PLoS ONE: Novel Epigenetisk CREB-miR-630 Signaling Axis Regulerer radiosensitivitet i kolorektal cancer

abstrakt

Baggrund

MIR-630 er blevet rapporteret at være en modulator af flere kræftformer, men den mekanisme, hvormed det påvirker radioresistance fortsat ukendt. Vi havde til formål at identificere den molekylære funktion miR-630 og dens reguleringsmekanisme i kolorektal cancer (CRC) cellelinier.

Metode

Overekspression og tab af funktion analyser af miR-630 var udført i CRC-cellelinjer ved at måle deres niveau af vækst og apoptose efter ionisk stråling (IR). Målgener blev påvist via en dual-luciferase assay og Western blot. Chromatin immunoprecipitation assay blev udført for at identificere transkriptionsfaktoren regulerer MIR-630, og en demethylering eksperiment blev også udført.

Resultater

MIR-630-ekspression viste sig at være positivt korreleret med radiosensitivitet i CRC cellelinier (

s

0,05). Efter IR behandling, MIR-630 inducerede apoptose i celler; blev imidlertid det modsatte observeret, når miR-630 blev nedreguleret (

s

0,05). BCL2L2 og TP53RK blev identificeret som målgener af MIR-630, og funktionen af ​​MIR-630 viste sig at afhænge af disse to gener (

s Restaurant 0,05). Desuden viste tegn på, at CREB regulerer niveauet af miR-630, og demethylering kan ophøje miR-630 niveauer (

s

0,05).

Konklusion

CREB -miR-630-BCL2L2 og TP53RK omfatter en roman signaleringskaskade regulerer radiosensitivitet i CRC-cellelinjer ved at inducere celle apoptose og død

Henvisning:. Zhang Y, Yu J, Liu H, Ma W, Yan L, Wang J et al. (2015) Novel Epigenetisk CREB-miR-630 Signaling Axis Regulerer radiosensitivitet i kolorektal cancer. PLoS ONE 10 (8): e0133870. doi: 10,1371 /journal.pone.0133870

Redaktør: Klaus Roemer, University of Saarland Medical School, TYSKLAND

Modtaget: 25. maj 2015; Accepteret: 3 juli 2015; Udgivet: 11 August, 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af major Program for Videnskab og Teknologi Program for Guangzhou (nr 201.300.000.087), Research Fund of Public velfærd i Health Industry of National Health og Family Planning Kommissionen Kina (No.201402015 og nr 201.502.039), National Key Technology R D Program (nr 2013BAI05B05) og Key Clinical specielle Disciplin Construction Program

Konkurrerende interesser: forfatterne har erklæret, at der ikke. eksisterer konkurrerende interesser.

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er en forholdsvis almindelig form for kræft med høj verdensomspændende dødelighed [1, 2]. Selvom præoperativ behandling med strålebehandling (CRT) i kombination med konventionel kirurgi forbedrer lokal styring af CRC og overlevelse, kun omkring 70% af patienterne reagerer på CRT [3, 4]. Således at forstå de mekanismer, der er involveret i ionisk stråling (IR) modstand CRC er et vigtigt skridt i at generere yderligere effektive behandlingsformer.

MikroRNA’er er små (18-25 nukleotider) kodende RNA, der kan undertrykke mRNA-ekspression ved at binde til deres komplementære sekvenser i 3′-utranslaterede regioner (UTR’er) [5, 6]. Mange undersøgelser har vist, at miRNA spiller vigtige roller i forskellige biologiske processer [7]. Nogle miRNA såsom MIR-135 og MIR-200c har vist sig at spille en væsentlig rolle i radioresistance [8, 9]. En tidligere undersøgelse rapporterede MIR-630 som en ny modulator af cisplatin-induceret ikke-småcellet lungecancer celledød [10]. Microarray analyse i et klinisk forskning udvalgt et sæt af 13 miRNA, herunder miR- 630, som kan være specifikke prædiktorer af CRT udfald i rektal kræftpatienter [11]. Men den mekanisme, hvormed MIR-630 påvirkninger radioresistance er ikke blevet belyst til dato. I den aktuelle undersøgelse, vi søgte at identificere funktionen af ​​miR-630 i CRC radiosensitivitet og dens potentielle regulator.

Materialer og metoder

Cell kultur

Menneskelig kolorektal cancer celle linjer LS174T, SW480, HCT116, SW837, HR8348, og HT29 blev købt fra Cell Bank of Type Culture Collection (Shanghai City, Kina). Alle disse cellelinier blev opretholdt i RPMI 1640 medium indeholdende 10% føtalt bovint serum (HyClone, Logan, Utah, USA) i en CO2 37 ° C befugtet inkubator under 5%.

miRNA ekstraktion og kvantitativ real time PCR (QRT-PCR)

TRIzol reagent (Invitrogen, Foster City, USA) blev anvendt til at isolere total RNA fra dyrkede celler. QRT-PCR blev udført på en 7500 System (Applied Biosystems, Foster City, USA) ved hjælp af en all-in-One miRNA Reverse Transcription Kit (GeneCopoeia, Inc.) og SYBR Green Menneskelig miRNA Assay Kit (GeneCopoeia, Inc.).

Cell bestråling

bestråling blev udført i en Siemens Meratron M2 medicinsk strålerøret i en dosis på 3 Gy ved stuetemperatur.

Celleproliferationsassay

96 Tja plader, 1 x 10

3-celler blev podet og derefter inkuberet i 4 dage. Celletælling kit-8 (CCK-8) (KeyGene Biotech) assay blev udført for at måle celleproliferation. Briefly10 pi CCK-8 opløsning blev tilsat til hver brønd i 2 timer. Absorbansen af ​​hver brønd blev aflæst ved anvendelse af en mikropladelæser indstillet ved 450 nm.

Caspase 3/6 aktivitetsassay

Caspase 3/6 aktivitet blev målt ved anvendelse Caspase 3 og caspase 6 assaykit ( Abcam, USA). Cellelyse puffer blev tilsat ved et volumen på 50 pi at resuspendere 1 x 10

6 celler og inkuber cellerne på is i 10 min. Derefter DEVD-p-NA-substrat (eller VEID-p-NA) og reaktionspuffer indeholdende DTT blev tilsat, og blandingen blev inkuberet i 2 timer ved 37 ° C. Efterfølgende blev prøverne aflæst ved 450 nm ved anvendelse af en mikrotiterpladelæser.

Apoptose assay

Celler blev opsamlet 24 timer efter stråling med eller uden 3 Gy IR. Celler blev farvet med Annexin V-FITC (KeyGene Biotech) og PI (KeyGene Biotech). Apoptose blev udført ved anvendelse af flowcytometri (BD LSRFortessa)

Dual-luciferaseanalyse og vektorkonstruktion

Targetscan (https://www.targetscan.org) og Miranda (http:. //Www .microRNA.org) blev anvendt til at forudsige potentielle mIR-630 mål. Den BCL2L2 (NM_001199839) bindingssted blev forudsagt at være placeret i position 995-1002 mens TP53RK (NM_033550.3) blev forudsagt at være placeret ved position 455-462 fra det transkriptionelle startsted. En 200 bp langt BCL2L2 og TP53RK segment blev syntetiseret med enten mutant eller vildtype-frø region og klonet ind i psiCHECK-2-vektoren (Applied Biosystems, USA). Fem nucleotider i frøet regionen var muteret til opnåelse mutant BCL2L2 og TP53RK 3′-UTR-sekvenser. Alle cellelinjer blev transficeret under anvendelse af Lipofectamine 2000 (Invitrogen, USA). Celler (1 x 10

5 celler /brønd) blev transient transficeret med 20 nmol /l MIR-630 efterligner eller kontrol. Derefter blev co-transfektion med BCL2L2 og TP53RK-udtrykkende vektor udført. Celler blev høstet 48 timer efter transfektion. Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, USA) blev anvendt til at detektere luciferaseaktiviteter

Transkriptionsfaktorer (TFS), der regulerer MIR-630 blev forudsagt under anvendelse Consite (http:. //asp.ii.uib .no: 8090 /cgi-bin /Consite /Consite), Transfac (https://www.gene-regulation.com/pub/databases.html), og DIANA (http: //diana.imis.athena-innovation. gr /DianaTools /index.php). Sekvenser af 1000-bp segment af 5′-UTR af MIR-630 med mutanten eller vildtypen frø region blev syntetiseret og klonet ind i pGL3-Basic Vector (Applied Biosystems, USA). Fem nucleotider i frøet regionen var muteret til opnåelse mutantsekvensen. cAMP respons element-binding (CREB) proteinkodende sekvens blev klonet i pcDNA3.1-vektoren (Applied Biosystems, USA). Celler (1 x 10

5 celler /brønd) transient transficeret med mutant eller vildtype 5′-UTR af MIR-630 blev podet. Derefter blev co-transfektion med CREB-udtrykkende vektor udføres. Efter 48 timer blev cellerne høstet og luciferaseaktivitet blev udført.

Western blot-

Bradford DC-proteinassay (Bio-Rad, USA) blev anvendt til at måle koncentrationen af ​​proteinlysater. Efterfølgende blev 20-40 ug protein opløst på en 12% Bis-Tris polyacrylamidgel, elektrooverført på nitrocellulosemembraner (GE Healthcare, Piscataway, USA) og blokeret med 5% fedtfri mælk. Protein-blots blev immunfarvet natten over med primære antistoffer ved 4 ° C og i 1 time med sekundære antistoffer ved stuetemperatur. Amersham ECL Western blotting-påvisningsreagenser (GE Healthcare) blev anvendt til at visualisere protein signal.

Behandling af celler med 5-aza-2′-deoxycytidin

HCT116-celler blev podet på 6 brønde plader på dag 0, derefter 5-aza-CdR (5-aza- deoxycytidin, Sigma-Aldrich), som kan inhibere DNA methyltransferase, sattes til cellerne fra dag 1 til dag 3. celler blev derefter høstet og ethanol blev tilsat til fix celler. Ekspression af MIR-630 blev analyseret ved QRT-PCR.

chromatin immunoprecipitation (chip) assay

chip assay blev udført i CRC-cellelinien SW480. Anti-CREB antistof (Abcam, USA) med EpiSeeker chip Kit (Abcam, USA) blev anvendt som anbefalet af producenten.

Statistisk analyse

Alle data er udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse (SD), med hvert eksperiment gentages mindst tre gange. Inhiberingshastigheden blev opnået ved at følge den beregning: (absorbansværdi ingen IR-celler-absorbansværdi IR-celler) /absorbansværdi ingen IR-celler. Forskelle mellem de to grupper blev vurderet via 2-halet, parret t-test. SPSS til Windows 20,0 software blev anvendt til at udføre alle statistiske analyser. Statistisk signifikans blev udledt hvis

s

. 0,05

Resultater

Expression niveauer af miR-630 blev reduceret i CRC celler efter bestråling

Den oprindelige niveauer af miR- 630 og proliferative kapacitet serielle CRC cellelinjer var besluttede på at fastslå, om miR-630 funktionelt kan påvirke ioniske radiosensitivitet. iagttoges en tilsyneladende inhiberende virkning på celleproliferation efter ionisk stråling i SW837, LS174T, og HR8348 celler, som udviste meget høj endogen MIR-630-ekspression; Derimod var svage hæmning satser observeret i HT29, SW480, og HCT116-celler, som udviste lav MIR-630-ekspression (Fig 1A og 1B). Signifikant positiv korrelation mellem miR-630 og radiosensitivitet blev påvist i alle seks testede cellelinjer.

(A og B) Endogen miR-630 udtryk og IR-induceret hæmning på serielle CRC cellelinjer (C) miR- 630-niveau fald efter stråling i forhold til deres oprindelige niveau. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer: * (P 0,05), ** (P 0,01)

Cellelinjer SW837 og LS174T, som viste de højeste ekspressionsniveauer, blev derefter udvalgt til bestråling. . Strålingen behandling blev gentaget tre gange, med hver behandling, der består af tre Gy IR. Levedygtige celler blev videredyrket i 5 d efter bestråling, hvorefter MIR-630 ekspressionsniveauet blev undersøgt (Fig 1C). Et signifikant fald i miR-630 niveauer blev fundet efter bestråling i begge cellelinier sammenlignet med deres oprindelige niveau.

Ektopisk udtryk for miR-630 forbedret ionisk stråling-induceret cytotoksicitet i CRC-cellelinjer

for at undersøge rollen af ​​mIR-630 modulering CRC radiosensitivitet blev mIR-630 overudtrykkes i HT29 og SW480-celler ved hjælp af mIR-630 efterligner. Efterfølgende blev miR-630-transfekterede celler bestrålet med 3 Gy IR og udsat for CCK-8 assay sammen med deres kontrol modstykker. Transfektion af MIR-630 førte til betydelig stigning i inhibering af celleproliferation efter IR-eksponering sammenlignet med kontrolgrupperne (fig 2A) i SW480 og HT29-celler. Caspase 3/6 aktiviteter af MIR-630-transficerede celler og kontrolceller efter 24 timer med eller uden 3 Gy IR blev også målt.

(A) MIR-630 signifikant forøget IR-induceret hæmning sats (B og C) miR-630 stærkt forøget caspase 3 og caspase 6 aktiviteter efter IR eksponering (D og E) miR-630 signifikant forøget apoptose sats efter IR eksponering. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer:. * (P 0,05), ** (P 0,01)

caspase 3/6 aktiviteter blev kraftigt forøget med miR-630 efter IR eksponering i HT29 og SW480 celler sammenlignet med NC-celler (fig 2B og 2C), hvilket indebærer en væsentlig rolle for miR-630 IR-medieret apoptose aktivering. Derudover apoptose assay illustreret, at MIR-630 kan føre til signifikant forøget apoptose sats i de to celler efter bestråling (fig 2D og 2E). Samlet set har disse resultater antydede, at miR-630 sensibiliserer CRC celler til IR ved at øge IR-induceret apoptose og hæmning af celle overlevelse efter IR.

Hæmning af miR-630 medførte nedsat IR følsomhed i CRC cellelinjer

Et tab af funktion assay blev udført i SW837-celler ved hjælp af mIR-630 inhibitorer. Proliferation blev forøget betydeligt i SW837 celler transficeret med miR-630 inhibitor sammenlignet med kontrol SW837 celler behandlet med IR (Fig 3A). Inhibering af MIR-630 også signifikant nedsat caspase 3/6 aktiviteter i SW837 cellelinier efter IR eksponering (figur 3B og 3C). Disse resultater viste, at tab af MIR-630 funktion reducerer radiosensitivitet af CRC cellelinier.

(A) Inhibering af MIR-630 faldt betydeligt IR-induceret hæmning sats (B og C) Inhibering af MIR-630 faldt kraftigt caspase 3 og caspase 6 aktiviteter efter IR eksponering. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer:. * (P 0,05), ** (P 0,01)

TP53RK og BCL2L2 er direkte mål for miR-630

At udforske de molekylære mekanismer, som miR-630 stiger cellulære følsomhed over for IR, blev potentielle mål for miR-630 søgte i bioinformatik databaser via Target-Scan og MIRANDA. I 3′-UTR af TP53RK og BCL2L2 blev potentielle bindingssteder af MIR-630 forudsagt (Fig 4A). At bekræfte, om MIR-630 direkte målrettet mod 3′-UTR af disse gener, konstruerede vi dual-luciferase reporter plasmider, der bærer et 200-bp fragment af den mutante eller vildtype 3′-UTR-sekvens, som indeholdt den forudsagte MIR-630 genkendelsessted. En Dual-Luciferase Reporter Assay System blev derefter vedtaget for at afgøre, om miR-630 regulerer ekspressionen af ​​de forudsagte kandidater i SW480 og SW837 celler. Normaliseret fluorescensintensitet af reporteren var signifikant lavere i cancerceller cotransficeret med MIR-630 efterligner og vildtype 3′-UTR sammenlignet med kontrolgruppen. I modsætning hertil blev der ingen signifikant forskel detekteret mellem kontrolgruppen og cellerne co-transficeret med MIR-630 efterligner og mutant 3′-UTR (figur 4B og 4C).

(A) Predicted bindingssteder af MFI -630 i 3′-UTR’er af TP53RK og BCL2L2 (B og C) Fluorescens blev signifikant reduceret i MIR-630 efterligner og vildtype dual-luciferasereporterplasmid-transficerede gruppe, mens det viste ingen signifikant ændring i miR- 630 efterligner og mutante dobbelt luciferasereporterplasmid-transficerede gruppe (D) TP53RK og BCL2L2 protein ekspressionsniveauer faldt i mIR-630-transficerede celler. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer: * (P 0,05), ** (P 0,01)

Ovenstående resultater blev også understøttet af Western blot-analyser.. Proteinekspression analyse viste et kraftigt fald i TP53RK og BCL2L2 af miR-630-transficeret HT29 og SW480 celler sammenlignet med de negative kontrol celler (Fig 4D). Samlet demonstrerede disse data, at MIR-630 direkte kan binde til 3′-UTR af TP53RK og BCL2L2 at undertrykke genekspression.

Hvis virkningen af ​​MIR-630 er specifikt, effekten af ​​MIR-630 overekspression bør undertrykkes ved co-ekspression af TP53RK og BCL2L2 proteiner. De plasmider pcDNA3.1 /TP53RK og pcDNA3.1 /BCL2L2, der kortvarigt kan løfte niveauet af TP53RK og BCL2L2 fik henholdsvis cotransficeret med miR-630 efterligner i HT29 og SW480 celler. Derefter caspase3 /6 aktivitetsassays blev udført. CCK-8 assay viste, at co-ekspression af TP53RK eller BCL2L2 protein med MIR-630 efterligner formindskede signifikant inhibering sats efter IR i begge cellelinier (figur 5A). Den caspase3 /6 gange skift post-bestråling i miR-630-transficeret SW480 og LS174T-celler faldt betydeligt efter transfektion af pcDNA3.1 /TP53RK og pcDNA3.1 /BCL2L2 (Fig 5B og 5C).

(A ) TP53RK eller BCL2L2 protein forårsagede en signifikant reduceret IR-induceret hæmning sats i miR-630 transfekterede cellelinjer. (B og C) TP53RK eller BCL2L2 protein faldt folden af ​​caspase 3 og caspase 6-aktiviteter efter IR eksponering i MIR-630 transficerede cellelinjer. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer: * (P 0,05), ** (P 0,01)

Cell methylering status og transkriptionsfaktoren CREB regulere miR-630 udtryk

DNA-methylering kan regulere ekspressionen af ​​miRNA [11, 12]. I denne undersøgelse blev MIR-630-ekspression signifikant opreguleret ved behandling med 5-aza-CdR i HT29 og SW480-celler (Fig 6A). Dette resultat indikerer, at DNA-methylering er tæt korreleret med ændringer i MIR-630 ekspression under CRC progression.

(A) 5-aza-CdR signifikant opreguleret MIR-630-ekspression (B) CREB blev forudsagt at binde til 5′-UTR af mIR-630 værtsgen ARIH1 (C) CREB i ARIH1 promotorregionen induceret luciferaseaktivitet og mutation af forudsagte CREB bindingssteder ændrede sin virkning (D) chips bekræftede bindingen af ​​CREB til ARIH1 promotoren. Fejlsøjler repræsenterer middelværdien af ​​tre separate bestemmelser ± standardafvigelse (SD). Asterisk angiver statistisk signifikante ændringer:. * (P 0,05), ** (P 0,01)

ARIH1, et protein-kodende gen, der indeholder den miR-630-genet i sin exon, har en stor CpG ø. Dette antyder, at miR-630 udtryk afhænger regulering af ARIH1 genet. Tre forskellige softwareprogrammer blev anvendt til at forudsige TFS regulerer MIR-630. Vore data antydede, at CREB kan binde til 5′-UTR af ARIH1 (Fig 6B). For at bestemme om CREB kan modulere niveauet af MIR-630, undersøgte vi virkningen af ​​CREB på mutant og vildtype ARIH1 promotorsekvens indeholdende forudsagte CREB-bindingssteder. I SW480 celler, fandt vi, at CREB-induceret luciferaseaktivitet blev reduceret i den gruppe, hvor ARIH1 promotorregionen var muteret (Fig 6C). Desuden chip assays bekræftede, at CREB direkte kunne binde til ARIH1 promotor (Fig 6D).

Diskussion

På trods af beviser implicerer miR-630 i kræft, har kun få studier udforsket sin funktion i detalje. miR-630 er blevet identificeret til at inducere celledød i bugspytkirtelkræft og regulere HER-targeting narkotika følsomhed i HER2-overekspression brystkræftceller selvom IGF 1R [12, 13]. MIR-630 inhiberer cellevækst selvom CDC7 kinase i humane lungecancer-celler [14]. Desuden er væksten anholdelse af prostatakræft ved gefitinib og luteolin delvis fremkaldt af miR-630 [15]. Imidlertid har den rolle og ekspressionsmønsteret for MIR-630 i radiosensitivitet af CRC ikke blevet illustreret til dato.

I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi den mekanisme, hvormed MIR-630 regulerer radiosensitivitet af CRC cellelinier. Først blev detekteret ekspression af MIR-630 og radiosensitivitet af seks CRC cellelinier. Resultaterne viste en positiv sammenhæng mellem miR-630 udtryk og radiosensitivitet. Desuden blev miR-630 niveau viser sig at være faldet betydeligt efter gentagen IR, afslører, at miR-630 kan spille en vigtig rolle i reguleringen radiosensitivitet.

Dernæst den mulige funktion af miR-630 IR-reaktion af CRC-cellelinier blev undersøgt. Resultaterne viste, at overekspression af MIR-630 i HT29 og SW480-celler forøget cancercelle apoptose og død

in vitro

. Udtømning af miR-630 i SW837 celler havde den modsatte effekt. Således er disse resultater dokumenterer, at miR-630 fremmer radiosensitivitet af CRC.

Den molekylære mekanisme, hvormed miR-630 modulerer CRC radiosensitivitet blev yderligere undersøgt. miR-630 viste sig at negativt regulere ekspressionen af ​​BCL2L2 og TP53RK ved direkte at målrette deres 3′-UTR’er. BCL2L2, også kaldet BCL-w, hører til familien af ​​BCL-2-proteiner. Overekspression af dette protein er blevet observeret i flere cancerformer, såsom CRC [16, 17]. BCL2L2 fremmer også celleoverlevelse og reducerer apoptose under apoptotisk stress [18, 19]. TP53RK er en kinase, der fastholder apoptose efter mitotisk stress [20]. Disse resultater viser, at MIR-630 modulerer radiosensitivitet via en signaleringskaskade involverer BCL2L2 og TP53RK.

For nylig har E2F1-regulerede ribonuclease drosha vist sig at fremme MIR-630 biosyntese i cisplatin-eksponerede cancerceller [21] . I den aktuelle undersøgelse, luciferaseanalyse resultater indikerede, at CREB kan binde til 5′-UTR af ARIH1, der er vært genet af MIR-630, og sletning af CREB-bindingssteder kan ophæve denne funktion. Endvidere chip assay viste, at CREB specifikt kan binde til promotorregionen af ​​MIR-630, hvilket antyder, at CREB kan være TF ansvarlig for at iværksætte MIR-630-ekspression. CREB er et protein, der binder til DNA-sekvensen cAMP responselementet. CREB medierer målgen transkription via cAMP signal aktivering [22]. Endvidere CREB er nødvendigt for proliferation, vækst, overlevelse og differentiering af mange celletyper [23]. Nyere forskning har vist, at CREB-Ser133 phosphorylering resulterer i suppression af anti-apoptotiske gener, hvorved der induceres celledød [24, 25]. I denne undersøgelse lave DNA-methylering også øger MIR-630 ekspression i CRC cellelinier.

Sammenfattende vores undersøgelse viser en hidtil ukendt signalvej fra CREB til BCL2L2 og TP53RK. De foreliggende resultater giver vigtige indsigt i de mekanismer, som TF’er og miRNA modulerer kræftcelle radioresistance. Vores resultater fremhæver også det terapeutiske potentiale af disse molekyler i CRC behandling.

Støtte Information

S1 data. Rå datasæt er i “Data.zip”, kan der opnås de oprindelige data fra dette forsøg fra det

doi:. 10,1371 /journal.pone.0133870.s001

(ZIP)

tak

Vi takker Dr. Li Liang for manuskriptet revision.