PLoS ONE: Metastase-associeret i Colon Cancer 1 er en ny Survival-Related Biomarkør for Menneskerettigheder Patienter med nyrebækkenet Carcinoma

Abstrakt

Metastase-associeret i tyktarmskræft en (MACC1) er for nylig blevet identificeret som en roman uafhængig prognostisk indikator for metastaser forekomst, samlet overlevelse og kræft-fri overlevelse for patienter med tyktarmskræft og andre solide tumorer. I denne undersøgelse undersøgte vi rolle MACC1 i udviklingen og progressionen af ​​nyrebækkenet karcinom, en form for Upper Tract urothelial karcinomer. MACC1 protein er blevet fundet i cytoplasmaet og i kernen af ​​overgangs- epitelceller i normale nyrebækkenet i immunhistokemiske (IHC) assays. Kvantitative IHC undersøgelser afslørede, at MACC1 unormal overflod i kræft væv kan udgøre en biologisk indikator klinisk tyder på tumor malignitet i nyrebækkenet. Endvidere har undersøgelser af sammenslutningen af ​​MACC1 protein niveauer med klinisk-patologiske parametre i denne undersøgelse foreslået en korrelation af MACC1 udtryk med tumor-node-metastaser scenen og histopatologisk kvalitet af patienter med nedsat bækken karcinom, med forhøjede MACC1 protein niveauer ofte er forbundet med højere aggressivitet af sygdommen. Desuden har både sygdomsfri overlevelse og samlet overlevelse for patienterne i høj MACC1 udtrykket gruppe var signifikant lavere end i den lave udtryk gruppen. Multivariat analyse med en Cox proportionel-farer model foreslået, at MACC1 er faktisk en selvstændig prognostisk indikator for samlet overlevelse og kræft-fri overlevelse for patienter med nyrebækken karcinom. Således kan MACC1 repræsentere en lovende prognostisk biomarkør kandidat, samt et potentielt terapeutisk mål for denne sygdom

Henvisning:. Hu H, Tian D, Chen T, Han R, Sun Y, Wu C (2014) metastase-Forbundet i Colon Cancer 1 er en ny Survival-Related Biomarkør for menneskerettigheder Patienter med nyrebækkenet karcinom. PLoS ONE 9 (6): e100161. doi: 10,1371 /journal.pone.0100161

Redaktør: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, USA

Modtaget: Februar 4, 2014 Accepteret: 22 maj 2014; Udgivet: 20 Jun 2014

Copyright: © 2014 Hu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af en bevilling fra National Natural Science Foundation of China (Grant nummer: 30.700.834), og en anden bevilling fra Natural Science Foundation of Tianjin (Grant Nummer: 12ZCDZSY16600). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

som en ondartet svulst følge af overgangsordningen epitel (en meget elastisk epitelvæv bestående af flere lag af epitelceller, der beklæder indersiden af ​​urinvejene), renal overgangsordning celle karcinom, eller renal urothelial carcinom (UC ) repræsenterer den fjerde mest almindelige kræftform i verden [1]. Forekommer i nyrebækkenet og ureter, øvre tarmkanal urothelial karcinom (UTUC) er en sygdom, primært rammer folk i alderen 50 og 75. Patologisk, UTUC er som regel mere invasiv end blære UC (60% vs. 15%) og er ofte forbundet med højere malignitet [2], [3], [4]. UTUC på nyrebækken eller nyrebækken karcinom (RPC) udgør ca. 5% til 6% af alle renale professionshøjskoler og er vanskeligere at diagnosticere end blære UC. Faktisk er den 5-års overlevelsesraten for RPC patienter er lavere end den, der findes i blæren UC som metastase udgør omkring 70% af cancer-specifik død i RPC [5]. Notorisk vanskeligt for klinisk diagnose, UTUC repræsenterer en enorm udfordring for karakterisering på radiologisk billeddannelse, samt for endoskopisk visualisering og biopsi. I øjeblikket er der fem faktorer, der er de hyppigst vurderede variabler for urothelial karcinom risiko lagdeling før endelig behandling: alder, tumor arkitektur, cytologi, biopsi tumor klasse, og tilstedeværelse af hydronephrosisand. Men selv om patologiske prædiktive faktorer såsom tumor stadie, grad, carcinoma in situ, lymphovascular invasion, og lymfeknude invasion kan være mere præcis end de andre kliniske faktorer til at forudsige recidiv og patient overlevelse [6], sådanne oplysninger er normalt ikke tilgængelige før patienten har lidt et betydeligt tab af renal reserve og er mindre tilbøjelige til at være i stand til at udholde aggressive behandlinger.

i de sidste 5 år, har forskerne fået stor indsigt i biologi og klinisk adfærd UTUC. Der er gjort betydelige fremskridt i identifikationen af ​​molekylære prognostiske indikatorer for patienter med urothelial karcinom og kan øge risikoen forudsigelse nøjagtighed. Signalmolekyler, der er relateret til cellulære processer, såsom angiogenese, celledød, celleadhæsion og celleproliferation er blevet undersøgt grundigt som de potentielle prognostiske indikatorer i udviklingen og progressionen af ​​sygdommen, såsom p53, EGFR, survivin, Bcl-2 , Ki-67, E-cadherin, hypoxi-inducerbar faktor 1a (HIF1A), telomerase mRNA komponent, matrixmetalloproteinaser (MMP-2, MMP-9, TIMP1 og TIMP-2), og mere (gennemgået i [7], [ ,,,0],8]). Identificeret i et genom-dækkende analyse som et differentielt udtrykt gen i humane coloncancer væv og metastaser, metastase-associerede i coloncancer 1 (MACC1) er blevet foreslået som en uafhængig prognostisk indikator for metastase-dannelse og metastase overlevelse for tyktarmscarcinomceller patienter [9]. Påvises i en række normale væv, såsom tarmen, maven, hypofysen, nyren, luftrør, bugspytkirtel, brystkirtel, knoglemarv, ovarie, lunge, hjerte, lever, og B-lymfoblaster, MACC1 er mere rigelige i vævene opstår fra endodermen (f.eks tarm og mave) end vævene stammede fra mesoderm (f.eks nyre, hjerte) eller ektoderm (f.eks hypofyse og brystkirtel). Tænkes, kan MACC1 spille en rolle i endoderm-afledte organogenese under fosterudviklingen. Oprindelig opdaget i koloncancer, er MACC1 overekspression blevet påvist at fremme tumor proliferation, invasion og metastase i et bredt spektrum af faste tumorer, herunder gastrointestinale cancere (f.eks tyktarmskræft [9], [10], gastrisk karcinom [11]), hepatocellulær karcinom [12], [13], osteosarkom [14], gliom [15], [16], lunge [17], [18], [19], esophageal [20], pancreas [21], i æggestokkene [22] , livmoderhalskræft og brystkræft [23] (revideret i [24]). Endvidere har undersøgelsen af ​​MACC1 ekspressionsniveauerne i tumorvæv i forskellige kliniske faser afsløret, at den højeste MACC1 ekspressionsniveauet er blevet observeret oftere i maligne tumorvæv af patienter, som ofte viser mere ugunstige klinisk-patologiske funktioner, herunder forbedret lymfeknude metastaser og metachronously udviklede fjernmetastaser . I andre tilfælde, såsom i sjældent metastatisk humant gliom, MACC1 genekspression er mere dramatisk opreguleres i væv af højere malignitet, hvilket afspejler symptomatisk forværring af sygdommen [15]. Forhøjet MACC1 udtryk er således blevet foreslået at fungere som en uafhængig prognostisk indikator for kræft tilbagefald, potentiel forværring fra godartede til maligne tumorer, eller under visse omstændigheder, indtræden af ​​metastaser. Derudover har MACC1 også vist sig som en forudsigende indikator for tilbagefald overlevelse, og samlet overlevelse (OS) af kræftpatienter i flere kvantitative undersøgelser i forskellige solide tumorer (gennemgået i [24]). Etableret som en ny prognostisk indikator for metastase i en bred vifte af solide tumorer, er MACC1 også blevet foreslået at være et mål kandidat for udviklingen af ​​terapeutiske strategier for interventionen med tumorprogression og metastase.

I vores nuværende undersøgelse, undersøgte vi rolle MACC1 i udviklingen og progressionen af ​​humane renal pelvis carcinom. Vi har demonstreret i immunhistokemiske assays ekspressionsmønsteret for MACC1 protein i humane nyrebækkenet carcinom vævsprøver, såvel som i de normale nyrebækkenet. Derudover undersøgte vi sammenhængen mellem MACC1 overekspression og klinisk-patologiske parametre (herunder alder, køn, tumor-node-metastaser (TNM) fase og patologisk klasse), samt sygdomsfri overlevelse (DFS) og total overlevelse (OS) i patienter med nyrebækken karcinom. Endelig har vi også undersøgt ved hjælp af univariate og multivariate analyser berettigelse MACC1 som en ny uafhængig prognostisk indikator for nyrebækken karcinom.

Materialer og metoder

Etik erklæring, patienter og vævsprøver

i alt 73 RPC patienter blev rekrutteret til denne undersøgelse i januar 2002 og januar 2005. RPC patienter deltog i denne undersøgelse omfattede 52 mænd og 21 kvinder. Gennemsnitsalderen var 61,2 år med en række 48-79 år. Patienterne gennemgik radikale nephroureterectomy med komplet klinisk fortid optegnelser ved Institut for Urologiske Surgery, Anden Hospital i Tianjin Medical University. Patienter, som havde udviklet metastaser og modtaget postoperativ kemoterapi eller strålebehandling blev udelukket fra dette forsøg. Normale vævssnit i denne undersøgelse blev afledt fra 32 tilstødende ikke-tumorform nyrebækken epitelvæv (ANRPETs, mindst 2 cm afstand fra tumor kant) og 34 normale nyrebækkenet epitelvæv (NRPETs, urothelial væv fra nyre kræftpatienter, som er mindre end 3 cm i diameter med intakt væv cellepolaritet og anses for at være normale epitelvæv).

Alle diagnoser af RPC’er blev bekræftet og yderligere klassificeret af postoperativ histopatologiske undersøgelse efter kriterierne i 2004 World Health Organization klassifikation. Tumor cellulære differentiering kvaliteter blev klassificeret i henhold til kriterierne i 1997 World Health Organization klassifikation. Tumor klinisk fase blev bestemt i henhold til den syvende udgave af TNM klassifikation af amerikanske fælles udvalg om kræft. Hver prøve var blevet fikseret i formalin, rutinemæssigt behandlet, og indlejret i paraffin. Postoperative opfølgning data blev indhentet fra alle patienter, med en median opfølgning på 41,5 måneder (der spænder fra 8 til 54 måneder). Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité i Second Hospital, Tianjin Medical University, og skriftligt informeret samtykke til brugen af ​​prøver fra hver patient indskrevet blev opnået i overensstemmelse hermed.

Klinisk dataindsamling

Alle kliniske data blev prospektivt indsamlet, behandlet og opbevaret i overensstemmelse med de kriterier /regler er beskrevet ovenfor. De kliniske variable, der er optaget omfattede køn, alder, histologisk type, TNM stadie og nuklear kvalitet (tabel 1). Opfølgende data blev indsamlet ved midlertidige fysiske undersøgelser af patienterne. For hver patient, er sygdomsfri overlevelse (DFS) i denne undersøgelse defineret som tidsintervallet mellem datoen for diagnose til første recidiv (herunder lokal eller regional tilbagefald og systemisk metastaser). Samlet overlevelse (OS) er defineret som intervallet mellem datoen for operationen og datoen for døden. Patienter, som var i live ved sidste opfølgning blev censureret på datoen for deres sidste besøg på klinikken, og patienterne, der døde af andre end RPC årsager blev censureret på tidspunktet for deres død.

Immunhistokemi (IHC)

de repræsentative paraffinblokke viser typiske tumorform RPC væv, og normale væv, herunder ANRPETs og NRPETs blev udvalgt til immunhistokemisk farvning efter vi nøje undersøgt hæmatoxylin-eosin farvning lysbilleder af alle kirurgiske prøver. Udførte vi IHC farvning for MACC1 ved en totrins-peroxidase-konjugeret polymer fremgangsmåde under anvendelse Chemmate Envision Detection kit. Kort beskrevet snit blev afvokset med xylen og rehydreret gennem en gradueret række af ethanol. Objektglassene blev derefter udsat for varme epitopgenfinding hjælp mikrobølgeovn i 0,01 M citratpuffer (pH 6,0) i 18 min og blev afkølet i 30 minutter ved stuetemperatur. Objektglassene blev inkuberet i 3% hydrogenperoxid i 10 min for at inaktivere den endogene peroxidase. Snittene blev derefter inkuberet med anti-MACC1 antistof (muse polyklonalt, Ig G, ab106579; 1:50 fortyndet, Abcam, Cambridge, UK) som primære antistoffer natten over ved 4 ° C i et fugtigt kammer. Efter vasket i PBS blev snittene inkuberet med biotinyleret kanin-anti-muse-immunoglobulin (Dakopatts, Glostrup, Danmark) fortyndet til 1:200 i 30 minutter, efterfulgt af yderligere 30 minutters inkubation med peroxidase-konjugeret streptavidin (Dakopatts) fortyndet ved 1: 300. Efterfølgende blev snittene underkastet diaminobenzidin og derefter modfarvet med hæmatoxylin. Sektioner fra humane coloncancer væv blev medtaget som positive kontroller i hver kørsel. De positive kontroller viste klar positiv farvning og intensiteten var meget ens blandt forskellige kørsler. Den negative kontrol blev udført med ikke-immunt okseserumalbumin som en erstatning for det primære antistof ved den samme koncentration i hver farvningskørsel. Snittene blev vasket tre gange med PBS mellem hvert trin.

Kvantitativ evaluering af immunhistokemisk farvning

immunhistokemisk farvning af MACC1 blev kvantitativt analyseret ved visuel bedømmelse og Image Pro Plus i denne undersøgelse. Visuel vurdering scoring af MACC1 ekspressionsniveauerne blev udført af en patolog efterfulgt af reeksamen /genbekræftelse fra en anden patolog. Andelen af ​​tumorceller blev scoret som følger: 0 (ingen positive tumorceller), 1 ( 10% positive tumorceller), 2 (10-50% positive tumorceller), og 3 ( 50% positive tumorceller ). Intensiteten af ​​farvning blev gradueret efter følgende kriterier: 0 (ingen farvning), 1 (svag farvning = lys gul), 2 (moderat farvning = gul brun), og 3 (stærk farvning = brun). Farvningen indeks blev beregnet ved at gange farvningsintensitet score og andelen af ​​positive tumorceller. Ved hjælp af denne metode til vurdering, vi evaluerede MACC1 protein udtryk niveauer i godartet nyrebækken epitel og maligne læsioner ved at bestemme farvningen indekset, hvilket resulterer i scoringer som 0, 1, 2, 3, 4, 6 eller 9. Til statistiske formål, IHC scores blev inddelt i to grupper, lav udtryk gruppe (≤4) og høj ekspression gruppe (≥6).

Som for Image Pro-Plus pointsystem blev MACC1 udtryk vurderet kvantitativt ved hjælp af Image Pro Plus 6,0 analyse systemet (Media Kybernetik, Silver Spring, MD) indført af Xavier og resultaterne blev igen undersøgt af yderligere to patologer uafhængigt efter den første runde af analysen. Kort fortalt blev 10 digitale billeder på 1360 × 1024 pixel opløsning og 400 × forstørrelse fanget af DP 70 CCD-kamera (Olympus, Japan) koblet til et Olympus AX-70 mikroskop (Olympus). Kvantificering af område farves og integreret optisk tæthed (IOD) af MACC1 i hvert billede blev bestemt bagefter og underkastet til yderligere analyse. Gennemsnitlig optisk densitet (AOD = IOD /Area) blev anvendt i denne undersøgelse til statistisk analyse.

For at lette statistisk analyse for overlevelsesdata blev hele kohorte af patienter inddelt i to grupper, høj MACC1 ekspression gruppe (60,6 %) og lav MACC1 udtryk gruppe (39,4%), blev hhv.

Statistisk analyse

Resultater udtrykt som gennemsnit ± standardafvigelse. Sammenligning mellem to grupper blev udført ved anvendelse af en uafhængig prøve

t

test eller parametrisk 2-tailed

t

test (Mann-Whitney-test). Envejs ANOVA (F-test) blev udført for at sammenligne parametrene for flere grupper. Korrelation mellem ekspressionsniveauerne af MACC1 (kvantitativt målt ifølge MACC1 immunhistokemisk farvning styrke) og klinisk-patologiske træk i RPC patienter blev vurderet ved anvendelse Pearsons korrelationskoefficient test. Alle statistiske analyser blev udført ved anvendelse af SPSS softwarepakke (version 17.0, SPSS, Inc., Chicago, IL). 2-sidet test blev vedtaget i denne undersøgelse, og

s

0,05 betragtes som statistisk signifikant. Overlevelsesraten blev estimeret ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden. Univariate og multivariate analyser blev udført med Cox proportionel risiko regressionsmodeller.

Resultater

Undersøgelse af MACC1 proteinekspression i nyrebækkenet carcinom (RPC) væv, tilstødende ikke-tumorform nyrebækken epitelvæv (ANRPET ) og normale nyrebækkenet epitelvæv (NRPET) prøver

immunhistokemisk (IHC) undersøgelse af MACC1 proteinekspression blev udført i 73 RPC vævsprøver, 32 ANRPET (mindst ca. 2 cm afstand fra tumor kant) og 41 NRPET (urothelial væv fra nyre kræftpatienter, som er mindre end 3 cm i diameter med intakt væv cellepolaritet og anses for at være normale epitelvæv). Som det fremgår af normale, ikke-neoplastiske nyrebækkenet vævssnit afledt fra patienter med renalcellecarcinom, blev MACC1 farvet i cytoplasmaet og i kernen i epitelcellerne bopæl i den stratificerede og midlertidig epitel (fig 1B B ‘). I modsætning hertil blev MACC1 farvning reduceret betydeligt i det stromale væv. Billeder i fig. 1A A ‘er negative kontrol IHC farvninger til MACC1

(A) negtive kontrol farvning.; (B) MACC1 positiv farvning; (C-E) repræsentative billeder af negtive, lav, høj MACC1 udtryk i RPC væv hhv. (A’-E ‘) en højere forstørrelse af det valgte område i (A-E), henholdsvis. Forstørrelse: x 100 i (A-E); × 200 i (A’-E ‘).

påvistes Positive MACC1 signaler i 66 af de 73 RPC kræft læsion prøver (~90.4%), samt i 24 af de 32 ANRPET ( ~75.0%) og 29 af de 41 NRPET (~70.7%) prøver vi undersøgt i dette studie. Billeder i fig. 1C-E, 1C’-E ‘er de repræsentative MACC1 IHC farvning billeder i RPC væv med MACC1 opdaget ved negativ (Fig 1C . C «), lav (figur 1D . D’). Og høj (fig 1E E ‘) ekspressionsniveauerne hhv. Selvom MACC1 udtryk er hovedsageligt til stede i cytoplasmaet i RPC vævssnit den nukleare lokalisering af MACC1 er let skelnelig som vist i fig. 1. Interessant trods den præferentielle cytoplasmatisk farvning i de fleste af de epiteliale celler i RPC kræft vævssnit, der er faktisk små populationer af celler, som viser væsentligt stærkere nuklear farvning end cytoplasmatisk farvning. I NRPETs blev MACC1 fordeles mere eller mindre jævnt i cytoplasmaet og kernen af ​​epitelceller (Fig 1B . B ‘). På nuværende tidspunkt er vi ikke klar over de biologiske konsekvenser af svagere nuklear farvning af MACC1 forhold til den cytoplasmatiske farvning udstillet i de maligne RPC væv.

Dernæst immunhistokemisk farvning styrken af ​​MACC1 blev målt kvantitativt af Image Pro Plus evaluering. Kvantificering af det farvede område, blev den integrerede optiske densitet (IOD) og den gennemsnitlige optiske densitet (AOD = IOD /Area) af MACC1 i hvert billede gennemført og udsat for yderligere analyse. Som vist i tabel 1, blev AOD læsning af MACC1 vist som 0,0648 ± 0,0312 i RPC væv, 0,0218 ± 0,0144 i ANRPETs, og 0,0210 ± 0,0151 i NRPETs hhv. Da der ikke var nogen væsentlig forskel mellem ANRPETs og NRPETs (

s

0,05), blev disse to grupper kombineret som en enkelt gruppe, “normal epitel«, som vist i den efterfølgende statistiske analyse vi behandles nedenfor. Som følge heraf AOD resultat normalt epitel var 0,0213 ± 0,0147. Kollektivt, når der sammenlignes med RPC væv, AOD score på immunhistokemisk farvede normale epitelvæv var signifikant lavere, tilnærme en tredjedel af farvningen styrke identificeret i RPC (

s Restaurant 0,05) (tabel 1). Disse resultater tyder på, at MACC1 unormal overflod kunne udgøre en biologisk indikator klinisk tyder på tumor malignitet i nyrebækkenet væv.

Sammenhængen mellem MACC1 protein ekspressionsniveauerne og prognostiske faktorer hos patienter med nyrebækkenet karcinom

for at bestemme den kliniske betydning af MACC1 overekspression i udviklingen og progressionen af ​​RPC, blev sammenhængen mellem MACC1 protein udtryk niveauer og de prognostiske faktorer (herunder alder, køn, TNM stadie og nuklear kvalitet) i RPC patienter yderligere undersøgt (tabel 2) . Kvantitativ analyse af IHC-farvning af Image Pro Plus analyse blev udført. Som vist i tabel 2, forhøjede MACC1 protein niveauer syntes at være forbundet med højere aggressivitet RPC, med AOD score på MACC1 i TNM stadie Ta, I, II, og III-IV afsløret som 0,0355 ± 0,0247, 0,0563 ± 0,0281, 0,0752 ± 0,0264, og 0,0965 ± 0,0185, henholdsvis. Mærkbart, MACC1 demonstrerede øget overflod i sene stadie tumorvæv som TNM stadie III-IV, når der sammenlignes med, at der i den tidlige fase, og forskellen var statistisk signifikant (

s

0,05). Desuden AOD score på MACC1 i RPC fase Ta var også væsentlig højere end målt i normalt epitel (0,0213 ± 0,0147) (

s Restaurant 0,05). Med hensyn til tumor nuklear kvalitet, var der også en statistisk signifikant forskel mellem de AOD snesevis af MACC1 målt i lav kvalitet (G1, G2: 0,0509 ± 0,0281) og scores målt i high-grade RPC væv (G3: 0,0729 ± 0,0304) (

s

0,05). Faktisk var der ~43.2% stigning påvist i tumorvæv af grad 3 i forhold til grad 1 eller 2, hvilket antyder, at MACC1 protein overflod kan være stærkt korreleret med udviklingen og progressionen af ​​RPC.

I kontrast, selv om MACC1 udviste en øget protein niveau i gruppen af ​​ældre patienter ( 61 år) med AOD score målt som 0,0654 ± 0,0298 i forhold til gruppen af ​​yngre patienter ( 61 år) (AOD score: 0,0628 ± 0,0343), ingen statistisk signifikant forskel blev observeret mellem disse to grupper (

s

0,05). Heller ingen statistisk sås signifikant forskel mellem den mandlige gruppe (AOD score: 0,0662 ± 0,0305), og den kvindelige gruppe (AOD score: 0,0612 ± 0,0335) (

s

0,05) (Tabel 2). Endvidere blev ingen statistisk signifikant sammenhæng afsløret mellem MACC1 proteinekspression og urin cytologi eller rygevaner (data ikke vist).

Sammenhængen mellem MACC1 protein ekspressionsniveauerne og samlet overlevelse (OS), sygdomsfri overlevelse (DFS ) hos patienter med nyrebækkenet karcinom

for at lette den statistiske analyse blev RPC patienter inddelt i tre grupper efter den visuelle vurdering af immunhistokemisk farvning styrke i vævssnit vi undersøgte (negativ, lav MACC1 udtryk gruppe, og høj MACC1 udtryk gruppe, henholdsvis). Den AOD score på MACC1 fås fra Image Pro Plus analyse blev åbenbart forøget i den lave MACC1 udtryk gruppen sammenlignet med den negative gruppe, og blev yderligere forhøjet i den høje MACC1 udtrykket gruppe (

s

0,001, Fig. 2A). Desuden i Spearman korrelationskoefficienten analyse måler styrken af ​​den lineære sammenhæng mellem MACC1 AOD scoringer fra Image Pro Plus analyse og visuel vurdering scoringer, blev der observeret en statistisk signifikant positiv lineær sammenhæng mellem disse to sæt scoringer hos patienter med RPC (

r

= 0,669,

s

0,001) (figur 2B).. Konkluderede vi således MACC1 ekspressionsmønsteret udledes af visuel vurdering faktisk trofast ligner udvundet fra analysen ved hjælp af Image Pro Plus AOD pointsystem.

(A), Patienter med RPC blev manuelt inddelt i tre grupper efter deres visuelle vurdering scoringer i IHC farvede vævssnit (negativ, lav MACC1 udtryk gruppe, og high MACC1 udtryk gruppe, henholdsvis). Den AOD værdi MACC1 fås fra Image Pro Plus analyse blev åbenbart forøget i den lave MACC1 udtryk gruppen sammenlignet med den negative gruppe, og blev yderligere forhøjet i den høje MACC1 udtrykket gruppe (

s

0,001). AOD = den integrerede optiske densitet (IOD) /område med positiv MACC1 farvning i hvert IHC farvning billede; B, Spearman korrelationskoefficient analyse måler styrken af ​​det lineære forhold mellem MACC1 AOD Image Pro Plus scores og visuel bedømmelse scores. En statistisk signifikant positiv lineær sammenhæng blev observeret mellem disse to sæt scoringer i RPC (

r

= 0,669,

s

0,001).

Næste, undersøgte vi prognostiske betydning af MACC1 overekspression i samlet overlevelse (OS) og sygdomsfri overlevelse (DFS) blandt RPC patienter. 28 patienter døde i 5-års opfølgning, og blandt de 28 afdøde, 18 døde med kræft metastase eller lokalt recidiv. Som vist i fig. 3A B, patienter med forhøjet MACC1 udtryk niveau bestemt af visuel vurdering pointsystem viste en signifikant kortere OS (

s

0,001) og DFS (

s

0,001) end gruppen af ​​patienter med lavt MACC1 ekspressionsniveau. Som illustreret i fig. 3A, i den høje MACC1 udtrykket gruppe, den gennemsnitlige OS sats var 29,9 måneder med den 5-årige OS sats tilnærme 70%. For patienter i den lave MACC1 udtrykket gruppe, den gennemsnitlige OS sats var 45,6 måneder, -50% højere end den høje MACC1 gruppen. Hertil kommer, at DFS lå -22 måneder som afsløret i den høje MACC1 gruppen, mens andelen næsten fordoblet i den lave MACC1 gruppen (~42 måneder) (fig. 3B). Tilsvarende 5-års DFS sats i den lave MACC1 gruppen var åbenbart højere end den sats i den høje MACC1 gruppen (57,5% versus 42,3%). Sammenfattende er højt MACC1 udtryk niveau signifikant korreleret med nedsat samlet overlevelse og sygdomsfri overlevelse i RPC patienter som afsløret i den kvantitative immunhistokemiske analyser.

Kaplan-Meier overlevelseskurver viste, at patienter i den høje MACC1 udtryk gruppe demonstreret signifikant kortere samlet overlevelse (OS) (

s

0,001) (A) og sygdomsfri overlevelse (DFS) (

s

0,001) (B) end patienter i den lave MACC1 udtryk gruppe.

univariate og multivariate analyser etableret MACC1 som en ny uafhængig prognostisk indikator for RPC

i denne undersøgelse blev univariate og multivariate analyser udført for evalueringen af prognostiske magt MACC1 overekspression (tabel 3 4). Som det fremgår af tabel 4, multivariat Cox regressionsanalyse viste, at MACC1 ekspressionsniveauerne og nuklear kvalitet er faktisk uafhængige prognostiske indikatorer for den samlede overlevelse af patienter med RPC efter justering for alder, køn og TNM stadie (Grade,

p

= 0,001, Hazard ratio: 0,086, 95% CI: 0,019 til 0,387; MACC1,

s

= 0,024, Hazard ratio: 0,282, 95% CI: 0,094-0,844 tabel 4).. Desuden blev MACC1 ekspressionsniveauerne og nuklear kvalitet også identificeret som selvstændige prognostiske faktorer for kræft overlevelse hos patienter med RPC (Grade,

s

= 0,001, Hazard ratio: 5,444, 95% CI: 1,964 til 15,093 ; MACC1,

s

= 0,002, Hazard ratio:.. 4,207, 95% CI: 1,668 til 10,613 tabel 4)

diskussion

Selvom renal pelvis carcinom er relativt mindre udbredt, er det mere vanskeligt at diagnosticere end blære urothelial carcinoma og repræsenterer en aggressiv sygdom med høje helingsfrekvens og progression. Ud over tobaksrygning, har undersøgelsen af ​​andre miljømæssige risikofaktorer foreslået, at erhvervsmæssig eksponering for industrielle kemiske stoffer også kan bidrage til udviklingen af ​​urothelial karcinom, f.eks kemoterapi (især, cyclophosphamid) og strålebehandling, kronisk blære irritation og infektioner, samt arsen eksponering [25]. Kina har verdens største rygning befolkning – ~350 millioner, cirka en fjerdedel til en tredjedel af verdens befolkning af rygere. Hertil kommer, som et resultat af hurtig, uden fortilfælde industrielle vækst, den industrielle kemisk forurening er også blevet en alarmerende stigende trussel mod sundheden for mange mennesker i Kina i de sidste 2-3 årtier. Kemikalier, der er foreslået for at fremme øvre tarmkanal urethral carcinom indbefatter aromatiske aminer, såsom benzidin (printere), 2-naphthylamin (gummi og farvestof arbejdere), 4-aminobiphenyl (frisører), polycykliske aromatiske carbonhydrider, såsom benzo (a) pyren (aluminium arbejdstagere) og diesel dampe [26]. Endvidere med forbedret cancer screening nøjagtighed i Kina i de seneste år har den dramatiske stigning i forekomsten af ​​kræft i populationen udgjorde en stor udfordring i de sidste 5-10 år. Faktisk har en højere frekvens af nyrebækken karcinom blevet identificeret i de sidste 2-3 årtier i Kina. Det er derfor vigtigt at udvikle mere effektive prognostiske indikatorer, og identificere højrisiko-patienter, for hensigtsmæssig og rettidig indgriben.

Emerging som et potentielt mindre invasiv måling, foreslås vurdering af status for vævsspecifikke biomarkører til at have kapacitet til at forbedre diagnostik og prognostisk nøjagtighed i beslutningsprocessen når de integreres i de nuværende prognostiske modeller. I de senere år har biomarkører forbundet med prognosen for patienter med øvre tract urothelial carcinomer blevet grundigt undersøgt. Faktisk har en bred vifte af vævsbaserede biomarkører blevet rapporteret og vurderet for deres potentielle anvendelse som urothelial carcinomer prognostiske indikatorer, såsom molekyler, der regulerer cellecyklus (f.eks p53, p21, pRb, p27, cyklin D1 og cyclin E1), apoptose (f.eks survivin, Bcl-2, osteopontin, bax, caspase-3), cellevækst og signaltransduktion (fx HER-2, NF-kB, EGFR, beta-catenin, galectin-3, RAS-MAPK), cellevandring og invasion (f.eks MMP), og angiogenese (f.eks vasohibin-1, VEGF, TSP-1) (revideret i [7], [8]). Som vist i denne undersøgelse, viste vi for første gang, at et unormalt højt niveau af MACC1 ekspression er associeret med en dårlig prognose for renal pelvis carcinom og er faktisk en uafhængig prognostisk indikator for sygdomsfri overlevelse og samlet overlevelse af patienter. Da der på nuværende tidspunkt har vi ingen effektiv behandling af patienter med metastatisk karcinom nyrebækkenet, kan påvisningen af ​​høje niveauer af MACC1 bidrage til at forudsige progression og prognosen af ​​sygdommen. Mærkbart, i metastatiske solide tumorvæv som afsløret i tidligere undersøgelser, foruden øget intensiteten af ​​MACC1 farvning i cytoplasmaet, ekstra nukleare farvning er også blevet anerkendt tyder forbedret nuklear translokation og den efterfølgende udvidelse af MACC1 transkriptionelle aktiviteter [15], [27 ], [28].