PLoS ONE: LINE-1 Methylering status Korrelerer Betydeligt til Post-Terapeutisk Gentagelse i trin III tyktarmskræft patienter, som fik FOLFOX-4 adjuverende kemoterapi

Abstrakt

Baggrund

methylering niveauer af lange indflettede nukleotid elementer (LINE-1) er repræsentative for genom-dækkende status methylering og afgørende for opretholdelsen genomisk stabilitet og udtryk. Deres prognostisk betydning for tyktarmskræft patienter, der fik adjuverende kemoterapi er ikke veletableret. Vi evaluerede sammenhængen mellem LINE-1 methylering status og clinicopathologic funktioner og postoperative onkologiske resultater i fase III-patienter tyktarmskræft.

Materialer og metoder

129 UICC stadium III tyktarmskræft patienter, der havde modtaget radikal resektion og FOLFOX adjuverende kemoterapi blev inkluderet. Global methylering blev estimeret ved at analysere tumor LINE-1 status for methylering under anvendelse bisulfit-polymerasekædereaktion (PCR) og pyrosekventering assay. Demografi, klinisk-patologiske data og postoperative resultater blev registreret af uddannede abstractors. Outcome målinger omfattede postoperative gentagelse og sygdomsfri overlevelse. Univariate, multivariat, og overlevelse analyser blev udført for at identificere prognostiske faktorer af onkologiske udfald.

Resultater

LINE-1 methylering af alle 129 patienter blev målt på en 0-100 skala (gennemsnit 63,3 , median 63,7, standardafvigelse 7,1), LINE-1 hypometylering var mere almindelig hos patienter på 65 år og derover (61,7% ± 7,6% vs. 64,6 ± 6,4,

s

= 0,019), og dem med post terapeutisk recidiv (61,7 ± 7,4 vs 64,3 ± 6,7,

s

= 0,041). I betragtning risikojusteringer blev LINE-1 hypometylering sig at være en uafhængig risikofaktor for post-terapeutisk recidiv (Justeret OR = 14,1,

s

= 0,012). Kaplan-Meier analyse viste, at patienter i den lave gruppe methylering havde kortere sygdomsfri overlevelse (

s

= 0,01). I en lagdelt analyse, der omfattede 48 patienter med post-terapeutisk tilbagefald, blev det konstateret, at de, der har oplevet kortere sygdomsfri overlevelse (≦ 6 måneder) viste sig at have lavere LINE-1 methylering niveauer end patienter, der rapporterede for tilbagefald efter 6 måneder (56,68 ± 15,75 vs. 63,55 ± 7,57,

s

= 0,041)

Konklusion

Der var en signifikant større risiko for tidlig postoperative gentagelse og en kortere periode med sygdoms- overlevelse i trin III patienter tyktarmskræft udviser LINE-1 hypometylering status efter at være blevet behandlet med radikal resektion og FOLFOX kemoterapi

Henvisning:. Lou YT, Chen CW, Fan YC, Chang WC, Lu CY, Wu IC, et al. (2015) LINE-1 Methylering status Korrelerer Betydeligt til Post-Terapeutisk Gentagelse i trin III tyktarmskræft patienter, som fik FOLFOX-4 opfølgende kemoterapi. PLoS ONE 10 (4): e0123973. doi: 10,1371 /journal.pone.0123973

Academic Redaktør: John Souglakos, Kretas universitet, GRÆKENLAND

Modtaget: 7. oktober, 2014 Accepteret: 24. februar, 2015; Udgivet: 28 April, 2015

Copyright: © 2015 Lou et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Kaohsiung Medical University Research Foundation (KMU-1M-30), center for biomarkører og Biotek Drugs, Kaohsiung Medical University (KMU-TP103C03 , KMU-TP103H11), og meddelelse af biosignatur i tarmkræft, Academia Sinica, Taiwan. CWC og JYW modtaget finansiering. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Der har været en støt stigning i kolorektal cancer (CRC) tilfælde på verdensplan i de seneste år. Ifølge GLOBOCAN overslagene i 2008, CRC er den tredje mest almindelige kræftform hos mænd og den næsthyppigste hos kvinder [1]. På grund af spredning af usund kost og livsstil i Taiwan, har CRC blevet den tredje mest almindelige årsag til kræft-relaterede dødsfald. I de senere år har mere end 4.000 CRC patienter døde årligt (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm; tilgås i december 2013). De seneste forbedringer i tumor detektion og adjuverende behandling, dog har øget forventede levetid CRC patienter [2]. Men på trods af helbredende kirurgi og adjuverende kemoterapi, er der stadig et betydeligt antal patienter, der støder tumor tilbagefald under deres follow-up periode. Mange postoperative overvågningsprogrammer er blevet foreslået til detektering af muligheden for en gentagelse på et tidligt stadium. Medicinske forskere har også nået til enighed om rutinemæssig overvågning af fase II og III CRC patienter, der er blevet behandlet med kurativ kirurgi [3-5]. Samtidig, mange forskere fortsat søge efter sofistikerede biomarkører i stand til effektivt at detektere asymptomatisk fornyet CRC efter operationen. I øjeblikket, nogle biomarkører er lovende, men stadig langt fra at være vurderbare hos de fleste patienter. I mellemtiden, mærkning af højrisikogrupper, som er tilbøjelige til at tilbagefald synes at være en anden taktik blandt de intensive postoperativ overvågning strategier, der anvendes i disse sårbare grupper.

CRC udvikler skyldes genetiske og epigenetiske ændringer. I det sidste årti, har mange undersøgelser undersøgt den rolle, epigenetiske faktorer i udviklingen af ​​CRC i patienter [6,7]. Epigenetik, som er blevet beskrevet som en bro mellem genetik og miljø, har vist sig at have en tæt relation med kræft biologi [8,9]. Epigenetiske ændringer kunne arvet, men disse faktorer er også reversible og kan vise sig at være nyttige i at belyse mange tvetydige aspekter af carcinogenese og tumor tilbagefald i CRC patienter. Da epigenetiske begivenheder kan vendes, er vi i stand til at regulere processen med kemisk modifikation, herunder potentielle anti-neoplastisk aktivitet [7,10].

Blandt forskellige epigenetiske begivenheder, DNA methylering er et centralt element i epigenetik i pattedyrgenomet, som resulterer i tilføjelsen af ​​en methylgruppe (CH

3) gruppe ved carbon-5 positionen af ​​cytosin ring. To store methyleringsmønstre observeres ofte i CRC: den ene er hypermethylering, hvilket som regel medfører CpG-øer, og den anden er hypometylering indebærer ofte gentagne DNA-sekvenser [6,8]. Selvom rapporter om hypermethylering i maligniteter overtal rapporter om hypometylering, sidstnævnte synes at være blevet et emne for intens efterforskning i de senere år [9,11]. Desuden kunne methylering niveauer påvirkes af prøveudtagning teknikker, tumor steder, miljømæssige faktorer og patientens alder [9,12-15].

Global DNA hypometylering kan føre til genetisk ustabilitet. Dens tæt forhold med en bred vifte af maligne lidelser, herunder CRC, er blevet rapporteret i tidligere studier [6,7,9]. Retroelements, gentagne sekvenser af lange afbrudt nukleare elementer-1 (LINE-1), forekommer i næsten 18% af det menneskelige genom [16]. Disse retroelements kan forårsage skadelige virkninger i værtscellen, men det er generelt inhiberes af undertrykkende mekanismer. Dog kan retroelements bidrage til tumorigenese i forskellige indstillinger. Global methylering kan måles indirekte ved at vurdere status methylering af LINE-1 [17]. Tidligere undersøgelser har vist, at pyrosekventering analysen for LINE-1 methylering er kvantitativ, effektiv og reproducerbar [18-20].

For nylig har mange epigenetiske studier belyst sammenhængen mellem LINE-1 methylering og kræft. Det er blevet foreslået, at graden af ​​LINE-1 hypometylering fungerer som en selvstændig faktor ugunstige onkologiske udfald i CRC patienter [18,21,22]. Ogino et al. fundet, at LINE-1 hypometylering er en uafhængig risikofaktor, hvilket indikerer høj kræft dødelighed og den samlede dødelighed hos patienter med tyktarmskræft [21]. Sunami et al. også rapporteret, at der er en lineær sammenhæng mellem udviklingen af ​​LINE-1 methylering og tumor progression [23]. Goel et al. rapporterede, at HNPCC (HPNCC) var associeret med lavere grad af LINE-1 methylering [24]. Desuden har nogle undersøgelser vist, at tidlig debut CRC er forbundet med lavere LINE-methylering og har fremhævet dens potentielle rolle som prognostisk biomarkør hos yngre CRC patienter [18,25]. Imidlertid har mange forskere foreslået LINE-1 som et lovende markør til at forudsige CRC prognose. Derfor bør mere patientrelaterede og behandlingsrelaterede konfoundere styres til at generere mere overbevisende konklusioner, især i lyset af moderne strategier, der fremhæver skræddersyede behandlinger for forskellige stadier af CRC’er.

Derfor i denne undersøgelse fokuserede vi udelukkende på trin III coloncancer befolkning. Vi undersøgte tumoral LINE-1 methylering status fase III-patienter tyktarmskræft, efter at de blev behandlet med radikal resektion og FOLFOX adjuverende kemoterapi. I denne undersøgelse blev særlig vægt på deres onkologiske udfald, herunder postoperative gentagelse og kræft dødelighed. Ved at kontrollere andre potentielle prognostiske faktorer, vi søgte at undersøge den prognostiske betydning af LINE-1 methylering i fase III-patienter tyktarmskræft.

Materialer og metoder

Etik erklæring

undersøgelsen blev godkendt af Institutional Review Board of Kaohsiung Medical University Hospital (KMUHIRB-20.120.043) i Kaohsiung, Taiwan. Alle deltagere i denne undersøgelse underskrev en informeret-samtykkeerklæring.

Undersøgelse emner

Vi retrospektivt anmeldt dokumentationen for alle patienter tyktarmskræft, der blev kirurgisk behandlet på Kaohsiung Medical University Hospital mellem januar 2008 og juli 2012. i alt 150 trin III tyktarmskræft patienter, som gennemgik radikal resektion og efterfølgende FOLFOX adjuverende kemoterapi blev oprindeligt indskrevet. Fjorten patienter blev udelukket som optimale vævsprøver var ikke tilgængelig. Blandt de resterende 136 patienter blev syv udelukket, fordi patienternes kliniske data var ufuldstændige. Således i alt 129 patienter kvalificeret ved den endelige analyse (figur 1). Alle patienter fik regelmæssige opfølgninger på 2-3 måneders mellemrum indtil døden eller slutningen af ​​juni 2013.

Postoperativ adjuverende kemoterapi

Alle undersøgelsens deltagere fik adjuverende FOLFOX-4 kemoterapi ifølge til centrets retningslinier for kræftbehandling. Følgende protokol blev anvendt til administration FOLFOX-4 kemoterapi: oxaliplatin 85 mg /m

2 blev infunderet inden for en to-timers periode på dag 1; leucovorin 200 mg /m

2 blev infunderet samtidig med oxaliplatin inden for en to-timers periode på dag 1, efterfulgt af en bolus af 5-FU 400 mg /m

2; derefter en kontinuerlig infusion af 5-FU 600 mg /m

2 blev indgivet i løbet af 22 timer. Denne protokol blev gentaget hver anden uge × 12 cyklusser.

Klinisk dataindsamling

Patient karakteristika, herunder alder, køn, tumor placering, og klinisk-patologiske træk, blev indhentet fra elektroniske patientjournaler og kliniske diagrammer . Klinisk-patologisk træk og stadier af primære tumorer blev defineret ved hjælp af de af TheAmerican Fælles Kommissionen foreslog den kræft /Union for International Cancer Control (AJCC /UICC) [26] kriterier. Histologi kvaliteter blev klassificeret som følger: godt differentieret (WD), moderat differentierede (MD), eller dårligt differentieret (PD). Som rapporteret i en tidligere undersøgelse blev tumor steder kategoriseret som proximal eller distal til milt bøjning [27]. Vaskulær invasion, perineural invasion, tumor invasion dybde, og lymfeknude metastaser blev faktorer særligt kategoriseret før yderligere sammenligning, da hver faktor blev betragtet som en selvstændig risikofaktor [28-31].

Genomisk DNA isolation

Disse formalin-fikseret, paraffin-indstøbt (FFRE) enheder fås fra 129 patienter blev gennemgået for at identificere de repræsentative steder for kræft. FFPE vævsblokke blev mikrodissekeres at erhverve 10 um snit fra hver prøve. Bisulfitbehandling af tumoral DNA blev derefter udført med en EpiTech bisulfit kit (Quiagen, Valencia, CA) ifølge fabrikantens protokol.

Pyrosequencing til måling LINE-1 methylering

Ud over den førnævnte natriumbisulfit DNA konverteringsprocessen (EpiTech bisulfit Fast FFPE Kits; Qiagen; No.59844), de pyrosekventering assays også omfattede polymerasekædereaktion (PCR) amplifikation (Pyromark PCR Kit; Qiagen; No.978703) og sekventering af målsekvensen ved syntese assay (Pyromark Gold Q24 reagenser Qiagen; No.970802). Denne analyse forstærker en region af LINE-1 element. PCR-betingelserne var 45 cykler ved 95 ° C i 20 s, 50 ° C i 20 s, 72 ° C i 20 s, efterfulgt af 72 ° C i 5 min. LINE-1 methylering resulterer blev opnået på en kontinuerlig skala fra 1-100 under anvendelse af pyrosekventering assay.

Outcome målinger

Udviklingen af ​​postoperative cancertilbagefald og sygdomsfri overlevelse (DFS) blev anvendt som store endepunkter for at sikre, at kausale slutninger om observerede resultater var hovedsageligt tilskrives kræft. Udviklingen af ​​en ny lokal recidiv eller fjerne metastatiske læsioner efter operationen blev betragtet som postoperative gentagelser. Mens beregning DFS resultater blev tilfælde af postoperativ dødelighed, der opstod inden for 30 dage udelukket. Personer, der døde af andre end CRC årsager blev også udelukket fra resultatet analyse. Med hensyn til resultatet behandling for FOLFOX regime, blev DFS defineret som den tid der er gået fra indledningen af ​​FOLFOX kemoterapi til tilbagefald.

Statistisk analyse

Data blev analyseret ved hjælp af statistiske Pakke til samfundsvidenskab, Version 17.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL). Student t-test, Pearson chi-square test, Fishers eksakte test, og Kruskal-Wallis testen blev anvendt til at sammenligne de demografiske og klinisk-patologiske træk mellem grupper ud fra deres forskellige måling af resultaterne. Alle variabler blev yderligere dikotomiseret til generering ujusterede odds ratio i univariate analyse, som blev udført efterfølgende. Multipel logistisk regressionsanalyse blev udført for at identificere variable, der er signifikant relateret til sandsynligheden for tumor tilbagefald eller cancer-specifik overlevelse. Regressionsmodeller blev kontrolleret for effekten af ​​confounding variable. Resultater af logistisk regressionsanalyse blev rapporteret som justeret odds ratio (OR) med 95% konfidensinterval (CI). Den sammenlignende vurdering af langsigtede resultater blev udført ved at analysere overlevelseskurverne bruger Kaplan-Meier-metoden. Kurver for DFS blev sammenlignet med Log-rank test. Alle tests af signifikans blev to tailed, og

P

-værdier 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Resultater

klinisk-patologisk karakteristika patientpopulationen

Den gennemsnitlige alder ved operation for disse 129 patienter var 61,6 år (interval, 30-87 år ), og 81 patienter var mænd (62,8%). Klinisk-patologisk træk er beskrevet i tabel 1. Alle patienter blev behandlet med FOLFOX adjuverende kemoterapi. Den mediane follow-up tid var 24 måneder (IQR: 16,9-36). Tumor gentagelse blev rapporteret af 48 patienter, mens 34 patienter døde under deres follow-up periode.

LINE-1 methyleringsanalyse

Selvom LINE-1 methylering niveauer i de 129 colon tumorer (figur 2), blev vidt udbredt (interval, 37,4-77,9 på en 0-100 skala), de stadig viste normalfordeling (Kolmogorov-Smirnov test

P

0,05). Den gennemsnitlige LINE-1 methylering niveau i stigende, tværgående, faldende, sigmoid tyktarm og endetarm, var 66,41 ± 5,23%, 60,71 ± 7,26%, 61,53 ± 10,45%, 63,32 ± 6,34%, 61,33 ± 8,05%, hhv. Methyleringen niveau var signifikant højere i colon ascendens i forhold til andre steder. (

s

= 0,042) methylering niveau i overlevelse gruppen Den gennemsnitlige LINE-1 var 63,8 ± 6,6% versus 61,9 ± 8,2% i dødeligheden gruppen (

s

= 0,164). Med hensyn til postoperative tumor tilbagefald, den gennemsnitlige LINE-1 methylering niveau var signifikant lavere i tilbagefald sammenlignet med den ikke-recidiv gruppe (61,7 ± 7,4% vs. 64,3 ± 6,7%;

s

= 0,041) . Fordi der er ingen alment accepteret tærskel for at definere, om LINE methylering niveau er optimal eller unormal, vi delte niveauet af methylering i to grupper ved hjælp af en modtager opererer karakteristik (ROC) analyse, der har balanceret sensitivitet og specificitet. Den cutoff-værdi var 70,15% som arealet under kurven (AUC) var 0,593.

univariat analyse af LINE-1 methylering niveau

Vi undersøgte LINE-1 methylering niveauer i de forskellige grupper kategoriseret efter de variabler, der er nævnt i tabel 1. for en bedre sammenligning, alder blev dikotomiseret i to grupper, med en cut-point værdi på 65 år. Som vist i tabel 2, i univariate analyse inkorporerer ni variabler blev LINE-1 methylering niveauer vist sig at være signifikant forskellig mellem gruppen i alderen 65 år og derover, og aldersgruppen under 65 år (64,6% versus 61,7%, henholdsvis;

s

= 0,019).

univariate og multivariate analyse af måling af resultaterne

tabel 3 viser resultaterne af den univariate og multivariate analyse med hensyn til måling af resultaterne af post-terapeutisk gentagelse. De histologiske kvaliteter blev inddelt i to grupper, den ene indeholder veldifferentieret (WD) og moderat differentierede (MD) prøver, og de øvrige omfatter dårligt differentierede (PD) prøver. På grund af en begrænset antal T1 tilfælde blev T-stadier dikotomiseret ind “T1 + T2” og “T3 + T4” grupper. De LINE-1 methylering niveauer blev dikotomiseret i “lave” versus “høj” grupper efter en cutoff værdi på 70,15% genereret af vores tidligere ROC-analyse. Derefter blev logistisk regression påført med fremad markering. LINE-1 methylering syntes at være den eneste uafhængige prognostiske faktor for onkologiske udfald af post-terapeutisk tumor recidiv (Justeret OR = 14,1,

s

= 0,012).

Survival analyse

Opfølgende data var til rådighed for alle de 129 deltagere. Den mediane overlevelse periode var 25 (IQR: 19-40) måneder for de patienter, der overlevede, 19,1 (IQR: 12.9-26.7) måneder for de patienter, der døde, og 24 (IQR: 16,9-36) måneder for den samlede kohorte. For at vurdere de prognostiske konsekvenser af LINE-1 methylering, vi fokuseret på postoperative gentagelse og DFS efter at have taget hensyn til resultatet af multivariat analyse. Kaplan-Meier-metoden viste, at flere tilfælde af postoperative gentagelse og en kortere gennemsnitlig DFS blev noteret i den lave LINE-1 methylering gruppe (figur 3,

s

= 0,010).

Kurverne afbilder virkningerne på postoperative gentagelse af LINE-1 methylering når opdelt i patienter med “lav” versus “høj” methylering.

Indflydelse af LINE-1 methylering niveau på DFS i patienter med post-terapeutisk gentagelse

på baggrund af dokumentation for den kortere gennemsnitlig DFS i den lave LINE-1 methylering gruppe, vi hypotese, at der er en vis sammenhæng mellem LINE-1 methylering niveau og DFS i gentagelse gruppen. For at påvise tærsklen til DFS forårsager betydelige forskelle i LINE-1 methylering niveauer, vi introducerede fire empiriske tærskelværdier af DFS (3, 6, 9 og 12 måneder) og dikotomiseret alle tilbagefald patienter i “tidlig recidiv” (DFS kortere end eller lig med grænseværdien) og “sen recurrence2010043 (DFS længere end tærsklen) grupper. Når tærsklen til DFS er seks måneder, den tidlige gentagelse gruppen syntes at have en signifikant lavere gennemsnitlig LINE 1-methylering niveau (tabel 4).

Diskussion

De vigtigste resultater af den nærværende undersøgelse

i denne undersøgelse har vi påvist, at LINE-1hypomethylation er forbundet med højere postoperative gentagelse og en kortere DFS i stadie III patienter tyktarmskræft, der har gennemgået radikale indgreb og efterfølgende FOLFOX kemoterapi. Tidligere undersøgelser har rapporteret, at CRC patienternes tumor progression, overlevelse, eller fornyet kan variere i henhold til niveauet af LINE-1 methylering [21,23,32]. Ikke desto mindre, da disse undersøgelser omfattede forskellige befolkning og forskellige behandlingsprocedurer, der var tydeligt heterogenitet i deres resultater. Vi vurderede kun de prognostiske implikationer af LINE-1 methylering niveauer på en homogen population omfattende fase III tyktarmskræft patienter, som havde fået radikal resektion og FOLFOX adjuverende kemoterapi. Vores resultater bekræftede de tidligere rapporterede fund af Ahn et al. på den prognostiske indflydelse LINE-1 hypometylering på resektion fase III CRC patienter [33]. De understregede, at DNA hypomethyaltion var en mulig biomarkør for tilbagefald i proksimal men ikke i distale CRC tilfælde. Ved at inkludere confounder justeringer, såsom tumor placering (proksimale versus distal) i vores undersøgelse fandt vi, at lav LINE-1 methylering niveauer (under 70,15) stadig fortsatte med at være en robust risikofaktor har cirka otte gange af postoperative gentagelse risiko.

Forholdet mellem LINE-1 methylering og det underordnede websted placeringer af tumorer

de to-kolon konceptet er traditionelt anvendes til at indikere diskrete molekylære funktioner via dikotomisk klassificering af proksimale og distale colon tumorer. I tidligere undersøgelser, har kromosomal instabilitet (CIN) blevet mere almindeligt observeret i distale CRC’er [34]. På den anden side, mikrosatellit instabilitet (MSI) og

BRAF

mutationer er mere almindelige i proksimale CRCs [35-37]. Imidlertid Yamauchi et al. for nylig fundet, at frekvenserne af høj CpG ø methylator fænotype (CIMP), MSI-høj, og

BRAF

mutationer gradvist øges fra endetarmen til colon ascendens [38]. Dette fund dybt udfordrede den konventionelle koncept af to-colon model, der har været anvendt i flere årtier. I vores egne data, selv om vores sammenligning af LINE-1 methylering niveauer hos patienter højresidig og venstre-sidet tyktarmskræft angivet borderline statistisk signifikans, bemærkede vi, at methylering niveau middelværdi var signifikant højere i colon ascendens tumorer i forhold til dem i andre steder . Vi anbefaler, at de stedspecifikke konfoundere altid bør overvejes, når der udføres forskningsundersøgelser om genetiske eller epigenetiske ændringer.

Definitionen af ​​hypermethylering eller hypometylering

Selv om en voksende mængde af beviser understøtter den prognostiske betydning af LINE-1 methylering, en tærskel definerer, om det målte methylering niveau hypermethyleret eller hypomethylated er endnu ikke fastlagt. Saito et al. observeret den prognostiske indvirkning LINE-1 methylering på ikke-småcellet lungekræft holde en høj tærskel på 90% [39]. Antelo et al. defineret LINE-1 hypometylering hos unge CRC patienter, der bruger en cutoff-værdi på 65%, og erklærede, at de patienter, der havde 65% LINE-1 methylering havde dårligere samlet overlevelse [18]. I vores undersøgelse har vi kategoriseret LINE-1methylation niveauer i høje og lave grupper niveau baseret på tidligere forskeres begreber [40,41]. For præcist at identificere en optimal cutoff værdi for LINE-1-methylering i patienter, der rapporterede tumor recidiv efter radikal CRC kirurgi, så gennemførte vi ROC-analyse. For de kontinuerlige data fra disse prøver blev arealet under kurven (AUC) fundet at være 0,593, og 70,15% blev anset som cutoff-værdien af ​​methylering var med balanceret følsomhed og specificitet. Med en højere cutoff værdi og dårligere diskriminerende ydelse, vores resultat var lidt anderledes end rapporteret i tidligere undersøgelse af Baba et al [25]. I en heterogen population bestående CRC’er af alle stadier, de opnået en bedre AUC på 0,62 ved at overveje en cutoff værdi på 60%. Ikke desto mindre, er der plads til forbedring diagnostisk præstation som mere omfattende undersøgelser skal være baseret på lagdelte befolkninger og forskellige tumor steder.

LINE-1 methylering variation i CRC med og uden tilbagefald

Mange forskere har entusiastisk fortsat udforske den mekanisme, hvormed LINE-1 methylering er forbundet med onkologiske udfald. Hypometylering af LINE-1 resulterer i transkriptionel aktivering af mulige carcinogenese [9,16]. En augmented ekspression af LINE-1 efter hypomethylering kan resultere i kromosomal ustabilitet (CIN), som er blevet betegnet som en karakteristisk fænotype i mere invasive cancere har dårligere prognose [13,16]. Endvidere Hur et al. for nylig rapporteret, at der har været beviser for, at LINE-1 hypometylering tjener som en afgørende funktion i CRC metastaser, især ved nedsat metastaser [42]. Dette er i god overensstemmelse med statistisk signifikant forskel mellem de LINE-1 methylering niveauer af tilbagefald og ikke-tilbagefald grupper af vores undersøgelse (tabel 2). Blandt de 48 colon cancer gentagelser i vores undersøgelse kohorte var der 14 tilfælde af levermetastaser. Men LINE-1 methylering niveauer af patienter med tyktarmskræft med levermetastaser ikke vise en signifikant forskel i forhold til dem med andre gentagelser. I modsætning til de perspektiver af tidligere forskere, har vi vist et afgørende fund, at LINE-1 hypometylering har en vis indflydelse på den tidlige gentagelse (DFS kortere end 6 måneder) i kohorten, der til sidst har oplevet tilbagefald. Disse resultater understreger den afgørende rolle, LINE-1 methylering i udviklingen af ​​tyktarmskræft tilbagefald, især tidligt recidiv. Derfor er det nødvendigt at udtænke hyppige og tidlige strategier overvågning til at styre den postoperative opfølgning af patienter, der tilhører hypometylering gruppen.

Begrænsninger

Flere begrænsninger skal overvejes, mens fortolke resultaterne af vores undersøgelse. Først kunne nogle indflydelsesrige faktorer global methylering ikke styres. Fordi undersøgelsespopulationen ikke var prospektivt rekrutteret, kunne visse miljømæssige faktorer eller patient-relaterede oplysninger ikke registreres ved kirurgi. For eksempel har ioniserende bestråling, rygning og fysisk aktivitet er blevet rapporteret at forårsage variationer i LINE-1 methylering [43-45]. For at undgå at indføre flere recall bias, vi ikke forsøge at kontrollere disse potentielle konfoundere i vores undersøgelse. Desuden på baggrund af dette forsøg, kan det være etisk uacceptabelt at gennemføre en undersøgelse, der tilfældig rækkefølge patienter med eller uden administrationen af ​​FOLFOX adjuverende kemoterapi. Vi foreslog, at status for methylering kunne bruges som en stratificering faktor. For det andet, at antallet af undersøgelsens deltagere er begrænset, og den udelukkede befolkning er fortsat stor. Den udelukkede del kan besidde en vis indflydelse på de overordnede resultater, hvis de også blev indskrevet. Desuden kunne den opfølgende varighed udvides til at belyse den prognostiske effekt på kræft-dødelighed. På trods af disse begrænsninger, var vi i stand til at påvise, at clinicopathologic funktioner var tydelig og prognoser var forskellige for de methylering undergrupper dannet af en homogen asiatiske befolkning.

Konklusion

Vores resultater indikerer, at på trods at blive behandlet med radikal kirurgi og FOLFOX adjuverende kemoterapi, fase III tyktarmskræft patienter med LINE-1 hypometylering stødt tidlige postoperative gentagelser og kortere DFS.

Støtte Information

S1 datasæt. Nærmere oplysninger om undersøgelsens deltagere 129

doi:. 10,1371 /journal.pone.0123973.s001

(XLS)

Tak

Forfatterne takker Ming-Yii Hwang for at give nyttige forslag om tidligere versioner af dette manuskript.