PLoS ONE: MicroRNA-137 Opregulering Øger blærekræft Cell Proliferation og Invasion ved Målretning PAQR3

Abstrakt

Der er stigende tegn tyder på, at dysregulering af nogle microRNA (miRNA) kan bidrage til tumorprogression og metastase og har været foreslås at være vigtige regulatorer af forskellige biologiske processer såsom transkriptionel regulering, cellevækst og tumorigenese. Tidligere undersøgelser har vist, at MIR-137 er dysreguleret i nogle maligniteter, men dens rolle i blærekræft er stadig ukendt. I vores undersøgelse finder vi, at MIR-137 er opreguleret i humane blærecancer væv og cellelinier. Endvidere blev det højere MIR-137 forbundet med pM eller pTNM fase hos patienter kliniske blærekræft. Tvungen udtryk for miR-137 i blære cancerceller væsentligt forbedret deres proliferation, migration og invasion. Bioinformatik analyse identificeret tumorsuppressorgenet PAQR3 som en potentiel MIR-137 målgen. Yderligere undersøgelser indikerede, at MIR-137 undertrykte ekspressionen af ​​PAQR3 ved binding til dets 3′-utranslateret region. Silencing af PAQR3 af små interfererende RNA phenocopied virkningerne af miR-137 overekspression, hvorimod restaurering af PAQR3 i blære cancerceller blære cancerceller overekspression miR-137, delvist vendt de undertrykkende effekter af miR-137. Disse resultater viser, at MIR-137 kunne være en potentiel onkogen i blærekræft

Henvisning:. Xiu Y, Liu Z, Xia S, Jin C, Yin H, Zhao W, et al. (2014) MicroRNA-137 Opregulering Øger blærekræft Cell Proliferation og Invasion ved Målretning PAQR3. PLoS ONE 9 (10): e109734. doi: 10,1371 /journal.pone.0109734

Redaktør: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanien

Modtaget: April 15, 2014 Accepteret: September 8, 2014; Udgivet: 16 Okt 2014

Copyright: © 2014 Xiu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:. Finansiering fra National Natural Science Foundation of China (81170534) (https://www.nsfc.gov.cn/). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Blærekræft er den femte mest almindelige kræftform i den almindelige befolkning, og den næsthyppigste dødsårsag i patienter med urogenitale kanal maligniteter [1], [2]. Mere end 90% af urinblæretumorer består af overgangs- cellecarcinom (TCC), der hidrører fra overgangs- epitel [3]. Blæretumorer kan inddeles i to forskellige kategorier: ikke-muskler og muskel invasiv blærekræft [4], [5]. De fleste blæretumorer (75-80%) er diagnosticeret som ikke-muskel-invasiv tumorer, hvoraf tilbagefaldsrater er høje (50-70%) [6]. Resten er af høj kvalitet muskel invasive tumorer (15%), der hurtigt kan udvikle sig til metastaser og føre til dødsfald [7]. Selv betydelige fremskridt i behandlingen er blevet gjort, herunder forbedret kirurgisk operation, strålebehandling og kemoterapi, blærekræft fortsat en almindelig sygdom med høj dødelighed [8], [9].

For nylig stigende beviser tyder at en ny klasse af RNA’er, kaldet microRNA (miRNA), kunne regulere forskellige målgener, herunder onkogener og tumor-suppressor [10]. miRNA er endogene 19~22 nukleotid (nt) ikke-kodende RNA, der kan have en negativ regulerer proteinekspression ved at inducere nedbrydning af target mRNA, der krænker deres oversættelse eller begge ved specifikt at binde sig til 3′-utranslaterede regioner (3’UTR) af target mRNA [ ,,,0],11], [12]. Et stigende antal undersøgelser har vist, at miRNA bidrager til de fleste, hvis ikke alle, basale biologiske processer, såsom udvikling, differentiering, apoptose og celleproliferation [13] – [16]. Mutationer af miRNA gener eller dysregulering ekspression af miRNA er blevet godt beskrevet i mange typer tumorer, herunder mavecancer, lymfom, bryst-, lunge-, tyktarms- og leverkræft [17] – [22]. Imidlertid rolle miRNA i blærekræft forbliver stort set ukendt.

MIR-137 har tiltrukket megen opmærksomhed, fordi det ofte nedreguleres og fungerer som en tumorsuppressor i mange cancere, såsom ovariecancer, mavecancer, glioblastom, lungekræft, tarmkræft og neuroblastom [23] – [28]. En tidligere undersøgelse af Shimuzu et al. viste også, at miR-137 var ofte methyleret i primære blæretumorer og ektopisk udtryk for miR-137 undertrykt blærekræft celledeling [29]. Men vi heri rapportere selvmodsigende udtryk og funktion af miR-137 i blærekræft, som er modstandere af, at rapporteret i litteraturen. I denne undersøgelse, vi har registreret hyppig opregulering af miR-137 i humane blærekræft væv og cellelinier. Overekspression af MIR-137 fremmet celleproliferation, migration og invasion af blæren cancerceller. Endvidere fandt vi, at PAQR3, et hidtil ukendt tumorsuppressorgen, var den direkte mål for MIR-137 i blærekræft. Således er vores resultater tyder vigtige roller for miR-137 i blærekræft patogenese og angiver dens potentielle anvendelse i cancerbehandling.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Alle disse patienter accepterede at deltage i undersøgelsen og gav skriftligt informeret samtykke. Både denne undersøgelse og samtykke blev godkendt af den etiske bestyrelse instituttet af The First Affiliated Hospital i Harbin Medical University og overholdt Helsinki-deklarationen.

Humane væv

Biopsier fra blærecancer og den tilstødende normale urothelium blev opnået fra patienter, der gennemgår radikale cystektomi for blærekræft på The First Affiliated Hospital i Harbin Medical University, Kina. De operationer opstod fra april 2010 til april 2013 og alle patienter forudsat underskrevet informeret samtykke. Biopsierne blev opbevaret i flydende nitrogen umiddelbart efter resektion indtil RNA-ekstraktion. De demografiske og kliniske patologiske data er anført i tabel S1.

cellelinjer, cellekultur og miRNA transfektion

Fire humane blærekræft cellelinjer T24, J82, 5637 og UMUC3 og en normal blære celle line, SV-HUC-1, blev købt fra Shanghai Institute for Biokemi og Cellebiologi ved Chinese Academy of Sciences [30]. Cellelinierne blev dyrket i RPMI 1640 medium suppleret med 10% varmeinaktiveret føtalt bovint serum under en fugtig atmosfære af 5% CO2 ved 37 ° C. Dagen før transfektion blev cellerne udpladet i vækstmedium uden antibiotika ved en densitet på 30-40%. Transfektionen af ​​HSA-MIR-137 mimic, inhibitor, og scramble, kemisk syntetiseret ved GenePharma (Shanghai, Kina) blev udført under anvendelse af lipofectamin 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) ifølge producentens protokol og blev transficeret ind i cellerne med en endelig oligonukleotid koncentration på 20 nmol /l.

RNA isolering og QRT-PCR

Total RNA fra vævsprøver og dyrkede celler blev isoleret ved hjælp TRIzol reagens (Takara, Dalian, Kina). Før du udfører Kvantitativ RT-PCR-analyser (qPCR), blev RNA omvendt transskriberet til miRNA cDNA og total cDNA under anvendelse af One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Kina) og PrimeScript RT reagens Kit (Takara, Dalian, Kina), henholdsvis. Real-time PCR primersekvenser og betingelser blev anført i tabel S2 og tabel S3 henholdsvis ifølge MIQE retningslinje. MRNA og miRNA ekspressionsniveauer blev detekteret ved qPCR med Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR systemet realtids-PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, USA) med SYBR Premix Ex Taq (Takara, Dalian, Kina) i overensstemmelse med producentens instruktioner og blev normaliseret versus GAPDH mRNA og små nukleare RNA U6 hhv. Den Ct værdien af ​​miR-137 og PAQR3 blev kvantificeret med 2

-ΔΔCt metode.

Migration og invasion analyser

Cell invasion og migration blev analyseret ved hjælp af en transwell kammer (Millipore, USA) med og uden Matrigel (BD, Franklin Lakes, USA). For invasionen assayet blev en transwell kammer anbragt i en 24-brønds plade og blev belagt med 30 pi Matrigel og blev inkuberet i fyrre minutter ved 37 ° C. I begge transwell assay celler, 48 timer efter transficeret, blev trypsinbehandlet og podet i afdelinger med en densitet på 8 x 10

4 celler per brønd og dyrkedes i medium med RPMI 1640 medium med 2% serum, mens 600 pi 10 % FBS-1640 blev tilsat til det nederste kammer. Fireogtyve times senere blev migrerede celler fikseret med 100% methanol i 30 min. Ikke-migrerede celler blev fjernet ved vatpinde. Derefter celler på bundoverfladen af ​​membranen blev farvet med 0,1% krystalviolet (Sigma) i 20 min. Cell billeder blev opnået under et fasekontrastmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).

Cell spredning

Cell proliferationsassays blev udført ved hjælp af en Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan ). Blærekræft celler blev udpladet i plader med 24 brønde ved 2 x 10

5 celler pr. Celler blev inkuberet i 10% CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan), som blev fortyndet i normalt dyrkningsmedium ved 37 ° C, indtil den visuelle farve konvertering indtraf. Opformeringsrater blev bestemt ved 0, 24, 48 og 72 timer efter transfektion.

Western blots

Ækvivalente mængder (30-50 ug) protein blev adskilt ved 10% SDS polyacrylamidgeler og overføres til polyvinylidenfluorid (PVDF) membraner. Membraner blev blokeret med 5% fedtfri tørmælk og inkuberet natten over med det passende primære antistof ved fortyndinger er angivet af producenten. Derefter blev membranerne vasket tre gange i TBST og inkuberet med det tilsvarende peberrodsperoxidase (HRP) -konjugeret sekundært antistof ved 1:5,0000 fortynding i 1 time. Bundet sekundært antistof blev påvist under anvendelse af forøget kemiluminescens (ECL) systemet (Pierce Biotechnology Inc., USA). Primære immunoblotting antistoffer var:. Anti-GAPDH, anti-PAQR3 (Santa Cruz Biotechnology, USA)

Luciferase assay

T24-celler blev podet i 24-brønds plader (1 × 10

5 celler /brønd) og inkuberet i 24 timer før transfektion. For reportergenanalysen blev cellerne cotransficeret med 0,5 ug pGL3-PAQR3-3’UTR eller pGL3- PAQR3-3’UTR Mut plasmid, 0,05 ng af phRL-SV40 kontrolvektor (Promega, USA), og 100 nM mIR-137 eller kontrol-RNA under anvendelse af lipofectamin 2000 (Invitrogen, USA). Ildflue og Renilla luciferase-aktiviteter blev målt fortløbende gennem en dobbelt luciferase assay (Promega, USA) 24 timer efter transfektion.

Statistisk analyse

Hvert forsøg blev gentaget mindst tre gange. Statistiske analyser blev udført under anvendelse af SPSS 15.0. Data er præsenteret som middelværdi ± standardafvigelse. Statistiske analyser blev udført med enten en variansanalyse (ANOVA) eller t-test, og den statistiske signifikans niveau blev sat til α = 0.05 (to-side).

Resultater

Expression af mIR-137 er opreguleret i blæren cancercellelinier

ekspressionen af ​​mIR-137 blev først vurderet ved kvantitativ revers transkription-PCR (QRT-PCR) i blæren cancercellelinier og én normal blære cellelinie SV-HUC-1. Som vist i fig. 1, miR-137 var signifikant opreguleret i alle de blærekræft cellelinjer sammenlignet med SV-HUC-1. Vi kvantificeret yderligere ekspressionsniveauet for MIR-137 i 6 par humane blærecancer væv og tilstødende normale slimhindevæv ved QRT-PCR (fig. 1). Resultaterne viste, at ekspressionsniveauet af MIR-137 var generelt højere i tumorvæv sammenlignet med matchede ikke-tumorvæv. Således har vi spekuleret på, at MIR-137 kan være en formodet onkogen i blærekræft.

(A). Opregulering af MIR-137-ekspression i blæren cancercellelinier og væv sammenlignet med de tilsvarende kontroller. Relativ ekspression af MIR-137 i fire blærekræft cellelinjer og én normal blære cellelinie SV-HUC-1 blev bestemt ved QRT-PCR. U6 snRNA blev anvendt som intern kontrol. (B) Relativ udtryk for miR-137 i 6 kirurgiske eksemplarer af blærekræft væv og matchede ikke-tumorvæv blev bestemt ved qRTPCR. U6 snRNA blev anvendt som intern kontrol.

Angivelse af miR-137 i patienter kliniske blære kræft og deres korrelationsanalyse med klinisk-patologiske karakteristika

For at undersøge forholdet mellem miR-137 med blære cancer forekomst blev ekspressionen af ​​miR-137 påvist i 50 kliniske patienter, der bruger real-time PCR. Ud af 50 blære kræft prøver, miR-137 var opreguleret i 45 tilfælde (45/50, 90%) sammenlignet med tilstødende væv (Fig. 2B). I mellemtiden, miR-137 blev nedreguleret i 5 tilfælde (5/50, 10%). Generelt udtryk for miR-137 mod blærekræft væv var signifikant højere end i tilstødende væv (Fig 2A, p. 0,001). Det højere niveau ekspression af MIR-137 var forbundet med pTNM stadium (fig 2C.), Og højere niveau af MIR-137 var forbundet med pM fase (p = 0,05, metastase vs. ingen metastssis) i blærecancerpatienter (fig . 2D). Disse data antydede, at ændringer af miR-137 kunne være involveret i blærekræft progression.

(A) Relative miR-137 ekspressionsniveauer i blære kræft væv og tilstødende normale væv blev bestemt ved QRT-PCR. U6 snRNA blev anvendt som intern kontrol. (B) MIR-137 blev detekteret i 50 par blærekræft væv og tilstødende normale kontroller ved kvantitativ RT-PCR. Data er præsenteret som log2 af gange ændring af blærekræft væv i forhold til tilstødende normale regioner; (C) og (D) Den statistiske analyse af sammenhængen mellem miRNA-niveau og pTNM etape (I, II, III og IV) og pM etape (Ingen metastaser og Metastase); * P 0,05, og ** p 0,01, *** p. 0,001

Overekspression af miR-137 forfremmet blærekræft proliferation, migration og invasion

Vi udforskede den potentielle virkning af miR-137 i blærekræft proliferation, migration og invasion. Celler blev transficeret med scrambled kontrol oligo eller MIR-137 efterligner og inhibitor, som viste høj transfektionseffektivitet (fig. 3A). CCK-8 proliferation assay viste, at celleproliferation blev fremmet i MIR-137 efterligner-transficerede blære cancerceller sammenlignet med scrambled oligo-transficerede celler eller ubehandlede celler (fig. 3B). Omvendt MIR-137 inhibitor inhiberede signifikant proliferation af T24-celler (fig. 3C). Interessant nok migration og invasion assay viste, at overekspression af MIR-137 fremmes signifikant migrering og invasion af T24 celler sammenlignet med kontrollen hvorimod MIR-137 inhibitor hæmmede både cellemigrering og invasion (fig. 3D og E).

(A) Expression niveauer af miR-137 blev undersøgt ved real-time PCR efter transfektion af miR-137 efterligner eller sramble eller ingen transfektion. (B) Vækst af T24 celler blev vist efter transfektion med miR-137 efterligner eller sramble eller ingen transfektion. Vækstindekset som vurderet ved 0, 24, 48 og 72 timer. (C) Ekspressionsniveauer af MIR-137 blev undersøgt ved realtids-PCR efter transfektion af MIR-137-inhibitor eller kontrol eller ingen transfektion. (D) Vækst af T24-celler blev vist efter transfektion med MIR-137-inhibitor eller kontrol eller ingen transfektion. Vækstindekset som vurderet ved 0, 24, 48 og 72 timer. (E) Transwell analyse af T24 celler efter behandling med miR-137 efterligner, inhibitorer eller scramble eller kontrol; det relative forhold af migrerede celler pr er vist nedenfor. (D) Transwell-analyse af T24-celler efter behandling med MIR-137 efterligner, hæmmere eller scramble eller kontrol; det relative forhold mellem invasive celler pr felt er vist nedenfor, * p 0,05, ** p 0,01, og *** p. 0,001

MIR-137 mål PAQR3 i blære cancerceller

som forudsagt af PicTar, var der komplementaritet mellem har-miR-137 og PAQR3 3’UTR (fig. 4A). Overekspression af MIR-137 reducerede protein og mRNA-niveauer af PAQR3 i blære cancerceller (fig. 4C og D). Virkningen af ​​MIR-137 ved omregning af PAQR3 mRNA til protein blev derefter vurderet under anvendelse af en luciferase reporter assay (fig. 4B). Tvungen ekspression af MIR-137 reduceres betydeligt luciferaseaktiviteten af ​​reportergenet med vildtype-konstruktionen, men ikke med det mutante PAQR3 3’UTR-konstruktionen, der indikerer, at MIR-137 direkte målrettet PAQR3 3’UTR.

(A) Skematisk repræsentation af PAQR3 3’UTR’er viser formodede miRNA målsted. (B) Analysen af ​​de relative luciferase aktiviteter PAQR3-WT, PAQR3-MUT i T24 celler. Fejlsøjlerne stammer fra tredobbelte expriments. (C) QRT-PCR-analyse af PAQR3 mRNA-ekspression i T24-celler efter behandling med MIR-137 efterligner eller scramble eller ingen transfektion. Udtrykket af PAQR3 blev normaliseret til GAPDH. (D) Western blot-analyse af PAQR3 ekspression i T24-celler transficeret med MIR-137 efterligner eller scramble eller ingen transfektion. GAPDH blev også påvist som en belastning kontrol.

Restaureret udtryk for PAQR3 delvist reddet miR-137-forstærket celle proliferation og invasion

Vi analyserede først funktionen af ​​PAQR3 i blære kræftceller . Som vist i fig. 5A, transfektion af små interfererende RNA mod PAQR3 i T24 celler førte til faldet drastisk PAQR3 proteinekspression. Silencing af PAQR3 væsentligt forbedret spredning af blærekræft celler (fig. 5B), som phenocopied virkningerne af miR-137 om spredning af blære cancerceller. Co-transfektion af en konstruktion, der udtrykker PAQR3 og miR-137 i T24 celler førte til genoprettelsen af ​​PAQR3 udtryk, hvilket bekræftes af Western blot (fig. 5C). Denne restaurering af PAQR3 hæmmede signifikant spredning og invasive kapaciteter af blære cancerceller. Vigtigere, fandt vi, at restaurering af PAQR3 væsentlig grad kan vende spredning og invasion fremmes af miR-137 (fig. 5D og 5E). Sammenfattende indikerer disse data, at inhibering af PAQR3 ekspression af MIR-137 er ansvarlig, i det mindste delvis, for de effekter af MIR-137 på celleproliferation og invasion i human blærecancer.

(A) Western blot analyse viste, at transfektion af små interfererende RNA mod PAQR3 i T24 celler førte til faldet drastisk PAQR3 proteinekspression. GAPDH blev også påvist som en loading kontrol. (B) Silencing af PAQR3 forbedret markant spredning af blærekræft celler. Vækstindekset som vurderet ved 0, 24, 48 og 72 timer. (C) Western blot-analyse af PAQR3 i T24-celler co-transficeret med enten MIR-137 mimic eller scramble og 2,0 ug pCDNA- PAQR3 eller pCDNA tom vektor. GAPDH blev også påvist som en loading kontrol. (D) Cell vækstkurver i T24-celler transficeret med forskellige kombinationer ved 0, 24, 48 og 72 timer. (E) Transwell analyse af T24 celler behandlet med forskellige kombinationer. Det relative forhold af invasive celler pr vist med det. * P 0,05, ** p 0,01, *** p. 0,001

Diskussion

I løbet af de sidste årtier, miRNA er dukket op som vigtige regulatorer er involveret i forskellige biologiske processer såsom transkriptionel regulering, celledifferentiering og tumorigenese [31]. Globalt afvigende miRNA udtryk profiler af tumorer har givet værdifuld indsigt i de molekylære veje for onkogenese [32]. Som en af ​​de mest fremtrædende miRNA impliceret i tumorigenese, er MIR-137 præsenteret for en kontroversiel rolle under tumorprogression [33]. MIR-137 viste sig at blive reduceret i talrige humane cancere, herunder mavecancer, glioblastom og brystcancer [24], [25], [34]. Den nøjagtige rolle af MIR-137 i blærecancer var stadig uklar, selv om dets tumor-undertrykkende funktion har været impliceret [29]. Således er vores aktuelle undersøgelse har til formål at klarlægge udtryk og biologiske funktion af miR-137 i blærekræft. I modsætning til resultaterne af Shimuzu et al. [29], vores undersøgelse viste, at MIR-137 var ofte opreguleret i blæren cancercellelinier og væv sammenlignet med normal blære cellelinje og væv. Baseret på disse resultater, vi den hypotese, at MIR-137 kan være en potentiel onkogen i blærekræft. Som forventet tvungen udtryk for miR-137 forbedret proliferation, migration og invasion af T24 celler. Årsagerne til afvigelser mellem resultaterne af den foreliggende undersøgelse, og at af Shimuzu et al. fortsat uklare, men den etniske baggrund af kliniske prøver kan spille en rolle. Endvidere kan den onkogene funktion af MIR-137 være specifikke for blærevæv siden sin tumor undertrykkende funktion er blevet meget omtalt i andre vævstyper. Vores nuværende resultater antyder, at MIR-137 spiller en kritisk rolle i den invasive og metastatiske potentiale blærecancer og kan være potentielle diagnostiske og prædiktive biomarkører.

Dernæst vi rettet den molekylære mekanisme af MIR-137 til at fremme proliferation , migration og invasion i blære cancerceller. I denne undersøgelse, real-time PCR, Western blots og luciferaseassays viste, at PAQR3 er et mål for miR-137. Vigtigere, specifik PAQR3 knockdown med siRNA phenocopied de migrations- og invasion-fremmende effekter af miR-137 overekspression. Vi viste også, at når miR-137-udtrykkende celler genoptaget PAQR3 udtryk, deres invasion mangler blev delvist vendt. Derfor mener vi, at MIR-137 spiller en rolle i at fremme metastase i blære kræft, i det mindste delvist, ved nedregulering proteinet ekspression af PAQR3. PAQR3 hører til progesteron og AdipoQ receptor (PAQR) familien og er en syv-transmembran-protein specifikt placeret på Golgi apparatet i pattedyrceller [35]. Tidligere undersøgelser har vist, at PAQR3, også kendt som RKTG (Raf kinase trapping til Golgi), kunne fungere som en rumlig regulator af Raf kinase ved sekvestrering Raf til Golgi-apparatet [36]. PAQR3 fungerer som en tumor suppressor grund af sin inhiberende aktivitet på Raf /MEK /ERK-signalering [37]. Når overudtrykt i humane A375 melanom celler, en human malignt melanom cellelinje med B-Raf mutation, PAQR3 /RKTG hæmmer ERK aktivering, celledeling og transformation af cellerne [37]. Desuden sletning af PAQR3 i mus førte til øget forekomst af hudens tumorigenese. PAQR3 /RKTG kunne også inhibere celleproliferation, migration, fremspiring og angiogenese af endotelceller, og ekspressionsniveauet af PAQR3 signifikant nedreguleret i kliniske clear-celle renalcellecarcinom prøver, med en omvendt korrelation med VEGF-ekspression niveau [38]. Desuden har tidligere undersøgelser også vist, at PAQR3 har en funktionel interaktion med p53 i formation kræft og epitel-til-mesenchymal overgang [39]. Udtrykket niveau PAQR3 blev signifikant reduceret i kolorektal cancer prøver sammenlignet med tilstødende normale væv og ekspressionsniveauet af PAQR3 blev omvendt associeret med tumor klasse i de kolorektale cancer prøver [40]. Vore undersøgelser har også vist, at overekspression af PAQR3 kan inhibere celleproliferation og invasion. Opregulering af disse miRNA i kræft kan lette udtryk for PAQR3, fører til øget metastaser af kræft.

Som konklusion har vores resultater vist, at miR-137 var signifikant opreguleret i blære cancer celler og væv. Tvungen udtryk for miR-137 forfremmet blærekræft proliferation, migration og invasion gennem direkte målrettet PAQR3. Denne roman miR-137 /PAQR3 akse kan give ny indsigt i mekanismerne bag tumor metastase, og undertrykkelse af miR-137 udtryk kan være en potentiel terapeutisk strategi til behandling af blærekræft i fremtiden.

Støtte Information

tabel S1.

Clinicopathologic charateristics af patienter med blærekræft

Doi:. 10,1371 /journal.pone.0109734.s001

(DOCX)

tabel S2. .

Primer sekvenser

doi: 10,1371 /journal.pone.0109734.s002

(DOC)

tabel S3.

Tjekliste over MIQE retningslinje

doi:. 10,1371 /journal.pone.0109734.s003

(DOC)