PLoS ONE: Selektiv ekspression af Myosin IC Isoform A i mus og humane cellelinjer og mus Prostata Cancer Tissues

Abstrakt

Myosin IC er en enkelt overskriften medlem af myosin superfamilien. Vi har for nylig identificeret en hidtil ukendt isoform og viste, at

MYOIC

gen i pattedyrsceller koder tre isoformer (isoform A, B og C). Desuden viste vi, at myosin IC isoform A, men ikke isoform B udviser en vævsspecifik udtryk mønster. I denne undersøgelse har vi udvidet vores analyse af myosin IC isoform ekspressionsmønstre ved at analysere protein og mRNA-ekspression i forskellige mammale cellelinier og i forskellige prostata prøver og tumorvæv fra den transgene mus prostata (TRAMP) model ved immunoblotting, QRT-PCR, og ved indirekte immunhistokemisk farvning af paraffin indlejret prostata prøve. Analyse af et panel af mammale cellelinjer viste en øget mRNA og protein ekspression af specifikt myosin IC isoform A i et panel af mennesker og mus prostatakræft-cellelinier, men ikke i ikke-cancer prostata eller andre (ikke-prostata-) cancercellelinier . Endvidere viser vi, at myosin IC isoform A ekspression er signifikant forøget i TRAMP mus prostataprøver med prostatahyperplasi intraepitelialneoplasi (PIN) læsioner og i fjernt sted metastaser i lunge og lever sammenlignet med matchede normale væv. Vores observationer viser specifikke ændringer i ekspressionen af ​​myosin IC isoform A, der er samtidig med forekomsten af ​​prostatacancer i TRAMP muse prostatakræft model, der nøje efterligner klinisk prostatacancer. Disse data antyder, at forhøjede niveauer af myosin IC isoform A kan være en potentiel markør til påvisning af prostatacancer

Henvisning:. Ihnatovych I, Sielski NL, Hofmann WA (2014) Selektiv ekspression af myosin IC isoform A i mus og humane cellelinjer og mus Prostata Cancer væv. PLoS ONE 9 (9): e108609. doi: 10,1371 /journal.pone.0108609

Redaktør: Craig N. Robson, Northern Institute for Cancer Research, England

Modtaget: 11. juli, 2014 Accepteret: September 1, 2014; Udgivet: 26 September, 2014

Copyright: © 2014 Ihnatovych et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Denne undersøgelse blev finansieret af det amerikanske forsvarsministerium, congressionally Directed Medical Research Programmer (https://cdmrp.army.mil/default.shtml) (tilskud # W81XWH -12-1-0234) til WAH og ved et universitet i Buffalo opstart tilskud til WAH. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatacancer er den mest almindelige cancer diagnosticeres hos mænd verden over og den næsthyppigste årsag til kræft dødsfald i USA [1], [2]. Prostatakræft kan være hyppigt indolent men det kan også være meget aggressiv og dødelig hos nogle patienter. Øjeblikket er der ingen pålidelig markør til rådighed for tidlig påvisning, diagnostisk bekræftelse, eller sygdom prognose tilgængelig [3]. Således identifikation af nye biomarkører, der har evnen til præcist at identificere og skelne prostatacancer er af betydning for nøjagtig styring af sygdommen.

Myosin IC er et medlem af myosin superfamilien [4], som lokaliseres til det cytoplasmaet og kernen og er impliceret i en række forskellige processer i begge rum. I cytoplasmaet, er myosin IC involveret i dannelsen af ​​lipidklumper [5], transport af vesikler indeholdende membranproteiner [6], og i ionkanal regulering i hårceller i det indre øre [7] – [9]. I kernen, er myosin IC involveret i forskellige aspekter af transskription [10] – [13] i kromatin remodellering [14], [15], og dynamisk organisation af kromosomale strukturer [16]. Vi har for nylig identificeret en hidtil ukendt isoform af myosin IC og viste, at

MYOIC

gen i pattedyrsceller koder tre isoformer, der kaldes myosin IC isoformer A, B, og C [17].

vores tidligere analyse af myosin IC isoform-ekspression i murine væv afslørede en vævsspecifik ekspression mønster til specifikt myosin IC isoform a med høje ekspressionsniveauer i nyre, binyre, bugspytkirtel og i epididymis og retroperitoneale adipose depoter [18]. I modsætning hertil myosin IC isoform B viser en allestedsnærværende udtryk mønster i alle analyserede væv og cellelinier [17] – [19]

Dette væv specifikt udtryk for myosin IC isoform A førte os til at udforske udtrykket profiler af. myosin IC-isoformer yderligere. Vi rapporterer her evalueringen af ​​myosin IC-isoformer A og B ekspression i en række forskellige pattedyr-vævsdyrkningscellelinier. Vi viser, at ekspression af myosin IC isoform A er steget betydeligt i prostata cancercellelinier sammenlignet med andre (ikke-prostata) cancercellelinier eller til en ikke-cancer prostata cellelinie. Efterfølgende analyse af prostatacancer tumorvæv fra den murine TRAMP model, der nøje afspejler patogenesen af ​​human prostatacancer [20] – [23] viser en signifikant stigning i isoform A ekspression sammenlignet med normale væv. Tilsammen vores data implicerer specifikke ændringer i myosin IC isoform Et udtryk, der er samtidig med fremkomsten af ​​prostatakræft.

Materialer og Metoder

Antistoffer

Antistoffer, der genkender specifikke isoformer af myosin IC: 1. anti-NMI-antistof er et kanin-polyklonalt antistof, der blev fremstillet mod den 16 aminosyrer lange N-terminale peptid af NMI, her kaldet isoform B [5], [24] (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); 2. myosin IC-isoform A antistof er et monoklonalt muse-antistof, der blev fremstillet mod myosin IC isoform Et specifikt N-terminale peptid og anerkender udelukkende myosin IC isoform A [17] (figur 1A). Monoklonale antistoffer til p-actin og SV40 stort T-antigen (SV40-Tag) blev opnået fra Sigma (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) og EMD Millipore (EMD Millipore Corporation, Billerica, MA), hhv. Peroxidasekonjugerede sekundære anti-mus eller anti-kanin-antistoffer blev opnået fra Jackson ImmunoResearch Laboratories (West Grove, PA).

Påvisning af myosin IC-isoformer A og B-protein i forskellige mammale cellelinier ved immunoblotanalyse ved anvendelse af antistoffer specifikke for myosin IC isoformer A, isoform B, SV40 stort T-antigen (Tag) og actin (kontrol). A) Skematisk af myosin IC isoformspecifik sekvenser og genkendelsessite af antistoffer. Afbildes, er 5′-området af den mammale

MYOIC

gen med exonerne der koder for isoform specifikke N-terminale peptider. Translation start sites for isoformerne er angivet som er de N-terminale aminosyresekvenser. Understreget er peptidsekvenserne, der anvendes som immunogen til at skabe isoform-specifikke antistoffer. B) repræsentant immunoblot af celleekstrakter, der blev analyseret under anvendelse af de angivne antistoffer. Relevante molekylvægt markører er angivet til venstre i kD. C) Histogram præsentere den gennemsnitlige densitometrisk intensitet myosin IC isoform A ekspression normaliseret til actin. D) Histogram præsentere den gennemsnitlige densitometrisk intensitet isoform B-ekspression normaliseret til actin. Myosin IC isoform Et protein er højt udtrykt i COS-7-celler og de humane og muse prostatacancer-cellelinier PC-3 og TRAMP-C2. I modsætning hertil er myosin IC isoform B protein udtrykkes på sammenlignelige niveauer i alle analyserede cellelinier. Resultaterne præsenteres som gennemsnit ± standardafvigelse; n = 3 uafhængige forsøg.

cellelinjer og vævskultur

COS-7, A-431, MCF-7, TRAMP-C1, DU 145, 22Rv1, RWPE-1 og PC-3-celler blev opnået fra American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, USA). OVCAR-3 celler, der oprindeligt stammer fra ATCC, blev generøst tilvejebragt af Dr. Arthur M. Edelman (Institut for Farmakologi og Toksikologi, University at Buffalo, Buffalo, NY, USA). As4.1 celler [25] var en slags gave fra Dr. Kenneth W. Gross [Dept. af molekylær- og cellebiologi, Roswell Park Cancer Institute (RPCI), Buffalo, NY, USA]. TRAMP-C2 celler [26] var en slags fra Dr. Barbara Foster (Institut for Farmakologi og Therapeutics, RPCI, Buffalo, NY, USA). COS-7, A431, og As4.1. celler blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS). MCF-7 og DU 145-celler blev dyrket i DMEM suppleret med 10% FBS og 0,01 mg /ml insulin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). PC-3 og 22Rv1 celler blev dyrket i RPMI-medium suppleret med 10% FBS. OVCAR-3 celler blev dyrket i RPMI-medium suppleret med 20% FBS og 0,01 mg /ml insulin. TRAMP-C1 og TRAMP-C2-celler blev dyrket i DMEM høj glucose suppleret med 5% FBS, 5% Nu Serum IV (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) 5 mg /ml insulin og 10 nmol /l dihydrotestosteron (Sigma- Aldrich, St. Louis, MO, USA). RWPE-1-celler blev dyrket i keratinocyt serumfrit medium (Invitrogen Carlsbad, CA, USA; Kit Catalog # 17.005-042) suppleret med 0,05 mg /ml bovin hypofyse (BPE) og 5 ng /ml human rekombinant epidermal vækstfaktor (EGF ). Desuden blev alle celler suppleret med 1% penicillin /streptomycin og dyrket ved 37 ° C med 5% CO

2.

vævsprøver Salg

Frosne vævsprøver fra 22 ugers alderen TRAMP-mus samt alder matchede vildtypemus blev indkøbt fra musetumor Model Resource på RPCI (Buffalo, NY, USA). Vævene blev indsamlet i nøje overensstemmelse med anbefalingerne i Vejledning for pleje og anvendelse af forsøgsdyr af National Institutes of Health under RPCI s 890 Tumor bank protokol for musetumormodeller ressource. Protokollen blev godkendt af Roswell Park Cancer Institute IACUC (Institutional Animal Care og brug Udvalg). Dyr blev aflivet ved anæstesi overdosis efterfulgt af cervikal dislokation. Alle prostata- og tumorvæv var blevet mikrodissekeres ved obduktion, flash-frosset i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C indtil anvendelse. Fem-micron tyk paraffin indlejrede matchede vævssnit blev indkøbt fra samme kilde.

Immunohistrochemistry

Paraffin vævssnit blev de-paraffinized med xylen, rehydratiseret med alkohol, og anbringes i dH

2O før de undergik standard antigen-genvinding (citratbuffer, pH 6). Endogen peroxidaseaktivitet blev blokeret ved anvendelse af 3% H

2O

2 før inkubering med enten myosin IC isoform A eller SV40-Tag antistoffer til immunhistokemi ifølge standardmetoder. Billeder blev opnået med en Zeiss Axio Imager Z1 (Carl Zeiss Inc, Thornwood, NY, USA) og forarbejdet ved hjælp af Adobe Photoshop-software.

Immunblotanalyse

Til tilberedning af rå cellulære ekstrakt, lige antallet af celler blev lyseret i SDS prøve-buffer. For hver cellelinie baseret analyse, blev udført tre uafhængige forsøg. Vævsekstrakt blev fremstillet som tidligere [18] beskrevne. For hvert væv baseret analyse, blev analyseret væv fra tre til seks mus. Lige volumener af rå celleekstrakt eller lige store mængder af væv proteinekstrakter (40 ug) blev separeret ved 10% SDS-PAGE (natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese) og overført til nitrocellulose-membran. Efter overførsel blev membranen skæres i passende størrelser og inkuberet med specifikke antistoffer. Immunreaktive bånd blev detekteret ved forøget kemiluminescens. Densitometrisk analyse blev udført på de udvalgte bands baseret på deres relative intensiteter ved hjælp ImageJ software.

Kvantitative Real-Time PCR (QRT-PCR)

Total RNA blev isoleret fra celler eller vævsprøver bruger Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ifølge producentens anvisninger. 1 ug totalt RNA fra hver cellelinje blev anvendt til revers transskribere til cDNA under anvendelse af Superscript III revers transkriptase og oligo dT primer ifølge producentens anvisninger (Invitrogen, Carlsbad, CA). QRT-PCR blev udført under anvendelse af iCycler iQ Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) og primer, der genkender specifikt muse og human myosin IC isoform A (

homo sapiens:

NM_033375. 4;

mus musculus

: XM_006532429.1) og mus og human myosin IC isoform B (

homo sapiens:

NM_001080950.1;

mus musculus:

NM_001080775). For kvantificering blev triplikater normaliseret til gennemsnittet af GAPDH housekeeping-genet. Den anvendte primer til QRT-PCR, er beskrevet i [18].

Statistisk analyse

Alle data er angivet som middelværdier ± standardafvigelser. Den normalitet af dataene blev testet med Kolmogorov-Smirnov test. Forskellen mellem datasæt blev testet med Students t-test. Afvigelserne blev betragtet som signifikante på niveauet for

s

0.01.

Resultater

Vi har tidligere analyseret ekspressionsmønstre af myosin IC-isoformer i 33 mus organer og væv og fandt, at myosin IC isoform A, men ikke isoform B udtrykkes i et væv bestemt måde [ ,,,0],18]. Vi har nu udvidet vores analyse af proteinet og mRNA-ekspression af myosin IC-isoformer til et panel af mammale cellelinjer. For at analysere proteinekspression, udførte vi immunoblotanalyse af totale celleekstrakter under anvendelse myosin IC isoform-specifikke antistoffer (figur 1A). Som vist i figur 1B og C, foruden i Afrika grønne abe nyre cellelinje COS-7 (hvor det oprindeligt blev opdaget og karakteriseret [18]) myosin IC isoform Et protein udtrykkes kraftigt i den humane og muse prostatakræft-cellelinier TRAMP -C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, og PC-3, men ikke i den ikke-cancer prostata-cellelinien RWPE-1. Endvidere myosin IC isoform A viser kun lave ekspressionsniveauer i andre cancercellelinier, herunder menneskehud (A-431), bryst (MCF-7) og ovarie (OVCAR-3) cancercellelinjer. Fordi COS-7-cellelinje blev afledt ved transformation med en oprindelse defekt mutant af SV40, der stadig koder for SV40 stort T-antigen (SV40-Tag) [27], testede vi også den As4.1 cellelinie, der blev etableret fra celler af en transgen mus med et intraparenchymal nyre tumor, der blev induceret ved målrettet tumorigenese med en SV40-Tag fusionskonstruktion og også udtrykker SV40-Tag [25]. Som vist i figur 1A, begge cellelinier, COS-7 og As4.1, hurtig SV40-Tag, men kun COS-7-celler viser et højt ekspressionsniveau af myosin IC isoform A. I modsætning til denne cellelinje-specifikke ekspression af myosin IC isoform A, myosin IC isoform B allestedsnærværende udtrykt på sammenlignelige niveauer i alle analyserede cellelinier (figur 1A B).

for at bestemme, om proteinekspression korrelerer med mRNA-ekspression, vi næste analyserede mRNA udtryk for isoformer anvendelse af kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR) med isoform-specifik primer (figur 2A). Som vist i figur 2, fandt vi, at mRNA-ekspression profiler af myosin IC-isoformer A og B korrelat til proteinet udtryk profiler. Sammenlignes med Protein Data, mRNA-ekspression af myosin IC isoform A er høj i COS-7, TRAMP-C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, og PC-3-celler, mens myosin IC isoform B-mRNA udtrykkes ubikvitært i alle analyserede cellelinier.

Påvisning af myosin IC-isoformer A og B-mRNA-niveauer i forskellige mammale cellelinier ved QRT-PCR under anvendelse af isoform-specifik primer. A) Skematisk skildrer 5′-regionen af ​​

MYOIC

genet og den deraf isoform A og B mRNA’er. Målsekvensen placering af primeren anvendt til QRT-PCR til påvisning af myosin IC isoformer er angivet med pile. B) Kvantitativ realtids-PCR-analyse af mRNA’er ekspressionsniveauer af myosin IC isoform Et normaliseret til GAPDH. C) Kvantitativ realtids-PCR-analyse af mRNA’er ekspressionsniveauer af myosin IC isoform B normaliseret til GAPDH. Myosin IC isoform En mRNA-ekspression er høj i COS-7 celler og det menneskelige og mus prostatakræft-cellelinier PC-3 og TRAMP-C2. I modsætning hertil er myosin IC isoform B mRNA udtryk på sammenlignelige niveauer i alle analyserede ell linjer. Resultaterne er præsenteret som middel

±

standardafvigelse; n = 3 uafhængige forsøg.

En slående observation af vores analyse af myosin IC isoform udtryk i disse cellelinjer er de høje ekspressionsniveauer af myosin IC isoform A i mus og humane prostatakræft-cellelinier, når sammenlignet med den normale (ikke-cancer) prostata-cellelinje RWPE-1 og til andre (ikke-prostata) cancercellelinjer som sammenfattet i tabel 1. Dette er særligt interessant, fordi vores tidligere analyse af muse væv og organer viste en meget lav ekspression af myosin IC isoform A i normal mus prostata [18]. I kombination med de lave ekspressionsniveauer af isoform A i den humane normale prostata-cellelinje RWPE-1, antyder disse data, at ændringer i myosin IC isoform A ekspression kan være forbundet med udviklingen af ​​prostatacancer.

for at undersøge denne mulighed, vi analyserede myosin IC isoform Et udtryk i forskellige væv fra TRAMP musen. TRAMP er en transgen linje af C57BL /6 mus, der udtrykker en konstruktion indeholdende den minimale -426 /+ 28 regulatorisk element af rotte probasinpromotoren at målrette ekspression af SV40 stort T-antigen til prostata epitel [21]. TRAMP model er en meget anvendt prostatacancer model som det efterligner nøje human prostatacancer. Spontan tumorprogression i TRAMP prostata begynder ved 8 til 12 uger gamle, og 100% af mus udvikler prostatacancer i en alder af 20 uger. Efterfølgende kan metastase forekomme ved fjerne steder som tumorerne fremskridt [20], [28], [29].

Figur 3 viser den immunhistokemiske analyse af repræsentative vildtype- og TRAMP muse prostata fra mus af 22 ugers alder. Vagabonden væv udviser typiske morfologiske træk der er forbundet med PIN-læsioner og farvet positive for nuklear SV40-Tag [23] (figur 3A B). Vores analyse af myosin IC isoform-ekspression i disse væv afslørede en markant forøget forekomst af myosin IC isoform A i celler associeret med karakteristiske PIN læsioner af TRAMP-mus sammenlignet med celler af vildtype prostata væv, i hvilket myosin IC isoform A er næppe påviselig (figur 3C F).

Repræsentant billede af immunhistokemisk analyse af SV40-Tag (A B), myosin IC isoform A (C D), og isoform B (E F) ekspression i prostata kirtler i 22 uger gamle vildtype (venstre kolonne) og TRAMP (højre kolonne) mus. Objektglassene blev modfarvet med hematoxylin. Billeder blev taget ved 20x forstørrelse. De histologiske ændringer af TRAMP muse prostata, der er forbundet med PIN læsioner er indlysende (venstre kolonne, B, D, F). Som forventet, SV40-Tag immunfarvning er negativ i vildtype prostata (A) og stærkt nuklear i TRAMP prostata (B). Myosin IC isoform A viser meget svag immunfarvning i vildtype prostatavæv (C), men stærk, overvejende cytoplasmatisk farvning i TRAMP prostata med PIN-læsioner (D). Myosin IC isoform B viser stærk farvning i begge, vildtype og TRAMP, prostata væv (E F).

For at bekræfte tilstedeværelsen af ​​myosin IC isoform A i væv, der er forbundet med prostatakræft, vi analyserede forskellige TRAMP prostata tumorvæv, der bestod enten af ​​lateral og ventrale (LV) eller ryg, senere, og ventral prostata (DLV). Som vist i figur 4, myosin IC isoform et protein niveauer signifikant højere i prostata tumorvæv fra TRAMP-mus sammenlignet med vildtype-prostatavæv, der viser kun knap påviselig myosin IC isoform A ekspressionsniveauer (figur 4A B og [18] ). Derudover analyserede vi tumorvæv fra fjernt sted metastase, dvs. lunge og levertumorer. Svarende til prostatavæv, viste lever- og lungetumorer en betydelig stigning i myosin IC isoform Et protein ekspression sammenlignet med de ekspressionsniveauer i vildtype normale lunge- og levervæv [Figur 4A B og [18]]. Yderligere undersøgelse af myosin IC isoform A ekspression ved QRT-PCR bekræftede, at den forøgede proteinekspression i TRAMP prostata og fjernt sted metastaser korrelerer til en betydelig stigning af myosin IC isoform A mRNA-ekspression i disse væv (figur 4C).

prostata vævsekstrakter bestående af ryg-, laterale og ventrale (DLV) eller laterale og ventrale (LV) prostata fra 22 ugers alderen TRAMP eller alder matchede vildtypemus blev analyseret for protein og mRNA ekspression som var vævsekstrakter fra lunge og lever metastaser af TRAMP og matchede væv af vilde type mus. A) Repræsentative immunblots af muse vævsekstrakter, der blev analyseret under anvendelse af de angivne antistoffer. Relevante molekylvægt markører er angivet til venstre i kD. B) Histogram præsentere den gennemsnitlige densitometrisk intensitet isoform A ekspression normaliseret til actin. C) Kvantitativ realtids-PCR-analyse af mRNA’er ekspressionsniveauer af myosin IC isoform Et normaliseret til GAPDH. Resultaterne præsenteres som gennemsnit ± standardafvigelse; n = 3-6 (antal testede hver fra et andet dyr væv). * P. 0,01 i forhold til normalt væv

Diskussion

En analyse af myosin IC isoform Et udtryk i prostata væv og fjerne websted metastaser i TRAMP mus eller alder matchede vildtype mus viste at myosin IC isoform A er signifikant højere udtrykt i prostatatumorer i forhold til normale murine prostata, lunge, eller levervæv. Det er, så vidt vi ved, den første rapport, der dokumenterer en ændring af et myosin IC isoform udtryk i forbindelse med kræft. De mulige biologiske og fysiologiske konsekvenser af overekspression af myosin IC isoform A i tumorvæv er i øjeblikket under efterforskning i vores laboratorium.

Ud over at etablere en forbindelse mellem myosin IC isoform Et udtryk og kræft, vores data tyder på, at afvigende myosin IC isoform A udtryk ændringer kan specifikt knyttet til transkriptionelle ændringer i forbindelse med forekomsten af ​​prostatakræft. Denne hypotese understøttes af flere observationer. Vores tidligere analyse af myosin IC isoform A ekspression i muse vævsprøver [18] viste, at dette specifikke isoform viser høj ekspression kun i nyre, binyre, bugspytkirtel, og en undergruppe af fedtvæv. Vi viser nu en signifikant forøget ekspression i prostata, lunge og lever prostatacancer tumorvæv fra TRAMP mus sammenlignet med vildtype-væv.

TRAMP prostatakræft model er baseret på prostata-specifikke ekspression af SV40-Tag oncoprotein [21]. Den store T-antigen af ​​SV40 virker via flere veje, herunder inaktivering af tumor suppressor proteiner p53 og Rb samt transkriptionel aktivering af et antal proteiner involveret i onkogenese [22]. Fordi SV40-Tag er en universel snarere end en prostatakræft-specifik onkogen, som er blevet brugt i udstrakt grad som en model for mange andre typer kræft [30], kunne det have været muligt at ændringer i myosin IC isoform Et udtryk blev induceret gennem handlinger af SV40-Tag uanset cancer type. viste imidlertid, vores analyse, at isoform var en udtryk ikke ændret i As4.1 cellelinie, der blev etableret fra ascitesvæsken af ​​en seks måneder gammel transgene mus med en intraparenchymal nyre tumor, der er fremkaldt ved transgen målrettet tumorigenese gennem SV40-Tag smeltet til renin-promotoren [25]. Desuden fandt vi, myosin IC isoform Et udtryk ændres i TRAMP-C1 og TRAMP-C2 cellelinjer at, selv om oprindelse fra TRAMP mus, udtrykker ikke SV40-Tag [26]. Desuden har vi også fundet forøget isoform A ekspression i SV40-Tag uafhængige human prostatacancer-cellelinier PC-3, DU 145, og 22Rv1 men ikke i den ikke-cancer human prostata-cellelinje RWPE-1 eller i nogen af ​​de andre ikke -prostate cancer cellelinjer. Samlet set viser disse data tyder på, at myosin IC isoform A ekspressionssystemer ændringer er samtidige med prostatakræft-specifik ændring i cellulære ekspressionssystemer profiler i stedet for SV40-Tag ekspression ændringer.

Mens ekspressionsmønsteret for myosin IA isoform A i mennesker og mus prostatakræft skal analyseres yderligere, vores resultater her, der viser en overekspression i humane og mus prostatakræftceller linjer og i prostata cancer associeret murine væv, antyder kraftigt, at specielt myosin IC isoform a kunne være en mulig diagnostisk markør til påvisning af prostatakræft.

Tak

Vi takker Ms Ellen Karasik for hendes fremragende teknisk bistand med immunhistokemisk analyse. Vi vil gerne takke Dr. Wade Sigurdson og Dr. Joan Baizer for hjælp med mikroskopisk billeddannelse.