PLoS ONE: Anacardic Acid Forbedrer spredning af menneskelige ovariecancerceller

Abstrakt

Baggrund

Anacardic syre (AA) er en blanding af 2-hydroxy-6-alkylbenzoic syre homologer. Visse antitumoraktiviteter af AA er blevet rapporteret i mange forskellige cancere. Men funktionen af ​​AA i kræft i æggestokkene, til dato, er forblevet ukendt.

Metoder

Ovariecancer cellelinjer blev udsat for AA, hvorefter celleproliferation, apoptose, invasion og migration assays blev udført. Phalloidin-farvning blev anvendt til at observere lamellipodia formation. Revers transkription polymerasekædereaktion (RT-PCR) og western blotting blev brugt til at vurdere mRNA og protein ekspressionsniveauer af Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), vaskulær endothelial vækstfaktor (VEGF) og caspase 3. Salg

Resultater

Vores resultater viste, at AA fremmer ovariecancer celleproliferation, inhiberer sene apoptose, og inducerer cellemigrering og invasion samt lamellipodia formation. AA eksponering signifikant opreguleret PI3K og VEGF mRNA og proteinekspression, mens i modsætning hertil det nedreguleret caspase 3-mRNA og proteinekspression i sammenligning med ubehandlede kontrolceller.

Konklusion

Taget sammen, vores resultater viser for første gang, at AA kan forstærke proliferation, invasion, metastase og lamellipodia dannelse i æggestokkene kræft cellelinjer via PI3K, VEGF og caspase 3 veje

Henvisning:. Xiu YL, Zhao Y, Gou WF, Chen S, Takano Y, Zheng HC (2014) Anacardic Acid Forbedrer spredning af menneskelige æggestokkene cancerceller. PLoS ONE 9 (6): e99361. doi: 10,1371 /journal.pone.0099361

Redaktør: Javier S. Castresana, Navarra Universitet, Spanien

Modtaget: 18. december 2013; Accepteret: 14 maj 2014; Udgivet: 12 Jun 2014

Copyright: © 2014 Xiu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Shenyang Enestående Talent Foundation Kina; Shenyang Videnskab og Teknologi Grant (F11-264-1-10, F12-277-1-01); projektet Støttet af videnskabelig Fund Research Liaoning Provincial Education Department (L2010633); Liaoning Videnskab og Teknologi Grant (2009225008-11, 2013021077); og Natural Scientific Foundation of China (81172371; 81.202.049). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i æggestokkene er stadig den mest almindelige dødsårsag fra gynækologiske maligniteter [1], [2]. Primær behandling af kræft i æggestokkene er kirurgisk resektion af synlig sygdom efterfulgt af adjuverende kemoterapi, normalt består af en kombination af platinbaseret og taxan kemoterapi. I betragtning af at tilbagefald og metastaser alvorligt påvirke prognosen for kræft i æggestokkene, har de fem-årige overlevelsesrate for alle stadier af kræft i æggestokkene blevet anslået til 35-38% [3], [4]. Således har den undersøgelse af nye second-line kemoterapi narkotika, der hæmmer de metastatiske og gentagelse processer for kræft i æggestokkene, bliver fokus for den seneste forskning interesse som deres udvikling kan forbedre femårige overlevelsesrater.

Anacardic syre (AA) er en blanding af 2-hydroxy-6-alkylbenzoic syre homologer og er almindeligt forekommende i planter af Anacardiaceae familien [5], [6]. Det er en kosten komponent fundet i cashew æble (

Anacardium occidentale

) og ginkgo (

Ginkgo biloba

) blade og frugter. AA fungerer som en mitokondrisk afkoblersektion af oxidativ phosphorylering [7] og sensibiliserer humane tumorceller for ioniserende stråling ved inhibering af histonacetyltransferase aktivitet [8]. AA har også vist visse antitumoraktiviteter i prostatacancer, lungecarcinom og brystcarcinom, samt nogle andre kræftformer, og menes at udøve dets indsats gennem forskellige mekanismer [9] – [13]. For nylig har et stigende antal undersøgelser undersøgt rolle AA i kræft, med håbet om, at det kan i sidste ende anvendes i klinisk behandling. Imidlertid har den funktion AA i ovariecancer forblevet ukendt. Således er vores undersøgelse viser den rolle og potentielle mekanismer i AA i kræft i æggestokkene for første gang.

Materialer og Metoder

Cell kultur

ovariecancer cellelinjer, SKOV3 ( serøs papillære cystisk adenocarcinom), HO8910 (serøs cystisk adenocarcinom) og stærkt invasive HO8910 (HO8910-PM), blev købt fra ATCC. Cisplatin-resistent SKOV3 (SKOV3 /DDP) blev købt fra Tumor Cell Bank of Chinese Academy of Medical Science (Peking, Kina). Celler blev opretholdt i RPMI 1640-medium (HO8910, HO8910-PM og SKOV3 /DDP) og McCoys 5A-medium (SKOV3) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 enheder ml

-1 penicillin (SKOV3 /DDP var også suppleret med 20 ng ml

-1 Cisplatin, (DDP) og 100 ug ml

-1 streptomycin. Cellelinjer blev holdt i en befugtet atmosfære af 5% CO

2 ved 37 ° C med eller uden AA behandling (Sigma, Saint Louis, USA). Alle celler blev høstet ved centrifugering efter celler blev udsat for trypsin, skyllet med phosphatbufret saltvand (PBS) og underkastet total protein ekstraktion ved lydbehandling i radio-immunopræcipitation assay (RIPA) buffer.

Proliferationsassay

Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Xiongben, Japan) blev anvendt til at bestemme antallet af levedygtige celler via en kolorimetrisk assay. Kort fortalt, 2,5 x 10

3 celler /brønd blev podet til en 96-brønds plade og får lov til at klæbe. på forskellige tidspunkter, 10 pi CCK-8 opløsning blev tilsat til hver brønd i pladen, og pladen blev efterfølgende inkuberet i 3 timer ved 37 ° C før optagelse af den optiske densitet ved 450 nm.

Cellecyklusanalyse

efter inkubation i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære af 5% CO

2, celler blev frigjort ved trypsinisering, opsamles, vaskes to gange med PBS og fikseret i 10 ml iskold ethanol (70%) i mindst 2 timer. Cellerne blev vasket to gange med PBS igen og inkuberet med 500 pi RNase (0,25 mg ml

-1) ved 37 ° C i 30 minutter. Cellerne blev pelleteret, resuspenderet i propidiumiodid (PI) ved en koncentration på 50 ug ml

-1 og inkuberet i mørke ved 4 ° C i 30 minutter. Cellecyklusanalyse blev udført ved analyse af PI-farvning ved flowcytometri.

Apoptose assay

Flowcytometri blev udført efter farvning med PI og FITC-mærket annexin V (Keygen Biotech, Nanjing, Kina) ifølge fabrikantens protokol til påvisning af phosphatidylserin eksternalisering som et slutpunkt indikator for tidlig apoptose i cellerne. Kort beskrevet efter inkubation i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære af 5% CO

2, cellerne blev vasket to gange med iskold PBS, resuspenderet i 1 × bindingspuffer i en koncentration på 1 x 10

6 celler ml

-1 og derefter inkuberet med 200 pi 1 × bindingsbuffer og 10 pi FITC-annexin V. prøver blev forsigtigt hvirvlet og inkuberet i 15 minutter ved 25 ° C i mørke, derefter 300 pi 1 × bindingsbuffer og 5 pi PI blev tilsat til hvert rør. Prøver blev forsigtigt vortexet og inkuberet i mindre end 1 time ved 25 ° C i mørke. Flowcytometri blev udført inden for 1 h inkubation.

sårheling assay

Celler blev podet ved en tæthed på 1,0 x 10

6 celler /brønd i 6-brønds dyrkningsplader. Efter at de var vokset til konfluens, blev cellemonolaget ridset med en pipettespids (200 uL) for at oprette en ridse. Cellerne blev derefter vasket med PBS tre gange og dyrket i FBS-frit medium. Celler blev fotograferet ved 0, 12, 24, 48 og 72 timer (

n

= 9), og de ridsede områder blev målt ved anvendelse Billede software. Den sårhelende blev beregnet efter følgende formel:

sårheling sats = (Område med original sår – Et område med faktiske sår på forskellige tidspunkter) /område med oprindelige sår × 100%

.

celleinvasion assays Salg

i invasionen assay 5 × 10

4-celler blev resuspenderet i FBS-fri RPMI-1640 og podet i de øverste kamre i Matrigelcoatede Transwell skær (BD Bioscience, San Jose, CA, USA). Det nedre rum af kammeret indeholdt 10%

v /v

FBS som en kemoattraktant. Efter inkubation i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære af 5% CO

2 blev cellerne på den øvre overflade af membranen tørres væk, og cellerne på den nedre overflade af membranen blev vasket med PBS, fikseret i 100% methanol og farvet med krystalviolet farvestof til at kvantificere omfanget af invasion.

real-time reverse transkription polymerasekædereaktion (real-time RT-PCR)

Totalt RNA blev ekstraheret fra de ovariecarcinom cellelinjer under anvendelse af TRIzol (Takara, Kyoto, Japan). Real-time RT-PCR blev udført fra 2 ug totalt RNA under anvendelse af AMV-revers transkriptase og tilfældige primere (Takara, Kyoto, Japan). PCR-primere blev designet i henhold til sekvenserne i GeneBank og er anført i tabel S1. Amplifikation af cDNA blev udført i overensstemmelse med producentens protokol under anvendelse af et SYBR Premix Ex Taq II kit (Takara, Kyoto, Japan) og

GAPDH

som en intern kontrol. Kort fortalt blev RT-PCR-amplifikation af cDNA for hver primer udført i et slutvolumen på 20 pi indeholdende 10 pi SYBR Premix Ex Taq (x 2), 0,08 pi primere, 0,4 pi ROX henvisning farvestof og 1 pi template cDNA (50 pg uL

-1). Protokollen parametre var følgende: indledende inkubering ved 95 ° C i 30 s efterfulgt af 40 cykler af denaturering ved 95 ° C i 5 s og annealing ved 60 ° C i 34 s. Alle PCR-forsøg blev ledsaget med en no-skabelon kontrol og

GAPDH

som en intern kontrol. Den relative genekspression niveau (mængden af ​​mål normaliseret til det endogene kontrol genet) blev beregnet under anvendelse af komparativ CT metode: 2

-ΔΔCt. Sekvenserne af primere for real-time kvantitativ PCR leveres i tabel S1.

Western blot-analyse

Protein assays blev udført ifølge Bradford-metoden ved anvendelse af Bio-Rad proteinassay-kit (Bio -Rad, Hercules, CA, USA). Denaturerede proteiner blev adskilt ved natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) på 12% acrylamidgeler, og derefter overført til Hybond-membraner (Amersham, Tyskland). Membranerne blev blokeret natten over i 5% skummetmælk i Tris-bufret saltvand med Tween 20 (TBST; 10 mM Tris-HCI, 150 mM NaCl, 0,1% Tween 20). For immunoblotting blev membranerne inkuberet i 1 time med det primære antistof, skyllet med TBST og inkuberet med anti-kanin, anti-muse- eller anti-gede-IgG-antistoffer konjugeret til peberrodsperoxidase (HRP; Dako, Carpinteria CA, USA) ved en fortynding af 1:1000. Efter påføring forstærket kemiluminescerende (ECL) -plus detektionsreagenser (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), blev proteinbåndene visualiseret ved anvendelse af en røntgenfilm (Fujifilm, Tokyo, Japan). Immunoblots blev vasket med western blotting (WB) stripning puffer (pH 2-3; Nacalai, Tokyo, Japan) og probet under anvendelse af et monoklonalt antistof specifikt for β-actin (1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA ).

Immunofluorescens

Celler blev dyrket på dækglas, fikseret med PBS indeholdende 4% formaldehyd i 10 minutter og permeabiliseret med 0,2% Triton X-100 i PBS i 10 minutter ved stuetemperatur. Efter vask med PBS blev cellerne inkuberet natten over ved 4 ° C med Alexa Fluor 594 Phalloidin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) for at gøre det muligt for lamellipodia der skal visualiseres. Kerner blev farvet med 1 ug ml

-1 (DAPI; Sigma-Aldrich St. Louis, MO, USA) i 15 minutter ved 37 ° C. Dækglassene blev derpå monteret med SlowFade Gold antifade Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og observeret under et konfokalt laser mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).

Statistisk analyse

Statistisk vurdering blev udført under anvendelse Spearman rang korrelationskoefficient at analysere sorteret data, og Mann-Whitney U test at differentiere midlerne til forskellige grupper. En

s

-værdi af 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. SPSS v. 10.0 software (SPSS, Chicago, IL, USA) blev anvendt til at analysere alle data.

Resultater

Virkningerne af anacardic syrer på ovariecancer celler

to par cellelinjer, SKOV3 og SKOV3 /DDP-celler, og HO8910 og HO8910-PM-celler, blev udsat for AA (0 uM, 2,5 pM, 5 pM, 10 pM, 15 pM, 20 pM) og underkastet CCK-8 proliferationsassays (figur 1A,

s 0,05

). SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM celler viste stærkere spredning, når de behandles med AA mod kontrol- cellelinjer. Vi fandt, at funktionen af ​​AA i at fremme spredning var positivt korreleret med dets koncentration, 10 uM AA kan fremme spredning betydeligt, så vi vælger 10 uM, 15 uM, 20 uM som eksperimentelle betingelser for at fuldføre følgende eksperiment. AA behandling induceret S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler; omvendt, AA induceret G1 anholdelse i HO8910 og HO8910-PM-celler (figur 1B,

s 0,05

). Flowcytometrisk apoptose analyse viste, at AA behandling (15 uM) inhiberede sent apoptose i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler (Figur 2,

p 0,05

), og sårhelende og invasion-assays viste, at AA fremmet cellemigration og invasion i en koncentrationsafhængig måde (figur 3A og B,

s 0,05

). Desuden AA eksponering induceret lamellipodia dannelse i alle fire cellelinjer, som angivet ved F-actin struktur (figur 4).

CCK-8 celleproliferationsanalyser viser, at AA behandling af SKOV3 og SKOV3 /DDP, og HO8910 og HO8910-PM-celle-liniepar inducerer celleproliferation (A). AA behandling induceret S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler, og G1 anholdelse i HO8910 og HO8910-PM celler (B). *

s 0,05

. Resultaterne er repræsentative for tre separate forsøg; data er udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse.

Flowcytometrisk apoptose analyse viser, at AA behandling inhiberer sene apoptose i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler. *

s 0,05

. Resultaterne er repræsentative for tre separate forsøg; data er udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse.

sårhelende assays viser, at AA behandling øger evnen af ​​SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler at migrere i en koncentrationsafhængig måde (A). Behandlede celler udviser også invasive potentiale (B). *

s 0,05

. Resultaterne er repræsentative for tre separate forsøg; data er udtrykt som gennemsnit ± standardafvigelse.

AA eksponering inducerer lamellipodia dannelse i alle fire cellelinjer som angivet af F-actin struktur.

mRNA og protein udtryk for fænotype-relaterede molekyler i ovariecancer celler efter udsættelse for AA

Efter behandling med AA, de mRNA ekspressionsniveauerne af caspase 3 i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM cellelinjer var lavere end dem, der observeres i kontrol- celler. I modsætning hertil var mRNA ekspressionsniveauer af PI3K og VEGF var højere end kontrolceller (figur 5A,

s 0,05

). Western blot-analyse af protein-ekspressionsniveauer viste, at AA eksponering up-PI3K og VEGF proteinekspression, og nedreguleret caspase 3 proteinekspression i begge celle-liniepar (figur 5B,

s 0,05

).

Virkninger af AA eksponering på mRNA-ekspressionsniveauer af proliferation og apoptose-relaterede molekyler, og deres tilsvarende proteiner til ovariecarcinom celle-liniepar ved hjælp af real-time RT-PCR (A) og Western blot-analyse (B). *

s

0,05. Resultaterne er repræsentative for tre separate forsøg; data er udtrykt som gennemsnit ± standardafvigelse.

Diskussion

AA er almindeligt forekommende i planter af Anacardiaceae familie og er en kosten komponent fundet i cashew æble (

Anacardium occidentale

) og ginkgo (

Ginkgo biloba

) blade og frugter og findes i en række medicinske planter, der har potentielle aktivitet mod kræft cellelinjer [14] – [15]. Adskillige undersøgelser har rapporteret, at AA spiller en anticancer rolle, hvilket kan associeret med reduceret ekspression af survivin og X-bundet inhibitor af apoptose protein, som er anti-apoptotiske proteiner associeret med cellulær overlevelse og radioresistance, og strålingssensibilisering af hypofyseadenom celler [ ,,,0],16]. AA spiller også en antibakteriel rolle og en tidligere undersøgelse fokuserede på struktur-aktivitet-relationer afslørede, at carboxylgruppen på den aromatiske ring og en umættet sidekæde i anacardic syrederivat er vigtige for motilitet inhibering og den lytiske aktivitet af AA mod zoosporer [17 ]. Det spiller også en rolle som en antioxidant og demonstrerer anti-fedme og anti-inflammatoriske aktiviteter [18] – [20]

AA inhiberer aktiveringen af ​​både inducerbare og konstitutive ekspression af nuklear faktor-kappa. B (NF-kB), som aktiveres af carcinogener og vækstfaktorer, og menes at forstærke apoptose i tumorceller ved en koncentration på 25 pM [9]. I mellemtiden har en tidligere undersøgelse vist via en række undersøgelser, såsom påvisning af cytotoksicitet, udtryk for relevante proteiner og Ca

2+ mobilitet, at AA inducerer ER (endoplasmatisk reticulum) stress og autofagi i lungekræft celler på en koncentration på 10 uM [10]. Sårheling migration assays, har Transwell migration assays og musemodel assays desuden foreslået, at AA kan fungere som en potent tumorangiogenese inhibitor ved at målrette Src /FAK /Rho GTPase-signalvejen, hvilket fører til signifikant undertrykkelse af prostata tumorvækst ved lave dosisniveauer ( 5-50 uM) [11]. AA er blevet vist ved en række eksperimenter, herunder cellecyklusanalyse, RT-PCR og WB, at inhibere LNCaP-celleproliferation ved at inducere G1 /S cellecyklusstandsning og apoptose ved koncentrationer på 5, 25, 125 pM [12]. Imidlertid har AA ikke er anvendt i kliniske situationer, selv om mange mennesker menes at tage det som en sundhedsfaglig supplement. Det skal bemærkes, at i modsætning til nogle andre kræftformer, vores nuværende undersøgelse tyder på, at AA kan fremme proliferation og inhiberer apoptose i ovariecancerceller, hvilket indikerer, at funktionen af ​​AA i æggestokkene cancercellelinier er et kontroversielt emne.

beslægtede molekylære mekanismer for AA i ovariekarcinomceller har til dato forblevet ukendt. For at undersøge de relaterede mekanismer i æggestokkene kræftceller, valgte vi to par ovariecancer cellelinjer baseret på deres resistens over for lægemidler og invasive evner (SKOV3 og SKOV3 /DDP, og HO8910 og HO8910-PM, henholdsvis). Vore eksperimentelle studier viste, at AA signifikant induceret cellelevedygtigheden i ovariecancerceller på 15 uM. Det skal bemærkes, at selv om AA induceret celleproliferation i alle celler i en koncentrations- og tidsafhængig måde, både de lægemiddelresistente (SKOV3 /DDP) og stærkt invasive (HO8910-PM) celler udviste større følsomhed over for AA eksponering, hvilket kan skyldes deres større andel af stamceller (tumor-initierende celler) eller øget stamcellelignende egenskaber af disse celler. AA behandling induceret S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler; omvendt, det inducerede G1 anholdelse i HO8910 og HO8910-PM celler. Flowcytometrisk apoptose-analyse viste, at behandling med AA inhiberede sent apoptose i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler. Der var et tilfælde rapporteret i brystcancer celle, kan AA fortrinsvis inhiberer ER-α (østrogenreceptor-α) -positiv brystcancercelleproliferation ved direkte østrogenreceptor-DNA-bindingsdomænet (ER-DBD) interaktion [13]. Vi yderligere komplet immunofluoresce eksperiment for at påvise ekspressionen af ​​ER i fire æggestokkene cancercellelinjer viste det resultat, at fire æggestokkene cancercellelinier har alle ER-ekspression. Så foreslår vi, at ER-negative eller ER-positive kan ikke påvirke AA funktion på æggestokkene kræft cellelinjer, kan forskellen mellem AA funktion på brystcancercellelinier og æggestokkene kræftceller via forskellige ruter. For at undersøge dette finde yderligere, bedømmes vi apoptose pathway-relateret indikator, caspase 3 [25] – [27], og fandt, at dets mRNA og protein-ekspressionsniveauer var signifikant lavere i celler udsat for AA. I uenighed med nogle eksperimenter [28] – [31]. Derfor vi mente, at AA kan have en pro-tumor funktion i ovariecancer.

At studere dette finde yderligere undersøgte vi en række andre indikatorer og fandt, at udtrykkene for PI3K mRNA og protein i æggestokkene cancerceller behandlet med AA var højere sammenlignet med ubehandlede kontrolceller. Vores data er i overensstemmelse med den af ​​Zachary et al. [21], der rapporterede, at PI3K /AKT /mTOR pathway er forskelligartet og påvirker lige så forskelligartede aspekter af æggestokkene tumor udvikling, progression og patient overlevelse. Der er blevet udført adskillige forsøg for at undersøge målrettet cancerterapi via PI3K pathway. Faktisk har en nyere prospektiv, storstilet genomisk analyse vist, at PI3K /AKT-vejen ofte er dereguleret i høj kvalitet serøse tumorer i æggestokkene [22] – [23]. PI3K kan betragtes som en vigtig mediator af overlevelsessignaler som beskytter ovariecancerceller fra apoptoseinduktion [24]. Derfor formoder vi, at AA kan fremme spredning i kræft i æggestokkene via PI3K pathway. Desuden har vores undersøgelse vist, at AA fremmer cellemigration og invasion i en koncentrationsafhængig måde, og AA eksponering inducerer lamellipodia dannelse i alle fire cellelinjer undersøgt, som angivet ved nøje koncentreret F-actin struktur.

vi har registreret også invasion og metastase-relaterede indikatorer og fandt, at ekspressionsniveauerne af VEGF-mRNA og protein i AA-behandlede celler steg i forhold til kontrolceller. VEGF er kendt som en af ​​de vigtigste vækstfaktorer involveret i dannelsen fartøj [32], [33]. Tyder på, at den unormale udtryk af VEGF i kræft i æggestokkene er tæt forbundet med tumor invasion og metastase [34], [35]. Som vi har diskuteret ovenfor, AA spiller en mangfoldig rolle i forskellige kræftformer og virker gennem flere veje. For eksempel har kraftig inhiberende aktivitet af AA på VEGF-stimuleret migrering, kapillær strukturdannelse, fastgørelse og paxillin aktivering i endotelceller tidligere blevet beskrevet [11]. Men i vores undersøgelse blev AA fundet, at fremme ekspressionen af ​​VEGF-mRNA og protein i ovariecancerceller. Derfor er vi spekulere at AA kan fremme migration og invasion i kræft i æggestokkene via VEGF vej.

Som konklusion foreslår vi, at AA kan forstærke proliferation, invasion og metastase via PI3K og VEGF veje i æggestokkene kræftceller . Men den afvigende specifikke molekylære mekanismer i AA i ovariecancer brug for yderligere undersøgelse og dets kliniske manipulation skal også forsigtigt overvejes i det fremtidige arbejde.

Støtte Information

Tabel S1.

Primer sekvenser udvalgt til real-time RT-PCR

doi: 10,1371 /journal.pone.0099361.s001

(DOC)