PLoS ONE: Anvendelse af Cell-SELEX at generere DNA Aptamere som Molecular Probes af HPV-associeret Cervical Cancer Cells

Abstrakt

Baggrund

Sygdom-specifikke biomarkører er et vigtigt redskab for en rettidig og effektiv forvaltning af patologiske tilstande, herunder fastlæggelse af følsomhed, diagnose og overvågning effekten af ​​forebyggende eller terapeutiske strategier . Aptamerer, der omfatter enkeltstrenget eller dobbeltstrenget DNA eller RNA, kan tjene som biomarkører for sygdom eller biologiske tilstande. Aptamerer kan binde til specifikke epitoper på makromolekyler på grund af deres tredimensionale strukturer og, meget gerne antistoffer, kan aptamerer anvendes til at målrette specifikke epitoper på basis af deres molekylære form. Systematic Evolution af ligander ved eksponentiel berigelse (SELEX) er den tilgang, der anvendes til at vælge høj affinitet aptamerer for specifikke makromolekylære mål fra blandt 10

13 oligomerer omfatter typiske tilfældig oligomerbiblioteker. I den foreliggende undersøgelse anvendte vi levende cellebaseret SELEX til at identificere DNA-aptamerer, som genkender celleoverflade forskelle mellem HPV-transformerede cervikal carcinom cancerceller og isogene, ikke-tumorigen, reverterende cellelinier.

Metode /vigtigste resultater

helcelle SELEX metode blev tilpasset til anvendelse med adhærente cellelinjer (som vi betegnet klæbende celle-SELEX (AC-SELEX)). Under anvendelse af denne fremgangsmåde identificerede vi høj affinitet aptamerer (nanomolære område K

d) til epitoper specifikke for celleoverfladen af ​​to ikke-tumorigene, ikke-tumorigene revertanter fra det menneskelige livmoderhalskræft HeLa-cellelinie, og demonstrerede tabet af disse epitoper i et andet humant papillomvirus transformeret livmoderhalskræft cellelinie (SiHa). Vi udførte også indledende undersøgelse af aptameren epitoper og deres bindende egenskaber.

Konklusioner /Betydning

Brug AC-SELEX vi har genereret flere aptamerer, der har høj affinitet og specificitet til ikke-tumorigen, revertant af HPV-transformerede cervicale cancerceller. Disse aptamerer kan bruges til at identificere nye biomarkører, der er relateret til carcinogenese. Paneler af aptamerer, som disse kan være nyttig til at forudsige den tumorigent potentiale og egenskaber kræft biopsier og støtte i en effektiv forvaltning af patologiske tilstande (diagnose, forventede resultat, og behandlingsmuligheder)

Henvisning:. Graham JC , Zarbl H (2012) Anvendelse af Cell-SELEX at generere DNA Aptamere som Molecular Probes af HPV-associeret Cervical Cancer Cells. PLoS ONE 7 (4): e36103. doi: 10,1371 /journal.pone.0036103

Redaktør: Eric Deutsch, Institut Gustave Roussy, Frankrig

Modtaget: Januar 26, 2012; Accepteret: 28 Marts 2012; Udgivet: 20. april, 2012