test anvendt. Alle tests var tosidet og signifikansniveauet var en = 0,05. For at udelukke forskelle i alderssammensætning mellem befolkninger brugte vi direkte standardisering (WHO verden standard). Den Kappa statistik blev anvendt til at måle aftale om HPV positivitet status mellem de to test, der anvendes.

De fundne HPV-typer blev klassificeret i lav-risiko (LR) (HPV 6, 11, 32, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 72, 74, 81, 90, og 114), høj risiko (HR) (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, og 68), og formentlig med høj risiko (pHR) (HPV 26 , 53, 66, 67, 70, 73, og 82) typer af slægten Alpha, der indeholder de mucosale typer af HPV [18-20]. I vores analyser, vi definerede (baseret på det fylogenetiske slægtskab) HPV 31 som tæt knyttet til HPV 16 og HPV 45, så tæt knyttet til HPV 18. HPV 33, 52, og 58 som mere fjernt beslægtet med HPV 16.

laboratoriet er akkrediteret til ČSN EN ISO 15 189 og deltager jævnligt i eksterne kontrolprogrammer kvalitet arrangeret af instand (Tyskland) og Mendel center for Biomedicinsk Institut (Cypern). Desuden laboratoriet deltog to gange i WHO HPV LabNet Proficiency Undersøgelse af HPV-DNA Typing arrangeret af WHO HPV Global referencelaboratorium [21,22].

Resultater

Ud af 1393 kvinder i vores undersøgelse, 25,6% (357/1393) var yngre end 25 år, og 2,2% var ældre (32/1393) end 60 år, dvs. 72% lå inden for det anbefalede aldersgruppe for screening. Størstedelen af ​​kvinderne – 93,5% (1302/1393) – havde normale cytologiske resultater. I alt 6,5% (91/1393) af kvinderne havde abnorme cytologiske fund, 4,4% (61/1393) havde ASC-US eller AGC-NOS, 2,0% (28/1393) havde AGC-NEO eller LSIL og 0,1% ( 2/1393) havde ASC-H eller HSIL. Færre kvinder – 18,2% (254/1393) – var positive for HR HPV af HR VK2 metode i forhold til BS-RLB, som registreres 22,3% (310/1393) HR HPV eller HR og LR HPV positive kvinder og 28,3% (394 /1393) var positive ved BS-RLB for enhver HPV-type. De tilsvarende prævalens, alder-standardiseret til verdens befolkning, var 14,7%, 19,5%, og 24,6%, hhv. Ved BS-RLB, 70,6% (278/394) af forsøgspersonerne var HPV positive for en enkelt HPV-type, mens 29,4% var positive for flere typer (18,3% for to, 6,9% for tre, 2,8% til fire, 1,3% for fem og 0,3% for seks HPV-typer). LR HPV-typer, som en enkelt infektion, var til stede i 6,0% (84/1396) af kvinder (tabel 1).

cytologiske RESULTATER

Alle

normal

ASC-US /AGC-NOS

AGC-NEO /LSIL

ASC-H /HSIL

p-værdi

N [%] N [%] N [%] N [%] N [%] HR HC2254 (18,2) 203 (15,6) 23 (37,7) 27 ( 96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, HR HPV * 310 (22,3) 256 (19,7) 27 (44,3) 26 (92,9) 1 (50,0) 0.0001PCR, enhver HPV394 (28,3) 333 (25,6) 33 ( 54,1) 27 (96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, LR HPV ** 84 (6,0) 77 (5,9) 6 (9,8) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.4912HPV 6/11

*** 20 (1,4) 19 (1,5) 0 (0,0) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.7503HPV 16/18

# 104 (7,5) 86 (6,6) 9 (14,8) 9 (32,1) 0 (0,0) 0.0001HPV 31/45

*** 43 (3.1) 37 (2,8) 3 (4,9) 3 (10,7) 0 (0,0) 0.0565HPV 33/52/58

48 (3.4) 38 (2,9) 6 (9,8) 3 (10,7) 1 (50,0) 0.0007Table 1. HPV prævalens af cytologiske resultater og ved HPV-DNA-detektion metode

p-værdi til sammenligning af HPV prævalens i patient med normale og atypiske (ASC-US /AGC-NOS, AGC-neo /LSIL, ASC-H /HSIL) cytologiske fund, HR HC2 = Hybrid Capture HR test, PCR = polymerase chain reaktion, ASC-US = atypiske planocellulære celler af ukendt betydning, AGC-NOS = atypiske kirtelceller, ikke andetsteds specificeret, AGC-NEO = atypiske kirtelceller, favorisere neoplasi, LSIL = lav kvalitet skællede intraepithelial læsion, ASC-H = atypisk pladecellekræft celler, kan ikke udelukke høj kvalitet skællede intraepithelial læsion (HSIL), HSIL = high-grade skællede intraepithelial læsion * tilstedeværelsen af ​​HR HPV og også HR HPV i multiple infektion med LR HPV-typer, ** tilstedeværelse af LR HPV-typer kun i enkelte eller multiple infektioner med andre LR typer *** prøver, som ikke indeholder HPV 16 og /eller 18,

# prøver HPV 16 og /eller 18 positive,

prøver, som ikke indeholder HPV 16 og /eller 18 og /eller 31 og /eller 45 CSV download CSV

cytologisk normale kvinder var positive for HR HPV-typer i 15,6% (203/1302) af HC2 testen. Brug af BS-RLB, 19,7% (256/1302) af de cytologisk normale kvinder var positive for HR HPV-typer, og 25,6% (333/1302) for enhver HPV-type (tabel 1). De respektive prævalens, alder-standardiseret til verdens befolkning, var 12,5%, 16,3%, og 21,4%. Af undersøgelsens kvinder, blev 5,9% (77/1393) inficeret med LR HPV-typer.

Forekomsten af ​​multiple infektion steget med sværhedsgraden af ​​cytologiske fund (P for trend = 0,0003) (Tabel 2). Multiple infektion var mere almindelig i yngre alder og var fraværende hos kvinder ældre end 55 år (figur 1).

HPV DNA FOREKOMSTEN (%)

Aldersgruppe

N

HR VK2

PCR HR HPV

PCR NOGEN HPV

PCR LR HPV

HPV 6/11

HPV 16/18

≤2015334 (22,2) 43 (28,1) 54 (35,3) 11 (7,2) 4 (1,3) 13 (9,2) 21-2521367 (31,5) 73 (34,3) 87 (40,8) 14 (6,6) 7 (3,3) 26 (12,2) 26-3020229 (14,4) 43 (21,3) 56 (27,7) 13 (6,4) 4 (2,0) 18 (8,9) 31-3521634 (15,7) 42 (19,4 ) 54 (25,0) 12 (5,6) 3 (1,4) 12 (5,6) 36-4019218 (9,4) 24 (12,5) 36 (18,8) 12 (6,3) 2 (1,0) 6 (3,1) 41-4511410 (8,8) 13 (11,4) 17 (14,9) 4 (3,5) 0 (0,0) 3 (2,6) 46-50905 (5,6) 9 (10,0) 17 (18,9) 8 (8,9) 0 (0,0) 7 (7,8) 51-55555 (9,1 ) 4 (7,3) 5 (9,1) 1 (1,8) 0 (0,0) 3 (3,6) 56-60371 (2,7) 3 (8,1) 4 (10,8) 1 (2,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 61-65210 (0,0) 2 (9,5) 3 (14,3) 1 (4,8) 1 (4,8) 0 (0,0) 6590 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) tabel 2. Alder specifikke HPV prævalens ved metode af HPV DNA-detektion i kvinder med normale cytologiske fund.

CSV Hent CSV

Uanset hvilken metode der anvendes til HPV detektering, forekomsten af ​​HR-HPV steget med sværhedsgraden af cytologiske fund mens forekomsten af ​​LR HPV-typer i en enkelt eller flere infektion forbliver mere eller mindre stabil (tabel 1). I vores undersøgelse blev der kun to kvinder opdaget med svære cytologiske fund, den ene med HSIL var positiv med både HR VK2 og BS-RLB (HPV 33) og en patient med ASC-H blev negativt med begge metoder.

Forekomsten af ​​HR-HPV var alder afhængige. Den højeste forekomst af HR HPV blev observeret i aldersgruppen 21-25 år, som både HR VK2 og BS-RLB, 34,2% (78/228) og 36,8% (84/228), henholdsvis og hurtigt faldt i ældre kvinder . I en alder kategorien 61-65 år, BS-RLB opdaget 9,1% (2/22) af HR HPV positive og HR HC2 gav negative resultater (figur 2).

Hos kvinder med normale cytologiske fund, forekomsten af ​​HR-HPV var lidt lavere i forhold til hele kohorten, nå maksimum på 31,5% (67/213) og 34,3% (73/213) i en alder af 21-25 år, som vurderet af HR HC2 og BS-RLB, (tabel 2).

Påvisning af HR-HPV-DNA af HR HC2 og BS-RLB givet overensstemmende resultater i 91,4% (1273/1393) af prøver. Korrelationen var betydelig (Kappa-værdi = 0,7339).

Ud af 120 afvigende prøver, 88 var BS-RLB positive, men HR VK2 negativ for HR HPV. Ud af disse, 76,1% (67/88) indeholdt HR HPV-typer, der er målrettet af HR VK2 sæt. I 32,8% (22/67) af disse prøver blev påvist multiple HPV-infektion. Vaccineopløsningerne HR HPV type 16 og /eller 18 blev detekteret i 31,8% (28/88) af disse prøver: i 60,7% (17/28) som en enkelt infektion og i 39,3% (11/28) som del af en multipel infektion. Tre af disse 28 patienter (10,7%) med multipel infektion havde mistænkelige cytologiske fund (ASC-US), mens de resterende 89,3% af forsøgspersonerne havde normal cytologi.

Der var 32 prøver positive på HR VK2 men negative for HR HPV af BS-RLB. I 56,3% (18/32) af disse prøver, BS-RLB detekteret LR HPV-typer kun (HPV 6, 32, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 74 og 81); de resterende 43,8% (14/32) af prøverne var BS-RLB negativ for enhver HPV-type. Gennemsnittet af RLU /CO i de 14 prøver var temmelig lav (12,3 RLU /CO), hvilket svarer borderline til svag positivitet prøve på HR VK2. I 10/18 prøver, positive ved BS-RLB for LR HPV-typer kun, LA også påvist HR HPV-typer, for det meste som en del af flere infektion. I 6/14 prøver negative af BS-RLB for enhver form, LA også detekteret HR HPV-typer (tabel 3). Vejviser HPV TYPE

PRØVE

cytologiske RESULTATER

HR HC2 [RLU /CO]

BS-RLB

LA

1Normal8.144242,662Normal1.2342423ASC-US14.334242,514Normal3.2005Normal1.742426LSIL35.944,81*31,62,81,52**7Normal1.2008Normal14.34435*9Normal132.70010Normal1.60011Normal1.10012ASC-US2.5424213Normal11.960014Normal6.2740**15Normal1.984242,66,8416Normal2.27616117Normal4.70018Normal1.8035,5919Normal5.9003120Normal1.4344,54*0**21Normal6.1754*31,5422Normal1.470*54,6223Normal1.46425924***Normal5.22623125Normal1.213283,84**26Normal1.8703527Normal10.126161,8128Normal1.1405229Normal5.244359**30Normal3.9005231Normal1.50059,8132Normal23.7766,31Table 3. Resultater af HPV-type-specifik påvisning ved hjælp af Linear Array (LA) i prøver er negative for HR HPV på BS-RLB men positive på HR VK2.

* BS-RLB ikke registrerer HPV 62, ** LA gør ikke registrere HPV 32, 43, 44, 74; *** HPV 66 detekteres ved hjælp af MY09 /11 PCR og sekventering CSV download CSV

Alt i alt blev påvist 35 forskellige HPV-typer: 20 HR og PHR HPV-typer og 15 LR HPV-typer. Prævalensen af ​​HPV type og cytologisk fund er vist i tabel 4. De mest fremherskende HR typer blev HPV 16 (5,4%), efterfulgt af HPV 56, 39, 53 og 18, mens af LR typer, HPV 42, 54, 44, , 6, og 61 blev oftest opdaget. De forekomsten af ​​vaccinationen, nært og fjernt beslægtede HPV-typer i alle kvinder samt hos kvinder med normal cytologi var næsten identiske og er opsummeret i tabel 1. HPV 6 og /eller 11 blev kun fundet i 1,4% (20/1393) af prøver mens HPV 16 og /eller 18 i 7,5% (104/1393) af prøver. Nært beslægtede typer HPV 31 og /eller 45 var til stede i 3,1% (42/1393) og fjernt beslægtede typer HPV 33 og /eller 52 og /eller 58 i 3,4% (48/1393) af prøver.

cytologiske RESULTATER

TYPER

alle NORMAL

ASC-US /AGC-NOS

AGC-NEO /LSIL

ASC-H /HSIL

N

%

N

%

N

%

N

%

N

%

1393100.0130293.5614.4282.020.1N+%N+%N+%N+%N+%HPV ALL39428.333325.63354.12796.4150.0HR HPV31022.325619.72744.32692.9150.0HPV single27870.624774.21751.51348.11100.0HPV multiple11629.48625.81648.51451.900.06201.4191.500.013.600.01120.120.200.000.000.016755.4634.8711.5517.900.018322.3241.846.6414.300.02610.110.100.000.000.031221.6161.234.9310.700.03210.110.100.000.000.033191.4171.311.600.0150.03550.450.400.000.000.039332.4262.023.3517.900.04050.450.400.000.000.042433.1362.846.6310.700.04330.220.211.600.000.044191.4161.211.627.100.045292.1262.034.900.000.051312.2211.646.6621.400.052241.7171.334.9414.300.053332.4251.9711.513.600.054271.9201.569.813.600.056392.8312.446.6414.300.058141.0110.834.900.000.059130.990.734.913.600.06190.690.700.000.000.06220.120.200.000.000.06670.560.500.013.600.06730.230.200.000.000.068201.4161.211.6310.700.070130.9120.900.013.600.07210.100.000.013.600.07370.570.500.000.000.07450.440.311.600.000.08160.440.311.613.600.082120.990.711.627.100.09020.120.200.000.000.011410.110.100.000.000.0Table 4. Forekomsten af ​​HPV-typer i screeningen populationen af ​​tjekkiske kvinder ved cytologiske fund som afsløret af BS-RLB.

CSV Hent CSV

Diskussion

Denne undersøgelse giver grundlæggende oplysninger om HPV-type- specifik forekomst i Tjekkiet før begyndelsen af ​​rutinemæssige vaccination og giver mulighed for yderligere overvågning af ændringer i forekomsten af ​​en række HPV genotyper. Forekomsten er blevet undersøgt i screeningen befolkning tjekkiske kvinder. To metoder til HPV-detektion blev anvendt. For at give internationalt sammenlignelige data, blev den mest udbredte kommercielt tilgængelige sæt HR VK2 valgt. Den anden metode, på den anden side, giver mulighed for en meget følsom påvisning af et bredt spektrum af HPV-typer, og også af flere infektioner. De to metoder gav overensstemmende resultater i 91% af prøverne. HPV og HR HPV er meget udbredt i den tjekkiske befolkning. Den højeste forekomst blev observeret i aldersgruppen 21-25 år. Hos kvinder ældre end 55 år, blev påvist nogen multiple infektion og næsten ingen LR typer. De fleste af kvinderne havde normale cytologiske fund, kun 6,5% af kvinderne havde abnorme cytologiske fund. Dette er i overensstemmelse med de årlige data i Den Tjekkiske største cytologiske laboratorium, som udfører omkring 600 000 cytologiske undersøgelser af screening cytologi året. Ca. 7,5% af kvinderne fra screeningen population blev inficeret med vaccinationen HR typer og 6,5% ved tæt og fjernt beslægtede HR typer, mens LR vaccinationen typer var meget mindre hyppige (1,4%). I lighed med andre lande, den mest udbredte HR type var HPV 16, men andre HR HPV-typer (HPV 56, 39/45, 18, og 51), der var de mest almindeligt påvist i den tjekkiske befolkning blev anderledes end dem rapporteret for de europæiske lande ved Bruni et al. (HPV 16, 31, 18, 39, 33, og 66) [5].

Meta-analyser samt en samlet analyse af typespecifikke prævalens HPV hos kvinder med normal cytologiske fund verden over er blevet udført [4,5,23], men de tidligere offentliggjorte data fra Den Tjekkiske Republik [6] er ikke medtaget på grund af deres uegnethed. Data om HPV-type-specifikke forekomst i screeningen befolkning fra Østeuropa er stadig begrænsede. Ingen af ​​de østeuropæiske lande indgik i de første poolede analyser [23]. I meta-analyse af de Sanjosé et al. kun data fra Rusland blev analyseret mens Bruni et al. inkluderet også data fra Polen, Ungarn, Hviderusland og Letland [4,4,5]. Men for nogle lande, f.eks Ungarn, kun den samlede prævalens af HR og LR typer blev vurderet, for andre lande, blev et begrænset antal HPV-typer analyseres eller kun en del af HPV-positive prøver blev indtastet. For nylig, data fra Slovenien er også blevet publiceret [24].

Den verdensomspændende HPV prævalens hos kvinder med normal cytologi i den samlede analyse var 10,4%, HPV prævalens i Europa var 8,1%, og fordelingen varierede betydeligt mellem kontinenter. Østeuropa var repræsenteret af kun én undersøgelse fra Rusland med 309 kvinder tilmeldt. HPV prævalens i denne undersøgelse var meget højere end i andre europæiske regioner (29,1%). HPV 16 var den mest udbredte form på verdensplan (2,5%) samt i Østeuropa (7,4%), men dette resultat skal overvejes med forsigtighed, da kun 100 HPV-positive prøver blev skrevet i den russiske undersøgelse. Forekomsten af ​​HPV 16 i andre europæiske regioner var meget lavere (1,6% til 3,0%) [4].

metaanalyse af en million kvinder med normale cytologiske fund [5] fundet en samlet prævalens af HPV på 11,7%, sammenligneligt i hele verden. Denne meta-analyse omfattede data fra fem østeuropæiske lande og bekræftet en væsentligt højere forekomst af HPV i disse fem lande i forhold til andre europæiske regioner (21,4% vs. 8,8% -10%). I vores undersøgelse, forekomsten af ​​enhver HPV-type hos kvinder med normal cytologiske fund var 25,6% og var højere end i Polen (16,6%). De forekomsten af ​​HR HPV-typer hos kvinder med normal cytologiske fund var lavere i Polen og Slovenien (9,6% og 10,7%, henholdsvis) end i Tjekkiet (19,7% og. 15,6% af BS-RLB og HR VK2 henholdsvis). I screeningen befolkning fra Rusland, Hviderusland og Letland, forekomsten af ​​HR HPV-typer var 27,2%. Eftersom der i de fire studier blev kvinder fra screeningen inkluderede population, kan de forskelle i forekomsten afspejler de reelle forskelle mellem populationer af de fire østeuropæiske lande eller kan tilskrives det faktum, at forskellige fremgangsmåder blev anvendt for HPV detektering som vist før [5]. Den polske undersøgelse benyttede GP5 + /6 + PCR-system, som er mindre følsom end den modificerede system, der anvendes i vores undersøgelse. Lignende system til vores blev anvendt af Schmitt et al. [25] til screening population af Belgian women og prævalensen opnået i deres undersøgelse var sammenlignelige med vores data. I den slovenske undersøgelse blev et system, som er rettet mod mindre HPV-typer udnyttet. Men i studiet af Kulmala et al. [26], blev et system, der registrerer kun ni HR HPV-typer anvendes, og den rapporterede forekomst var sammenligneligt højt som i den tjekkiske befolkning. En anden kilde til variation er sondringen mellem HR og LR HPV-typer. I analyserne, har vi inkluderet både HR og PHR HPV-typer som HR typer (se materialer og metoder). Hvis vi brugte den samme definition af HR-typer som den polske undersøgelse [27], vil HR HPV udbredelser i den tjekkiske befolkning være stadig meget højere, 20,4% for hele kohorten og 17,9% for kvinder med normale cytologiske fund. Vores data bekræfter den usædvanligt høje forekomst af HPV i screeningen befolkning i de østeuropæiske lande, og er også sammenlignelige med resultaterne af talrige andre undersøgelser udført rundt omkring i verden med den mest almindeligt anvendte sæt VK2 (for review se 5).

I screeningen befolkningen i de tjekkiske kvinder, den højeste forekomst af HPV blev fundet i aldersgruppen 21-25 år. Den højeste forekomst i samme aldersklasse blev fundet i både mindre og mere udviklede lande. I de østeuropæiske lande blev højdepunkt observeret i aldersgruppen 25-34 år [5].