PLoS ONE: Association blandt polymorfier i EGFR Gene Exon, Livsstil og Risiko for mavekræft med kønsforskelle i kinesisk Han Subjects

Abstrakt

Baggrund

epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) gen spiller en central rolle i tumor overlevelse, invasion, angiogenese og metastatisk spredning. Nylige undersøgelser viste, at gastrisk cancer (GC) var associeret med polymorfier af EGFR-genet og miljømæssige påvirkninger, såsom livsstilsfaktorer. I denne undersøgelse blev syv kendte SNP’er i EGFR exoner undersøgt i en højrisiko-kinesiske befolkning i Jiangsu-provinsen for at teste, om genetiske varianter af EGFR exons og livsstil er forbundet med en øget risiko for GC.

Metode /Principal resultaterne

Et hospital-baseret case-kontrol undersøgelse blev udført i Jiangsu provinsen. Resultaterne viste, at ryge, drikke og præference for salt mad markant var forbundet med risiko for GC. Forskellene i livsstil mellem mænd og kvinder kan være så grunden til højere forekomst hos mænd end hos kvinder. Syv exon SNPs blev genotype rs2227983, rs2072454, rs17337023, rs1050171, rs1140475, rs2293347, og rs28384375. Det blev bemærket, at de variante rs2072454 T-allel og TT genotype signifikant var forbundet med en øget risiko for GC. Interessant nok vores resultat foreslog ACAGCA haplotypen kan være forbundet med nedsat risiko for GC. Der blev dog ikke signifikant sammenhæng undersøgt mellem de øvrige seks SNPs og risikoen for GC både i den samlede befolkning og alder-matching befolkning selv med kønsforskelle.

Konklusioner

Rygning, alkohol og præference for salt mad var signifikant associeret med risiko for GC i Jiangsu provinsen med kønsforskelle. Selv om kun én SNP (rs2072454) var signifikant associeret med en øget risiko for GC, kombinerede de seks EGFR exon SNPs sammen kan være nyttig til at forudsige risikoen for GC

Henvisning:. Zhang J, Zhan Z, Wu J , Zhang C, Yang Y, Tong S, et al. (2013) Forening blandt polymorfier i EGFR Gene Exon, Livsstil og Risiko for mavekræft med kønsforskelle i kinesisk Han Emner. PLoS ONE 8 (3): e59254. doi: 10,1371 /journal.pone.0059254

Redaktør: Eithne Costello, The Liverpool Cancer Research UK Centre, England

Modtaget: September 19, 2012; Accepteret: 13 februar 2013; Udgivet: Marts 29, 2013 |

Copyright: © 2013 Zhang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Priority Academic Program Udvikling af Jiangsu højere uddannelsesinstitutioner (PapD), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2008461), National Natural Science Foundation of China (30.973.715 og 81.001.502), forskningsfonden for ph.d.-programmet for videregående uddannelse i Kina (20103237110011) , Unge Lærere i Nanjing Universitet for traditionel kinesisk medicin. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Selv om både forekomsten og dødeligheden af ​​mavekræft (GC) er faldet i de seneste år, GC var den fjerde mest almindelige malignitet i verden i 2008, med cirka 989.600 nye tilfælde. Mænd generelt udvikle GC dobbelt så ofte som kvinder, og omkring 72% af nye tilfælde forekommer i udviklingslandene. Generelt de højeste incidensrater er i Asien, især i østasiatiske lande som Korea, Japan og Kina [1].

Faktisk næsten 40% af alle GC tilfælde forekommer i Kina, og der er en bemærkelsesværdig geografisk variation i GC satser hele Kina [2]. Mere end to tredjedele af patienter diagnosticeret med GC i Kina har inoperabel sygdom og en median overlevelse på seks til ni måneder. Desuden patienter med resektable tumorer, de lokale og fjernmetastaser er høj, og 5-års overlevelse er mindre end 30% [3]. Sun

et al.

[4] vurderet indvirkningen af ​​GC på det kinesiske befolkning ved epidemiologisk analyse af dets dødelighed fordeling 1990-1992, viste resultaterne, at GC var den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald i Kina .

det er nu almindeligt accepteret, at patogenesen af ​​GC indebærer en multifaktoriel samspil mellem miljømæssige udløsere og genetisk modtagelighed. Epidemiologiske studier har identificeret alder, kønsforskelle og en række miljømæssige faktorer, der kan bidrage til udviklingen af ​​GC, herunder en salt kost, rygning, alkoholforbrug og

Helicobacter pylori

infektion [5] – [8] . Andre undersøgelser har identificeret værten faktorer og genetiske ændringer, der også spiller en vigtig rolle i udviklingen og progressionen af ​​GC gennem gen-miljø interaktioner [9], [10].

epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) gen er placeret i den korte arm af humant kromosom 7, og danner en glycoprotein med en molekylvægt på 170 kDa, som har en høj affinitet for dets ligander, herunder epidermal vækstfaktor (EGF) og transformerende vækstfaktor alfa (TGF-α). EGFR deltager i flere væsentlige tumorgene mekanismer, såsom tumor overlevelse, invasion, angiogenese og metastatisk spredning. EGFR ekspression er blevet observeret i mange humane tumorer, og flere undersøgelser vist, at overekspression af EGFR korrelerer med en dårligt resultat [11]. I GC, EGFR overekspression korrelerer med avanceret tumor stadie og en dårlig klinisk resultat [12]. Men de roller, EGFR overekspression og genetiske ændringer spiller i gastrisk carcinogenese fortsat uklare. Desuden har kun et par enkelt nukleotid polymorfier (SNP) vist sig at associere med GC udvikling og resultat [11], [13].

I denne undersøgelse har vi en hypotese, at de miljømæssige påvirkninger og kønsforskelle fungere som effekt modifikatorer på en baggrund af genetisk variation i EGFR exoner, der kan påvirke EGFR funktion, derved forme GC modtagelighed. For at teste denne hypotese blev et hospital-baseret undersøgelse udført, hvor 387 GC tilfælde og 392 kræft-fri kontrol i en høj-risiko kinesiske befolkning blev genotype i syv kendte SNP’er i EGFR exons, nemlig rs2227983 A G, rs2072454 C T, rs17337023 A T, rs1050171 G A, rs1140475 C T, rs2293347 G A, og rs28384375 T . C

Materialer og metoder

Rekruttering af Cases og Kontrol Deltagere

I første omgang 401GC tilfælde og 420 kontroller blev identificeret; 3 tilfælde af kræft manglende spørgeskemaer andre såvel som 11 tumorer end adenocarcinom blev udelukket; 18 kontroller blev udelukket af umådeholden serum kræftrelaterede biomarkører og 10 kontroller blev udelukket af geografisk afvigelse. Samlet set en samlet befolkning med 387 tilfælde og 392 kontroller var tilgængelige for den aktuelle undersøgelse på grundlag af fremadrettede effekt analyser, det er en skam, at kontrollen var omkring 10 år yngre end sager dermed en alder-matching population med 294 tilfælde og 294 kontroller blev ekstraheret fra den samlede befolkning til sammenstilling af alder-matching. Alle emner var genetisk relateret etniske han-kinesere. De patienter med primær GC blev rekrutteret fra Kirurgisk Afdeling Gastroenterologisk i Jiangsu Provence Hospital i traditionel kinesisk medicin (TCM) mellem januar 2008 og juli 2010 i Nanjing by, Jiangsu-provinsen. De kræft-fri raske kontrolpersoner blev fortløbende rekrutteret fra Jiangsu Hospital TCM, og de var hospitalets besøgende for en årlig check-up i samme periode. For at blive inkluderet i undersøgelsen, patienterne (a) hanner eller hunner over 20 år gamle, men under 80 år, (b) skulle være af Han kinesisk etnicitet (selvrapporteret), (c), kom fra tre regioner i Jiangsu provinsen og skulle være en lokal beboer i mindst 5 år, (d) skulle have nyligt histopatologisk diagnosticeret primær GC, (e) måtte mangle tidligere maligne tumorer i andre organer, og (f) ikke havde haft antitumorterapi før ansættelsen , herunder kemoterapi og strålebehandling. Trænede interviewere brugt en pre-testet spørgeskema for at indsamle epidemiologiske data fra deltagerne, nemlig demografiske faktorer som alder og køn, og kendte risikofaktorer for GC (såsom rygning, alkoholforbrug, og en familie historie af mave-cancer-tarmkanalen) . Personer, der røget en eller flere gange om dagen i over et år blev defineret som rygere, og dem, der forbruges tre eller flere alkoholholdige drikkevarer om ugen i over 6 måneder, blev anset for at være kroniske drikkende [14], [15]. Efter at have underskrevet informeret samtykke former, hvert individ donerede 3-5 ml perifert blod, der skal anvendes til genomisk DNA ekstraktion. Forskningen Protokollen blev godkendt af den institutionelle gennemgang bestyrelse Jiangsu Provence Hospital TCM.

Genomisk DNA Isolering fra Perifere blodlegemer

En kommerciel blod DNA-ekstraktion kit (AxyPrep-96 kit, Axygen, CA, USA) blev anvendt til at ekstrahere genomisk DNA fra blodprøver. De oprensede DNA blev opbevaret ved -20 ° C indtil de blev brugt til genotype testning. Kvaliteten af ​​DNA’et blev vurderet ved agarosegelelektroforese.

Genotypebestemmelse

Polymerasekædereaktion-ligering påvisning (PCR-LDR) fremgangsmåder blev anvendt til genotypebestemmelse [16]. Primere blev syntetiseret af Shanghai Sangon Biologisk Engineering Technology and Services (No.698, Xiangmin Rd, Songjiang District, Shanghai, Kina). Hvert sæt af ligase påvisningsreaktion prober bestod en fælles probe og to diskriminerer prober for de to typer (tabel S1).

Målet DNA-sekvenser blev amplificeret ved anvendelse af en multiplex-PCR-metode. PCR’er for hvert fag blev udført i et slutvolumen på 20 pi indeholdende 1 × PCR-buffer, 3,0 mmol /l MgC

2, 2,0 mmol /l deoxynukleotidtriphosphater, 1 pi primere, 0,2 pi QIAGEN HotStarTaq polymerase (QIAGEN, Kina ), 4 pi 1 × Q-opløsning og 10-20 ng genomisk DNA. Termisk cyklisering blev udført i fem SNP’er (rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs2293347 og rs2072454) i Gene Amp PCR-system 9600 (PerkinElmer) med en indledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, efterfulgt af 35 cykler af denaturering ved 94 ° C i 30 s, annealing ved 59 ° C i 1 min og ekstension ved 72 ° C i 1 min, efterfulgt af en endelig ekstension ved 72 ° C i 7 min. Protokollen for rs28384375 amplifikation bestod af en indledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, efterfulgt af 35 cykler af denaturering ved 94 ° C i 30 s, annealing ved 56 ° C i 1 min og ekstension ved 72 ° C i 1 min efterfulgt af en endelig ekstension ved 72 ° C i 7 min. Protokollen for rs1050171 bestod af en indledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, efterfulgt af 35 cykler af denaturering ved 94 ° C i 30 s, annealing ved 53 ° C i 1 min og ekstension ved 72 ° C i 1 minut, efterfulgt af en endelig ekstension ved 72 ° C i 7 min.

ligeringsreaktionen for hvert individ blev udført i et slutvolumen på 10 pi indeholdende 1 × NEB Taq DNA-ligasepuffer, 12,5 pmol af hver probe mix , 0,05 pi Taq DNA-ligase [NEB Bioteknologi (Beijing)], og 1 pi multi-PCR-produkt. Probesekvenserne er vist i tabel S2. I alt blev 35 cykler bestående af 95 ° C i 2 min, 94 ° C i 30 s, og 60 ° C i 2 minutter udført. De fluorescerende produkter ligasen afsløring reaktioner blev differentieret ved en ABI sequencer 377 (figur S1). For at bekræfte nøjagtigheden af ​​PCR-LDR genotypebestemmelse metode blev direkte DNA-sekventering af tilfældigt udvalgte PCR-produkter udført. Andelen af ​​sekventering prøverne var omkring 5%. De PCR-LDR genotype Resultaterne viste fuldstændig enig med de direkte DNA-sekventering resultater.

Statistiske Analyser

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS softwareversion 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). For at sammenligne de observerede genotypefrekvenser i kontrolgruppen med de forventede frekvenser, blev Hardy-Weinberg ligevægt (HWE) blev testet af en goodness-of-fit χ

2-test. Cases og kontroller blev sammenlignet med hensyn til demografiske karakteristika, livsstilsfaktorer, og allelfrekvenserne af hver SNP ved hjælp af

χ

2

-test. For hver polymorfi blev odds ratio (OR) og 95% konfidensintervaller (CI) beregnet ud fra betingede logistiske regressionsmodeller til at estimere den vigtigste virkning af hver polymorfi med GC mens du justerer for kontinuerlige alder, køn og livsstilsfaktorer. Logistisk regression analyser ved hjælp af den store allel som reference var ansat til at estimere justerede yderste periferi, 95% CIs, og

P

værdier. Vi fandt imidlertid, at køn og alder variabel ikke var i overensstemmelse med antagelsen om proportionalitet. Således blev køn lagdeling og alder-matching bruges til at måle yderste periferi og 95% kreditinstitutter. For livsstil variabler, der viste signifikante forbindelser med GC i analyser kontrolleret for kun matchende faktorer, vi yderligere vurderet deres uafhængighed i analyser justeret for yderligere potentielle konfoundere (dvs. rygning, alkohol, salt mad, spise tid og spise morgenmad) i en alder-matching befolkning. Og FASE softwarepakke version 2.0 blev anvendt til at udlede haplotypefrekvenser baseret på de observerede EGFR genotyper. Alle

P

værdier var tosidede og en

P Drømmeholdet værdi. 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

Karakteristik af forsøgspersonerne

Kendetegnene for disse forsøgspersoner var i overensstemmelse med tidligere beskrevet [17], [18]. I dette papir, blev den samlede befolkning med 387 tilfælde og 392 kontroller og en alder-matching population med 294 tilfælde og 294 kontroller indeholdt i de aktuelle analyser. Køn, alder og geografisk region fordeling af forsøgspersonerne er vist i tabel 1.

For at undersøge forskellene i GC forekomsten mellem mænd og kvinder, blev fordelingen af ​​udvalgte livsstil variabler analyseres med kønsforskelle. Resultaterne viste, at seks livsstilsfaktorer (dvs. regelmæssigt tager måltider, præference for salt mad, spise tid, rygning status, drikker status, og spise morgenmad) var signifikant korreleret til risikoen for GC, og deres virkninger kan ændres efter køn og alder. Fire livsstilsfaktorer, dvs. præference for salt mad, spise tid, rygning status og drikke status, var signifikant forskellig mellem mænd og kvinder (

P

0,05) (Tabel 2). Det blev bemærket, at procentsatserne for hannerne transporterer usunde kostvaner, såsom præference for salt mad, korte spise tid, ryge og drikke, var betydeligt højere end hunnerne (

P

0,05), som kan være som følge af højere forekomst hos mænd end hos kvinder. I den samlede befolkning, regelmæssigt at tage måltider og spise morgenmad faldt risikoen for kvindelige GC, mens drikke kan øge risikoen for mandlige GC (tabel 3). Desuden har både præference for salt mad og rygning øger risikoen for mandlige og kvindelige GC (

P

0,05). Lignende resultater blev også fundet efter alder-matching, der regelmæssigt tager måltider faldt risikoen for GC og præference for salt mad og rygning øger risikoen for både mandlige og kvindelige GC (

P

0,05, tabel 4). Der var imidlertid to undtagelser, der drak øget risikoen for mandlige GC (

P

0,05), men ikke kvindelig GC (

P

0,05) måske på grund af den begrænsede kvindelige befolkning, mens daglig spise morgenmad faldt risikoen for kvindelige GC (

P

0,05), men ikke male GC (

P

0,05). (tabel 4)

Genotypning Distribution og Risiko for GC

i nærværende undersøgelse blev opdaget kun T allel af missense locus rs28384375. Med hensyn til de seks resterende SNPs, de observerede genotypefrekvenser i kontrollerne var i HWE. Da ingen statistisk signifikans blev tabt, kun de justerede statistiske resultater er vist i tabellerne. I den samlede befolkning, blev foreningen blandt fordelingen af ​​EGFR gen alleler, genotyper og risikoen for GC vist i tabel 5. Kun en lille forskel blev observeret med hensyn til allel distribution af rs2072454 (

χ

2

= 3,844,

P =

0,050), og logistisk regression analyser viste, at variant af denne allel kan være forbundet med GC risiko (justeret OR = 1,23, 95% CI = 1,00-1,50). Imidlertid blev ingen signifikante forskelle mellem tilfælde og kontrol i form af allel fordeling observeret med kønsforskelle. Den rs2293347 polymorfi var forbundet med mandlige GC tilfælde, fordi 73,0% af GC sager foretaget en G allel sammenlignet med 29,5% af sundhedskontrol (justeret OR = 6,45, 95% CI = 4,89-8,51,

P

0,001 ), men ingen genotyper var signifikant forbundet med risiko for GC. I modsætning kvindelige befolkning GA genotypen kunne mindske risikoen for kvindelige GC grund af 34,5% af GC tilfælde udføre en GA genotype sammenlignet med 38,9% af sundhedskontrol, men ingen signifikante forskelle mellem fordelingen af ​​allel og genotypefrekvenser (

P

0,05). Derudover blev ingen signifikante forskelle undersøgt på de andre fire SNPs (

P

0,05), dvs. rs2227983, rs17337023, rs1050171 og rs1140475 mellem tilfælde og kontrollerer selv med kønsforskelle

i en alder-matching population blev foreningen blandt fordelingen af ​​EGFR gen alleler, haplotyper og risikoen for GC vist i tabel 6. En signifikant forskel blev observeret med hensyn til allele fordeling (

χ

2

= 4,795,

P =

0,029) og genotype distribution (

χ

2

= 6,668,

P =

0,036) af rs2072454, bortset resultaterne i tabel 5. Derudover analyser logistisk regression viste, at variant af rs2072454 T-allelen kan øge risikoen for GC (justeret OR = 0,77, 95% CI = 0,61-0,97;

P

0,05 ). Ifølge genotype distribution, blev en signifikant forskel også observeret i den mandlige befolkning (

χ

2

= 7,914,

P =

0,019) snarere end kvindelige befolkning (

χ

2

= 0,452,

P =

0,798). Men der var ingen signifikante forskelle mellem cases og kontroller selv med kønsforskelle for de resterende SNPs, nemlig rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs1050171 og rs2293347 (

P

0,05).

for at udelukke miljøpåvirkning, undersøgte vi sammenhængen mellem de potentielle tre GC-relaterede SNP’er og risikoen for GC i en alder-matching befolkning bærer sundhed livsstil (tabel 7). En tydelig forskel blev undersøgt med hensyn til genotype fordeling af rs2072454 (

χ

2

= 6,036,

P =

0,049). Specielt, analyser logistisk regression viste, at TT genotypen signifikant øget risiko for GC i befolkningen med daglige spise morgenmad (justeret OR = 1,92, 95% CI = 1,07-3,44,

P

0,05).

Exon ikke kun koder aminosyresekvensen af ​​proteinet, men også indeholde sekvenser, der påvirker translation eller mRNA nedbrydning [19]. Den loci blev kombineret og underkastet haplotype inferens analyse under anvendelse af FASE 2.0 programmet. Der var fire mulige haplotyper i den samlede befolkning og tre mulige haplotyper i alderen-matching befolkning, med en frekvens på 4% (tabel 8, tabel 9). Sammenlignet med GTTGCG haplotype, analyser logistisk regression viste, at ACAGCG haplotypen var forbundet med en signifikant nedsat risiko for GC (OR = 0,67, 95% CI = 0,49-0,92,

P

0,05 korrigeret for alder, køns- og livsstilsfaktorer) i den samlede befolkning (tabel 8) snarere end alder-matching befolkning (OR = 0,83, 95% CI = 0,58-1,19,

P

0,05 korrigeret for alder, køn og livsstil faktorer) (tabel 9). De øvrige haplotyper var forbundet med en signifikant nedsat risiko for GC (justeret OR = 0,69, 95% CI = 0,52-0,90 for den samlede befolkning, justeret OR = 0,74, 95% CI = 0,56-0,99 for alderen-matching befolkning). Sammenlignet med ACAGCG haplotype kunne ACAACG mindske risikoen for GC (OR = 0,61, 95% CI = 0,40-0,94 korrigeret for alder, køn og livsstil) i den samlede befolkning, men

P Drømmeholdet værdi gjorde ikke statistisk signifikans ved Bonferroni korrektion (tabel 8).

diskussion

Selv om en lang række nye GC sager blev set i hele verden i de seneste årtier, den præcise mekanismer bag gastrisk carcinogenese er endnu ikke fuldt forstået. Svarende til tidligere forskning [20], [21], viste vores resultat, at mænd generelt har udviklet GC dobbelt så ofte som kvinder i Kina. Det blev foreslået af Michael

et al.

, At meget af den globale variation i forekomsten af ​​kræft er blevet tilskrevet miljømæssige påvirkninger, herunder kosten præferencer og usund livsstil faktorer [22]. I den foreliggende undersøgelse, derfor, vi var interesseret i at teste, om nogle usunde livsstilsfaktorer kan øge risikoen for GC med kønsforskelle i Kina. Seks livsstilsfaktorer, herunder regelmæssigt tager måltider, præference for salt mad, spise tid, rygning status, drikker status, og spise morgenmad, blev identificeret til at være påvirket af risikoen for GC med kønsforskelle, hvilket var i overensstemmelse med de tidligere undersøgelser i det østlige Kina [20], [23], [24]. Især præference for salt mad, drikke og ryge var de stærkeste og mest konsistente risikofaktorer for GC.

harmes forsker foreslog, at et højt indtag af salt (natrium) kan øge risikoen for GC [21], [ ,,,0],24] – [26]. Det blev også dokumenteret ved vores observation, at GC patienter i Jiangsu provinsen var præference for salt mad, såsom saltet kød, syltede grøntsager, og syltede grøntsager juice, som kan være forurenet med N-nitrosoforbindelser. Men de N-nitrosoforbindelser var den hyppigst foreslåede relateret til den øgede risiko for øvre-gastrointestinale cancere [27]. Drikke og rygning, en anden to dominerende risikofaktorer for GC i verden [28], blev også undersøgt i denne undersøgelse. Vi fandt en signifikant sammenhæng mellem at drikke og GC risiko i Jiangsu provinsen. Det var det ved et laboratorieundersøgelse, at rygning kan øge apoptose i rotte gastrisk mucosa ved en stigning i XO aktivitet [29], og alkohol kan også øve indflydelse på syresekretion, gastrisk tømning, og visse syrerelaterede sygdomme, såsom gastritis ledsaget med beskadigelse af maveslimhinden, og følgende inflammatorisk reaktion vil på sin side fremme gastrisk celleproliferation og differentiering [30]. I fremgangsmåden kan de N-nitrosoforbindelser og mykotoksiner fra nogle salt mad fremkalder genmutationer [31], [32], således præference for salt fødevarer kan være den oprindelige risiko for GC. Og beviser pegede på en forening med involverede veje i udviklingsprocesser [33]. Vigtige molekyler af disse veje var receptortyrosinkinaserne, som viste sig at være afvigende aktiveres eller overudtrykt i en række tumorer, og derfor udgør lovende mål for terapeutisk indgreb [13].

EGFR var en af ​​de vigtigste molekyler , og mange former for evidens tyder på, at stærkt invasive GC er forbundet med afvigende aktivering eller overaktivering af EGFR skyldes genamplifikation eller strukturelle ændringer [13]. Meget nylig, en case-kontrol undersøgelse af 61 tilfælde og 20 kontroller i Henan-provinsen, som ligger i midten Kina, viste, at EGFR rs28384375 C /T polymorfi kan fremme forekomsten og udviklingen af ​​GC [34]. Desuden en anden case-kontrol undersøgelse af 138 tilfælde og 170 kontroller i Jiangxi-provinsen, som ligger i det sydøstlige Kina, viste, at EGFR rs763317 G /A polymorfi kan associere med en øget risiko for GC [35].

EGFR er en vækstfaktor receptor tyrosinkinase og hører under receptortyrosinkinase-superfamilien, hvis medlemmer er karakteriseret ved et ekstracellulært domæne (hvor ligand bindingsligander finder sted), en kort lipofilt transmembrandomæne og et intracellulært domæne, som huser tyrosinkinase aktivitet [36]. EGFR kan aktiveres ved bindingsligander, såsom EGF og TGF-α, og det spiller afgørende roller i udvikling, proliferation og differentiering. Aktiveringen af ​​EGFR kan bidrage til omdannelsen af ​​cellulære fænotyper og giver tumorceller med betydelig vækst og overlevelse fordele [37]. Mange humane tumorer udviser EGFR overekspression, som er korreleret med en avanceret tumor stadie eller et dårligt klinisk resultat, såsom ikke-småcellet lungecancer [38], kolorektal cancer [39], brystkræft [40], hoved- og halscancer [ ,,,0],41], blærekræft [42], og GC [43].

der er i øjeblikket stigende interesse for SNP-mutationer i EGFR, da de kan påvirke effekten af ​​EGFR-tyrosinkinaseinhibitoren (TKI) behandling i forskellige kræft [44], kolorektal cancer [39], ikke-småcellet lungecancer [45], GC [46] – [49]. Det er velkendt, at exons ikke kun koder aminosyresekvensen af ​​proteinet, men også indeholde sekvenser, der påvirker translation eller mRNA nedbrydning [19]. Således kunne EGFR exon SNPs påvirke EGFR-genekspression og /eller protein-aktivitet og derved at ændre affiniteten af ​​EGFR for ikke blot dets ligander, men også for anticancermidler, der er målrettet dette protein. Faktisk Puyo

et al. Hej, fundet, at mutationer i exonerne 18-21 af EGFR forøge aktiviteten af ​​TKI’er, medens udeladelsen af ​​exonerne 2-7 er forbundet med glioblastom onkogenese [49]. Desuden viste to kliniske undersøgelser, der SNPs i EGFR exon 18, 19, 21, og 25 påvirker den kliniske effekt af gefitinib og kan være potentielle biomarkører for forudsigelse af det kliniske resultat af gefitinib-behandlede patienter med fremskreden ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) [50], [51].

i den foreliggende undersøgelse, de seks exons SNPs i EGFR var lidt forbundet med risiko for GC både i den samlede befolkning og alder-matching befolkning selv med køn forskelle. Det bemærkedes, at SNP rs2072454 var signifikant associeret med risiko for GC. Især blev varianten rs2072454 T-allel og TT genotype forbundet med en øget risiko for GC. Men de rs2227983, rs17337023, rs1050171 og rs1140475 SNPs ikke forholde med GC risiko. Med hensyn til missense locus rs28384375 blev kun T-allelen detekteres i tilfælde og kontroller. Mange rapporter foreslog, at flere EGFR SNPs, herunder rs2227983 (også betegnet som Arg521Lys eller R497K) [39], [52], [53], rs1050171 (også betegnet som Q787Q) [54], [55] og rs2293347 (C2982T) [ ,,,0],56], var mere tilbøjelige til at påvirke den biologiske opførsel af tumorer (såsom tumorvækst, invasion, metastase, og progression) end at definere modtagelighed for udvikling af kræft. Da EGFR, en vigtig mediator af angiogenese, kan regulere sit mål gener såsom VEGF, som direkte kan påvirke tumor biologisk adfærd. Disse resultater vil også forklare, hvorfor EGFR SNP kan tjene som vigtige determinanter for et svar på EGFR TKI kemoterapi [11]. Derfor kan disse genmutationer give den kompleksitet og forlegenhed til GC behandling og overlevelse [57].

Når Puyo

et al

. [49] analyseret sammenhængen mellem specifikke EGFR funktionelle polymorfier og anticancerlægemiddel-aktivitet i 60 humane tumorcellelinier, der er etableret af National Cancer Institute, frekvensen af ​​den ikke-synonyme SNP rs28384375 (også betegnet som Val592Ala) var 0,5, mens den heterozygote hyppighed af -216G T SNP (også betegnet som rs287129) var 0,346. Cellelinierne, der var heterozygote og variant homozygote for -216 G T SNP viste signifikant højere ekspression af EGFR-genet, end den homozygote vildtype-linjer. Desuden sammenlignet med cellelinjer uden en variant allel, cellelinierne med mindst én variant T-allelen ved -216 G T SNP var mere følsomme over for erlotinib og mindre følsomme over for geldanamycin, topoisomerase I og II inhibitorer og alkyleringsmidler. Interessant, viste vores resultater, at GTTGCG haplotypen var mere udbredt i GC tilfælde end i kræft-fri kontrol, og at ACAGCG haplotyper var forbundet med en signifikant nedsat risiko for GC (justeret OR = 0,67, 95% CI = 0,49-0,92 for ACAGCG, justeret OR = 0,69, 95% CI = 0,52-0,90 for andre) i den samlede befolkning (tabel 8). Men i en alder-matching befolkning, blev der ikke signifikant sammenhæng undersøgt mellem ACAGCA haplotype og risiko for GC (justeret OR = 0,83, 95% CI = 0,58-1,19) (Tabel 9). Således kan T alleler af rs2072454 og rs17337023, især den tidligere, være forbundet med risiko for GC. Derfor kan kombineret analyse af de seks SNPs, især T alleler af rs2072454 og rs17337023, være nyttig til at forudsige risikoen for GC

Flere begrænsninger i den foreliggende undersøgelse skal løses:. 1) sin stikprøvestørrelse måske ikke været stor nok til at detektere SNP’er med lav variant frekvens, såsom rs28384375; 2) de polymorfier, der blev undersøgt i denne undersøgelse blev udvalgt på grundlag af deres virkninger på EGFR-funktion og kan ikke give et overblik over den genetiske variation i EGFR exoner; 3) detaljerede oplysninger om GC tilfælde ikke blev indsamlet, herunder patientens overlevelse, om tumorerne var tarm eller diffuse type, om der var metastaser, og hvad effekten af ​​medicinsk behandling var.

Som konklusion nærværende undersøgelse foreslog, at forskellene i livsstil mellem mænd og kvinder kan være så grunden til højere forekomst hos mænd end hos kvinder. Selv om kun én SNP (rs2072454) var signifikant associeret med en øget risiko for GC, kombineret analyse af andre seks EGFR exon SNPs sammen kan være nyttig til at forudsige risikoen for GC. Yderligere undersøgelser er berettiget til at etablere disse resultater og til at løse de underliggende mekanismer.

Støtte Information

Figur S1. Salg The fluorescerende produkter LDR blev differentieret ved ABI sequencer 377 for de syv SNPs i EGFR exons. I alt blev mere end 90% af de produkter med succes differentieret ved ABI sequencer 377.

doi: 10,1371 /journal.pone.0059254.s001

(TIF)

tabel S1.

PCR primersekvenser for syv loci i EGFR-genet. Primerne blev designet af Primer Premier 6 software og syntetiseret af Shanghai Sangon Biologisk Engineering Technology and Services

doi:. 10,1371 /journal.pone.0059254.s002

(DOC)

tabel S2.

Probesekvenser af de syv SNP’er i EGFR-genet. Primerne blev syntetiseret af Shanghai Sangon Biologisk Engineering Technology and Services

doi:. 10,1371 /journal.pone.0059254.s003

(DOC)

Tak

Vi anerkender Master Jingye Wang og Haixia Xu for assistance med DNA isolation.