PLoS ONE: Cell-Free Cirkulerende Plasma hTERT mRNA er en nyttig markør for prostatakræft diagnose og er forbundet med dårlig prognose Tumor Kendetegn

Abstrakt

Baggrund

Serum prostata-specifikt antigen (PSA) er den mest udbredte markør til diagnosticering af prostatakræft (PCA). Det mangler specificitet og prædiktiv værdi, hvilket resulterer i unøjagtige diagnoser og overbehandling af sygdommen. Formålet med denne undersøgelse var at vurdere nytten af ​​plasma telomerase revers transkriptase (hTERT) mRNA som et diagnostisk og prognostisk værktøj for PCa og dens tilknytning til klinisk-patologiske parametre tumorer.

vigtigste resultater

plasma hTERT mRNA niveauer blev bestemt ved QRT-PCR i 105 konsekutive patienter med forhøjede PSA niveauer og i 68 raske frivillige. Den diagnostiske nøjagtighed, effekten som prognostisk faktor biokemisk recidiv og foreningen med tumor klinisk-patologiske parametre for plasma hTERT mRNA og serum PSA test blev bestemt ved hjælp af univariate og multivariate analyser. Resultaterne viser, at plasma hTERT-mRNA er en non-invasiv biomarkør for PCa diagnose, der viser højere følsomhed (85% vs. 83%), specificitet (90% vs. 47%), positive prædiktive værdi (83% vs. 56%) og negativ prædiktiv værdi (92% vs. 77%) end serum PSA. Plasma hTERT mRNA signifikant associeret med dårlig prognose tumor klinisk-patologiske parametre og er en væsentlig uafhængig prædiktor for PCa (p 0,0001). Univariate analyse identificeret plasma hTERT mRNA (men ikke serum PSA) som en væsentlig prognostisk faktor biokemisk tilbagefald. Plasma hTERT mRNA Kaplan-Meier kurver bekræftede signifikante forskelle mellem grupper og patienter med højere niveauer end cut-off værdi viste formindsket gentagelse overlevelse (p = 0,004), mens ingen forskelle blev observeret med serum PSA (p = 0,38). Multivariat analyse viste, at plasma hTERT mRNA (men ikke serum PSA) og scene var signifikant associeret med biokemisk recidiv.

Konklusioner

Samlet set har disse resultater viser, at hTERT mRNA er en nyttig non-invasiv tumor markør for den molekylære diagnose af PCa, giver en større diagnostisk og prognostisk nøjagtighed end PSA-analysen og kan være relevant i opfølgningen af ​​sygdommen

Henvisning:. marts-Villalba JA, Martínez-Jabaloyas JM , Herrero MJ, Santamaria J, Alino SF, Dasi F (2012) Cell-Free Cirkulerende Plasma hTERT mRNA er en nyttig markør for prostatakræft diagnose og er forbundet med dårlig prognose Tumor Kendetegn. PLoS ONE 7 (8): e43470. doi: 10,1371 /journal.pone.0043470

Redaktør: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugal

Modtaget: April 30, 2012; Accepteret: 20 juli 2012; Udgivet: 20 August, 2012

Copyright: © Marts-Villalba et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne har ingen finansiering eller støtte til rapporten

konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatakræft (PCA) er, med undtagelse af hudkræft, den hyppigst diagnosticerede kræftform blandt mænd i udviklede samfund og den anden årsag til kræftdødsfald efter lungekræft [1]. Diagnosticering af PCa er steget dramatisk i det seneste årti, takket til den omfattende brug af serum prostata specifikt antigen (PSA) test [2]. Når serum PSA stiger over grænsen på 2,5-4,0 ng /ml, er patienten ofte betragtes som en kandidat til en biopsi for at udelukke risikoen for kræft. Men brugen af ​​serum PSA til at screene for PCa er kontroversiel og ikke enstemmigt anbefalet af det internationale medicinske samfund. Denne forskel skyldes den omstændighed, at PSA-testen har begrænset specificitet og prædiktiv værdi, hvilket resulterer i et betydeligt antal falske positive og dermed unødvendige biopsier [3].

Der er flere grunde til, at det er vanskeligt at fortolke PSA-test og at foretage en præcis beslutning om, hvorvidt eller ikke at udføre en biopsi. For det første er op til 15% af kræfttilfælde (nogle af dem high-grade PCA) ikke diagnosticeret hos mænd med PSA niveauer under cut-off-niveau [4]. For det andet, selv om høje serumniveauer af PSA er forbundet med PCa, de kan også angive andre meget mindre alvorlige tilstande, såsom akut bakteriel prostatitis, godartet prostatahypertrofi (BPH), blærebetændelse, ejakulation, perineal traumer eller nylige kirurgiske procedurer i urinvejene [2]. Fra Den Europæiske Randomiseret Undersøgelse af Screening for prostatakræft (ERSPC) viste, at 10-20% af mændene havde unormale PSA niveauer og derfor opfyldt den nuværende kriterium for en biopsi, men kun omkring 24% af de pågældende mænd til sidst udviklede PCa [5].

Desuden har resultaterne af randomiserede kliniske forsøg vist, at PSA-screening giver inkonsistente resultater og kun har en begrænset fordel med hensyn til PCa dødelighed. Den ERSPC og Göteborg-undersøgelser viste en moderat reduceret PCa dødeligheden [5], [6], mens Prostate, Lung, Kolorektal, og kræft i æggestokkene Screening (PLCO) forsøg viste ingen nedgang i nævnte sats [7]. Selvom høj PSA niveauer ofte er forbundet med en mere aggressiv progression af PCa, de ikke altid korrelerer med den biologiske opførsel af sygdommen, hvilket fører til overdiagnostik og overbehandling, med de unødvendige risici for urin, seksuel og tarm dysfunktion, som dette medfører [ ,,,0],8].

i denne sammenhæng er radikalt behov for nye biomarkører til at opdage klinisk relevant PCa og udføre tidlige og præcise diagnoser af sygdommen, hvilket reducerer antallet af biopsier, mens succes afsløre så mange tilfælde af PCa som muligt.

til dette formål menneskelig telomerase er en af ​​de mest lovende tumormarkører øjeblikket er under efterforskning. er fundet telomerase aktivitet at være forhøjet i 85-100% af kræftpatienter, det er lav eller udetekterbar i normale somatiske celler [9]. Flere forskere har rapporteret påvisning af telomerase revers transkriptase (hTERT) mRNA i plasma /serum af flere typer cancer, herunder PCa [10] – [17]. I en tidligere undersøgelse af et lille antal patienter, vores gruppe detekteret hTERT mRNA i plasmaet fra PCA patienter og observeret, at dens kvantificering udgjorde en følsom og specifik fremgangsmåde til identificering PCA patienter. Desuden, når betragtet i kombination med PSA, det var en effektiv markør for tidlig PCa diagnose [16].

Ingen af ​​disse studier har sammenlignet tilstedeværelsen af ​​hTERT-mRNA i plasma /serum fra PCA patienter med klinisk-patologiske karakteristika af tumorer. Derfor er formålet med den foreliggende undersøgelse var at: i) undersøgelse, i en stor population af patienter, den kliniske relevans af hTERT plasma-mRNA som en markør for PCa og, ii) at analysere fordelingen af ​​klinisk-patologiske parametre med hensyn til hTERT mRNA plasma niveauer i PCA patienter.

Materialer og Metoder

patienter og prøvetagning

Et hundrede og fem patienter, der blev indlagt efter hinanden til hospitalet Clínico Universitario Valencia (HCUV) blev inkluderet i undersøgelsen. Kriterier var som følger: (1) patienter med forhøjet serum PSA niveauer (PSA skæringspunkt ≥4.0 ng /ml), (2) ingen forudgående diagnose af kræft af enhver type; og (3) ingen behandling for PCa før blodprøvetagning.

Alle prøver blev analyseret prospektivt uden kendskab til emner ‘klinisk-patologisk tilstand. Patienterne blev klassificeret i henhold til histopatologiske kriterierne og henføres til en af ​​tre grupper: PCa (gennemsnitsalder ± SD: 65,8 ± 7,30 år, interval: 49-80), prostatitis (gennemsnitsalder ± SD: 65,9 ± 5,69 år, interval: 54- 80), og BPH (gennemsnitsalder ± SD: 62,4 ± 8,45 år, interval: 50-71) (tabel 1). Patienter med PCa blev behandlet med radikal prostatektomi (26/46; 57%), brachyterapi (3/46, 6%), strålebehandling (13/46; 28%) og androgen deprivation terapi (4/46; 9%). Median opfølgning varighed var 10,0 år (interval: 9,5-10,4). Biokemiske kriterier gentagelse er som angivet af den europæiske sammenslutning af Urologi guider; efter radikal prostatektomi retropubic, to på hinanden følgende PSA værdier på 0,2 ng /ml eller derover og efter stråleterapi, et stigende PSA niveau 2 ng /ml over nadir PSA [18]. Ifølge disse specifikke kriterier, 7 patienter havde biokemisk recidiv

Sixty-otte aldersmatchede (gennemsnitsalder ± SD: 61,0 ± 6,32 år, interval: 50-76). Raske frivillige med ingen symptomer i de nedre urinveje eller tidligere PCa eller enhver anden form for kræft fungerede som kontroller.

Perifere venøse blodprøver blev opnået fra patienter (før transrektal ultralyd-vejledt prostatabiopsi) og raske frivillige i 8 ml blod opsamlingsrør indeholdende natriumcitrat gel og en densitetsgradient-medium (Vacutainer CPT 362.761; Beckton Dickinson). Blod mononukleære celler og plasma blev adskilt ved centrifugering i overensstemmelse med producentens anvisninger.

Denne undersøgelse blev godkendt af videnskabsetisk komité af HCUV, og alle deltagende fag gav skriftligt informeret samtykke forud for deres optagelse i undersøgelsen.

RNA Isolation og plasma hTERT mRNA Kvantificering

RNA blev isoleret fra 250 pi plasma med DNase i-behandling, som tidligere beskrevet [11], [16]. cDNA-syntese og kvantitativ real-time PCR (qPCR) har tidligere [16] blevet rapporteret. Kort sagt, blev oprenset RNA (200 ng) revers transkriberet med vilkårlige hexamerer hjælp af TaqMan Reverse Transcription reagenser kit (Applied Biosystems) ifølge producentens instruktioner. Fem pi af RT-reaktionen blev blandet med 45 pi af TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems) indeholdende 250 nM af de fremadrettede og reverse primere og 125 nM af TaqMan-proben. Primere og TaqMan prober for hTERT og 18S rRNA og PCR-betingelser er blevet beskrevet andetsteds [17]. Plasma hTERT mRNA blev normaliseret mod plasma 18S rRNA mRNA. En standardkurve blev dannet ved anvendelse af HT-29 koloncarcinomcellelinie (ATCC HTB-38). Tærskelcyklen (Ct) af hver prøve blev målt ved anvendelse af ABI 7700 detektionssekvensen systemet og transformeret til ng HT-29 hTERT og HT-29 18S rRNA under anvendelse af de standardkurver genereret i det samme forsøg. Forholdet mellem ng hTERT og ng 18S rRNA repræsenterer den normaliserede hTERT for hver prøve

Præoperativ serum PSA-værdierne blev målt ved hjælp af standard teknik anvendes i HCUV. (Elecsys total PSA assay; Roche Diagnostics) .

klinisk-patologisk Parametre

Når resultaterne af en PSA-test peger mod PCa, patienten gennemgik en ultralyd-vejledt prostata biopsi. Resultaterne af alle biopsier blev gennemgået af erfarne uro-patologer og, hvis det anses positiv, blev den pågældende patient behandlet i overensstemmelse med den normale procedure blev fulgt i urologi Unit ved HCUV i tilfælde af PSA. Tumor prognostiske faktorer såsom Gleason score, procent af positive prostata biopsier (beregnet som antallet af positive biopsier divideret med det samlede antal biopsier udføres), perineural invasion og lymphovascular invasion blev bestemt. Klinisk iscenesættelse blev udført af digital rektal undersøgelse (DRE), transrektal ultralydsscanning (TRUS) og magnetisk resonans.

statistiske metoder

Plasma hTERT mRNA niveauer og serum PSA niveauer blev sammenlignet med klinisk-patologiske parametre ved hjælp Mann-Whitney U og Kruskal-Wallis ikke- parametriske tests, da en Kolmogorov-Smirnov test viste, at hverken hTERT mRNA eller serum PSA normalt blev fordelt. Nøjagtigheden af ​​serum PSA og plasma hTERT mRNA assays til diagnosticering PCa blev bestemt ved Receiver Operating Characteristic (ROC), det tilsvarende areal under kurven (AUC ROC) og sandsynlighedsforhold (LR). Følsomheden og specificiteten af ​​hTERT mRNA og præoperativ serum PSA blev beregnet under anvendelse af bedste afskæringsværdi af ROC-kurven, som blev bestemt ifølge det højeste punkt på den lodrette akse og den længst til venstre på den vandrette akse. Associationen mellem plasma hTERT mRNA, serum PSA og klinisk-patologiske parametre blev analyseret ved anvendelse univariat analyse. Logistisk regression blev udført for at bestemme signifikante uafhængige forbehandling prædiktorer for PCa diagnose. Effekten af ​​plasma hTERT mRNA og serum PSA som prædiktorer for biokemisk tilbagefald blev vurderet ved univariate og multivariate analyser. De odds ratio (OR) beregnet ved logistisk regression og 95% konfidensintervaller (95% CI) blev rapporteret. Alle beregnede p-værdier blev to-tailed, og sandsynlighed værdier på mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

Plasma hTERT mRNA er et Nyttige Ikke-invasiv biomarkør for PCa Diagnose

Plasma hTERT mRNA-niveauer blev målt i 105 konsekutive patienter med forhøjede PSA niveauer (≥4.0 ng /ml) og 68 raske frivillige. Patientens alder, præoperativ serum PSA og plasma hTERT mRNA-niveauer er vist i tabel 1. Der blev ikke observeret forskelle i alder mellem de forskellige grupper (ANOVA, p = 0,350).

PCa screening ved hjælp PSA som den eneste indikator for prostatabiopsi afslørede, at seksogfyrre af de 105 patienter blev diagnosticeret med PCa (43,8%), 47, havde prostatitis (44,8%) og 12 led af BPH (11,4%) (figur 1). Fordeling af plasma hTERT mRNA-niveauer i patienter med PCa, prostatitis eller BPH og i kontroller er vist i figur 2A. Plasma hTERT mRNA medianværdier var signifikant højere (p 0,001) blandt de PCA patienter (median; interkvartile interval: 1,6; 0,7 til 4,08) end i kontrolgruppen (0,07; 0,02-0,10), prostatitis (0,13; 0,03 til 0,31) og BPH (0,03; 0.01-0.13) grupper. Præoperativ serum PSA var signifikant højere (p 0,001) hos patienter end blandt kontroller, selv om der blev fundet nogen signifikante forskelle mellem PCA gruppen og prostatitis eller BPH grupper (Figur 2B)

Et hundrede og fem på hinanden følgende patienter. med forhøjede PSA niveauer undergik prostata biopsi. Fyrre-seks af de 105 patienter (44%) blev diagnosticeret med PCa, og halvtreds-ni patienter (56%) viste ingen tegn på kræft. PCa: Prostata Cancer BPH:. Benign prostatahyperplasi

Data udtrykkes som median og interkvartile område. A) Kvantificering af plasma hTERT mRNA-niveauer forskelsbehandler PCA patienter og raske individer (p 0,001). B) Selvom PSA niveauer signifikant højere i PCA patienter end i kontrollerne (p 0,001), kvantificering af serum PSA ikke var i stand til at skelne mellem PCa, BPH og prostatitis patienter. BPH = benign prostatahyperplasi.

Alle patienter og kontrolprøver viste 18S rRNA forstærkning angiver integriteten af ​​den isolerede RNA (data ikke vist).

Plasma hTERT mRNA Viser Højere diagnostisk nøjagtighed end Serum PSA i PCa Diagnose

ROC kurver og den bedste afskæringsværdi blev anvendt til at bestemme følsomhed, specificitet, positiv prædiktiv værdi (PPV) og negative prædiktive værdi (NPV) af hvert assay. Følsomheden og specificiteten af ​​plasmaet hTERT mRNA assay med hensyn til påvisning PCa var 91% og 85%, henholdsvis (bedste afskæringsværdi 0,45), (bedste afskæringsværdi 0,45, med en AUC ROC kurve af 0,932 ± 0,027) , mens PSA-analysen viste en sensitivitet på 83% og en specificitet på 47% (bedste afskæringsværdi 7.2 ng /ml, (bedste afskæringsværdi 7.2 ng /ml, med et AUC ROC af 0,651 ± 0,054 (figur 3 .) den parvise sammenligning af hTERT mRNA og PSA ROC kurver bekræftede signifikante forskelle (p. . 0,001) (figur 3) PPV og NPV var højere for hTERT mRNA assay end for PSA testen Positive og negative LR var 5,99 og 0,10, henholdsvis for hTERT testen og 1,57 og 0,37, henholdsvis for PSA testen (tabel 2). for yderligere at teste den diagnostiske nøjagtighed af begge tests i PCa diagnose, valgte vi en høj følsomhed (98%) for begge prøver og beregnet specificitet og tilhørende likelihood ratio. på denne følsomhed, viste plasma hTERT assayet højere specificitet (78% vs. 10%) og højere positiv sandsynlighed ratio (4,44 vs. 1,10) end PSA-testen.

ROC kurver viser at plasma hTERT mRNA, men ikke serum PSA, diskriminerer mellem PCA patienter og raske personer eller patienter med prostatitis eller BPH. Plasma hTERT mRNA viser højere følsomhed (85% vs. 83%), specificitet (90% vs. 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) og AUC ROC (0,932 vs 0,651) end PSA med hensyn til PCa diagnose. Parvis sammenligning af hTERT mRNA og PSA ROC kurver viste signifikante forskelle (p 0,001).

Kombination af plasma hTERT mRNA og serum PSA i diagnose for PCa resulterede i en sensitivitet på 98%, en specificitet på 42%, en PPV på 57%, en NPV på 96%, en LR + på 1,69 og en LR på 0,05 (tabel 2).

Interessant, 5 af de 47 prostatitis patienter, der udviklede PCa over en femårig periode viste højere gennemsnitlige hTERT mRNA-værdier på diagnosetidspunktet end resten af ​​prostatitis gruppen (1,08 ± 0,80 vs. 0,45 ± 1,00), selv om forskellene ikke var statistisk signifikant (p = 0,26), sandsynligvis på grund af det lille antal af de analyserede sager.

Plasma hTERT mRNA associeret med dårlig prognose tumor klinisk-patologisk parametre

univariat analyse viste, at plasma hTERT mRNA-niveauer betydeligt var associeret med dårlig prognose tumor klinisk-patologiske parametre såsom Gleason score (p = 0,01), procent biopsi kerne positivitet (p = 0,002), perineural invasion (p = 0,002), lymphovascular invasion (p 0,001) og klinisk fase (p = 0,004). Ingen statistisk signifikant sammenhæng blev fundet mellem præoperative serum PSA-niveauer og Gleason score (p = 0,10), procent biopsi kerne positivitet (p = 0,34), perineural invasion (p = 0,35) eller vaskulær /lymfatiske invasion (p = 0,15). Ikke desto mindre blev betydeligt højere PSA-værdier hos patienter på et avanceret klinisk fase (p 0,01) (tabel 3)

Tabel 4 viser resultaterne af den logistiske regressionsanalyse af forbehandling indikatorer for PSA.: alder (p = 0,04) og plasma hTERT mRNA (p 0,0001) var væsentlige uafhængige prædiktorer for PCa, mens serum PSA ved diagnose (p = 0,94), DRE (p = 0,43) og TRUS (p = 0,85) ikke var uafhængige prædiktorer .

Plasma hTERT mRNA er prognostisk faktor for Biochemical gentagelse

Plasma hTERT mRNA viste sig at være en væsentlig faktor for biokemisk recidiv. Plasmaet hTERT mRNA afskæring til optimeringen sensitivitet og specificitet til at forudsige biokemisk tilbagefald på 3,15. På dette afskæringsværdi, følsomhed og specificitet var 71,4% og 91,8%, henholdsvis og AUC ROC-kurven var 0,932 ± 0,02 (figur 4). Figur 5A viser Kaplan-Meier-kurver for de to grupper er defineret af hTERT afskæringsværdi (3,15). Den gentagelse-overlevelsestid var signifikant højere (p = 0,004; Chi-square test) hos patienter med hTERT mRNA 3,15 (gennemsnit ± SD; 10,44 ± 0,26 år 95% CI: 9,92-10,96) end hos patienter med værdier ≥3.15 (gennemsnit ± SD; 8,28 ± 0,60 år 95% CI: 7,10-9,41). På den anden side, præoperativ serum PSA er ikke en forudsigelse af biokemisk tilbagefald. Den optimale afskæringsværdi til forudsigelse biokemisk tilbagefald på 14,5. Følsomhed og specificitet var henholdsvis 100% og 87,7%, henholdsvis og AUC ROC-kurven var 0,658 ± 0,05 (figur 4). Kaplan-Meier-kurver for de to grupper er defineret af PSA afskæringsværdi er vist i figur 5B. Der blev ikke observeret nogen forskel i recidiv overlevelse (p = 0,38) blandt patienter med PSA 14,5 (gennemsnit ± SD; 10.00 ± 0,34 år 95% CI: 9,34-10,68) og patienter med PSA-værdierne ≥14.5 (middel ± SD ; 9,09 ± 0,68 år, 95% CI: 7.77-10.42). Parvise sammenligning af ROC kurver viste signifikante forskelle (p lt; 0,001). (Figur 4)

ROC kurver viser, at plasma hTERT mRNA, men ikke serum PSA, er en væsentlig prædiktor for biokemisk tilbagefald. Plasma hTERT mRNA viser højere specificitet (91,8% vs. 87,7%) og AUC ROC-kurve (0,932 vs 0,658) end PSA i forhold til biokemisk tilbagefald. PSA-analysen viser højere følsomhed (71,4% vs 100%) end hTERT mRNA forudsige biokemisk recidiv. Parvis sammenligning af hTERT mRNA og PSA ROC kurver viste signifikante forskelle (p 0,001).

Kaplan-Meier kurver viser, at der er betydelige forskelle i tilbagefald overlevelse mellem høje og lave hTERT grupperne (A ) men ikke mellem høje og lave serum PSA grupper (B).

prædiktorer for biokemisk tilbagefald blev analyseret med COX regressionsanalyse (tabel 5). Multivariat analyse viste, at hTERT mRNA (OR: 1,55; 95% CI: 0,99-2,43; p = 0,04) og fase (OR: 0,13; 95% CI: 0,01-1,30; p = 0,08), er signifikant associeret med biokemisk recidiv, mens ingen af ​​de andre analyserede faktorer viste signifikant sammenhæng med biokemisk recidiv.

diskussion

Serum PSA har været meget anvendt i det sidste årti i diagnosticering og opfølgning af PSA. De største problemer, som denne tilgang er manglen på kræft specificitet og lav prædiktiv værdi af PSA, hvilket resulterer i en unødig antal prostata biopsier og /eller manglende diagnosticere sygdommen hos mænd med PSA-niveauer under cut-off værdi. Selvom høj PSA niveauer ofte er forbundet med mere aggressive tumorer, er PSA ikke altid hænger sammen med den biologiske opførsel af sygdommen, hvilket fører til overbehandling og dens konsekvenser (øget omkostninger, bivirkninger og patient angst). Udfordringen for klinikerne er at skelne mellem disse forskellige forhold, og for at undgå at basere beslutninger rent på PSA målinger. Som følge heraf er nye diagnostiske redskaber kræves for at opdage PCa så tidligt og så præcist som muligt for at reducere antallet af biopsier, mens succes afsløre så mange tilfælde af PCa som muligt.

I denne undersøgelse 105 patienter med PSA-værdier over 4,0 ng /ml undergik en prostata biopsi for at udelukke tilstedeværelsen af ​​PSA. Kun 46 af disse patienter (44%) blev til sidst diagnosticeret med PCa, mens 47 (45%) og 12 (11%) blev diagnosticeret med prostatitis og BPH, hhv. Disse resultater viser, PCa screening baseret på PSA som eneste indikator for en prostata biopsi mangler specificitet og fører til et stort antal (59/105; 56%) af unødvendige interventioner. Selvom forskellige strategier er blevet udviklet i et forsøg på at øge specificiteten af ​​PSA, herunder måling PSA hastighed, niveauer af fri /total PSA-forholdet, og brugen af ​​afskæringsværdier specifikke for patientens alder og etnisk gruppe, deres kliniske pålidelighed har ikke blevet bekræftet [2], [19]. Vores gruppe har tidligere demonstreret, i et lille antal patienter, at kvantificeringen af ​​plasma hTERT mRNA er et betydeligt følsom og specifik fremgangsmåde til identifikation PCa og at når de anvendes i kombination med serum PSA, er en effektiv metode til PCa diagnose [16 ]. Desuden i en nylig rapport, vi har vist, at plasma hTERT mRNA skelner mellem klinisk lokaliseret og lokalt fremskreden sygdom og er en indikator for tilbagefald i PCA patienter [20]. Vi har nu vurderet nøjagtigheden af ​​plasma hTERT mRNA som et diagnostisk værktøj til PCa i et større antal patienter og har udforsket sit samarbejde med de klinisk-patologiske karakteristika tumorer. Vi har også undersøgt anvendeligheden af ​​plasma hTERT mRNA som en prognose faktor biokemisk tilbagefald. Resultaterne bekræfter og udvider dem af en tidligere rapport, som indikerer de, at plasma hTERT-mRNA er en non-invasiv tumor markør, som kan anvendes til PCA diagnose, viser højere følsomhed (85% vs. 83%), specificitet (90% vs. . 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) og LR-forhold end PSA testen. angiver, at plasma hTERT mRNA assay har en høj diskriminerende effekt og dermed høj potentiel anvendelighed som diagnostisk test i PCa diagnose. Nogle medicinske foreninger anbefaler reducere PSA cut-off point fra 4,0 ng /ml til 2,5 ng /ml for at øge følsomheden og dermed opdage flere kræftformer på et tidligere tidspunkt. For yderligere at undersøge den diagnostiske nøjagtighed PSA testen, valgte vi to PSA-værdierne for tiden anvendes i klinisk praksis (PSA ≥4.0 ng /ml og ≥2.5 ng /ml) og beregnet deres følsomhed, specificitet, PPV og NPV og positive og negative LR . Vi har observeret, hvordan reducere PSA cut-off point øger følsomheden, men reducerer specificitet og PPV. På disse cut-off point for PSA, plasma hTERT-assayet viser meget højere specificitet (85% vs. 8% og 5%), PPV (83% vs. 47% og 46%) og positiv LR (5,99 vs. 1,09 og 1,05), men lignende følsomhed (91% vs. 100%), NPV (92% vs. 100%) og negative LR (0,10 vs 0,00) (tabel 3). Kombination af plasma hTERT mRNA og PSA forbedrer ikke diagnostisk nøjagtighed. En begrænset stigning i følsomhed (91% for hTERT vs. 98% for hTERT /PSA kombination) resulterer i betydelig reduktion i specificitet (85% vs. 42%), PPV (83% vs. 57%) og LR + (5,99 vs. 1,69).

Multivariat analyse identificeret alder og plasma hTERT mRNA ved diagnose som signifikante uafhængige prædiktorer for PCa, mens serum PSA på diagnosetidspunktet, DRE og TRUS ikke var prædiktorer i denne henseende.

taget sammen indikerer disse resultater, at plasmaet hTERT mRNA assay har en høj diskriminerende effekt og er derfor potentielt nyttige til diagnosticering PSA.

Interessant, 5 af de 47 prostatitis patienter, der udviklede PCa over en fem-årig periode viste højere gennemsnitlige hTERT mRNA-værdier end resten af ​​deres gruppe. Dette fund giver yderligere støtte til tanken om, at plasma hTERT mRNA har konsekvenser for opfølgning og minimal residual påvisning af sygdommen, selv om antallet af patienter i vores undersøgelse var for lille til at drage endelige konklusioner. Andre forfattere har offentliggjort lignende resultater, rapporterer, at telomerase RNA kan være nyttige til diagnosticering af avancerede PCa og overvågning af patienter til påvisning af minimal residual sygdom [15]. Det skal bemærkes, at hTERT-RNA er blevet evalueret fra plasmaprøver, således transskription af hTERT fra ikke-tumor kilder, såsom aktiverede lymfocytter, kunne ikke udelukkes. Desuden kan tilstedeværelsen af ​​plasma hTERT mRNA over afskæringsniveauet indikere tilstedeværelsen af ​​cirkulerende tumorceller, yderligere underbygger den ide, at kvantitativ analyse af frit cirkulerende RNA kunne være nyttige til diagnosticering og overvågning af PCA patienter og kan have konsekvenser i minimal residual disease detektion.

mekanismen ved hvilken cellefri cirkulerende RNA frigives til blodbanen er ukendt, som er kilden til cirkulerende RNA. er blevet foreslået en hæmatopoietisk oprindelse af cirkulerende RNA, selvom korrelationen i mutationer, mikrosatellitændringer, promotor-methylering i parret tumor og plasma /serumprøver tyder på, at cirkulerende RNA kan stamme fra tumorvæv [21]. Højere cellefrie cirkulerende RNA-niveauer er blevet fundet i patienter med maligne læsioner end hos patienter uden tumorer. Imidlertid høje niveauer af cirkulerende RNA er ikke cancer-specifikke og øgede niveauer er blevet fundet i patienter med inflammatoriske processer og godartede læsioner. Nylige rapporter har korreleret niveauerne af flere tumormarkører i plasma /serum med kliniske og patologiske egenskaber ved sygdommen antyder, at celle-frit cirkulerende RNA kan tilvejebringe biomarkører for kræft diagnose, opfølgning af patienter efter operation og overvågning af behandlingseffekt [22 ].

En af de vigtigste resultater af den foreliggende undersøgelse er sammenhængen mellem høje plasma hTERT mRNA værdier og klinisk-patologiske parametre for tumorer. Til forfatternes viden, er dette den første rapport, der viser, at plasma hTERT mRNA signifikant associeret med dårlig prognose PCA tumor egenskaber, såsom Gleason score (p = 0,01), tumor fase (p = 0,004), og vaskulær (p 0,001 ) og perineural invasion (p. 0,001)

Selv om antallet af patienter, der viser biokemisk tilbagefald er begrænset (kun syv patienter), vores resultater viser også, at plasma hTERT-mRNA er en væsentlig prognostisk faktor for fornyet. Kaplan-Meier overlevelseskurver bekræftede signifikante forskelle mellem grupper, så patienter med plasma hTERT mRNA niveauer over cut-off værdi viste signifikant formindsket gentagelse overlevelse end patienter med niveauer under cut-off værdi. På den anden side, serum PSA er ikke en prædiktor for biokemisk tilbagefald og blev ikke observeret nogen signifikante forskelle i recidiv-fri tid mellem patienter over og under cut-off værdien. Multivariat analyse bekræftede, at plasma hTERT mRNA er (sammen med etape) en uafhængig prædiktor for biokemisk recidiv hvorimod ingen af ​​de andre analyserede faktorer (herunder PSA) viste signifikant sammenhæng med biokemisk recidiv.

Flere forfattere har rapporteret lignende resultater i andre former for kræft, hvilket indikerer, at plasma hTERT mRNA kan have prognostiske implikationer [12] – [13], [23] – [24]. Miura et al. målt hTERT mRNA og epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) mRNA i serum fra patienter med lungecancer og viste, at hTERT-mRNA uafhængigt var forbundet med tumorstørrelse, tumor nummer, tilstedeværelse af metastase, gentagelse og rygning. EGFR mRNA korreleret med avancerede kliniske trin og begge mærker faldt betydeligt efter kirurgi [12]. De samme forfattere viste, at serum hTERT mRNA er nyttig til diagnose af gynækologiske cancere. Disse patienter viser højere serum hTERT mRNA end patienter med benigne sygdomme og raske personer. Serum hTERT mRNA uafhængigt korreleret med klinisk fase, CA125 og histologiske parametre i ovariecancer [22]. Terrin et al. viste, at plasma hTERT mRNA er en nyttig markør til påvisning og overvågning af kolorektal carcinom [17].

Udover telomerase-aktivitet, kan humane kræftceller også bruge en telomerase-uafhængig mekanisme kaldet alternativ forlængelse af telomerer (ALAT). Selvom ALT mekanisme er forholdsvis almindelig i sarkomer og astrocytomer, har det aldrig været rapporteret i PSA. Heaphy et al. har vurderet 1.176 PCA væv (herunder både adenokarcinomer og små celle carcinomer) og ikke finde en enkelt ALT-positive tumor [25] indikerer, at ALT mekanismen ikke bruges af PCA celler til at opretholde deres telomerer. Derfor bør plasma hTERT mRNA assay registrere alle PCA tilfælde.

Flere nye biomarkører til stede i biologiske væsker er i øjeblikket under evaluering for at bestemme deres potentiale i den tidligere afsløring og prognose af PSA. Altimari et al. viste, at cirkulerende frie plasma hTERT DNA er højere hos patienter med PCa end i kontrolpersoner og korrelerer med tumor stadie. Forfatterne konkluderer, at fri plasma hTERT DNA er en lovende biomarkør til tidlig diagnose og overvågning af PCa [26].