PLoS ONE: cyclooxygenase-2 Expression i blærekræft og Patient Prognose: Resultater fra en stor klinisk Kohorte og Meta-Analysis

Abstrakt

Afvigende overekspression af cyclooxygenase-2 (COX2) er observeret i urothelial karcinom i blære (UCB). Undersøgelser evaluere COX2 som prognostisk markør i UCB rapportere modstridende resultater. Vi bestemt den prognostiske potentiale COX2 udtryk i UCB og kvantitativt sammenfatte resultaterne med dem af litteraturen gennem en meta-analyse. Nydiagnosticerede UCB patienter rekrutteret mellem 1998-2001 i 18 spanske hospitaler blev prospektivt inkluderet i undersøgelsen og følges op (median, 70,7 måneder). Diagnostiske slides blev revideret og ensartet klassificeret af ekspert patologer. Kliniske data blev hentet fra hospital diagrammer. Tissue microarrays indeholder ikke-muskel invasive (n = 557) og muskel invasive (n = 216) tumorer blev analyseret ved immunohistokemi under anvendelse af kvantitativ billedanalyse. Ekspression blev evalueret i Cox regressionsmodeller til at vurdere risikoen for tilbagefald, progression og sygdomsspecifikke dødelighed. Meta-hazard ratio blev estimeret ved hjælp af vores resultater og dem fra 11 yderligere evaluerbare studier. COX2 ekspression blev observeret i 38% (211/557) af ikke-muskel invasive og 63% (137/216) af muskel invasive tumorer. Ekspression blev forbundet med fremskreden patologisk stadium og bedømmelse (p 0,0001). I de univariable analyser, COX2-ekspression – som en kategorisk variabel – var ikke forbundet med nogen af ​​de analyserede resultater. Som en kontinuerlig variabel, blev en svag sammenhæng med recidiv i ikke-muskel invasive tumorer observeret (p-værdi = 0,048). I de multivariable analyser, har COX2-ekspression ikke uafhængigt forudsige nogen af ​​de betragtede resultater. Metaanalysen bekræftede disse resultater. Vi fandt ikke beviser for, at COX2 udtryk er en uafhængig prognostisk markør for tilbagefald, progression eller overlevelse hos patienter med UCB

Henvisning:. Czachorowski MJ, Amaral AFS, Montes-Moreno S, Lloreta J, Carrato A, Tardón A, et al. (2012) cyclooxygenase-2 Expression i blærekræft og Patient Prognose: Resultater fra en stor klinisk Kohorte og meta-analyse. PLoS ONE 7 (9): e45025. doi: 10,1371 /journal.pone.0045025

Redaktør: Xiaolin Zi, University of California Irvine, USA

Modtaget: Maj 20, 2012; Accepteret: August 11, 2012; Udgivet: September 13, 2012 |

Copyright: © Czachorowski et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Arbejdet blev delvist støttet af Fondo de Investigaciones Sanitarias, Instituto de Salud Carlos III, Ministeriet for videnskab og innovation, Spanien (G03 /174, 00/0745, PI051436, PI061614 og G03 /174); Red Tematica de Investigación Cooperativa en kræft- RD06 /0020-RTICC; Consolider ONCOBIO; EU-FP6-STREP-37.739-drop-top; EU-FP7-HEALTH-F2-2008-201663-UROMOL; EU-FP7-HEALTH-F2-2008-201333-DECanBio; USA-NIH-RO1-CA089715; og et ph.d.-stipendium tildeles MJC fra “la Caixa” fundament, Spanien, og en postdoc stipendium tildelt AFSA fra Fundación Científica de la AECC. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

urothelial karcinom i blæren (UCB) er den mest almindelige blærekræft typen i de udviklede nationer [1]. UCB overvejende manifesterer (70-80% af patienterne) som en ikke-muskel invasive tumor (NMIBC: PTA-PT1), kendetegnet ved en samlet god prognose efter transuretral resektion i patienter med lav-grade tumorer (pTaG1 /2), intravesikal kemoterapi og /eller instillation Bacillus Calmette Guerin (BCG) hos patienter med høj kvalitet tumorer (pTaG3 eller pT1G2 /3) [2]. Ca. 70% af NMIBC patienter lider et tilbagefald efter behandling, og yderligere 15% fremskridt, udvikling af nye tumorer udviser muskel invasion (MIBC: pT2-pT4); risikoen for progression er højere blandt patienter med høj kvalitet tumorer [2]. På grund af en høj sats for fornyet og behovet for tæt opfølgning over en patients levetid, UCB fortsat et af de dyreste tumorer til behandling på en per patient basis [3]. En lavere andel (20-30%) af UCB patienter er diagnosticeret med muskel invasive tumorer (MIBC; pT2-pt4), kendetegnet ved dårlig prognose: 50% af disse patienter dør af deres cancer [2]. Genomisk profilering og genekspression analyser viser en stærk sammenhæng mellem disse patologiske klassifikationer og den underliggende molekylære arkitektur UCB [4].

Voksende data viser, at kronisk inflammation kan øge risikoen for UCB [5]. Undersøgelser undersøger langvarig brug af cyclooxygenase-2 (COX2) hæmmer ikke-steroide anti-inflammatoriske lægemidler (NSAID) har rapporteret et fald i UCB risiko [6], [7]. COX2 er et prostaglandin endoperoxid synthetase, som katalyserer produktionen af ​​prostanoider efter induktion af proinflammatoriske cytokiner, vækstfaktorer, tumorpromotorer og andre eksterne stimuli [8]. COX2 aktivering medierer cellulære processer også impliceret i carcinogenese, såsom angiogenese, celleoverlevelse /proliferation og apoptose [9]. Endvidere har undersøgelser vist, at blærevæv fra patienter med blærebetændelse eller UCB udviser forhøjede COX2 niveauer i modsætning til benign blærevæv [10], [11].

Mens talrige grupper har undersøgt den prognostiske potentiale COX2-ekspression i UCB [12] – [31], er der ingen klar konsensus om dens anvendelighed. Formålet med denne undersøgelse var at vurdere, om COX2 proteinekspression i UCB celler er associeret med prognose hjælp af en stor og standardiseret kohorte af nydiagnosticerede blærecancerpatienter. En meta-analyse blev også gjort for at opsummere disse resultater sammen med dem fra andre undersøgelser offentliggjort om emnet.

Materialer og metoder

Undersøgelse Befolkning

I alt 773 nyligt diagnosticerede UCB tilfælde i alderen 22-80 år (gennemsnit ± SD = 66 ± 10 år) med en median opfølgning på 70,7 måneder (interval 0.7-117.7 måneder) og tilgængelige tumorvæv blev brugt i den aktuelle analyse. Alle sager blev rekrutteret mellem 1998 og 2001 fra 18 hospitaler i fem regioner i Spanien som en del af den spanske blærekræft (SBC) /epidemiologi kræft i urinvejene (Epicuro) studie, et hospital-baseret case-kontrol undersøgelse beskrevet tidligere [32 ]. En patolog panel ensartet klassificeret T scenen og bedømmelse (G) af hver tumor biopsi i henhold til kriterierne i TNM klassifikation og WHO-ISUP [33], ved hjælp af tre klasse omdefinering fra WHO [34], [35 ]. Alle blære tumor prøver anvendt i undersøgelsen blev indsamlet forud for administrationen i en intravesikal eller systemisk terapi. Klinisk information relateret til diagnostiske procedurer, tumor egenskaber og behandlingen blev indsamlet fra medicinske journaler, og et edb-spørgeskema blev anvendt til indsamling af sociodemografiske data. NMIBCs blev fjernet ved transuretral resektion og patienter fik intravesikal kemo- eller immunterapi (dvs. BCG) som passende. Størstedelen af ​​patienter med MIBCs blev behandlet ved radikal cystektomi; i tilfælde, hvor kirurgi ikke var muligt, blev radioterapi eller systemisk kemoterapi administreret. Opfølgning oplysninger blev indsamlet årligt fra sygehusjournaler og gennem direkte telefoninterviews af uddannede skærme med strukturerede spørgeskemaer. Blandt NMIBCs blev tilbagefald defineres som forekomsten af ​​et nyt NMIBC efter en tidligere negativ opfølgning cystoskopi, og progression, som udviklingen af ​​en MIBC. Hos patienter indledningsvis præsentere med MIBCs blev enhver tumor genkomst efter behandling anset progression, uanset om tumortilbagefald var lokale eller distal. Tumor-specifikke overlevelse blev vurderet kun for patienter med MIBCs. Informeret skriftligt samtykke blev opnået fra undersøgelsens deltagere i overensstemmelse med de etiske komitéer for hver deltagende sygehus.

Immunhistokemi

væv blokke af formalin-fikseret, paraffinindlejrede primære blæretumorer blev brugt til at konstruere væv microarrays (TMA) indeholdende tumor kerner af 0,6-mm i diameter repræsenteret i to eksemplarer og valgt blandt de mest repræsentative regioner af tumoren, hvor T og G var baseret på. Efter deparaffinisation og varmeinduceret antigen hentning blev alle objektglas farves samtidigt og så Histologi og Immunhistokemi kerneenhed af CNIO hjælp af PT LINK systemet ifølge producentens instruktioner (Dako Inc., Glostrup, Danmark). Kort fortalt blev vævssnit inkuberet med anti-COX2 kanin-monoklonalt antistof (ThermoFisher Scientific, Fremont, CA, USA; # RM-9121-R7; forfortyndet, klar-til-brug) ved stuetemperatur, efterfulgt af visualisering ved hjælp af EnVision flex Visualisering systemet (Dako Inc., Glostrup, Danmark) og udsættelse for diaminobenzedine. Væv blev derefter modfarvet med hæmatoxylin, dehydreret og monteret. Et afsnit af colon væv blev anvendt som en positiv kontrol.

Evaluering af COX2 Immunfarvning

COX2-ekspression blev kvantificeret ved anvendelse af ARIOL SL-50 (version 3.1.2, Applied Imaging Corp., San Jose, CA, USA) high-throughput slide imaging scanner. Alle kerner blev afbildet og behandles ved hjælp af et lysmikroskop og den ledsagende TMA Multistain Imaging software. Programmet blev trænet af en patolog (SM) for at maksimere optagelsen af ​​positivt farvede tumor epitel samtidig minimere stromal materiale, som tidligere [36] beskrevne. COX2 ekspression score blev beregnet som produktet af den gennemsnitlige intensitet af farvning (ved at definere baggrunden og mætning rammerne af antistoffet og billedsensoren, henholdsvis) og den andel af cellulær antistof-positive divideret med totalt cellulært område. Værdier fra gentagne kerner blev midlet til tilvejebringelse af en endelig udtryk score for hver patient. Desuden en tilfældigt udvalgt TMA (der repræsenterer 10% af alle kerner) blev analyseret ved direkte visuel mikroskopisk inspektion af en uafhængig patolog (MMM) for at muliggøre sammenligning med den automatiske scoring tilgang. Patologen-afledte score blev beregnet som produktet af COX2 farvningsintensitet (1 = svag, 2 = mellemprodukt, 3 = stærk) og en kvartil af procentdelen af ​​epiteliale tumorceller farves (0-4; hvor 0 repræsenterer 0% farvning) , hvilket giver en endelig kategorisk score i området fra 0-12. Der var en høj og signifikant sammenhæng mellem maskinen og patolog afledte scores (Spearman rho = 0,85; 95% CI = 0,79-0,90; p-værdi 0.00001). COX2-ekspression blev analyseret som både en kontinuert variabel og kategoriske variable partitioneret ved median og ekstreme tertiles. Derudover ekspression blev undersøgt som en kategorisk variabel dikotomiseret ved en tærskel (0,340 arbitrære enheder [au]) over hvilken COX2 ekspression blev anset for at være

positiv

. Dette udtryk tærskel blev afledt ved at sammenligne patolog s (MMM) binær tildeling af positivt udtryk (dvs. score på 0 vs. score ≥1, som beskrevet ovenfor) til maskinen-afledte kontinuerlig score ved hjælp receiver operating characteristic (ROC) kurve analyse (areal under kurven = 0,95;. 86% sensitivitet og 92% specificitet) [37]

meta-analyse

Metaanalysen omfattede COX2 udtryk resultater fra vores egen serie (ved hjælp af ROC- afledt kategoriske udtryk variabel) og relevante undersøgelser offentliggjort før den 1. januar 2012 er identificeret ved at søge PubMed og ISI Web of Knowledge. Søgestrengen anvendte var: (COX2 ELLER cox-2 eller cyclooxygenase-2 eller “cyclooxygenase 2” ELLER ptgs2) OG (Prognos * levende live eller dødelighed eller fornyet ELLER tilbagefald eller progression) OG ( “blærekræft”). Undersøgelser blev støtteberettigede, hvis: (i) de rapporterede effekten foranstaltning (som HRs, overlevelse kurver eller log-rank p-værdier) af COX2 proteinekspression på tilbagefald, progression eller sygdomsspecifikke overlevelse; (Ii) COX2 blev vurderet i primære tumorer udviser ensartethed i tumor histologi (≥75% UCB), og subphenotype (≥75% NMIBC

eller

MIBC); (Iii) de blev skrevet på engelsk eller spansk (tabel S1). Anmeldelser, abstracts, ikke-kliniske undersøgelser, og dubletpublikationer blev udelukket. HRs og 95% CIs var direkte udvundet fra de publikationer, når tilgængelige. For dem, der opgiver kun log-rank p-værdi eller Kaplan-Meier overlevelseskurver, HRS og 95% CIs blev uafhængigt beregnet ved to af medforfattere (MJC, AFSA) ved hjælp af regneark udarbejdet af Sydes og Tierney med enhver uoverensstemmelser løst ved diskussion [38]. I nogle få angivet tilfælde blev forfatterne direkte kontaktet for afklaring eller levering af data, der ikke er vist på de offentliggjorte manuskripter (tabel S1). Niveauet af heterogenitet blandt undersøgelser blev beregnet ved hjælp af I

2 statistik [39], og publikationsbias blev vurderet ved at analysere funnel plots og Egger s asymmetri test [40].

Statistisk analyse

Associations mellem demografiske og klinisk-patologiske parametre og COX2-ekspression blev vurderet ved anvendelse af Fishers eksakte test. I NMIBCs blev udtryk også vurderet tydeligt i lav kvalitet /risiko (pTaG1 /G2) og high-grade /risiko (PTA /pT2G3) tumorer, baseret på vores tidligere tyder differentielle prognostiske, genetiske og molekylære profiler mellem disse undergrupper [41 ], [42]. Gentagelse-fri, progressionsfri og samlet sygdomsspecifikke overlevelseskurver blev dannet ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden, med statistisk signifikans vurderet ved anvendelse af log-rank test. Tid til hver endepunkt blev beregnet ud fra datoen for primær behandling til datoen for begivenheden, dato for sidste opfølgning, eller dato for patientens død. Personer, der ikke udgør nogen begivenhed indtil slutningen af ​​undersøgelsen, der tabte til opfølgning, eller dem, der døde af andre årsager blev censureret enten på tidspunktet for sidste lægebesøg eller ved død. Tid til tilbagefald og progression blev defineret ved at anvende “mid-tid” mellem datoen for den tidligere sygdomsfri besøg og at når en ny begivenhed blev diagnosticeret. Overlevelsestiden blev målt som tiden fra første behandling til dødsfald som følge af cancer. Univariable og multivariable Cox-proportional farer analyse blev anvendt til at beregne hazard ratio (HR) og intervaller 95% sikkerhedsgrænser (CI). Schoenfeld residualanalyse foreslog ikke nogen afvigelse fra den proportionale farer antagelse i multivariable modeller.

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af STATA (version 10.1 SE, StataCorp, College Station, TX, USA). Statistiske tests var to-sidede og p-værdier mindre end 0,05 blev betragtet som signifikante. Bemærkningen [43] retningslinjer for prognostiske undersøgelser samt PRISMA [44] retningslinjer for systematiske reviews og metaanalyser blev overholdt ved udarbejdelsen af ​​manuskriptet.

Resultater

Patienter og COX2 Expression i Blærekræft TMA’er

COX2 ekspression blev vurderet i 557 patienter med NMIBCs og 216 personer med MIBCs. Median COX2 udtryk var 0,121 au (interval fra 0 til 42,590; interkvartile område 1,382) i NMIBCs, og 0.760 au (0 til 30,806; 3,600) i MIBCs (p-værdi = 4 × 10

-12). Repræsentative COX2 Immunofarvning mønstre i UCBs er vist i figur S1. Af patienter med NMIBCs, blev 41% (230/557) behandles kun ved transuretral resektion, mens resten (56%), der fik endovesical BCG immunterapi og /eller kemoterapi efter transuretral resektion eller anden behandling (3%; tabel 1). Næsten halvdelen (46%) af patienterne med MIBCs blev behandlet af cystektomi, mens resten modtager systemisk kemoterapi, strålebehandling, overfladisk eller anden behandling, eller en kombination heraf (tabel 2).

COX2 Expression og klinisk-patologisk funktioner

To-hundrede elleve (38%) NMIBCs og 137 (58%) MIBCs udtrykte COX2 (tabel 1 og 2, henholdsvis), med positivt udtryk defineret som en score lig med eller større end ROC-afledte tærskel på 0,340 AU. Patient og tumor karakteristika i den analyserede prøve ikke adskiller sig væsentligt fra den oprindelige SBC /Epicuro studiepopulation med undtagelse af geografisk region og tumorstørrelse i NMIBC patienter (data ikke vist). Fordelingen af ​​COX2 positivitet blev vurderet i henhold til etablerede blærekræft prognosticators herunder tumor invasion og kvalitet, tumor mangfoldigheden, tumorstørrelse og behandling, blandt andre. Demografiske faktorer som alder, køn og region var ikke forbundet med COX2 udtryk, og heller ikke var den type af primær behandling, som patienter (tabel 1 og 2). I NMIBCs blev COX2 udtryk signifikant associeret kun med T og G; være mere fremtrædende i lav kvalitet /risiko pTaG1 /2 tumorer end i høj kvalitet /PTA /pT1G3 tumorer risiko (p-værdi 0,0001; tabel 1). Yderligere vurdering af COX2 distribution i relevante molekylære undertyper af UCB [4], viste en større andel af pTaG2 end pTaG1 tumorer positivt udtrykker COX2 i lav kvalitet NMIBCs (p 0,0001, undertype 1, figur S2). COX2 udtryk varierede ikke blandt høj kvalitet /risiko NMIBCs (p = 0,075), men en større andel af MIBCs positivt udtrykt COX2 end gjorde alt høj kvalitet /risikofaktorer NMIBCs kombineret (p 0,0001, undertype 2, Figur S2). Kun tumor mangfoldigheden var forbundet med positive COX2 udtryk i MIBC patienter (p-værdi = 0,008; tabel 2).

COX2 Expression og Prognose i Blære kræftpatienter

Vi analyserede sammenslutningen af ​​COX2 udtryk med tumor tilbagefald og progression hos patienter med NMIBCs og med progression og sygdomsspecifik overlevelse hos patienter med MIBCs (tabel 3, figur 1). Når de betragtes som en kontinuerlig variabel i univariable analyse blev COX2-ekspression marginalt forbundet med en øget risiko for tilbagefald i NMIBCs (HR = 1,02, 95% CI = 1,00-1,04, p-værdi = 0,048; tabel 3). Men denne forening forsvandt på multivariabel analyse, når der korrigeres for region, køn, tumor scenen og kvalitet, mangfoldighed, tumorstørrelse, og behandling. Desuden blev COX2 udtryk ikke signifikant associeret med tilbagefald i NMIBCs når de betragtes som en kategorisk variabel, hverken i de univariable heller multivariable analyser (figur 1A, figur S3AC, tabel 3). Endelig blev der ikke signifikant sammenhæng mellem COX2 udtryk og progression eller overlevelse hos patienter med NMIBCs eller MIBCs, uanset om udtrykket blev betragtet som en kontinuerlig eller kategoriske variabel i ikke-justerede eller justerede analyser (Figur 1B-D, figur S3B, 3D -H, tabel 3)

Stiplede kurver:. patienter med tumorer positive for COX2 protein farvning; faste kurver: patienter med tumorer negative for COX2 proteinfarvning. Betydning værdier fra tosidet logrank test.

Meta-analyse af COX2 Expression og blærekræft Prognose

Tyve publikationer om COX2 udtryk og blærekræft prognose blev identificeret gennem litteraturgennemgang ( tabel S1) [12] – [31]. Tre af dem manglede prognostiske data, to overlappede med andre større undersøgelser og fire omfattede patientkohorter, der ikke opfylder kriterierne for støtteberettigelse tidligere skitseret, hvilket efterlader 11 evaluerbare publikationer [12] – [14], [19], [21] – [25 ], [28], [29] plus den aktuelle undersøgelse for meta-analyse (figur S4). Undersøgelser blev klassificeret af tumor undertype (e) de berettede om (dvs. NMIBC eller MIBC), og om blev anset justering for kovariater for hver prognostiske endepunkt undersøgte (dvs. univariable eller multivariable, figur 2 og 3). Af de fire meta-analyserne i forbindelse med univariable data, kun metaHR af foreningen mellem COX2 udtryk og tilbagefald i NMIBCs viste marginal betydning (metaHR = 1,35, 95% CI = 1,00-1,83, figur 2). Dette resultat blev ikke påvirket af undersøgelsen heterogenitet (I

2 p-værdi = 0,13), men udviste signifikant publikationsbias, som det fremgår af Egger test (p-værdi = 0,019). Den resterende meta-analyser overvejer univariable data foreslog øget, om end ikke-signifikant, risikoen for tumorprogression hos patienter med NMIBCs (metaHR = 2,07, 95% CI = 0,76-5,64) og MIBCs (metaHR = 1,45, 95% CI = 0.77- 2,74), og død hos patienter med MIBCs (metaHR = 1,13, 95% CI = 0,8-1,59; Figur 2). Især resuméet effekt for progression i NMIBCs og der blev observeret for overlevelse i MIBCs blev begge væsentligt påvirket af undersøgelsen heterogenitet (I

2 p-værdier: 0,006 og 0,004 henholdsvis), med den tidligere også væsentligt påvirket af offentliggørelse bias ( Egger test p-værdi = 0,001).

på grund af en mangel på publicerede prognostiske undersøgelser udfører multivariable analyser på patienter med NMIBCs, kunne vi kun tage fat på multivariable meta-association med progression og overlevelse hos patienter med MIBCs (figur 3). En lille, ikke-signifikant øget resumé risikoen for progression (metaHR = 1,12, 95% CI = 0,53-2,35; figur 3) blev observeret i COX2 udtrykker MIBCs, der var upåvirket af undersøgelsen heterogenitet (I

2 p-værdi = 0,139 ). Tilsvarende blev der observeret en null resumé effekt for overlevelse (metaHR = 0,97, 95% CI = 0,69-1,36, figur 3). Denne effekt var påvirket af hverken studie heterogenitet (I

2 p-værdi = 0,114) eller ved offentliggørelse bias (Egger test p-værdi = 0,108.

Diskussion

På trods af mange offentliggjorte undersøgelser, modstridende resultater sejre på COX2 udtryk som en selvstændig prognostisk markør hos patienter med UCB. Den aktuelle undersøgelse tyder på, at COX2 udtryk er ikke en uafhængig markør associeret med recidiv, progression eller overlevelse hos patienter med UCB.

Brug den største kohorte af patienter med NMIBCs evalueret for COX2 udtryk for dato, bemærkede vi, at 38% af disse tumorer udtrykte protein Andre grupper har rapporteret frekvenser spænder fra 53 til 88%,. men disse undersøgelser anvendte forskellige COX2 antistoffer og udtryk evaluering teknikker og havde mindre stikprøvestørrelser [16], [28], [29], [45], [46]. i overensstemmelse med rapporterede resultater [11], [18], [45] vi observeret signifikant højere COX2 udtryk i MIBCs (58%) end i NMIBCs. Denne frekvens svarer til observeret i andre store, histologisk homogene undersøgelser [21], [28], mens grupper anvender heterogene grupper af planocellulære og overgangsbestemmelser celle carcinomer rapporterer frekvenser forskellige fra vores egen [12] , [29]. Kollektivt, disse resultater gentager betydningen af ​​homogenitet, eller lagdeling i tumor markør studier.

Sammenhængen mellem COX2 og klinisk-patologiske karakteristika fortsat et omstridt emne i litteraturen. De fleste studier rapporterer en sammenhæng mellem COX2 overekspression og avanceret tumor invasion og kvalitet, men brug heterogene populationer af NMIBCs

og

MIBCs i deres vurderinger [21], [25], [26], [28], [47]. I betragtning af den kendte forskel i COX2 udtryk mellem NMIBCs og MIBCs, ville en sammenslutning af denne type kan forventes i en blandet tumor befolkning. Efter at samle NMIBCs og MIBCs i vores undersøgelse har vi også observere en stærk signifikant sammenhæng mellem COX2 overekspression og avanceret tumor invasion (p 0,0001) og bedømmelse (p 0,0001). Især flere grupper rapporterer ingen sammenhæng mellem COX2 udtryk og T og G [14], [29], [45]; især dem, der arbejder strengt med homogene kohorter af MIBCs [12], [23]. Ligeledes i vores undersøgelse, COX2 udtryk afveg ikke væsentligt blandt pT2, PT3 og pt4 tumorer (p = 0,896). Interessant, observerede vi lavere COX2 positivitet i PT1 og høj kvalitet /risiko NMIBCs, end i PTA og lav kvalitet /risiko NMIBCs tumorer. Dette resultat kan synes ulogisk, hvis kvalitet progression betragtes som en lineær træk og COX2 udtryk anses for at stige lineært med T og G. Men der er stærke beviser indikerer, at UCB eksisterer som to molekylært distinkte undertyper, med høj kvalitet /risiko NMIBCs have en molekylær signatur mere ligner MIBCs end lav kvalitet /risiko NMIBCs [4], [42]. I denne henseende observerede vi, at COX2 positivitet steg betydeligt med stigende T og G inden for hver molekylær tumor undertype (figur S2). Shirahama et al. [26] rapporterede en COX2 fordeling ligner vores, observere 8% positivitet i pT1 tumorer og 50% i MIBCs ved brug hele afsnittet farvning og et udtryk tærskel på 5%. Kollektivt, disse resultater gentage uligheden i COX2 udtryk mellem NMIBCs og MIBCs først rapporteret af Komhoff et al. [47], og fremhæve betydningen af ​​at overveje udtryk inden for den korrekte molekylære kontekst.

For at minimere virkningerne som følge af at vælge en vilkårlig udtryk tærskel, undersøgte vi COX2 proteinekspression som en kontinuerlig variabel og tre kategoriske variable. Kun når de betragtes som en kontinuerlig variabel i univariable analyse var COX2-ekspression sig at være associeret med en svag stigning i risikoen for tilbagefald. Den meta-analyse, som består af fem andre univariable undersøgelser, gentog denne forening og viste en 35% øget risiko for tilbagefald hos patienter med COX2 udtrykke NMIBCs. Men begge effekt skøn udviser kun marginal betydning, tyder på, at de observerede foreninger kan skyldes tilfældigheder. Desuden foreningen observeret i univariable analyse ikke holde efter justering for konventionelle prognostiske faktorer af tilbagefald i multivariable analyse. Endelig kan den summariske effekt observeret i metaanalysen er blevet skæv af to små undersøgelser, der er valgt kun høj risiko NMIBCs (T1G3 [19] og Cis [24]). Når en følsomhedsanalyse udført fjerne disse to undersøgelser fra meta-analyse blev sammenhængen mellem gentagelse og COX2 udtryk ikke længere vedligeholdes (metaHR = 1,14, 95% CI = 0,94-1,38). Den observerede forskel mellem effekt estimater af progression i nærværende undersøgelse og metaanalyse kunne også tilskrives inddragelse af disse to undersøgelser. Efter deres udelukkelse, viste resumé HR ingen sammenhæng med progression (metaHR = 0,98, 95% CI = 0,47-2,03). Disse resultater støtter ikke en rolle for COX2 udtryk i NMIBCs som en uafhængig prognostisk markør for recidiv eller progression.

Flere grupper har undersøgt evne COX2 udtryk til at forudsige udfaldet i patienter med MIBCs. Trods bred inter-studie variation i metode, anvendte antistoffer, stikprøvestørrelse, og justeringsparametre i tilfælde af multivariable analyser, har de fleste af disse undersøgelser ikke identificere nogen signifikant sammenhæng mellem COX2 udtryk og progression eller overlevelse, i overensstemmelse med vores resultater [13 ], [14], [23], [28], [29]. Shariat og Margulis og deres kolleger observeret en negativ sammenhæng mellem høj COX2 udtryk og tumor progression og dødelighed [21], [25]. Men begge undersøgelser har påberåbt sig heterogene prøvepopulationer som omfattede en lille andel af patienter med NMIBCs; potentielt tegner sig for de observerede foreninger givet forskellen i COX2 udtryk mellem overfladiske og avancerede blæretumorer [45]. I en anden undersøgelse Wulfing et al. rapporterede, at høj COX2 udtryk var en uafhængig prædiktor for dårlig samlet overlevelse i en undergruppe af 62 patienter med MIBC behandlet med cisplatin kemoterapi [29]. Vi har ikke identificere nogen meningsfuld interaktion mellem COX2 udtryk og behandling (data ikke vist), og var ude af stand til at replikere deres resultater i en mindre delmængde af 39 patienter behandlet med cisplatin (HR = 1,47, 95% CI = 0,48-4,51, p- værdi = 0,497). Aziz et al. rapporterede en 36% overlevelse fordel forbundet med øgede COX2 niveauer i en kohorte af 266 patienter med MIBCs (221 med UCB), der var uafhængig af lymfeknude status og neo /adjuverende kemoterapi [12]. Mens vi også observeret en forbedret overlevelse blandt patienter med COX2 overekspression MIBCs, har denne forening ikke nå betydning, i overensstemmelse med andre univariable [23], [28] og multivariable [26] analyser.

Vores undersøgelse havde en stor prøve størrelse, indeholdt kun hændelser tilfælde og har påberåbt sig omfattende og præcist erhvervet opfølgende oplysninger spænder ti år. Derudover brugte vi automatiseret scoring af immunfarvet TMAs, en strategi, der giver en reproducerbar vurdering af udtryk, der korrelerede stærkt med den uafhængige evaluering af en delmængde af prøver af en uafhængig patolog. COX2 farvning blev udført i et laboratorium for at undgå heterogenitet i immunhistokemisk farvning og scoring, og evalueres som en kontinuerlig variabel i prognostiske analyser for at undgå potentiel skævhed relateret til valget af et udtryk tærskel. Desuden prøvepopulationen giver en nøjagtig gengivelse af blærekræft i den almindelige befolkning som ingen inklusionskriterier blev anvendt i ansættelsesprocessen som omfattede en god blanding af indbringelsen centre og amt hospitaler. Endelig blev anbefalingerne fra bemærkningen og PRISMA undersøgelser fulgt i alle de rapporterede analyser.

På trods af disse overvejelser og forsøg på præcist at kvantificere COX2 udtryk kun i epitelceller, patologen uddannet automatiseret billeddannende system kan have inkorporeret nogle immunfarvet stromal materiale fundet på vævet kerne, og derved øge type i fejl. For at reducere potentiel fejl vi gennemsnit udtrykket scoringer fra dublerede kerner og også undersøgt en metode undersøgt af Henriksen et al. [48], hvor højere score blev anvendt (data ikke vist). Begge metoder produceret lignende materiale sammenhænge mellem COX2 udtryk og klinisk-patologiske parametre eller HRs. Desuden bør justerede analyser for progression i NMIBCs forsigtigt tolkes betragtning af den lave antal hændelser i relation til kovariater. Også kunne forskellige patient management praksis i rekruttering hospitaler øger prøve heterogenitet, nødvendiggør inddragelse af både rekruttering område og behandlingsregime i vores multivariable analyser

Resultaterne præsenteret heri fokus på COX2 ekspressionsniveauerne målt i tumor epitelceller. – kun ét aspekt af det komplekse samspil mellem tumoren og værtsimmunsystemet /inflammatorisk respons [49]. Den prognostiske potentiale COX2 (hvis nogen), kan kun blive afsløret, når de betragtes sammen med andre tumorale markører. Ved undersøgelse flere potentielle prognostiske parametre i UCB, Hilmy et al. konkluderede, at systemiske faktorer af den inflammatoriske reaktion, såsom niveauer af C-reaktivt protein var bedre tumor-baserede faktorer såsom kvalitet, COX2 ekspression eller T-lymfocytisk infiltration [18]. Desuden er der i modeller for livmoderhalskræft, Ferrandina et al. observeret, at mens COX2-ekspression var gensidigt udelukkende i tumoren og stromale inflammatoriske celler, kan høj ekspression i begge celletyper anvendes som en uafhængig markør for ringe overlevelse [50].