PLoS ONE: Effektiv Berigelse af hepatisk Cancer Stem-lignende celler fra en primær Rat HCC Model via en densitetsgradientcentrifugering-Centered metode

Abstrakt

Baggrund

Fordi nogle endelige markører er tilgængelige for hepatiske cancer stamceller (HCSCs), baseret på fysisk snarere end immunokemiske egenskaber, vi anvendt en ny metode til at berige HCSCs.

Metode

Efter hepatiske tumorceller (HTCs) blev først isoleret fra diethylinitrosamine-induceret F344 rotte HCC model ved hjælp af Percoll diskontinuerlig gradient centrifugering (PDGC) og renses via differential trypsinisering og differentieret vedhæftet fil (DTDA), de blev adskilt i fire fraktioner under anvendelse Percoll kontinuerlig gradient centrifugering (PCGC) og sekventielt betegnet som fraktion i-IV (FI-IV). Morfologiske karakteristika, mRNA og protein niveauer af stamceller markører, proliferative evner, induceret differentiering,

in vitro

vandrende kapacitet,

in vitro

kemo-resistente kapacitet, og

in vivo

maligne kapacitet blev bestemt for cellerne i hver fraktion.

Resultater

Som tætheden af ​​celler steg, 22,18%, 11,62%, 4,73% og 61,47% af primære dyrkede HTCs blev adskilt i FI-FIV hhv. Cellerne fra F III (densitet mellem 1,041 og 1,062 g /ml) viste en højere nuklear-cytoplasmatisk forhold og færre organeller og udtrykte højere niveauer af stamceller markører (AFP, EpCAM og CD133) end celler fra andre fraktioner (

P

0,01). Derudover

in vitro

, cellerne fra F III viste en større evne til at forny sig selv, differentiere til modne HTCs, transit over membraner, tæt ridser, og bære resistens mod kemoterapi end gjorde celler fra andre fraktion;

in vivo

, injektion af kun 1 × 10

4 celler fra F III kunne generere tumorer ikke kun i subkutant væv, men også i lever fra nøgne mus.

Konklusioner

Gennem vores nye metode blev HCSC-lignende celler med succes beriget med F III. Denne undersøgelse vil i høj grad bidrage til to vigtige områder af biologisk interesse:. CSC isolation og HCC terapi

Henvisning: Liu W-h, Wang X, Du N, Tao K-s, Wang T, Tang L-j, et al. (2012) Effektiv Berigelse af hepatisk Cancer Stem-lignende celler fra en primær Rat HCC Model via en densitetsgradientcentrifugering-Centered metode. PLoS ONE 7 (4): e35720. doi: 10,1371 /journal.pone.0035720

Redaktør: Kwan Man, The University of Hong Kong, Hongkong

Modtaget: Februar 3, 2012; Accepteret: 20 mar 2012; Udgivet: 25 april, 2012