PLoS ONE: Protein kinase C Zeta Regulerer human kræft i bugspytkirtlen transformeret Vækst og Invasion gennem et STAT3-Dependent Mechanism

Abstrakt

Kræft i bugspytkirtlen er en meget aggressiv sygdom med få behandlingsmuligheder. I denne undersøgelse undersøger vi rollen af ​​proteinkinase C zeta (PKCζ) i bugspytkirtelkræftceller. PKCζ har vist sig at virke som enten en tumorsuppressor eller tumor promotor afhængigt af den cellulære kontekst. Vi finder, at PKCζ udtryk enten opretholdes eller forhøjet i primære humane pancreas tumorer, men er aldrig tabt, i overensstemmelse med PKCζ spille en fremmende rolle i bugspytkirtelkræft fænotype. Genetisk inhibering af PKCζ reduceret adhærent vækst, celleoverlevelse og forankringsuafhængig vækst af humane pankreatiske cancerceller in vitro. Endvidere PKCζ inhibering reducerede orthotopisk tumorstørrelse in vivo ved at inhibere tumorcelleproliferation og stigende tumornekrose. Desuden PKCζ hæmning reduceret tumor metastaser in vivo, og forårsagede en tilsvarende reduktion i bugspytkirtelkræft celleinvasion

in vitro

. Signal transducer og aktivator af transkription 3 (STAT3) ofte konstitutivt aktiv i bugspytkirtelkræft, og spiller en vigtig rolle i bugspytkirtelkræft celleoverlevelse og metastase. Interessant, hæmning af PKCζ væsentligt reduceret konstitutiv STAT3 aktivering i bugspytkirtelkræftceller

in vitro

in vivo

. Farmakologisk inhibering af STAT3 efterlignede fænotypen af ​​PKCζ inhibering, og ekspression af et konstitutivt aktivt STAT3 konstrukt reddet den transformerede fænotype i PKCζ-deficiente celler. Vi konkluderer, at PKCζ er nødvendig for kræft i bugspytkirtlen er transformeret vækst og invasion in vitro og tumorigenese in vivo, og at STAT3 er en vigtig nedstrøms mediator af de pro-kræftfremkaldende effekter af PKCζ i bugspytkirtelkræftceller

Henvisning.: Butler AM, Scotti Buzhardt ML, Li S, Smith KE, Fields AP, Murray NR (2013) Protein kinase C Zeta Regulerer human kræft i bugspytkirtlen transformeret vækst og invasion gennem et STAT3-afhængig mekanisme. PLoS ONE 8 (8): e72061. doi: 10,1371 /journal.pone.0072061

Redaktør: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, USA

Modtaget: Maj 16, 2013; Accepteret: 5 jul 2013; Udgivet: 28 august, 2013 |

Copyright: © 2013 Butler et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Finansiering forudsat af: NIH /NCI R03 CA143164, NIH /NCI R01CA140290 (NRM), Daniel Foundation of Alabama Postdoc Fellowship (MLS), NIH /NCI F31 CA168117 (AMB), NIH /NCI R01 CA081436-16 (APF), The Mayo Clinic Foundation (NRM, APF). APF er Monica Flynn Jacoby Begavet Professor of Cancer Research. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesser: En foreløbig patentansøgning relateret til denne forskning er indgivet (MSB, APF, NRM, Metoder og materialer til behandling kræft i bugspytkirtlen, US patentansøgning # 20110190390). Medforfatter Alan Fields er en akademisk Editor for PLoS ONE. Der er ikke yderligere patenter, produkter i udvikling eller markedsførte produkter til at erklære. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Kræft i bugspytkirtlen er den tiende mest almindeligt diagnosticeret kræft i USA, og rangerer fjerde i dødelighed [1]. Den samlede 5-års overlevelsesraten for kræft i bugspytkirtlen er mindre end 5%, og er ikke væsentligt forbedret i løbet af de seneste 30 år. Letalitet pancreascancer er delvis tilskrives resistens mod de nuværende kemoterapier [2]. Karakterisering af hidtil ukendte onkogene signalveje i pancreascancer kan føre til identifikation af mere effektive terapeutiske mål for kræft i bugspytkirtlen behandling.

proteinkinase C (PKC) er blevet impliceret i tumorigenese i over 30 år, siden den første karakteriseret som en receptor for de tumorfremmende phorbolestere [3]. PKC er nu kendt for at være en familie af relaterede isoformer, og de seneste undersøgelser har karakteriseret de specifikke roller enkelte isoformer i følsomheden over for, og udvikling af, kræft [4], [5], [6], [7], [8 ], [9], [10]. Selv medlemmer af den atypiske PKC (aPKC) sub-familie af PKC isoformer er ude af stand til at binde og blive aktiveret af phorbolestere, har deres potentielle rolle i cancerfænotypen også blevet undersøgt. De to aPKCs, PKC iota (PKCι) og PKC zeta (PKCζ), er strukturelt ens; imidlertid embryoniske knockout af hver aPKC afslører unikke fænotyper, hvilket antyder ikke-redundante funktioner i udvikling og cancer [11], [12]. PKCι fremmer kræft udvikling i musemodeller for lunge- og tyktarmskræft, og er et onkogen i lunge- og æggestokkræft [5], [6], [13], [14], [15]. Ligeledes har vi påvist en pro-kræftfremkaldende rolle PKCι i bugspytkirtelkræftceller [16]. I modsætning hertil har både tumor fremmende og tumor suppressor roller blevet tilskrevet PKCζ [4], [17], [18], men dens rolle i bugspytkirtelkræft er ikke blevet evalueret. I den foreliggende undersøgelse viser vi, at PKCζ er forhøjet i en undergruppe af humane pancreatiske tumorvæv sammenlignet med matchede normal pancreas epitel. Desuden viser vi, at hæmning af PKCζ i bugspytkirtelkræftceller væsentlig grad hæmmer kræft fænotype. Vores data også identificere STAT3 som en vigtig formidler af PKCζ i den transformerede vækst og invasion af bugspytkirtelkræftceller.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Biospecimens blev opnået fra Mayo Clinic Tissue Registry under en godkendt Mayo Clinic Institutional Review Board-protokol. Alle eksperimenter dyr blev godkendt af Mayo Clinic Institutional Animal Care og brug Udvalg.

Patientprøver

RNA blev isoleret fra et sæt af pancreas adenocarcinom patientprøver for hvilke frosne, parret tumor og ikke- tumor pancreas væv var tilgængelig som beskrevet [16]. Hematoxylin og eosin (H 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

PKCζ er forhøjet i en delmængde af humane pancreas tumorer

Vi begyndte vores undersøgelse ved at evaluere PKCζ ekspression i primære humane pancreas tumorer og omgivende ikke-tumorvæv (figur 1). Klinisk og demografiske oplysninger til denne patientgruppe er offentliggjort [16]. Immunhistokemisk påvisning af PKCζ protein i repræsentative pancreas tumorvæv afslørede et variabelt niveau af PKCζ ekspression som lokaliseret til både kernen og cytoplasmaet (figur 1A). PKCζ ekspression blev også påvist ved en variabel, men lavere niveau i ikke-tumor, pankreatiske celletyper (figur 1b). Ø og acinære celler af den ikke-tumor pancreas udviste lav PKCζ ekspression (figur 1B, venstre paneler). Ekspressionen af ​​PKCζ i duktale celler var den samme som eller lidt højere end den ekspression i ø og acinære celler (figur 1B, højre paneler). Dernæst evalueres PKCζ mRNA-ekspression i et panel af 28 parrede humane pancreas adenocarcinom og tilstødende, ikke-tumor pancreas. PKCζ mRNA-ekspression blev påvist i alle 28 primære pancreatiske tumorer analyseret (data ikke vist). Analyse af parrede prøver afslørede, at PKCζ ekspression var betydeligt højere i tumorer end i parret, ikke-tumorvæv (figur 1C). PKCζ mRNA-ekspression blev signifikant forhøjet i 25% af pancreas-tumorer, sammenlignet med den gennemsnitlige PKCζ mRNA-ekspression i ikke-tumor pancreas, og ingen tumorer udviste en signifikant reduktion i PKCζ mRNA-ekspression (figur 1D). Analyse af forholdet mellem PKCζ mRNA-ekspression og patient overlevelse blev gennemført, men i denne lille kohorte blev observeret nogen korrelation

A og B) IHC påvisning af PKCζ udtryk i repræsentative humane pancreas tumorer (A;. Tumor) og tilstødende ikke-tumorvæv (B; Normal). B) Serielle snit farvet med H * P = 0,001 beregnet ved parret

t

-test. D) PKCζ ekspression signifikant forhøjet i en undergruppe af pankreatiske tumorer. PKCζ blev overudtrykt i 25% af pancreas tumorer analyseret, som defineret af tumor mRNA overflod større end 2 standardafvigelser over gennemsnittet af PKCζ mRNA overflod i alle tilstødende ikke-tumor bugspytkirtel prøver.

PKCζ regulerer transformerede fænotype af bugspytkirtelkræftceller in vitro

for direkte at vurdere, hvilken rolle PKCζ i bugspytkirtelkræft fænotype, vi brugte to forskellige RNAi konstruktioner til at hæmme PKCζ udtryk i to velkarakteriserede humane bugspytkirtelkræft cellelinjer, Panc- 1 (figur 2A) og MiaPaCa-2 (figur S1A). Stabilt udvalgte cellepopulationer konsekvent udviste 70% eller større inhibering af PKCζ mRNA-ekspression, med et tilsvarende fald i PKCζ proteinekspression (figur 2A og S1A). Selektivitet af PKCζ målrettede RNAi konstruktioner bekræftes af den manglende effekt af disse konstruktioner på ekspressionen af ​​det nært beslægtede atypisk PKCι isozym (figur 2A og S1A). Inhibering af PKCζ ekspression resulterede i en lille, men signifikant fald i log-fase, adhærerende cellevækst (figur 2B og S1B) og en stigning i basal celledød (figur 2C). Endvidere PKCζ vælte (KD) signifikant nedsat pancreas forankringsuafhængig vækst cancercellen (blød agar-kolonidannelse) (figur 2D og S1c), hvilket indikerer, at PKCζ er kritisk for pancreascancer celleoverlevelse og den transformerede fænotype.

Panc-1 celler stabilt bærer lentivirus udtrykker enten kontrol, ikke-targeting (NT) eller PKCζ-targeting RNAi (Z1 og Z2) blev vurderet til A) PKCζ og PKCι proteinekspression ved immunoblotanalyse (øverst), og PKCζ mRNA overflod af qPCR analyse (nederst); B) cellelevedygtighed (MTT kolorimetrisk assay); C) celledød (detekteret ved Celledød Detection ELISA) og D) forankringsuafhængig vækst (kolonidannelse i blød agar). For hver panel Bars = gennemsnit på 3 eller flere gentagelser ± SD og graf er repræsentativ for 3 eller flere uafhængige forsøg. * P. 0,05 vs NT

PKCζ spiller en afgørende rolle i bugspytkirtlen tumorigenese

Vi næste undersøgt effekten af ​​PKCζ KD på pancreas tumor dannelse og vækst ved hjælp af en tidligere beskrevet Panc- 1 ortotopisk tumormodel [16]. Panc-1-celler, der udtrykker den ildflue-luciferase-genet (pSIN-Fluc) og enten NT eller PKCζ RNAi blev injiceret i pancreas hos nøgne mus for at danne ortotopisk tumorer. Tumorvækst blev overvåget ved bioluminescens detektion (Figur 3A), og mus blev høstet 5 uger efter inokulering. Tumordannelse blev observeret i alle mus injiceret med Panc-1-celler udtrykker enten RNAi konstruere; dog endelig pancreas vægt var signifikant lavere i mus, der bærer PKCζ RNAi tumorer, grundet reduceret tumorstørrelse (figur 3B og 3C). Vi antager, at i lighed med virkningen af ​​PKCζ KD in vitro (Figur 2B-D), den reducerede tumorstørrelsen af ​​PKCζ KD Panc-1-celler in vivo skyldtes reduceret tumorcelleproliferation og forbedret tumor celledød. Niveauet af BrdUrd inkorporering, et mål for tumor spredning, blev evalueret i Panc-1 PKCζ RNAi tumorer og i forhold til niveauet af BrdUrd inkorporering i Panc-1 NT RNAi tumorer [16]. Som forudsagt blev tumorproliferation signifikant reduceret i PKCζ RNAi tumorer sammenlignet med NT RNAi tumorer (figur 4A). Interessant, vi ikke oplever en betydelig effekt af PKCζ KD på tumor apoptose, opdaget af kløvet caspase-3 (figur 4B). Men PKCζ RNAi tumorer havde en signifikant højere nekrose end NT RNAi tumorer (figur 4C og 4D). Tumor nekrose skyldes en ophobning af tumorcelledød, som kan forekomme, når en tumor vokser dens blodforsyning. Selvom PKCζ RNAi tumorer er drastisk mindre end NT RNAi tumorer, de ikke udviser et fald i tumor blodkar massefylde som kvantificeret ved CD31-farvning (figur 4E). Disse data tyder på, at den reducerede tumorvolumen af ​​PKCζ RNAi pankreatiske tumorer er resultatet af den kumulative virkning af nedsat celleproliferation og overlevelse over tidsforløbet for in vivo forsøg.

A) repræsentant bioluminescerende billeddannelse af mus med ortotopisk Panc-1 NT og PKCζ RNAi pancreas tumorer. B) Repræsentant H n = 16; * P. 0,001

A) Kvantitativ analyse af tumor spredning opdaget af BrdUrd inkorporering; * P 0,003. B) Kvantitativ analyse af tumor apoptose detekteret ved spaltet caspase-3-farvning. C) repræsentant H * P 0,0002. E) Kvantitativ analyse af tumor vaskularisering, som bestemt ved procent område CD31 farvning. A-E)

n

= 16 NT RNAi tumorer og 15 PKCζ RNAi tumorer. F) Panc-1 NT og PKCζ RNAi celler (Z1 og Z2) blev bedømt for cellulær invasion gennem Matrigelcoatede kamre. Barer = gennemsnit på 3 eller flere replikater +/- SD og graf er repræsentativ for 2 eller flere uafhængige forsøg. * P. 0,05 vs NT

PKCζ spiller en vigtig rolle i bugspytkirtelkræft celleinvasion

I pancreas ortotopisk tumor model, Panc-1 celler danner både primære tumorer og metastatiske læsioner [16]. Metastaser til nyre, lever, mellemgulvet, og mesenterium blev observeret hos mere end 50% af musene, der huser NT RNAi tumorer (tabel 1, [16]). I modsætning hertil blev der ikke tumormetastase til mesenterium eller membran identificeret i mus, der bærer PKCζ RNAi tumorer; kun 2 af 15 PKCζ RNAi tumorbærende mus (13%) havde metastaser til deres nyrer, og kun 1 af 15 PKCζ RNAi tumorbærende mus (6%) havde en levermetastase (tabel 1). Disse data er i overensstemmelse med en inhibitorisk virkning af PKCζ KD på pancreas tumormetastase. Men vi kan ikke udelukke muligheden for, at den faldt metastaser observeret i PKCζ RNAi tumorer kan være sekundær til den væsentligt reduceret størrelse af tumorer. Hvis PKCζ regulerer tumormetastase in vivo, er det sandsynligt at også regulere aspekter af den metastatiske fænotype, såsom cellulær invasion in vitro. Faktisk var cellulær invasion signifikant reduceret i PKCζ RNAi celler, sammenlignet med NT RNAi bugspytkirtelkræftceller (Figur 4F og S2). Disse resultater viser en rolle for PKCζ i bugspytkirtelkræft celle invasion, og er i overensstemmelse med en rolle for PKCζ i metastatiske fænotype af bugspytkirtelkræftceller in vivo.

PKCζ regulerer STAT3 aktivering

Signal transducer og aktivator for transkription-3 (STAT3) er en transkriptionsfaktor, der integrerer talrige ekstracellulære signaler til regulering kræft-fremme cellulære processer [25], [26]. Konstitutiv STAT3-aktivering er kendetegnende for mange humane cancere, herunder pancreascancer [27]. STAT3 aktivering fremmer onkogene fænotype af kræft i bugspytkirtlen, og tab af STAT3 forebygger kræft i bugspytkirtlen udvikling og progression i en musemodel af

Kras

medierede pancreascancer [27], [28]. Endvidere inhibering af STAT3-aktivitet i bugspytkirtelkræftceller reducerer også celleoverlevelse, invasion og tumorvækst [28], [29]. På grund af den slående lighed mellem den rapporterede fænotype af STAT3 hæmning og fænotype vi observeret med hæmning af PKCζ, vi spurgte, om PKCζ udtryk regulerer STAT3 aktivitet i bugspytkirtelkræft cellelinjer. En betydelig reduktion i STAT3 aktivering, detekteres som phosphorylering af STAT3 på Tyr705, blev observeret i bugspytkirtelkræftceller udtrykker PKCζ RNAi (figur 5A og S3A). Endvidere blev STAT3-aktivering signifikant reduceret i PKCζ RNAi tumorer sammenlignet med NT RNAi tumorer (figur 5B), hvilket indikerer, at PKCζ regulerer STAT3-aktivering i bugspytkirtelkræftceller både in vitro og in vivo. Da PKCζ også har været impliceret i reguleringen af ​​ERK1 /2-aktivering i kræft og ikke-kræft celletyper [30], [31], [32], [33], vi analyserede effekten af ​​PKCζ RNAi på ERK1 /2 phosphoryleringsassays i humane bugspytkirtelkræftceller. I modsætning STAT3 phosphorylering, blev ERK1 /2 phosphorylering ikke ændret ved en signifikant reduktion i PKCζ ekspression (figur 5A og S3A) antyder, at PKCζ ekspression ikke regulerer signalering gennem ERK1 /2 signalvej.

A) Inhibering af PKCζ ekspression falder konstitutiv STAT3-aktivering (detekteret som phospho-STAT3 Y705), men ikke ERK1 /2-aktivering (detekteret som phospho-ERK1 /2). Immunoblotanalyse blev udført på totale cellelysater fra Panc-1 NT og PKCζ RNAi-celler (til venstre) og udtryk analyse af immunoblot påvisning blev udført (til højre)

n

= 3. B) Repræsentant IHC påvisning af p-STAT3 i ortotopisk Panc-1 NT og PKCζ RNAi pancreas tumorer (til venstre), bar = 50 um. Kvantitativ analyse af pSTAT3 IHC-farvning (højre). C-E) Virkningen af ​​STAT3 inhibitor (S3I-201) på C) STAT3 phosphorylering, D) forankringsuafhængig vækst i blød agar og E) cellulær invasion gennem Matrigelcoatede kamre. I alle assays blev S3I-201 anvendes ved 100 um og et tilsvarende volumen DMSO anvendt som kontrol fortyndingsmiddel. For invasion assay blev cellerne forbehandlet med S3I-201 eller DMSO i 48 timer før initiering af assayet. Barer = gennemsnit på 3 eller flere replikater +/- SD, og ​​grafen er repræsentativ for 2 eller flere uafhængige forsøg. * P. 0,05

STAT3 hæmning reducerer den transformerede fænotype af bugspytkirtelkræftceller

For at bestemme, om nedsat STAT3 aktivering kan være ansvarlig for nogle af virkningerne af PKCζ KD, vi vurderede virkningen af ​​en farmakologisk inhibitor af STAT3 på den transformerede fænotype af pankreatiske cancerceller. Behandling af pankreatiske cancerceller med S3I-201, et lille molekyle, der forstyrrer STAT3 SH2-phospho-tyrosin interaktioner [34], reduceret STAT3-aktivering (figur 5C og S3B) og signifikant reduceret forankringsuafhængig vækst (figur 5D) og cellulær invasion ( Figur 5E og S3C), svarende til effekten af ​​PKCζ inhibering. Tilsammen viser disse data, at hæmning af PKCζ udtryk reducerer STAT3 aktivitet i bugspytkirtelkræftceller, og at PKCζ udtryk og STAT3 aktivitet positivt regulere kræft i bugspytkirtlen er transformeret vækst og invasion.

grundlæggende aktiv STAT3 kan rekonstruere den transformerede fænotype i PKCζ RNAi bugspytkirtelkræftceller

for at teste hypotesen om, at STAT3 er en kritisk nedstrøms effektor af PKCζ i bugspytkirtelkræftceller, vi vurderede, om udtryk for en konstitutivt aktiv STAT3 konstruktion (STAT3-C) kunne redde virkningerne af PKCζ inhibering i Panc-1-celler. Panc-1 NT og PKCζ RNAi-celler blev inficeret med adenovirus, der udtrykker FLAG-mærket, STAT3-C eller kontrol (null) adenovirus (figur 6A). Ekspression af STAT3-C genvundet betydeligt forankringsuafhængig vækst i Panc-1 PKCζ RNAi celler, uden væsentlig påvirkning af forankringsuafhængig vækst NT RNAi-celler (Figur 6B). Desuden blev det reducerede cellulære invasion fænotype af PKCζ RNAi celler signifikant genvundet ved ekspression af STAT3-C (figur 6C). Taget sammen viser disse data, at øget cellulær STAT3 aktivitet kan redde anti-onkogene fænotype af PKCζ RNAi celler, og viser, at PKCζ medierer pancreascancer celletransformation, i det mindste delvist, ved regulering af STAT3-aktivitet.

Panc-1-celler, der udtrykker NT eller PKCζ RNAi blev inficeret med adenovirale konstruktioner, der udtrykker enten nul (kontrol) eller konstitutivt aktiv, FLAG-mærket STAT3 (STAT3-C). A) Immunblotanalyse af p-STAT3, STAT3, FLAG, PKCζ og β-actin-ekspression. Celler blev vurderet for B) forankringsuafhængig vækst i blød agar og C) cellulær invasion gennem Matrigelcoatede kamre. For hver graf: Barer = gennemsnit på 3 eller flere gentagelser ± SD og graf er repræsentativ for 2 eller flere uafhængige forsøg. * Væsentligt reduceret i forhold til NT /null, p 0,05; ** Væsentligt forøget i forhold til nul-behandlet, s. 0,05

Diskussion

Funktionelle undersøgelser har vist, at den rolle PKCζ i reguleringen cancerfænotypen varierer efter tumortype, model systemet og stadium af sygdommen. For eksempel inhibering af PKCζ ekspression i en coloncancercellelinie reducerer proliferation in vitro og tumorstørrelse in vivo; imidlertid genetisk inhibering af PKCζ i muse tarmepitelet ikke påvirke tumorigenese i APCmin /+ musemodel for tarmkræft initiering og progression [7], [35]. I modsætning hertil genetisk inhibering af PKCζ i en musemodel for

Kras

G12D

-induceret lunge tumorigenese afslører en tumor suppressor rolle [4], mens inhibering af PKCζ ekspression i lungecancerceller har ingen virkning på transformeret vækst in vitro [20]. I den foreliggende undersøgelse, vurderet vi specifikke rolle PKCζ i biologi bugspytkirtelkræftceller, hjælp PKC isotypespecifikke RNAi til at hæmme PKCζ udtryk. Vi viser, at PKCζ KD reduceret kræft i bugspytkirtlen celledeling og celleoverlevelse in vitro. Vi viser endvidere, at PKCζ KD i bugspytkirtelkræftceller væsentligt reduceret forvandlet vækst in vitro, hvilket svarer til en betydelig reduktion af tumorstørrelse in vivo. Disse data antyder kraftigt, at PKCζ er nødvendig for opretholdelse af den transformerede fænotype af bugspytkirtelkræftceller.

PKCζ har været impliceret i den invasive fænotype af humane cancere [36], [37], [38]. RNAi-medieret, specifik inhibering af PKCζ reducerer brystcancer og glioblastoma celleinvasion in vitro [37], [38] og reducerer prostatacancer celleinvasion in vitro og in vivo [36]. Interessant, idet hver af disse rapporter attributter PKCζ til et særskilt invasiv signalvej, hvilket antyder en bred rolle for PKCζ i cancercelleinvasion [36], [37], [38]. I overensstemmelse med fænotype observeret i andre kræftformer, vi konstateret, at hæmning af PKCζ udtryk ikke kun hæmmede den transformerede væksten af ​​bugspytkirtelkræftceller, men også undertrykt deres invasive potentiale in vitro. Endvidere PKCζ KD reducerede signifikant pancreatisk tumormetastase, hvilket indikerer, at PKCζ regulerer pankreatisk tumorcelleinvasion in vivo, såvel som in vitro.

prognostiske værdi af PKCζ ekspression i cancer er ikke veldokumenteret. Imidlertid har flere nylige rapporter impliceret PKCζ som indikator for dårligt resultat for kræftpatienter. High PKCζ forudser dårlig sygdomsspecifikke overlevelse af patienter med bløddelssarkom [39]. Ligeledes er PKCζ forhøjet i prostatakræft, og høj PKCζ udtryk forudsiger ringe overlevelse af patienter med prostatacancer [36]. Vi evaluerede udtryk for PKCζ i bugspytkirtelkræft, og fastslået, at PKCζ klart var forhøjet i en undergruppe af pancreascancer. Men vores lille stikprøvestørrelse kombineret med generelt dårlig prognose bugspytkirtlen kræftpatienter udelukket bestemmelse af en potentiel prognostisk rolle PKCζ udtryk. Igangværende væv samlinger vil lette fremtidig undersøgelse af evnen hos PKCζ ekspression at forudsige resultater i en større kohorte af patienter med pancreascancer.

Mens PKCζ ekspression er for nylig blevet karakteriseret at være forhøjet og forudsige ringe overlevelse i flere kræftformer [36 ], [39], lidt om reguleringen af ​​PKCζ udtryk. PKCζ er dog vist, at blive aktiveret af flere signalveje, der vides at fremme onkogen signalering i bugspytkirtelkræft. Phosphatidylinositol-3,4-5-trisphosphat (PtdIns-3,4,5-P3), produktet fra phosphoinositid 3-kinase, kan direkte binde og aktivere PKCζ, og også aktiverer PtdIns-3,4,5-P3-aktiveret phosphoinositid-afhængig kinase 1-medieret phosphorylering og aktivering af PKCζ [40], [41], [42]. I hoved og hals skællede carcinomceller, PKCζ er tyrosinphosphoryleret og aktiveret af epidermal vækstfaktor receptor [31]. Fremtidige undersøgelser vil undersøge, om nogen af ​​disse veje, både hyppigt dysreguleret i bugspytkirtelkræft, modulerer PKCζ signalering i bugspytkirtelkræft cellelinjer.

I modsætning til vores observation, at hæmning af PKCζ undertrykt pancreas tumor vækst og metastase, genetiske hæmning af PKCζ i

Kras

G12D

induceret lungetumorer fremmer tumorvækst og progression [4].