PLoS ONE: dendritiske celler Lastet med bugspytkirtelkræft Stamceller (CSCS) Lysater Fremkald Antitumor Immune Killing Effekt I Vitro

Abstrakt

Ifølge cancer stamceller (CSCS) teori, maligne tumorer kan være heterogen, hvor en lille population af CSCS drive progression af cancer. På grund af deres iboende egenskaber, kan CSCS overleve en række behandlinger og så føre til terapeutisk modstand og kræft gentagelse. Pancreas CSCS er blevet rapporteret til at være ansvarlig for de maligne adfærd af kræft i bugspytkirtlen, herunder undertrykkelse af immun beskyttelse. Således kan udvikle immune strategier til udryddelse pancreas CSCS være af stor værdi til behandling af pancreascancer. I denne undersøgelse har vi beriget pancreas CSCS ved dyrkning Panc-1-celler under sfære-dannende betingelser. Panc-1 CSCS udtrykte lave niveauer af HLA-ABC og CD86, som målt ved flowcytometri analyse. Vi fandt endvidere, at de Panc-1 CSCS modulere immunitet ved at hæmme lymfocytproliferation som fremmes af phytohæmagglutinin (PHA) og anti-CD3 monoklonale antistoffer. De monocyt afledte dendritiske celler (DCS) blev anklaget samlede lysater genereret fra Panc-1 CSCS opnået fra tumor sfære dyrkning. Efter co-dyrkning med lymfocytter på forskellige nøgletal, de Panc-1 CSCS lysater modificerede DC fremmes effektivt lymfocyt proliferation. Den aktiverende effektivitet nåede 72,4% og 74,7% ved forholdene 01:10 og 01:20 med lymfocytter. De aktiverede lymfocytter secernerede høje niveauer af INF-γ og IL-2, som er stærke antitumor cytokiner. Desuden Panc-1 CSCS lysater modificeret DC inducerede signifikante cytotoksiske virkninger af lymfocytter på Panc-1 CSCS og parentale Panc-1-celler, henholdsvis som vist ved lactatdehydrogenase (LDH) assay. Vores undersøgelse viser, at udviklingen af ​​CSCS vaccine er en lovende strategi til behandling af kræft i bugspytkirtlen

Henvisning:. Yin T, Shi P, Gou S, Shen Q, Wang C (2014) dendritiske celler Læsset med pancreas Kræft stamceller (CSCS) Lysater Fremkald Antitumor Immune Killing effekt in vitro. PLoS ONE 9 (12): e114581. doi: 10,1371 /journal.pone.0114581

Redaktør: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, USA

Modtaget: 31 jul 2014; Accepteret: 11. november 2014 Udgivet: 18. december 2014

Copyright: © 2014 Yin et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (nr 30.801.100)

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at ingen eksisterer konkurrerende interesser.

Introduktion

kræft i bugspytkirtlen er en af ​​de mest dødelige maligniteter i fordøjelsessystemet, der rangerer som den førende årsag til kræft dødsfald i de udviklede lande. I de senere år er forekomsten af ​​kræft i bugspytkirtlen og dødsfald støt stigende i udviklingslandene, hvorimod prognosen for de fleste patienter med pancreascancer ikke forbedrede løbet af de sidste tredive år. Størstedelen af ​​patienter med pancreascancer mistede mulighed for kirurgisk resektion, skyldes det faktum af fremskredent stadium af sygdommen på diagnosetidspunktet, og iboende eller erhvervet resistens mod kemoterapi eller strålebehandling, hvilket er et typisk kendetegn ved pancreascancer [1]. Det er således vigtigt at udforske nye målrettede interventionsstrategier til behandling kræft i bugspytkirtlen.

De cancer stamceller (CSCS) er en subpopulation af tumorceller, der besidder stærke selvfornyelse og differentiering evner til at drive carcinogenese og progression af kræft. For nylig har den CD44 + CD24 + ESA + pancreas CSCS blevet bekræftet at have en øget tumorigent potentiale, og er ansvarlige for den maligne opførsel af kræft i bugspytkirtlen [2]. Komplet udryddelse af disse CSCS kan give håb som en ny terapeutisk strategi til behandling af kræft i bugspytkirtlen. Men anti-apoptotiske evne er en af ​​de fremtrædende træk for CSCS tværs af flere tumortyper, hvilket resulterer i ineffektiv drab i standard kemoterapi og strålebehandling [3] – [4]. De resterende CSCS kan således blive oprindelsen af ​​tilbagefald og kilden til behandlingssvigt.

Cancer immunterapi aktiverer patientens antitumor immunresponser at afvise maligne tumorceller. CSCS udtrykke visse biomarkører, der har særskilte antigenicitet, som kan inducere specifikke immunresponser [5] – [6]. CSCS har vist sig at blive anerkendt og elimineres ved CD8 + cytolytiske T-celler [7]. Endvidere er det blevet påvist, at iboende immunitet mod CSCS kan diktere kræft progression naturligvis [6]. Det er således en attraktiv strategi for at inducere immunresponser mod pancreas CSCS til behandling af pancreascancer. DC’er er potente antigenpræsenterende celler og spiller en central rolle i induktion af primære immunresponser mod tumorassocierede antigener. En række strategier er blevet udviklet til at ændre DC’er med tumor-specifikke antigener til at generere anti-tumor immunrespons. Svag tumorantigen-modificeret DC vaccine kan fremkalde stærke anti-tumor immunrespons in vitro og in vivo [8]. I denne undersøgelse, vi ændrede DCs med bugspytkirtlen CSCS antigen, og undersøgte dræbende effekt af immunrespons fremkaldt af CSC-DC på pancreas CSCS in vitro.

Materialer og metoder

Etik redegørelse

brugen af ​​mennesker blev specifikt er godkendt af Clinical Research etiske komité af EU hospitalet, Tongji Medical College, HUST. Blodprøverne blev opnået fra raske donorer. Alle de frivillige havde kendt og aftalt, at blodet skulle bruge til videnskabelig forskning. Alle deltagere indgået en skriftligt informeret samtykke form, inden donere blodet.

Cellekultur

Panc-1 pancreascancer cellelinie blev dyrket i Dulbecco Modified Eagle Medium suppleret med 10% føtalt bovint serum ( Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), penicillin (100 U /ml) og streptomycin (100 U /ml) ved 37 ° C inkubator med 5% CO

2. Kulturen betingelse for bugspytkirtelkræftceller til dannelse tumor sfærer i suspension blev beskrevet tidligere [9]. Kort fortalt blev enzymatisk dissocierede enkeltceller fortyndet til en densitet på 10

3 celler /ml i kugle-dannende medium (SFM). Cellerne blev passeret hver 10 til 14 dage og genudpladet i SFM. De sfæriske klynger af celler dyrket i denne tilstand blev benævnt Panc-1 CSCS. SFM anvendte blev DMEM-F12 suppleret med 10 ng /ml fibroblastvækstfaktor-basic (Peprotech), 20 ng /mL epidermisvækstfaktor (Peprotech), 5 ug /ml insulin, 2,75 ug /ml transferrin, 2,5 ng /ml natriumselenit (Sigma), og 0,4% bovint serumalbumin (Amresco).

Udarbejdelse af tumor cellelysat

bugspytkirtelkræftceller (Panc-1 kugle, Panc-1) blev inkuberet med 0,01% EDTA s opløsning i 5 min. Efter vask to gange i PBS, blev cellerne resuspenderet i serum-frit medium. Cellesuspensionerne blev frosset ved -80 ° C og optøet ved fire fryse-tø cykler. Efter fjernelse af rå debris blev lysaterne centrifugeret i 10 minutter ved 300 g tyngdekraften. Supernatanter blev opsamlet, og proteinet koncentrationer af lysaterne blev bestemt ved Bio-Rad-assayet (Bio-Rad, Munchen, Tyskland).

Fremstilling af bugspytkirtelkræftceller lysater modificerede DC

Perifer mononukleær blod celler (PBMC’er) fra to raske donorer blev isoleret ved Ficoll densitet-gradient centrifugering. PBMC’erne blev dyrket i RPMI 1640 forsynet med 10% serum i dyrkningspladerne for adhærens ved 37 ° C med 5% CO

2 i to timer. De ikke-adhærerende celler blev fjernet og dyrket i medium indeholdende 10U /ml IL-2 for yderligere generering af lymfocytpopulationen. De adhærerende celler blev høstet og dyrket i nærvær af GM-CSF (Genzyme, 100 ng /ml) og IL-4 (Genzyme, 100 ng /ml) i 6 dage ved 37 ° C, 5% CO2. Derefter blev cellerne inkuberet med lysater af bugspytkirtelkræft celle (Panc1 kugle og Panc-1) ved en koncentration på 100 pg for hver 2 × 10

5 DC’er i 24 timer. Efterfølgende blev DC’er aktiveret med TNF-α (20 ng /ml) i 24 timer.

Immunologisk fænotypisk analyse

Flowcytometri-analyse blev udført for at påvise de immune fænotyper af tumor og dendritiske celler. Antistoffer omfatter anti-HLA-DR-FITC, anti-HLA-ABC-FITC, anti-HLA-DQ-PE, anti-CD80-FITC, anti-CD54-FITC, anti-CD1a-FITC og anti-CD86-PE , (eBioscience). FITC-IgG og PE-IgG blev brugt som interne kontroller. For farvning, 5 × 10

5-celler blev udpladet i brønden U pladen 96 (Corning, USA) og inkuberet med 5 pi af hvert antistof ved 4 ° C i 30 minutter. Efter vask med PBS blev cellerne opsamlet ved 1000 g tyngdekraft i 5 minutter. Derefter blev cellerne resuspenderet ved 300 pi PBS og underkastet flowcytometrianalyse.

Inhibering af bugspytkirtelkræftceller på lymfocytproliferation

Panc-1 CSCS blev høstet som stimulatorceller. Efter at være blevet forbehandlet med mitomycin C (25 ug /ml), blev stimulatorcellerne samdyrket med 1 × 10

6 /ml non-adhærente lymfocytter (reaktorer) i et forhold på 1:10 i nærværelse af PHA (Sigma) eller anti-CD3 monoklonale antistoffer (OKT3, eBioscience). Derefter 20 pi 5 ug /ul af 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-yl) -2, 5- diphenyl 2H – tetrazoliumbromid (MTT) (Sigma) blev tilsat til hver brønd. Efter inkubering i 4 timer blev supernatanten erstattet med 150 pi dimethylsulfoxid (Sigma). Absorptionen (A) blev aflæst ved 570 nm ved anvendelse af et spektrofotometer. Den relative hastighed af celleproliferation blev beregnet som følger: (A-B) /(C + D) x 100%. (A) eksperiment gruppe: Panc-1 CSCS + lymfocyt + PHA /OKT3; (B) positiv kontrol: lymfocyt + PHA /OKT3; (C) blank kontrol: Panc-1 CSCS + PHA /OKT3. Forsøgene blev udført in triplo.

Aktivering effekt af Panc-1 CSCS modificeret DC den lymfocytproliferation

For at undersøge kapaciteten af ​​Panc-1 CSCS modificerede DC at aktivere proliferation af lymfocyt, forskellige grupper af DC (Panc-1 CSC-DC, DC) blev høstet som stimulatorceller. Efter forbehandling med mitomycin C (25 ug /ml, Roche), stimulatorcellerne blev co-dyrket med 1 × 10

6 /ml allogen ikke-klæbende lymfocyt (reaktorer) i plader med 96 brønde ved forhold i området fra 1: 10 til 1:20 og var dyrkning ved 37 ° C, 5% CO

2 i 96 timer. Lymfocytterne dyrket alene uden at stimulere blev fastsat som kontroller. Derefter 20 pi 5 pg /pl af 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-yl) -2, 5- diphenyl 2H – tetrazoliumbromid (MTT) (Sigma) blev tilsat til hver brønd. Efter inkubering i 4 timer blev supernatanterne erstattet med 150 pi dimethylsulfoxid (Sigma). Absorptionen (A) blev aflæst ved 570 nm ved anvendelse af et spektrofotometer. Det relative antal lymfocyt efter aktivering blev beregnet som: A eksperiment /A kontrol x 100%. Hastigheden af ​​celleproliferation blev beregnet som: (A eksperiment-A kontrol) /A kontrol x 100%. Eksperimenterne blev udført i triplikater.

Cytokine detektion af Elisa assay

For at bestemme stimulerende kapacitet af dendritiske celler på lymfocytaktivering, supernatanterne af lymfocyt blev opsamlet 72 timer efter at være blevet stimuleret med DC , og koncentrationerne af IFN-γ, IL-2, IL-10 blev målt ved ELISA-kit fra R 0,05 blev betragtet som signifikant

Resultater

Bugspytkirtelkræft CSCS kultur og kugle-dannende

De kugle-dannende evner kræftceller i serum fri medium har længe været anvendt til. berige stamme-lignende celler. Forholdet mellem kuglen danner evner i serum fri medium og stamcelle tilhører Panc-1 bugspytkirtelkræftceller er blevet testet i vores tidligere undersøgelser [9], [10]. Vores foreløbige undersøgelser vist, at Panc-1 celler kan forplante at danne kugler med stamceller egenskaber. Desuden viste disse stamceller-lignende celler øget resistens mod kemoterapi og øget migration evne. I denne undersøgelse indsamlede vi de Panc-1 CSCS dyrket under serum-frit medium for yderligere undersøgelse af det immunologiske drab strategi (fig. 1).

Den immunologiske fænotype af Panc-1 sfære celler

Vi har registreret udtryk for immunologiske molekyler på Panc-1 kugle ved FACS metoder. Som vist i fig. 2, Panc-1 sfære udtrykte lave niveauer af HLA-ABC og CD80 sammenlignet med Panc-1-celler. Vi fandt ikke nogen forskelle mellem Panc-1 og Panc-1 sfærer vedrørende andre immun molekylære markører, herunder HLA-DR, HLA-DQ, CD86, og CD1a. Den lave ekspression af immune molekylære markører på Panc-1 sfære indikerer, at den lave stimulerende evne CSCS på immunsystemet.

Et repræsentativt eksempel på FCM-analyse viste, at MHC I og CD80 ringe blev udtrykt i Panc-1 CSCS sammenlignet med Panc-1-celler. Ingen signifikante forskelle blev fundet for andre immune molekyler, herunder CD86, HLA-DR, HLA-DQ, CD86, og CD1a. Ekspressionen af ​​CD80 og HLA-ABC på Panc-1 CSCS er angivet ved en fuldt optrukket linie. Ekspressionen af ​​CD80 og HLA-ABC i Panc-1-celler er vist med en stiplet linje

Virkning af bugspytkirtelkræftceller på proliferationen af ​​lymfocyt

CSCS er blevet rapporteret at modulere immune og inducere immunsuppression via flere mekanismer. For at bestemme om pancreas CSCS modulere aktiveringen af ​​lymfocytter, virkninger af Panc-1 CSCS på lymfocytproliferation fremmes af PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer blev analyseret ved MTT-assayet. Panc-1 sfærer blev co-dyrket med lymfocytter. PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer blev anvendt til at aktivere lymfocyt proliferation. Resultaterne viste, at spredning af lymfocyt aktiveres af PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer blev inhiberet i nærvær af pancreas CSCS sammenlignet med kontroller (Fig. 3).

Lymfocytter blev stimuleret til at proliferere med PHA eller anti- CD3 monoklonale antistoffer. Panc-1 CSCS blev co-dyrket med lymfocyt i et forhold på 1:10 i nærvær af PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer. Lymfocytter stimuleret med PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer udelukkende blev fastsat som kontrol. MTT-assay indikerede, at lymfocytproliferation fremmes af PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer blev inhiberet i nærvær af Panc-1 CSCS.

Den stimulerende evne CSCS lysater modificeret DC den lymfocytproliferation

for at bestemme virkningen af ​​CSCS lysater modificeret DC om spredning af lymfocytter, forskellige del af DC (Panc-1 CSC DC og primitive DC) blev co-dyrket med lymfocytter. De aktiverende effekter af forskellige DC på proliferationen af ​​lymfocytter blev påvist ved MTT-metoden. Spredningen af ​​lymfocytter blev demonstreret med overholdelse ved OD570 nm. Som vist i fig. 4, DC ladet med pancreas CSCS lysater fremkaldte stærk proliferation af lymfocyt, (fig. 4A). Den aktiverende effekt af forskellige DC på lymfocytter kan afspejles af lymfocytter spredning sats, og den aktiverende effekt af Panc-1 kugle lysater indlæst DC på lymfocytter nåede 72,4% og 74,7% i forholdet 01:10 og 01:20, mens lymfocytproliferation aktiveret af DC nåede kun 17,5% og 14,6% (fig. 4B).

forskellige DC’er (Panc-1 CSC DC, DC) blev dyrket sammen med lymfocyt (reaktorer) i plader med 96 brønde i forskellige forhold (1:10, 1:20). Lymfocytterne dyrket alene blev sat som kontroller. Efter 96 timer blev det relative celleantal beregnet som absorbansen ved MTT metoder. Forsøgene blev udført in triplo. A. Det relative antal lymfocyt efter stimulation kan reflekteres ved absorbans. Panc-1 CSCS modificerede DC stimuleret stærkere proliferation af lymfocyt forhold til DC-grupper. B. aktiverende virkninger af DC’er på lymfocyt kan reflekteres af lymfocyt proliferation sats. De Panc-1 CSCS lysater modificerede DC opnået en betydelig høj lymfocyt proliferation sats sammenlignet med DC-grupper.

Bugspytkirtelkræft CSCS lysater modificeret DC provokeret sekretion af IFN-y IL-2 og IL-10 på lymfocytter

for at bestemme aktivering af lymfocytter ved pancreas CSCS modificeret DC, vi har registreret de cytokiner, der udskilles af T-celler i henhold til materialer og metoder. DC pulset med bugspytkirtelkræft cellelysater induceret sekretion af Th1 cytokin IFN-γ, IL-2 og Th2 cytokin IL-10. Vores resultater viste, at opregulering af IFN-γ var især signifikant for Panc-1 sfære modificeret DC, og sekretionen af ​​IFN-γ steg til 5,03 gange sammenlignet med primitive DC gruppe. Sekretionen af ​​IL-2 steg til 2,28 gange sammenlignet med primitive DC gruppe (fig. 5). I mellemtiden er den Th2-associerede cytokin IL-10 også forøget i Panc-1 CSCS antigen loaded DC. Mængden af ​​IL-10 i supernatanten øges op til 7,3 gange i Panc-1 sfære lysater modificeret DC i forhold til den primitive DC, men signifikant lavere end den for Th1 associeret cytokin (fig. 5).

forskellige DC’er blev co-dyrket med 1 × 10

6 /ml lymfocyt i plader med 96 brønde. Supernatanterne af lymfocyt blev opsamlet 72 timer efter at være blevet stimuleret med DC, og koncentrationerne af IFN-γ, IL-2, blev IL-10 målt ved ELISA-assay. Pancreas CSCS lysater modificerede DC provokeret betydelig sekretion af IFN-γ, IL-2 og IL-10 på lymfocyt.

Bugspytkirtelkræft CSCS modificeret DC inducerede kraftig dræbende effekt på bugspytkirtlen CSCS

Vi yderligere i forhold den specifikke dræbende effekt af lymfocyt aktiveres af pancreas CSCS modificeret DC. Autolog lymfocyt stimuleret med CSC-DC blev indsamlet og co-dyrkes med Panc-1 CSCS på forskellige forhold. Den specifikke dræbende virkning blev påvist ved LDH metoder. De lymfocytter aktiveres af DC fyldt med Panc-1 CSCS vragrester viste signifikant dræbende virkning på Panc-1 CSCS forhold til DC kontroller på forskellige forhold (fig. 6). Endvidere fandt vi, at primitive Panc-1 cellelysater loaded DC fremprovokerede en svagere dræbende virkning på Panc-1 CSCS sammenlignet med Panc-1 CSCS lysater modificerede DC (fig. 7A). Men Panc-1 CSCS modificerede DC provokeret sammenlignelige drab virkninger både på Panc-1 CSCS og Panc-1 celler. Selvom dræbende effekter var svagere på Panc-1 celle sammenlignet med Panc-1 DC, var der ingen signifikant forskel mellem Panc-1 DC og Panc-1 CSC- DC (fig. 7B). Denne dræbende virkning var især signifikant ved en lavere andel på 1:10 og 1:20 med lymfocytter. Salg

Forskellige DC’er blev co-dyrket i et forhold på 1:10 med lymfocyt i 5 dage. De ikke-adhærerende celler blev opsamlet og talt som effektorer celler. Effektorer (1 × 10

6 celler) blev dyrket sammen med de bugspytkirtelkræftceller på forskelligt forhold i 20 timer ved 37 ° C i en CO 5%

2 incubator. Den cellefrie supernatant blev opsamlet og analyseret ved LDH-assay. De Panc-1 CSCS lysater modificerede DC viste stærkere dræbende effekt på Panc-1 CSCS sammenlignet med kontroller.

Forskellige udviklingslandene (Panc-1 fm, Panc-1CSC DC) blev co-dyrket i forholdet 1:10 med lymfocyt i 5 dage. De ikke-adhærerende celler blev opsamlet og talt som effektorer celler. Effektorer (1 × 10

6 celler) blev dyrket sammen med de bugspytkirtelkræftceller (Panc-1, Panc-1 CSCS) ved forskelligt forhold i 20 timer ved 37 ° C i en 5% CO2 inkubator. Den cellefrie supernatant blev opsamlet og analyseret ved LDH-assay. A. De Panc-1 CSCS lysater modificerede DC viste stærkere dræbe effekter på Panc-1 CSCS sammenlignet med Panc-1 lysater modificerede DC. B. Panc-1 CSCS lysater modificerede DC havde sammenlignelige drab effekter på Panc-1 celler sammenlignet med Panc-1 DC-vaccine.

Diskussion

CSCS har været berygtet for sin modstand mod terapi og kan være årsag til tilbagefald af maligne tumorer, som tidligere rapporteret [10] – [11]. Udvikling af antitumor immunitet kan således være et effektivt alternativ tilgang til at udrydde pancreas CSCS. Desværre kan CSCS bryde kroppens immunforsvar overvågning via flere mekanismer. CSCS er blevet rapporteret at være svag immunogen. Ohlfest et al rapporterede, at menneskelige CD133 + gliomer celler udtrykker lave niveauer af MHC I eller naturlige dræberceller (NK) celle aktiverende ligander. Lav udtryk for disse immunstimulerende molekyler kan hjælpe gliomer CSCS at unddrage den adaptive og medfødte immun angreb [12]. Konsekvent i vores undersøgelse, flowcytometri afslørede, at pancreas CSCS udtrykker lave niveauer af HLA-ABC og CD80. Lav ekspression af MHC-molekyler kan svække identifikationen af ​​CSCS antigen ved menneskelige legeme immunsystem. Lav ekspression af CD80 kan føre til immun-anergi [13]. De observerede immune egenskaber foreslog lav immunstimulerende evner af pancreas CSCS for immunsystemet. CSCS blev også rapporteret at modulere immunresponser. Heimberger et al rapporterede, at CSCS bidrager immun unddragelse gennem inducere regulatoriske T-celler og udskille specifikke immunosuppressive molekyler [14], [15]. Det blev også rapporteret, at det maligne melanom initierende celler kan modulere antitumor immunrespons gennem inhiberende T-celleaktivering og inducerer Treg celler [14]. Vores undersøgelse viste, at aktiveringen af ​​lymfocyt stimuleret af PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer blev inhiberet i nærvær af Panc-1 sfære. Dette indikerede, at pancreas CSCS kan have immunsuppressive egenskaber. Breaking the immun tolerance af pancreas CSCS og induktion af immunreaktioner mod CSCS kan være effektive og lovende strategier til at eliminere CSCS.

udviklingslandene er professionelle antigen-præsenterende celler, der spiller en central rolle i at fremkalde og kørsel af primære immunreaktioner , hvilket gør dem som et væsentligt mål i generering terapeutisk immunitet mod cancere [16]. Modifikation af DC’er med tumorantigen kan inducere T-celle-aktivering og antitumor immunrespons. DC-baseret vaccination repræsenterer en lovende og kraftfuld strategi til fremkaldelse antitumorimmunitet til kræftbehandling. Frembringelse af DC fyldt med CSCS associerede antigener kan udgøre en hidtil ukendt og værdifuld metode til fremkaldelse af immunresponset at udrydde CSCS. Det var blevet rapporteret, at cytotoksisk T-lymfocyt mod CSCS kan induceres ved fusion af CSCS med DC eller transfektion af CSCS mRNA til dendritiske celler [17] – [18]. I denne undersøgelse, opkræves vi DC med bugspytkirtlen CSCS vragrester. Efter co-kultur med lymfocytter, denne modificerede DC aktiverer og stimulerer lymfocytproliferation og sekretion af INF-γand IL-2. Den opregulering af IFN-γ, som er et stærkt antitumor cytokin, var især markant. I mellemtiden fandt vi, at Th2 associeret cytokin IL-10 steg også efter DC-stimulering. IL-10 er et potent immunsuppressivt cytokin, som inhiberer T-celleaktivering. Selvom opregulering af IL-10 var meget lavere i forhold til Th1-associerede cytokin, inhibering af IL-10 kan forøge immunresponset mod CSCS.

Vores yderligere undersøgelse viste, at lymfocyt aktiveres af Panc-1 CSCS lysater modificeret DC viste signifikante drab virkninger både på Panc-1 og Panc-1 CSCS. Desuden dræbende virkning på Panc-1 CSCS provokeret af Panc-1 CSC-DC var stærkere sammenlignet med Panc-1 DC. I betragtning af at kræft i bugspytkirtlen er resistent over for næsten alle aktuelt tilgængelige behandlinger, og det terapeutiske resistens kan tilskrives CSCS. Udvikling af immunterapi til pancreas CSCS bliver en lovende tilgang til at behandle kræft i bugspytkirtlen i den nærmeste fremtid.

Til dato, isolering af pancreas CSCS er primært opnået gennem specifik overflade markør-afhængige valg celle. Rapporterede celleoverflademarkører inkluderer CD44, CD24, CD133, ESA, og andre for pancreas CSCS [2], [19]. pancreas CSCS udvalgt gennem disse celleoverflademarkører kan imidlertid være heterogen, da ingen af ​​disse markører vises til selektivt karakterisere en ren population af CSCS [20] – [21]. På den anden side kan dyrkning af CSCS sfærer i stamcelle konditioneret dyrkningssystem være en anden tilgang til at berige pancreas CSCS. I aktuelle undersøgelse, vi beriget pancreas CSCS ved hjælp non-adhærente sfære dyrkningssystem. Resterne af cellen sfære blev anvendt til at oplade DC og indsamle CSCS modificerede DC. Den immunreaktion fremkaldt af en sådan fremgangsmåde kan direkte målrette størstedelen af ​​pancreas CSCS befolkning.

Sammenfattende viste vores resultater, at DC-baserede immunterapi kan være en ideel strategi for at eliminere pancreas CSCS. Denne lovende immun behandling værd videreudvikling overvejer den iboende modstand pancreas CSCS til eksisterende behandlingsformer.

Forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikt vedrørende offentliggørelsen af ​​dette papir.