PLoS ONE: Den KRAS-variant og miRNA Expression i RTOG endometriecancer Clinical Trials 9708 og 9905

Abstrakt

Målsætning

At udforske foreningen af ​​en funktionel kimlinie variant i 3′-UTR af

KRAS

med risikoen for endometriecancer, samt foreningen af microRNA (miRNA) underskrifter og

KRAS

Variant med kliniske karakteristika og overlevelse udfald i to prospektive RTOG endometriecancer forsøg.

Metoder /Materialer

foreningen af

KRAS

Variant med risikoen for endometriecancer blev evalueret ved case-kontrol analyse af 467 kvinder med type 1 eller 2 endometriecancer og 582 aldersmatchede kontroller. miRNA og DNA blev isoleret til ekspression profilering og genotypning fra tumor prøver af 46 kvinder med type 1 endometriecancer indskrevet i RTOG forsøg 9708 og 9905. miRNA ekspressionsniveauerne og

KRAS-

variant genotype blev korreleret med patient- og tumor egenskaber blev og overlevelse resultater evalueret af variant allel type.

Resultater

KRAS

variant var ikke signifikant associeret med samlet endometriecancer risiko (14% kontrol og 17% type 1 cancere), selv om der blev beriget med type 2 livmoderkræft (24%, p = 0,2). I den kombinerede analyse af RTOG 9708/9905, miRNA udtryk afveg efter alder, tilstedeværelse af lymphovascular invasion og

KRAS

Variant status. Samlet overlevelsesrater på 3 år for patienter med variant og vildtype alleler var 100% og 77% (HR 0,3, p = 0,24), henholdsvis begunstige varianten.

Konklusioner

KRAS-

variant kan være en genetisk markør for risikoen for type 2 livmoderkræft. Desuden synes tumor miRNA udtryk at være forbundet med patientens alder, lymphovascular invasion og

KRAS-

variant, støtter hypotesen om, at ændrede tumor biologi kan måles ved miRNA udtryk, og at

KRAS- Salg variant sandsynlige virkninger endometrie tumor biologi

Henvisning:. Lee LJ, Ratner E, Uduman M, Winter K, Boeke M, Greven KM, et al. (2014)

KRAS-

Variant og miRNA Expression i RTOG endometriecancer Clinical Trials 9708 og 9905. PLoS ONE 9 (4): e94167. doi: 10,1371 /journal.pone.0094167

Redaktør: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, USA

Modtaget: December 2, 2013; Accepteret: 12 Marts 2014; Udgivet: 14 April, 2014

Copyright: © 2014 Lee et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af NCI-NIH tilskud 5R01CA098346. Denne forskning blev også støttet af strålebehandling Oncology Group /American College of Radiology (RTOG /ACR) Fellowship Program og RTOG giver U10 CA21661 og CCOP tilskud U10 CA37422 fra National Cancer Institute (NCI) og af NCI-NIH tilskud 5R01CA098346. JW blev støttet af R01 CA131301-04, CA-157749-01A15 og 5R01CA131301-05. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Dr. Weidhaas og Dr. Slack opdagede KRAS-varianten, som er patenteret af Yale University. Dette patent kaldes “genetisk læsion i forbindelse med cancer”, og antallet er 8.221.980. Det er blevet licenseret til et selskab, Mira Dx, at Dr. Slack og Dr. Weidhaas medstifter. Hverken Dr. Slack eller Dr. Weidhaas er ansat eller betalt af Mira Dx, men fungere som ubetalte videnskabelige konsulenter. Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE politikker på datadeling og materialer.

Introduktion

Den kliniske og biologiske heterogenitet for endometriecancer er blevet godt anerkendt siden beskrivelsen af ​​to store undertyper ved Bokhman i 1983 [1]. Type 1 endometriecancer, den endometrioide subtype, er forbundet med opponeret østrogen eksponering, kronisk anovulation, nulliparity og fedme. Type 2 endometriecancer omfatter mindre almindelige ikke-endometrioide undertyper af uterin papillære serøs og clear cell carcinoma. Type 2 cancere ofte ses hos ældre kvinder, opstår i atrofisk endometrium, og er ikke østrogen responsiv. De to-differentieret klassificering af endometriecancer baseret på kliniske og patologiske faktorer er også understøttet på molekylært niveau. Yderligere molekylær klassifikation er for nylig blevet lagt frem ved offentliggørelsen af ​​The Cancer Genome Atlas [2]. Tab af tumor suppressor

PTEN

er blevet rapporteret hos 30-50% af type 1 kræftformer [3] – [5], men er sjældent observeret i de serøse eller klare celle undertyper [6]. Proto-onkogen HER2 /neu, en trans-membran vækstfaktorreceptor, er almindeligt amplificeres eller overudtrykkes i type 2 cancere [7], [8]. Genekspression profilering af microarray analyse har også bekræftet tilstedeværelsen af ​​distinkte endometriecancer undertyper [9]. Andre karakteristiske molekylære ændringer omfatter mikrosatellit ustabilitet [10] og mutation af

beta

catenin [11] i endometrioide endometrie carcinomer, og tab af E-cadherinekspression og p53 mutationer i serøse kræftformer [5]. Tumor erhvervede mutationer i

KRAS

er blevet identificeret i 15-30% af type 1 livmoderkræft, men er sjældent observeret (0-5%) i type 2 kræftformer [12]. Forekomsten af ​​tumor-erhvervet

KRAS

mutationer er blevet trinløst forbundet med scenen, kvalitet og overlevelse i endometriecancer [13] – [16].

KRAS

mutationer er også blevet påvist i endometriehyperplasi, og kan repræsentere en tidlig begivenhed i tumorgenese for type 1 livmoderkræft.

Mens adjuverende behandling for type 2 livmoderkræft ofte indebærer kemoterapi, hvilken rolle af kombineret kemoterapi og strålebehandling (RT) for høj risiko og avancerede trin type 1 kræftformer er mere kontroversiel. Kvinder med type 1 livmoder kræft med patologiske risikofaktorer såsom dyb myometrisk invasion, høj tumor kvalitet, cervikal invasion og /eller bækken-indesluttede ekstrauterin spredning har en 15-30% risiko for tilbagefald på trods af adjuverende bækken strålebehandling (RT) [17]. Den strålebehandling Oncology Group (RTOG) gennemførte to prospektive, multi-institutionelle studier (9708 og 9905), der var designet til at vurdere mulighederne og effekten af ​​samtidig kemoterapi og postoperativ RT for kvinder med International Federation of Gynækologi og obstetrik (Figo) Stages IC-IIIC, høj risiko, type 1 endometriecancer. I betragtning af de rapporterede responsrater på 30-35% med kemoterapi alene, blev disse forsøg udført for at evaluere sikkerhed og overlevelse udfald for en kombineret modalitet tilgang til høj risiko og avancerede trin endometriecancer. RTOG 9905, den randomiserede sammenligning af adjuverende kemo- og stråleterapi versus RT alene, blev lukket tidligt på grund af dårlig periodisering og dermed overlevelse endepunkter blev ikke analyseret. Ikke desto mindre, væv blev indsamlet for udforskning af nye biomarkører og kliniske sammenhænge.

MikroRNA’er (miRNA) er en klasse af små ikke-kodende RNA, hæmmer genekspression af downstream mål ved at binde komplementære sites i 3 ‘utranslaterede områder (UTR) af messenger-RNA. Som globale gen regulatorer, miRNA funktion som en hidtil ukendt klasse af onkogener eller tumorsuppressorer afhængigt af cellulære kontekst. Ændringer i miRNA ekspressionsniveauer har været impliceret i onkogenese samt tumorbiologi i stort set alle cancere [18]. Tydelige miRNA udtryk signaturer er også blevet beskrevet for type 1 og type 2 livmoderkræft [19], at støtte deres evne til at reflektere iboende tumor biologi. Desuden arvede varianter i miRNA bindingssteder i onkogener har vist sig at forudsige kræftrisiko, tumor biologi og ændrede miRNA signaturer [20].

Det første eksempel på et funktionelt miRNA bindingssted mutation er en variant allel i 3′-UTR af

KRAS

(rs61764370), til en kimlinie mutation fundet forstyrre

lad-7

binding, øge

KRAS

udtryk [21] og forudsige risikoen for kræft [21] – [24]. Denne mutation er desuden blevet forbundet med ændrede gen og miRNA ekspression i tumorer [21] – [23], [25]. Interessant,

KRAS-

variant forudsiger æggestokkene kræftrisiko hos postmenopausale kvinder [22], triple negativ brystkræft hos præmenopausale kvinder [22], og aggressiv brystkræft tumor biologi hos postmenopausale kvinder med en historie hormonbehandling [26], hvilket tyder på, at der er en sandsynlig effekt af østrogen på tumor-associerede funktion af

KRAS-

variant. Desuden vises

KRAS-

variant til at forudsige kræft biologi på alle kræftformer hidtil studeret, herunder dem, for hvilke det ikke synes at forudsige øget risiko [27] – [28].

Formålet med denne undersøgelse var multifold: 1) at afgøre, om

KRAS-

variant er associeret med risikoen for endometriecancer; 2) at vurdere sammenslutning af miRNA udtryk signaturer med kliniske funktioner i tumor prøver fra RTOG 9708 og 9905; og 3) at afgøre, om

KRAS

Variant er forbundet med endometriecancer biologi ved at evaluere både kliniske og miRNA udtryk foreninger i disse samme forsøg.

Materialer og metoder

Case-kontrol data

emnerne for den case-kontrol undersøgelse blev Connecticut beboere diagnosticeret med primær endometriecancer mellem oktober 2004 og september 2008. undersøgelse personale af den hurtige Case Konstatering arm af Yale cancer center besøgte Connecticut generelle hospitaler til at bestemme tilfælde berettigelse og identificerbare oplysninger. Kontroller blev identificeret ved tilfældig cifret opkald. Blodprøver eller spyt prøver blev indsamlet fra disse forsøgspersoner. Fra indsamlede prøver blev DNA isoleret ved anvendelse Magna ren nukleinsyre kit (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) for buffy-coat blodlegemer, og Oragene kit (DNA Genotek Inc, Canada) for spytprøver. Tilstedeværelsen af ​​

KRAS

Variant blev detekteret under anvendelse af et TaqMan PCR assay til at identificere vild-type (T) eller variant (G) allel under anvendelse allelspecifikke prober, som beskrevet tidligere [21]. På grund af den mindre allel frekvens, blev den heterozygote (TG) og homozygote (GG) former kombineres til analyse for at sammenligne med vildtype-allel (TT).

etiske retningslinjer for Case-kontrol data

Denne protokol blev godkendt af Yale Menneskelige Undersøgelser Udvalg og staten Connecticut Institut for Folkesundhedsvidenskab Menneskelig Investigation udvalget. Visse data, der anvendes i denne undersøgelse blev opnået fra Connecticut Tumor Registry i Connecticut Institut for Folkesundhedsvidenskab.

RTOG 9708 og 9905

RTOG 9708 var en enkelt-arm fase II undersøgelse af adjuverende RT kombineret med cisplatin og paclitaxel kemoterapi, der indskrevet 45 patienter med type i FIGO 1988 Stage IC-IIIC endometrioide adenocarcinom af livmoderen. Efterfølgeren retssag, RTOG 9905, var et randomiseret to-arm fase III undersøgelse af adjuverende RT med eller uden samme kemoterapi, der indskrevet 42 patienter. Alle patienter indskrevet i de to undersøgelser i gang adjuverende strålebehandling inden for 8 uger kirurgi (total abdominal hysterektomi og bilateral salpingo-ooforektomi). Egnede patienter havde grad 2 eller 3 adenokarcinom med mere end 50% myometrisk invasion, cervikal stromale involvering eller bækken-indesluttede ekstrauterin sygdom og /eller positiv peritoneal cytologi. Patienter med ikke-endometriod histologi, såsom papillær serøs eller klar celle, blev ekskluderet fra disse studier.

Adjuverende behandling inkluderet bækken RT til en dosis på 45 til 50,4 Gy efterfulgt af vaginal brachyterapi. Cisplatin (50 mg /m2) blev leveret samtidig på dag 1 og 28. Efter afslutningen af ​​RT, fik patienterne 4 cyklusser af adjuverende cisplatin (50 mg /m

2) og paclitaxel (160-175 mg /m

2) givet hver 4. uge. Patienterne blev set i opfølgning hver 4. måned i 2 år, derefter hver 6. måned i 1 år og derefter årligt. En celleprøve og bryst X-ray blev udført hvert år.

etiske retningslinjer for RTOG 9708 og 9908

Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter før indskrivning. De kliniske outcome og toksicitetsdata for RTOG 9708 er tidligere blevet publiceret [17], [29]. RTOG 9905 blev afsluttet tidligt på grund af dårlig periodisering og opfølgning blev afbrudt efter mindst 12 måneders opfølgning for hver patient.

Isolering af DNA og RNA og Test af

KRAS

Variant og miRNA

tumor prøver fra paraffinindlejrede formalinfikserede blokke blev mikrodissekeres efter identifikation af områder med tilstrækkelig tumor cellularitet af en patolog. Tumor sektioner blev de-paraffinized hjælp Xylen og DNA blev isoleret til genotypning af

KRAS

Variant som beskrevet ovenfor. Totalt RNA blev isoleret fra paraffinindlejrede tumorprøver under anvendelse af Ambion Recover All kit (Life Technologies, Grand Island, NY) ifølge producentens anvisninger. miRNA blev kørt på ABI Taqman TLDA platform. Prøverne blev genotype for

KRAS-

variant. Dataene var i Hardy-Weinberg ligevægt.

Statistisk analyse

Statistisk analyse blev udført ved hjælp af den statistiske software JMP, v. 8.0.1 (SAS Institute, Cary, NC). For case-kontrol-analyse, blev forekomsten af ​​varianten allel (TG /GG) sammenlignet for sager med endometriecancer og befolkning kontrol ved hjælp af Fisher eksakt test. Kliniske, pathologiske og behandling karakteristika for patienter i de RTOG forsøg blev sammenlignet ved alleltype (vildtype vs. variant) under anvendelse af en t-test eller Fisher eksakt test. Aktuarmæssige estimater af sygdomsfri overlevelse (DFS) og samlet overlevelse (OS) blev beregnet under anvendelse af Kaplan-Meier-metoden. Den kumulative incidens metode blev anvendt til at estimere satserne for lokal-regional svigt (LRF) og fjern svigt (DF). OS blev beregnet fra datoen for randomisering indtil død uanset årsag. DFS blev defineret som intervallet fra datoen for randomisering indtil udviklingen af ​​fjernmetastaser, lokal-regional svigt eller død uanset årsag. LRF blev defineret som primær recidiv eller progression, vaginal tilbagefald og /eller nodal recidiv eller progression. DF blev defineret som fjernmetastaser og /eller para-aorta fiasko. Univariate analyse blev udført under anvendelse af Cox proportional hazard modeller. Anslået prævalens for variant allel blev brugt til el-beregninger. En type 1 fejl (α) på mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

For miRNA udtryk data, var alle forbehandling og statistisk analyse udført i den statistiske programmeringsmiljø R, ved hjælp af tilpassede funktioner og BioConductor limma pakke. Hver prøve blev normaliseret separat med de otte endogene kontrol RNA’er, og derefter intensiteterne blev skaleret tværs prøverne at have lignende fordelinger. Statistisk signifikante ændringer i miRNA udtryk mellem prøver grupperet efter alder, race, tilstedeværelse af lymphovascular plads invasion, DFS og

KRAS

Variant status blev bestemt ved hjælp limma med p 0,05 justeret med en Bonferroni korrektion, og en absolut fold Udskiftning ≥2. Hierarkisk klyngedannelse var baseret på euklidisk afstand metriske og Wards kobling.

Resultater

KRAS

Variant og endometriecancer Risk

I case-kontrol undersøgelse, at vurdere den rolle, som

KRAS-

variant forudsige livmoderkræft risiko, blev allel data opnået for 583 befolknings- kontrol, 430 patienter med type 1 endometriecancer og 37 patienter med type 2 kræft. Forekomsten af ​​varianten allel var 13,9% blandt kontroller og 16,5% for patienter med endometriecancer (p = 0,29). Som vist i tabel 1, forekomsten af ​​varianten optrådte højere hos patienter med type 2 livmoderkræft af ikke-endometrioide histologi (24,3%) sammenlignet med type 1 endometriecancer (16,7%) eller befolkningsgrupper kontroller (13,9%). Men ingen af ​​de forskelle, nåede statistisk signifikans sandsynligvis på grund af det lille antal type 2 kræftformer i denne undersøgelse.

miRNA Expression i RTOG 9708 og 9905

miRNA ekspressionsmønstre blev evalueret fra tumor prøver af patienter indskrevet i RTOG 9708 og 9905 og testet for association med kliniske og patologiske egenskaber. Vi fandt ingen signifikante forskelle i miRNA ekspression mellem prøver fra de to forsøg (data ikke vist), således at prøverne blev kombineret for den efterfølgende analyse. miRNA ekspressionsmønstre afveg mellem tumorer med lymphovascular invasion (LVI) versus dem uden. Differentielt udtrykte miRNA (p-værdi 0,05 og fold-change 2) inkluderet miR-194, miR-192, miR-203, miR-345, miR-30e-3p, miR-210 og miR-301 (tabel S1, figur 1), som alle er overudtrykt i tumorer med LVI stede. Ligeledes var der forskelle i miRNA udtryk baseret på patientens alder: tumorer i ældre kvinder (≥51 år) viste overekspression af miR-20b, miR-10a, og miR-187 og underekspression af miR-432 og lad-7d (tabel S2 , Figur 2) i forhold til tumorer af yngre kvinder ( . 51 år)

Gul repræsenterer patienter med LVI, og blå repræsenterer patienter uden LVI

Gul repræsenterer patienter yngre end. 51 års alderen, og blå repræsenterer patienter svarende til eller ældre end 51 år.

Kliniske Sammenslutninger af

KRAS

Variant i Trials RTOG 9708 og 9905

allel data var tilgængelige for 46 af 87 evaluerbare patienter (53%) indskrevet i RTOG 9708 og 9905. tilgængeligheden af ​​allel data var ens for de to forsøg, som omfattede 22 patienter (49%) fra 9708 og 24 patienter ( 57%) fra 9905. forekomsten af ​​

KRAS

Variant var samlet 22%, og 18% (n = 4) og 25% (n = 6) fra 9708 og 9905, hhv.

KRAS-

variant blev fundet i kun 1 ud af 11 (10%) kvinder yngre end 51 år på tidspunktet for livmoderkræft diagnose, og i 9 ud af 35 (28%) kvinder, der var ældre, selv om disse prævalens ikke var statistisk forskellige (p = 0,41), sandsynligvis på grund af lille prøvestørrelse.

den mediane follow-up tid for patienter med allel data i den kombinerede analyse var 29,3 måneder (min-max, 6.8-124.1 måneder). Patient karakteristika, herunder alder, ECOG performance status, og race, var ikke signifikant forskellig mellem kvinder med og uden

KRAS-

variant (tabel 2). 1988 FIGO stadie distribution, histologi, dybde myometrisk invasion større end 50% og tilstedeværelsen af ​​LVI var også ens mellem grupperne.

De 3-årige OS satser var 100% for

KRAS-

variant patienter og 77% (95% konfidensinterval [CI]: 58% -87%) for de ikke-variant patienter (hazard ratio [HR] = 0,3, 95% CI: 0,04-2,29, p = 0,24). En af 10 patienter (10%) med

KRAS-

variant havde LRF og 2 (20%) havde DF sammenlignet med 7 (19%) og 13 (36%), henholdsvis blandt patienter med non Variant allel. HRS for LRF og DF var 0,45 (95% CI: 0,05-3,65, p = 0,45) og 0,44 (95% CI: 0,10-1,97, p = 0,28) for variant luftfartsselskaber. Disse tendenser var ikke signifikant, måske fordi undersøgelsen magt var kun 14-41% at påvise en signifikant forskel i de kliniske endpoints på grund af lille prøvestørrelse og begrænset opfølgning.

mirna Expression og

KRAS

variant i RTOG 9708 og 9905

Fordi

KRAS-

variant har tidligere vist sig at være forbundet med ændrede gen samt miRNA udtryk i tumorer, vi vurderet miRNA underskrifter fra tumorer med og uden den

KRAS-

variant. I betragtning, at miRNA underskrifter afveg mellem tumorer baseret på patientens alder (beskæringspunkts 51 år), og at de fleste patienter med

KRAS-

variant var postmenopausale, vi evalueret disse forskelle kun i tumorer fra patienter over 51 år. Vi fandt signifikante forskelle i miRNA signaturer mellem tumorer fra patienter med

KRAS-

variant og dem uden

KRAS-

variant. Disse omfattede lavere ekspression af miR-181b, miR-324-3p og miR-518b i

KRAS-

variant patienternes tumorer (tabel 3, figur 3).

Gul repræsenterer patienter uden

KRAS-

variant og blå patienter med

KRAS-

variant.

diskussion

Denne undersøgelse er den første analyse af foreningen af ​​

KRAS-

variant med endometriecancer. Selv om

KRAS

Variant ikke var en prædiktor for den samlede risikoen for endometriecancer, blev det beriget hos patienter med type 2 kræftformer, med en prævalens på 24,3%. Hertil kommer, at to prospektive RTOG endometriecancer forsøg miRNA underskrifter samt

KRAS-

variant var forbundet med forskellige kliniske funktioner. miRNA underskrifter var forskellige mellem tumorer med eller uden LVI, mellem tumorer i præ- versus postmenopausale patienter, og mellem

KRAS-

variant patienter og ikke-variant patienter. Selvom RTOG 9708 og 9905 ikke blev drevet til at detektere statistisk signifikante associationer mellem

KRAS

Variant og resultatet, var tendensen, at

KRAS-

variant var forbundet med bedre resultat, selv om bekræftelse af denne hypotese kræver test i en større undersøgelse med mere statistisk styrke.

Selv om sammenslutningen af ​​miRNA udtryk og ændrede kliniske funktioner i en tumor er veldokumenteret, kan det virke overraskende, at

KRAS

Variant, en kim-linje, ikke-proteinkodende sekvens mutation, der forstyrrer miRNA binding, forudser ændret miRNA signaturer i en tumor og også ændrer prognose. Men foreningen af ​​

KRAS-

variant med ændrede miRNA underskrifter er blevet fundet i hver tumor, hvor det er blevet analyseret, herunder lungekræft [21], melanom [10], hoved- og halscancer [30 ] og tredobbelt negativ brystkræft [23].

foreningen af ​​

KRAS-

variant med prognose tværs tumortyper har også været meget omtalt. I en kohorte af 344 patienter med hoved- og halscancer, selv om en forening med kræftrisiko ikke blev observeret, variant luftfartsselskaber havde en dårligere klinisk resultat, når der korrigeres for alder og stadie (HR 1,6, 95% CI 1,0-2,5) [30], med lavere overlevelsesrater mest udtalt blandt patienter med mundhulen kræft i forhold til svælg og larynx sites. Flere undersøgelser har vist, at den

KRAS

Variant forudsiger ændret respons på cetuximab hos patienter med metastatisk kolorektal cancer [28], [31]. I kræft i æggestokkene,

KRAS-

variant forudsiger dårligt resultat på grund af platin modstand [23]. Platin modstand blev også fundet hos patienter i kemoterapi alene for metastatisk hoved- og halscancer (Chung, indsendt). Platinmodstandstermometer er særlig interessant i forbindelse med de RTOG forsøg undersøges i denne undersøgelse, hvor en andel af patienter fik cisplatin leveret samtidigt med stråling og sammen med paclitaxel. Man kunne hypotesen, at tilsætning af stråling til platin agenter kunne overvinde den tilhørende modstand, en hypotese, der i øjeblikket evalueret i yderligere RTOG forsøg.

Blandt

KRAS

Variant positive og negative tumorer i denne undersøgelse blev 3 miRNA differentielt udtrykt, herunder mIR-181b, mIR-324 og mIR-518b. I prækliniske studier har miR-181b vist sig at fremme celleproliferation og reducere apoptose i livmoderhalskræft celler [32], mægle tumorigenese gennem STAT3 [33], og fremkalde gemcitabin resistens i bugspytkirtelkræftceller [34]. I humane kimcelletumorer, opregulering af MIR-518b var forbundet med en cisplatin-resistente fænotype [35]. Disse undersøgelser kan forklare de forbedrede resultater set i vores arbejde, der begunstigede de

KRAS

Variant patienter, som

KRAS-

variant tumorer havde lavere ekspressionsniveauer af miR-518b. I en undersøgelse af nasopharyngeal carcinom, blev nedregulering af MIR-324 forbundet med radioresistance [36]. I vores undersøgelse,

KRAS-

variant tumorer havde lavere niveauer af miR-324, selv om der var nogen klar radioresistance da disse patienter havde forbedret satser for lokal-regional kontrol.

For et samlet overblik af, hvad differentierede miRNA udtryk findes i vores tumorer kan repræsentere, vi brugte miR System, der kombinerer 7 algoritmer og 2 validerede databaser for at identificere potentielle gen mål for miRNA og deres funktion, samt sti analyse ved hjælp Kegg (Kyoto Encyclopedia of Gener og genomer) [37]. De målgener af miR-181b omfatter

MAP3K3

(mitogenaktiveret proteinkinase 3, top hit),

ESR1

(østrogen receptor 1, en valideret target), og

KRAS

, mens dem for mIR-518b indbefatter

CTNNBIP1

(β-catenin interagerende protein) og

MAP3K7IP3

(mitogenaktiveret proteinkinase 7 interagerende protein 3). For pathway analyse af de berigede målgener, differential ekspression af miRNA anført ovenfor var forbundet med langsigtet potensering, veje i cancer, og endometrisk cancer, såvel som følgende signalveje: TGF-β, ErbB, MAPK, og Wnt . Wnt /β-catenin-signalvejen er blevet vist at blive dysreguleret i 10-45% af livmoderkræft og intimt reguleret af østrogen og progesteron [38]. Desuden KRAS er en vigtig opstrøms mediator af MAPK-vejen, og overekspression kan føre til øget aktivering af RAF /MEK /MAPK-vejen og således fremme tumorigenese. Tidligere arbejde har vist, at MAPK pathway aktiveres i triple negativ brystkræft med

KRAS

Variant, og er forbundet med lavere østrogen signalering [24]. Disse resultater og andre viser, at den rolle, som

KRAS

Variant i kræftrisiko og biologi kan være afhængig af hormonelle miljø som menopausal status, en igangværende emne for undersøgelse.

Vi har også udført pathway analyse for de 10 differentielt udtrykte miRNA for tumorer med og uden lymphovascular invasion. Af interesse, forudsagde involverede veje i fokal vedhæftning, regulering af actincytoskelettet, gap junction og adherens krydset var top hits fra Kegg, samt Wnt, MAPK, TGF-β, og ErbB signalveje.

Mens vores undersøgelse var begrænset af den lille stikprøve af RTOG prøvelser vi udnyttet, som gav tilstrækkelig statistisk styrke for os at udvikle solide konklusioner om den potentielle rolle for den

KRAS-

variant forudsige endometriecancer risiko eller resultatet , kunne vi se en potentiel forening gennem ændret miRNA udtryk i tumorer. Desuden kunne vi fremadrettet indsamle vævsprøver i et kooperativ gruppe indstilling og udføre en translationel forskning undersøgelse, som har produceret foreløbige data værd validering i større kohorter. Disse resultater understøtter endvidere den hypotese, at der er målbare måder at vurdere heterogenitet for endometriecancer, som kunne give vigtige prognostisk information i fremtiden at gøre det muligt for praktiserende læger til mere passende og individuelt direkte patient terapi.

Støtte oplysninger

tabel S1.

associering mellem miRNA udtryk og lymphovascular invasion

doi:. 10,1371 /journal.pone.0094167.s001

(DOCX)

tabel S2.

associering mellem miRNA udtryk og alder

doi:. 10,1371 /journal.pone.0094167.s002

(DOCX)

Tak

Samarbejdet på 28 Connecticut hospitaler, herunder Charlotte Hungerford Hospital, Bridgeport Hospital, Danbury Hospital, Hartford Hospital, Middlesex Hospital, New Britain General Hospital, Bradley Memorial Hospital, Yale /New Haven Hospital, St. Francis Hospital og Medical center, St. Marys Hospital, Hospital St. Raphael St. Vincent Medical center, Stamford Hospital, William W. Backus Hospital, Windham Hospital, Eastern Connecticut Health Network, Griffin Hospital, Bristol Hospital, Johnson Memorial Hospital, Day Kimball Hospital, Greenwich Hospital, Lawrence og Memorial Hospital, Milford Hospital, New Milford Hospital, Norwalk Hospital, MidState Medical center, John Dempsey Hospital og Waterbury Hospital, i at tillade patienten adgang, er taknemmeligt anerkendt. Vi vil gerne takke Barbara Sølv og Corinne Doll for kritisk læsning af dette manuskript.