PLoS ONE: associering mellem CASP8 -652 6N Del polymorfi (rs3834129) og Kolorektal Cancer Risk: Resultater fra en Multi-Centric Undersøgelse

Abstrakt

Den fælles -652 6N del variant i

CASP8

promotor (rs3834129) er blevet beskrevet som en formodet lav penetrans risikofaktor for forskellige typer kræft. Især nogle undersøgelser antydet, at den slettede allel (del) omvendt var forbundet med CRC risiko mens andre analyser ikke kunnet bekræfte dette. Derfor, for bedre at forstå den rolle denne variant i risikoen for at udvikle CRC, udførte vi en multi-centreret case-kontrol undersøgelse. I undersøgelsen blev varianten -652 6N del genotypebestemmes i alt 6,733 CRC tilfælde og 7,576 kontroller rekrutteret af seks forskellige centre i Spanien, Italien, USA, England, Tjekkiet og Holland samarbejder med det internationale konsortium COGENT (kolorektal cancer genetik). Vores analyse viste, at rs3834129 ikke var forbundet med CRC risiko i den fulde datasæt. den del allelen var imidlertid underrepræsenteret i et sæt af sager med en familie historie af CRC (per allel model OR = 0,79, 95% CI = 0,69-0,90), hvilket antyder dette allel kan være en beskyttende faktor versus familiær CRC. Da denne multi-centreret case-kontrol undersøgelse blev udført på en meget stor stikprøve, det gav robust afklaring af effekten af ​​rs3834129 på risikoen for at udvikle CRC i kaukasiere

Henvisning:. Pardini B, Verderio P, Pizzamiglio S, Nici C, Maiorana MV, Naccarati A, et al. (2014) associering mellem CASP8 -652 6N Del polymorfi (rs3834129) og Kolorektal Cancer Risk: Resultater fra en Multi-Centric Study. PLoS ONE 9 (1): e85538. doi: 10,1371 /journal.pone.0085538

Redaktør: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, USA

Modtaget: 27. september 2013; Accepteret: December 4, 2013; Udgivet: 21 Jan 2014

Copyright: © 2014 Pardini et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. For alle kohorter: Dette arbejde blev støttet af COST Action BM1206. Spansk kohorte: Forfatterne er oprigtigt taknemmelig for alle patienter, der deltager i denne undersøgelse, som blev ansat i 25 (EPICOLON 1) og 14 (EPICOLON 2) spanske hospitaler som en del af EPICOLON projektet. Forfatterne er også i gæld til Genomics Enhed for Institut d’Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer for teknisk hjælp. Arbejdet blev udført (delvis) på Esther Koplowitz Center, Barcelona. SCB understøttes af en kontrakt fra Fondo de Investigación Sanitaria (CP 03-0070 til SCB). Networked Biomedical Research Center for Hepatisk og Digestive Diseases og Centro de Investigación Biomedica en Red de Enfermedades Raras finansieres af Instituto de Salud Carlos III. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra Fondo de Investigación Sanitaria /EFRU (08/0024, 08/1276, PS09 /02368, 11/00219, 11/00681), Instituto de Salud Carlos III (Acción Tværgående de kræft), Xunta de Galicien (07PXIB9101209PR), Ministerio de Ciencia e Innovación (SAF2010-19273), Asociación Española contra el cancer (Fundación Científica y Junta de Barcelona), Fundació Olga Torres (SCB og CRP), FP7 CHIBCHA Consortium (SCB og A. Carracedo). Italiensk kohorte: Forfatterne takker alle personer, der er aftalt til at deltage i undersøgelsen. Forfatterne takker også personalet i Tissue Bank of Fondazione Istituto di Ricovero e Cura en carattere Scientifico Istituto dei Tumori for prøvetagning og alle patologer for deres bidrag og samarbejde. Amerikansk kohorte: Kentucky Colon Cancer genetisk epidemiologi Study er støttet af National Institutes of Health give R01CA136726 til LL. Engelsk kohorte: Basisfinansiering til Wellcome Trust Center for Human Genetik blev leveret af Wellcome Trust (090.532 /Z /09 /Z). Tjekkisk kohorte: Grant agentur for Den Tjekkiske Republik (GACR) [CZ: GACR: GA P304 /10/1286 og P304 /12/1585] og Prvouk-P27 /LF1 /1 fra Undervisningsministeriet, ungdom og sport, Tjekkiet (Første medicinske Fakultet, Charles University, Prag, Tjekkiet som en modtager). Hollandsk kohorte: Hollandsk Cancer Society, give KWF-UL-2010-4656. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. PP er en akademisk redaktør på PLoS ONE, men dette ændrer ikke forfatternes overholdelse af alle Journal politikker vedrørende datadeling og materialer.

Introduktion

Carcinogenese er kendetegnet ved ændring af de normale processer, der er udpeget til at opretholde genom stabilitet. Apoptose er den mest fremtrædende mekanisme af den programmerede celledød, der er ansvarlig for sikker fjernelse af beskadigede celler før genom abnormiteter kan replikeres og yderligere spredning. Caspaseenzymer er afgørende i reguleringen og udførelse af de fleste af de apoptotiske celle-død veje. Især caspase-8 (

CASP8

) er en afgørende spiller i at kontrollere apoptose af T-lymfocytter gennem aktivering-induceret celledød [1] og samtidig en fysiologisk homeostase af T-lymfocytter er et grundlæggende aspekt i immun-overvågning af kræftceller.

En polymorfisme bestående af sletning af seks nukleotider i promotor-regionen i

CASP8

, og nævnt som -652 6N del (rs3834129), er blevet beskrevet at være meget almindelig i flere populationer [2]. Denne seks nukleotiddeletion viste sig at ødelægge en stimulatorisk protein 1 indbindingselement i promotoren regulatoriske region, der medfører nedsat

CASP8

transkription og til sidst en reduceret apoptose af antitumor T-lymfocytter [2]. Således rs3834129 blev postuleret at påvirke immunresponset antitumor under kræft initiering eller progression, og dermed betragtes som en genetisk faktor potentielt forbundet med kræftrisiko. På denne baggrund blev polymorfi afprøvet i en case-kontrol undersøgelse og del allelen viste sig at være forbundet med en beskyttende effekt i flere typer af kræft, herunder CRC, i den kinesiske [2] befolkning. To efterfølgende studier undersøgt yderligere effekten af ​​rs3834129 i CRC sager test og kontrol af blandet og kaukasisk etnicitet men undlod at bekræfte foreningen [3], [4]. En meta-analyse af disse tre studier viste, at i henhold til en dominerende model, blev del allel forbundet med en betydeligt reduceret risiko for CRC med odds ratio (OR) = 0,89, 95% konfidensinterval (CI) = 0,83 til 0,96 [5 ]. Men en senere undersøgelse ikke inkluderet i ovennævnte metaanalyse, igen ikke at afsløre en associering mellem rs3834129 og CRC risiko på Kinesisk [6].

Derfor, i den foreliggende undersøgelse har vi søgt efter mere robust bevis, hvorvidt rs3834129 kan være en CRC risikofaktor i en case-kontrol undersøgelse, baseret på seks kohorter rekrutteret i centre beliggende i Spanien, Italien, USA, England, Tjekkiet og Holland og samarbejder inden for COGENT (kolorektal cancer genetik) konsortium [7 ].

Materialer og metoder

Case-kontrol kohorter

COGENT (kolorektal cancer genetik) konsortium blev oprettet i 2007 med det primære mål at studere genetisk modtagelighed for CRC i en kollaborativ måde. Konsortiet bestod i over 20 forskergrupper i Europa, Australien, Amerika, Kina og Japan arbejder aktivt på CRC genetik og med ekspertise omfatter genetisk epidemiologi, statistisk genetik, gen-kortlægning, biologi, molekylær genetik, patologi og diagnose og den kliniske behandling af CRC [8]. Vedligeholdelse sine vigtigste mål har konsortiet nu udviklet sig til en mere struktureret initiativ med navnet “Samarbejde Undersøgelser om arvet modtagelighed for kolorektal cancer” (EuCOLONGENE – https://www.eucolongene.eu). I den foreliggende undersøgelse blev rs3834129 testet som genetisk risikofaktor for CRC i seks kohorter omfattende 6,733 tilfælde og 7,576 kontroller.

1. Spansk kohorte. Cases og kontroller blev rekrutteret gennem EPICOLON Consortium, der er baseret på en prospektiv, multicenter og populationsbaseret epidemiologi undersøgelse af forekomsten og funktioner i CRC i den spanske befolkning [9]. Kort fortalt blev sager udvalgt som patienter med

de novo

histologisk bekræftet diagnose af kolorektal adenocarcinom. Eksklusionskriterier var arvelige CRC former, såsom arvelig ikke-polypose colorectal cancer (HNPCC) og familiær adenomatøs polypose (FAP) og en personlig historie af inflammatorisk tarmsygdom. Kontrol var fra det spanske nationale DNA bank og blev bekræftet ikke at have kræft eller tidligere neoplasma og ingen familie historie af CRC. Alle sager og kontroller var af kaukasisk etnicitet. 2. Italiensk kohorte. Cases og kontroller blev rekrutteret som beskrevet af [10]. Kort fortalt tilfældene var fortløbende individer ramt med CRC, der blev opereret på Fondazione IRCCS Istituto Nazionale Tumori i Milano (INT). Kontrollerne var bloddonorer rekrutteret gennem Immunohematology og Transfusion Medicine Forkyndelse af INT Associazione Volontari Italiani Sangue Comunale i Milano. Alle sager og kontroller var af kaukasisk etnicitet. 3. amerikansk kohorte (Kentucky, USA). Cases og kontroller blev rekrutteret som for nylig beskrevet [11]. Kort fortalt blev hændelse kolon kræfttilfælde identificeret gennem Kentucky Cancerregisteret. Befolkning kontroller blev rekrutteret via tilfældig cifret opkald efter følgende kriterier: at være mindst 30 år eller ældre og fri for personlige historie af kræft end hudkræft. For begge tilfælde og kontroller, eksklusionskriterier var inflammatoriske tarmsygdomme, FAP og HNPCC. Flertal af deltagerne var kaukasiere (93,7%). 4. engelsk kohorte. Cases (CRC eller væsentlige adenomer) og kontroller blev rekrutteret gennem Colorectal Tumor Gene Identification (Corgi) konsortium som tidligere beskrevet [12]. Kort beskrevet tilfælde havde mindst én første grads slægtning påvirket af CRC. Kontrollerne var ægtefæller eller partnere upåvirket af kræft og uden en personlig og familie historie af kolorektal neoplasi. En enkelt proband fra hver familie blev inkluderet i denne undersøgelse. Arvelige CRC former som, HNPCC /Lynch syndrom eller bi-alleliske MutYH mutationsbærere blev udelukket. Alle sager og kontroller var af kaukasisk etnicitet. 5. Tjekkiet kohorte. Cases og kontroller blev rekrutteret som tidligere beskrevet [13]. Kort fortalt havde alle tilfælde histologisk bekræftet CRC og blev fortløbende konstateret gennem onkologiske afdelinger. Controls var enten hospitalsbaserede frivillige med negative koloskopi resultater eller bloddonorer indsamlet fra en bloddonor center i Prag. Alle sager og kontroller var af kaukasisk etnicitet. 6. hollandske Kohorte. Cases og kontroller blev rekrutteret som tidligere beskrevet [14]. Kort fortalt de fleste tilfælde blev rekrutteret gennem kliniske genetik afdeling. Alle sager blev diagnosticeret med CRC og havde tidlig debut og /eller positiv familiehistorie for CRC. Kendte dominerende polypose syndromer, blev HNPCC /Lynch syndrom eller bi-alleliske MutYH mutationsbærere udelukket. En enkelt proband fra hver familie blev inkluderet i denne undersøgelse. Kontroller var raske bloddonorer fra sydvest region i Nederlandene. Alle sager og kontroller var af kaukasisk etnicitet.

For hver kohorte, er antallet af sager og kontroller, der indgår i undersøgelsen, og deres køn og alder data vist i tabel 1. Alle personer, der deltager i denne undersøgelse underskrev et informeret samtykke til brugen af ​​deres biologiske prøver til forskningsformål. Denne undersøgelse blev godkendt af de følgende institutioner: Clinical Research Etik og forskning udvalg i Hospital Clinic i Barcelon (spansk kohorte); Etiske komité af Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori, Milano, Italien (italiensk kohorte); Institutional Review Boards fra University of Kentucky, Lexington, Case Western Reserve University /University Hospitals of Cleveland og University of Southern California, USA (American kohorte); Southampton og sydvestlige Hampshire Research Ethics Committee (engelsk kohorte); Etiske komité af Institut for Eksperimentel Medicin, og etiske komité af Institut for Klinisk og Eksperimentel Medicin og Thomayer Hospital, Prag, Tjekkiet (Tjekkiet kohorte); Medicinsk Etisk Komité Leiden University Medical Center, Holland (protokol P01.019) (hollandsk kohorte).

Genotypning

Den genomiske DNA blev isoleret fra perifert blod lymfocytter hjælp standardprocedurer. DNA-prøverne fra og kontrolpersoner var tilfældigt portion anbringes i 96-brønds plader. Genotypebestemmelse af rs3834129 blev udført ved hjælp af Taqman assay (Life Technologies /Applied Biosystems, USA) i spansk, italiensk, USA og hollandske kohorter og brug af Kaspar assay (K-Bioscience, UK) i engelsk og Tjekkiet kohorter . Dobbelte prøver (5%), ingen skabelon kontroller i hver plade, og Hardy-Weinberg ligevægt testen blev anvendt som kvalitetskontrol test.

Statistisk analyse

Inden for hver kohorte, en logistik regressionsanalyse [ ,,,0],15] blev udført for at sammenligne genotyper hyppigheden af ​​

CASP8

rs3834129 i tilfælde og kontroller. Vi skønnede odds ratio (OR) og deres relative 95% konfidensinterval (CI) ved at overveje i hvert logistisk model alder og køn som justering kovariater. Fire forskellige modeller ( “tre genotyper”, dominerende, recessive og pr allel) blev udført for hver kohorte adskilt, og i betragtning af alle de personer sammen. I dette tilfælde blev den variable med angivelse af kohorten og samspillet sigt mellem denne variabel og genotypen inkluderet i den logistiske model i tillæg til den variable genotype, alder og køn. Afvigelserne i genotypefrekvenser i kontrollerne fra dem, der forventes under Hardy-Weinberg ligevægt (HWE) blev vurderet inden for hver kohorte samt ved at betragte alle personer ved hjælp Pearsons chi-square test. Alle statistiske analyser blev udført med SAS-software. (Version 9.2, SAS Institute Inc. Cary, NC)

Resultater og Diskussion

I denne undersøgelse analyserede vi rs3834129 genotype fordelingen i alt af 6,733 tilfælde og 7,576 kontrol fra seks kohorter, alle af kaukasisk etnicitet. Genotypen distributioner i kontroller var i overensstemmelse med HWE i alle årgange og på tværs af dem frekvenserne af del allel var ens i kontroller (interval: 0,45-0,52). Vi udførte en samlet analyse at sammenligne genotyper hyppigheden af ​​

CASP8

rs3834129 i sager med CRC og raske kontroller. Som i de hollandske kontrol data om køn og /eller alder manglede (tabel 1), blev denne kohorte udelukket fra den samlede analyse og i alt 6,148 tilfælde og 7,217 kontroller blev overvejet. Alle kohorter var baseret på hændelsen /fortløbende sager bortset fra engelske kohorten, som var baseret på familiære tilfælde. Derfor udførte vi også en ekstra samlet analyse eksklusive engelske kohorten og teste alt 4.572 sager og 6.450 kontroller. I begge disse analyser interaktionen mellem kohorte og genotype ikke var statistisk signifikant, og også den yderste periferi, der stammer fra de forskellige gennemførte genetiske modeller var ikke statistisk signifikant (data ikke vist).

Desuden har vi vurderet effekten af ​​rs3834129 på CRC risiko inden for hver kohorte. De eller skøn blev justeret for køn og alder med den eneste undtagelse af hollandsk kohorte, er resultater rapporteres i tabel 2. De yderste periferi for de forskellige gennemførte modeller (tre genotyper, dominerende, recessive og pr-allel model) stort set bekræftet resultaterne af samlet analyse være ikke statistisk signifikant i hver kohorte med den eneste undtagelse af den engelske. De yderste periferi i familiær tilfælde-kontrolprøver fra England var statistisk signifikant (per allel model OR = 0,79, 95% CI = 0,69-0,90), som angiver del allel kan være en beskyttende faktor versus familiær kræft. Dette resultat kan forklares i betragtning af at de familiære tilfælde, i forhold til indfaldende /konsekutive tilfælde kan være en bedre kilde for association test da de forventes at blive beriget med genetiske risikofaktorer, eller omvendt, fratages af faktorer med en beskyttende virkning.

så vidt vi ved, er dette den største analyse teste sammenhængen mellem rs3834129 og CRC risiko i kaukasiere og vores data giver stærkere og entydige beviser så langt, at rs3834129 er ikke en CRC risikofaktor i denne etniske gruppe. Mens vores analyse var i gang, andre undersøgelser viste, viser inkonsistente resultater. På den ene side blev manglende association findes i case-control analyser baseret på græske og kinesiske befolkningsgrupper [16], [17]; på den anden side, en meta-analyse, baseret på tre studier af mix etnicitet, og en separat ekstra undersøgelse om kinesisk viste en moderat beskyttende virkning af del allel [18], [19]. Vores resultater i kaukasere, med hensyn til den formodede beskyttende effekt påvist i kinesisk-, der skal bekræftes af yderligere større undersøgelser-kan forklares med yderligere risiko-associerede varianter i kobling med rs3834129 og med forskellig hyppighed i forskellige etniske genetiske baggrunde. Konkret del allel af rs3834129 har en 0,48 kontrol frekvens i vores undersøgelse, mens vi udledt en frekvens på 0,20 til 0,25 i kinesiske kontrol [2], [6], [16], [18].

I konklusion, mens der er behov for yderligere undersøgelser for at bekræfte den beskyttende virkning af den del allel vi observerede i familiære CRC tilfælde med familiens historie, vores undersøgelse giver robust dokumentation angiver rs3834129 er ikke en risikofaktor for CRC i kaukasiere.

Tak

medlemmer af EPICOLON Consortium (Gastrointestinal Oncology Group for den spanske Gastroenterologisk Association) er: Hospital 12 de Octubre, Madrid: Juan Diego Morillas (lokal koordinator), Raquel Muñoz, Marisa Manzano, Francisco Colina, Jose Díaz , Carolina Ibarrola, Guadalupe López, Alberto Ibáñez; Hospital Clinic, Barcelona: Antoni Castells (lokal koordinator), Virginia Piñol, Sergi Castellvi-Bel, Francesc Balaguer, Victoria Gonzalo, Teresa Ocaña, María Dolores Giraldez, Maria Pellisé, Anna Serradesanferm, Leticia Moreira, Miriam Cuatrecasas, Josep M. Piqué; Hospital Clínico Universitario, Zaragoza: Ángel Lanas (lokal koordinator), Javier Alcedo, Javier Ortego; Hospital Cristal-Pinor, Complexo Hospitalario de Ourense: Joaquin Cubiella (lokal koordinator), M

en Soledad Díez, Mercedes Salgado, Eloy Sánchez, Mariano Vega; Parc de Salut Mar, Barcelona: Montserrat Andreu (lokal koordinator), Anna Abuli, Xavier Bessa, Mar Iglesias, Agustín Seoane, Felipe Bory, Gemma Navarro, Beatriz Bellosillo; Josep M

en Dedeu, Cristina Álvarez, Marc Puigvehí; Hospital San Eloy, Baracaldo og Hospital Donostia, CIBERehd, University of Baskerlandet, San Sebastián: Luis Bujanda (lokal koordinator) Ángel Cosme, Inés Gil, Mikel Larzabal, Carlos Placer, María del Mar Ramírez, Elisabeth Hijona, Jose M. Enríquez- Navascués, Jose L. Elosegui; Hospital General Universitario de Alicante: Artemio Payá (EPICOLON I lokale koordinator), Rodrigo Jover (EPICOLON II lokale koordinator), Cristina Alenda, Laura Sempere, Nuria Acame, Estefanía Rojas, Lucía Pérez-Carbonell; Hospital General de Granollers: Joaquim Rigau (lokal koordinator), Ángel Serrano, Anna Giménez; Hospital General de Vic: Joan Saló (lokal koordinator), Eduard Batiste-Alentorn, Josefina Autonell, Ramon Barniol; Hospital General Universitario de Guadalajara og Fundación para la Formación e Investigación Sanitarias Murcia: Ana María García (lokal koordinator), Fernando Carballo, Antonio Bienvenido, Eduardo Sanz, Fernando González, Jaime Sánchez, Akiko Ono; Hospital General Universitario de Valencia: Mercedes Latorre (lokal koordinator), Enrique Medina, Jaime Cuquerella, Pilar Canelles, Miguel Martorell, José Ángel García, Francisco Quiles, Elisa Orti; CHUVI-Hospital Meixoeiro, Vigo: EPICOLON I: Juan Clofent (lokal koordinator), Jaime Seoane, Antoni tardio, Eugenia Sanchez. EPICOLON II M

en Luisa de Castro (lokal koordinator), Antoni tardio, Juan Clofent, Vicent Hernández; Hospital universitari tyskere Trias i Pujol, Badalona og afsnit af Digestive Diseases og Ernæring, University of Illinois i Chicago, IL, USA: Xavier Llor (lokal koordinator), Rosa M. Xicola, Marta Piñol, Mercè Rosinach, Anna Roca, Elisenda Pons, José M. Hernández, Miquel A. Gassull; Hospital Universitari Mutua de Terrassa: Fernando Fernández-Bañares (lokal koordinator), Josep M. Viver, Antonio Salas, Jorge Espinos, Montserrat Forné, Maria Esteve; Hospital Universitari Arnau de Vilanova, Lleida: Josep M. Renè (lokal koordinator), Carmen Piñol, Juan Buenestado, Joan Viñas; Hospital Universitario de Canarias: Enrique Quintero (lokal koordinator), David Nicolás, Adolfo Parra, Antonio Martín; Hospital Universitario La Fe, Valencia: Lidia Argüello (lokal koordinator), Vicente Pons, Virginia Pertejo, Teresa Sala; Hospital Sant Pau, Barcelona: Dolors Gonzalez (lokal koordinator) Eva Roman, Teresa Ramon, Maria Poca, M

en Mar Concepción, Marta Martin, Lourdes Pétriz; Hospital Xeral Cies, Vigo: Daniel Martinez (lokal koordinator); Fundacion Publica Galega de Medicina Xenomica (FPGMX), CIBERER, Genomisk Medicin Group-Universitetet i Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, Galicia, Spanien: Ángel Carracedo (lokal koordinator), Clara Ruiz-Ponte, Ceres Fernández-Rozadilla, M

et Magdalena Castro; Hospital Universitario Central de Asturias: Sabino Riestra (lokal koordinator), Luis Rodrigo; Hospital de Galdácano, Vizcaya: Javier Fernández (lokal koordinator), Jose Luis Cabriada; Fundación Hospital de Calahorra (La Rioja) La Rioja: Luis Carreño (lokal koordinator), Susana Oquiñena, Federico Bolado; Hospital Royo Villanova, Zaragoza: Elena Peña (lokal koordinator), José Manuel Blas, Gloria Cena, Juan José Sebastián; Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba: Antonio Naranjo (lokal koordinator)

.