PLoS ONE: Identifikation og karakterisering af angiogenese targets gennem proteomiske Profilering af endotelceller i Human Cancer væv

Abstrakte

Genomisk og proteomisk analyse af normale og cancer væv har givet rigelig molekylær information til potentielle biomarkør og terapeutiske mål. I betragtning af de potentielle fordele i adgangen til farmakologisk intervention, identifikation af mål med bopæl på det vaskulære endotel i tumorer er særligt attraktivt. Ved at anvende massespektrometri (MS) som et redskab til at identificere proteiner, som overeksprimeres i tumorassocieret endotel i forhold til normale celler, vi havde til formål at opdage mål, der kunne bruges i tumorangiogenese cancerterapi. Vi udviklede proteomiske metoder, der tillod os at fokusere vores studier på opdagelsen af ​​celleoverflade /udskilte proteiner, da de repræsenterer vigtige antistof terapeutiske og biomarkør muligheder. Først, vi isoleret endotelceller (ECS) fra humane normale og nyrekræft væv ved FACS hjælp CD146 som markør. Derudover spredte menneskelige kolon og lungekræft væv og deres tilsvarende normale væv blev dyrket

ex-vivo

deres endotel indhold blev fortrinsvis udvidet, isoleret og passeret. Celleoverfladeproteiner blev derefter fortrinsvis fanget, spaltet med trypsin og underkastet MS-baseret proteomanalyse. Peptider blev først kvantificeret, og derefter sekvenserne af differentielt udtrykte peptider blev opløst ved MS-analyse. I alt 127 unikke ikke-overlappende (157 i alt) tumor endotelcellen over-udtrykte proteiner identificeret fra direkte isoleret nyre-associeret ECS og dem identificeret fra

ex-vivo

dyrkede lunge- og colon væv, herunder kendte EF markører sådanne som CD146, CD31, og VWF. blev bekræftet ved immunhistokemi (IHC), herunder CD146, B7H3, Thy-1 og ATP1B3 ekspressionen analyser af et panel af de fastsatte mål. At afgøre, om de identificerede proteiner mægle enhver funktionel rolle, vi udførte siRNA undersøgelser, der førte til tidligere uidentificerede funktionel afhængighed til B7H3 og ATP1B3

Henvisning:. Mesri M, BIRSE C, Heidbrink J, McKinnon K, Brand E, Bermingham CL, et al. (2013) Identifikation og karakterisering af angiogenese targets gennem proteomiske Profilering af endotelceller i Human Cancer væv. PLoS ONE 8 (11): e78885. doi: 10,1371 /journal.pone.0078885

Redaktør: Benedetta Bussolati, Center for Molekylær Bioteknologi, Italien

Modtaget: 30. maj 2013; Accepteret: September 16, 2013; Udgivet: November 13, 2013