PLoS ONE: Omfattende Undersøgelse af Gene og microRNA Expression Relateret til Epithelial-Mesenchymale Transition i prostata Cancer

Abstrakt

Prostatakræft er den mest almindelige kræftform hos mænd, og de fleste patienter har lokaliseret sygdom på tidspunktet for diagnosen . Imidlertid 4% allerede indfinde med metastatisk sygdom. Epithelial-mesenchymal overgang er en grundlæggende proces i carcinogenese, der er blevet vist at være involveret i prostatakræft progression. Den vigtigste begivenhed i epitel-mesenkymale overgang er undertrykkelsen af ​​E-cadherin ved transkriptionsfaktorer, men processen er også reguleret af microRNA. Formålet med denne undersøgelse var at analysere genet og microRNA ekspression involveret i epitel-mesenchymal overgang i lokaliseret prostatacancer og metastatisk prostatacancer-cellelinier og korrelerer med klinisk-patologiske fund. Vi studerede 51 friske frosne vævsprøver fra patienter med lokaliseret prostatacancer (PSA) behandlet ved radikal prostatektomi og tre metastatisk prostatacancer-cellelinier (LNCaP, DU145, PC3). Ekspressionen af ​​10 gener og 18 miRNA blev vurderet ved real-time PCR. Patienterne blev inddelt i grupper efter Gleason score, patologisk stadium, præoperativ PSA, biokemisk tilbagefald, og risikogruppe for korrelation med klinisk-patologiske fund. Størstedelen af ​​lokaliserede PCA tilfælde viste en epitelial fænotype, med overekspression af E-cadherin og underekspression af de mesenchymale markører. MiRNA-200 familiemedlemmer og miRNA 203, 205, 183, 373, og 21 blev overudtrykt, mens miRNA 9, 495, 29b, og en blev underexpressed. Low-ekspressionsniveauer af miRNA 200b, 30a, og 1 var signifikant associeret med patologisk stadium. Lavere ekspression af MIR-200b var også forbundet med en Gleason score ≥8 og kortere biokemisk tilbagefald overlevelse. Desuden blev lav ekspressionsniveauer af miR-30a og high-ekspressionsniveauer af vimentin og Twist1 observeret i gruppen med høj risiko. Sammenlignet med den primære tumor, viste de metastatiske cellelinier væsentligt højere ekspressionsniveauer af MIR-183 og Twist1. Sammenfattende miRNA 200b, 30a, 1, og 183, og generne Twist1 og vimentin kunne spille en vigtig rolle i udviklingen af ​​prostatakræft og i sidste ende kan blive vigtige prognostiske markører

Henvisning:. Katz B, Reis ST, Viana NI, Morais DR, Moura CM, Dip N, et al. (2014) omfattende undersøgelse af Gene og microRNA Expression Relateret til Epithelial-Mesenchymale Transition i prostatakræft. PLoS ONE 9 (11): e113700. doi: 10,1371 /journal.pone.0113700

Redaktør: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, USA

Modtaget: Juli 21, 2014 Accepteret den 28. oktober 2014 Udgivet: November 19, 2014

Copyright: © 2014 Katz et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Sao Paulo) under protokol nummer 2012 /50.094-9. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatakræft (PCA) er en af ​​de mest almindelige tumorer hos mænd, og det tegner sig for 29% af alle nydiagnosticerede kræfttilfælde [1]. Efter vedtagelsen af ​​PSA-screening, de fleste patienter til stede med lokaliseret PCa, men 4% allerede har metastatisk sygdom på tidspunktet for diagnosen [1]. På nuværende klinisk-patologiske funktioner såsom iscenesættelse, Gleason score (GS), og PSA niveauer er gode prognostiske markører [2], og bruges til at lave behandlingen beslutninger; de er imidlertid ikke tilstrækkelig nøjagtige til at skelne mellem tumorer, som vil forblive indolent og dem, der senere vil udvikle sig til at blive metastatisk. Faktisk kan de unikke biologiske egenskaber og heterogene genetiske baggrunde PCA [3] begrænser effektiviteten af ​​konventionelle klinisk-patologiske parametre som prædiktive markører. Af disse grunde har molekylære biomarkører i stigende grad blevet undersøgt for at hjælpe med at forstå og forudsige kræft adfærd.

epitel-til-mesenchymal overgang (EMT) er en omvendt biologisk proces, der spiller en rolle i invasionen og metastase under carcinogenese. Epitelcelle-celle-adhæsion er faldet, og cellerne får en spindel-formet, meget motile fibroblast fænotype og en større kapacitet for migration og invasion [4]. Det vigtigste element i EMT er transkriptionel lyddæmpning af E-cadherin [5], [6], som er styret af de transkriptionelle regulatorer

ZEB1

,

ZEB2

,

SNAI1

(Snail),

SNAI2

(Slug), og

TWIST1

[5], [7], [8]. Desuden er der også opregulering af mesenchymale markører, såsom vimentin og N-cadherin, en proces, der er kendt som cadherin skifte [9].

roller gener relateret til EMT i PCa forstås ikke til fulde, og tidligere undersøgelser beskriver tabet af E-cadherin [10] efterfulgt af forøget ekspression af N-cadherin, cadherin-11 og vimentin [9] i immunhistokemi-analyse. Ekspressionsniveauerne af

ZEB1

, en afgørende regulator af EMT i PCa, er relateret til GS [11], og Behnsawy et al foreslog brugen af ​​EMT genekspressionsprofiler som markører for biokemisk tilbagefald efter radikal prostatektomi [ ,,,0],12].

MikroRNA’er (miRNA), en ny klasse af ikke-kodning, regulatoriske RNA, har vist sig at deltage i mange processer i forbindelse med udvikling og progression af kræft, herunder EMT [13]. En af de vigtigste miRNA involveret i EMT er MIR-200-familien, som er en potent inducer af epitheldifferentiering. Denne gruppe omfatter miR-200a, miR-200b, miR-429, miR-200C, og miR-141, som er genereret ud fra to udskrifter. De første tre er afledt fra kromosom 1, mens de to sidstnævnte er afledt af kromosom 12. Medlemmerne af denne gruppe er stærkt relateret i sekvens, hvilket indikerer, at de sandsynligvis målrette en tilsvarende supplement af messenger RNA’er [14].

Blandt målene i miR-200 familie er ZEB1 og ZEB2 [15] – [17]. MIR-200 medlemmer inhibere ekspressionen af ​​ZEB på post-transkriptionel niveau ved at binde til stærkt bevaret målsteder i deres 3’UTRs [18], [19]. Interessant, miR-200 medlemmer er transkriptionelle mål for

ZEB1

og

ZEB2

. Den tætte funktionel forbindelse mellem de ZEB faktorer og miR-200 familie i en dobbelt-negative feedback loop er kendt som ZEB /miR-200 feedback-sløjfe [18], hvor aktivering af en gruppe negativt påvirker ekspressionen af ​​det andet gruppe. Afhængigt af de ekstracellulære signaler, kan denne løkke skifte fra den ene side til den anden side og stabilisere enten epitel- eller mesenchymale fænotype. Andre miRNA har også vist sig at deltage i EMT, målretning

SNAI1

(MIR-29b, MIR-30a, MIR-34a) [20], [21], og

SNAI2

(MIR -34a, miR-1, miR-200b) [22], [23]. Imidlertid har nogle undersøgelser vurderet miRNA er involveret i EMT i PSA.

Vores mål er at dechifrere rolle gener og miRNA relateret til EMT i PCa at identificere en profil, der definerer PCa adfærd.

Materialer og metoder

Patient valg

Fifty-én patienter, som klinisk havde lokaliserede prostatakræft og gennemgik radikal prostatektomi mellem 2000 og 2002 blev udvalgt. Alle patienter blev behandlet ved samme kirurg (MS), og alle patologiske prøver blev analyseret ved samme uropathologist (KRML). Patienterne blev fulgt i en gennemsnitlig periode på 63,06 måneder

Kontrolgruppen bestod af ti prøver fra patienter, som gennemgik kirurgi for benign prostatahyperplasi, og havde prostatavolumen. 50 cm

3 om ultralyd, PSA niveauer. 2,5 ng /ml, og ingen malignitet i de patologiske eksemplar

prostata vævsprøver

Alle friske frosne PCA prøver blev indhentet fra vores prostata biobank, og skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter. Denne undersøgelse blev godkendt af institutionelle bestyrelse etik (CAPPesq – Comissão de Etica para Análise de Projetos de Pesquisa) under nummer 5907. De friske frosne tumorer stammer fra radikal prostatektomi prøver, og en 1 cm

3 fragment blev isoleret fra den mistænkelige område og umiddelbart snap-frosset ved -80 ° C. Det resterende væv blev fikseret i 10% formalin, behandles rutinemæssigt, og farvet med hematoxylin og eosin til histologisk undersøgelse. Prøverne blev efterfølgende revideret og sorteres ved hjælp af den modificerede Gleason klassificeringssystem [24], og scenen blev bestemt efter TNM 2010.

Cellelinjer

prostatakræft-cellelinier LNCaP, DU 145, og PC3 blev opnået fra American Type Culture Collection (ATCC). LNCaP, DU145, og PC3 blev opretholdt i RPMI, DMEM, og MEM-medier (Invitrogen, Carlsbad, CA, ERE), hhv. Alle medier blev suppleret med 10% kalvefosterserum og 1% antibiotisk /antimykotisk opløsning (Sigma, St. Louis, MO, USA), og kulturerne blev inkuberet ved 37 ° C i en atmosfære af 5% CO

2 .

RNA og miRNA isolation og amplifikation

Både RNA og miRNA blev isoleret fra prostatavæv og cellelinjer under anvendelse af Ambion Mirvana kittet (Austin, TX, USA) ifølge producentens protokol. cDNA blev dannet fra RNA og miRNA anvendelse af en TaqMan RNA Reverse Transcription Kit og TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit hhv. For genet og miRNA amplifikation blev en TaqMan reagenskittet anvendes med 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reaktionerne blev udført i dobbeltbestemmelse, og

B2M

(β-2-mikroglobulin) og RNU-48 blev anvendt som endogene kontroller for gener og miRNA henholdsvis. Salg

Gene og miRNA ekspressionsniveauer var opnået ved relativ kvantificering under anvendelse af 2

-ΔΔct metode. Formlen anvendes, er ΔΔCT = DCT

1- DCT

2, hvor DCT

1 = CT af målet (tumorprøven) – CT af gennemsnittet af den endogene kontrol (tumorprøve), og DCT

2 = CT af gennemsnittet af de normale kontroller (godartet prostata væv) – CT af gennemsnittet af den endogene kontrol (benign prostata væv). For vurdering af de metastatiske cellelinier blev “kontrol” (DCT

2) anses for at være de PT2 tumorer. Det endelige resultat blev opnået ved at anvende 2

-ΔΔct metode. Konstateringer større eller mindre end 1, blev anset for at indikere overekspression eller underekspression hhv. Alle værdier var standardiseret i forhold til de normale kontrolværdier, der var repræsenteret en værdi på 1.

Gene og miRNA udvælgelse

Valget af miRNA og gener evalueret i denne undersøgelse var baseret på deres rolle i EMT-processen i forskellige typer af kræft. Vi udførte en litteratursøgning via PubMed og Web of Science ved hjælp af begreberne “epitel-mesenkymale overgang”, “cancer” og “miRNA”. På baggrund af de data, der er offentliggjort i litteraturen, valgte vi 18 miRNA, der er målrettet de vigtigste gener involveret i EMT. Dataene er præsenteret i tabel 1.

Statistisk analyse

For at sammenligne de klinisk-patologiske træk hos patienter med lokaliseret PCa blev patienterne inddelt i grupper baseret på deres GS (GS ≤6 vs GS ≥8), patologisk stadium (pT2 vs pT3), præoperativ PSA ( 10 vs ≥10 ng /ml), og fravær eller nærvær af biokemisk tilbagefald, defineret som PSA ≥0,02 ng /mL. Patienterne blev også klassificeret i lav risiko og høj risiko sygdomsgrupper efter tilstedeværelsen af ​​ugunstige træk. I dette scenarie var udtryk værdier i tumorvævet sammenlignet med dem i den godartede prostata væv.

Til vurdering af metastatiske tumorer, tre metastatiske PCA cellelinier blev analyseret sammen og betegnet som den metastatiske gruppe. Ekspressionsniveauerne af generne og miRNA mellem cellegruppen og PT3 tumorer blev sammenlignet i forhold til PT2 tumorer, som blev anset for “kontrol” gruppen. Rationalet var, at den patologiske stadium kunne være et praktisk bevis på EMT, og ved hjælp af denne metode, kunne vi evaluere hvilken EMT markører er involveret i udviklingen af ​​en lokaliseret tumor til metastase.

Mann-Whitney U og T tests blev anvendt til at sammenligne GS, patologisk stage, præoperative PSA niveauer, biokemisk tilbagefald, og risikogrupper. Fordelingen af ​​genet og miRNA ekspressionsniveauerne blev skæv, og dataene blev log-transformeret til analyse. Kaplan-Meier-kurver blev konstrueret for at analysere biokemisk tilbagefald overlevelse. Den statistiske signifikans for alle tests, som vurderet ved at beregne to-sidet

P

-værdier, blev fastsat til. 0,05

Resultater

Patient data

gennemsnitsalderen for patienterne var 65 år. Middelværdien og median GS var 7,3 og 7, henholdsvis. Toogtyve patienter (43%) var stadium pT2, og 29 (57%) patienter var stadium pT3. Sytten (33%) patienter havde biokemisk tilbagefald i en gennemsnitlig opfølgningsperiode på 63,06 måneder. Dataene er illustreret i tabel 2.

miRNA og genekspression profilering i lokaliseret PCa

miRNA 200a, 200b, 200c, 429, 141, 205, 203, 21, 183, og 373 blev overudtrykt i 35 (69%), 47 (92%), 38 (74%), 39 (77%), 42 (82%), 44 (86%), 38 (74%), 51 (100 %), 38 (74%), og 33 (64%) prøver. miRNA 1, 29b, 9, og 495 blev underexpressed i 41 (80%), 41 (80%), 36 (71%), og 42 (82%) prøver. miRNA 34a, viste 155, 30a, og 10b et variabelt mønster af udtryk: miR-34a og miR-155 blev underexpressed i 55% og 57% af prøverne, henholdsvis og miR-30a og miR-10b blev overudtrykt i 51% af prøverne (tabel S1 i File S1).

E-cadherin blev overudtrykt i 50 tilfælde (98%). Generne N-cadherin,

TGFB1

, og

ZEB1

blev underexpressed i 36 (71%) patienter, mens

SNAI2

og vimentin blev underexpressed i 42 (82%) og 41 (80%) patienter.

ZEB2

,

SNAI1

, og

PDGFD

viste variable mønstre af udtryk. På den anden side,

TWIST1

var den eneste EMT-induceret gen, der viste overekspression i de fleste tilfælde (73%) (tabel S1 i File S1).

miRNA og gener forbundet med klinisk-patologiske træk

tabel 3 og 4 viser dataene for miRNA og genekspression i forhold til klinisk-patologiske træk, hhv. Lave niveauer af miR-200b, miR-30a, og miR-1 var forbundet med pT3 sygdom. Af de 18 miRNA undersøgte tre signifikant underexpressed i pT3 sygdom (miR-200b – 7,73 vs 23,86,

P

= 0,02; miR-30a – 1,73 vs 3,79,

P

= 0,048; og miR-1-0,72 vs 1,97,

P

= 0,04). Men med hensyn til de gener, vi kunne ikke finde nogen sammenhæng mellem deres udtryk og patologisk stadium.

Vi vurderede sammenslutning af GS med miRNA eksklusive GS 7 på grund af deres usikre adfærd. Femten patienter (29%) havde en GS ≤6 og 23 (45%) havde en GS ≥8. Vi fandt, at miR-200b udtryk var signifikant lavere hos patienter med en GS ≥8 sammenlignet med patienter med en GS ≤6 (6,94 vs 18,67,

P

= 0,035). Ingen association blev fundet mellem GS og de andre miRNA og gener.

Når patienter blev grupperet efter lav risiko og høj risiko for sygdom, den høje risiko for sygdom, havde signifikant lavere niveauer af miR-30a (1,70 vs 6,37,

P

= 0,039). Også høje niveauer af vimentin og

TWIST1

var signifikant forbundet med høj-risiko for sygdom (0,27 vs 0,90,

P

= 0,017; 1,81 vs 8,89,

P

= 0,018) .

på grund af den signifikant sammenhæng mellem miRNA 200b, 30a, og en med patologisk stadium og deres potentiale som prognostiske markører, blev udført en overlevelse analyse. Kaplan-Meier-analyse viste, at patienter med lavere niveauer af MIR-200b havde signifikant kortere biokemisk tilbagefald overlevelse (

P

= 0,049) (figur 1).

Patienter med MIR-200b ekspression niveauer ≤14.690 viste signifikant kortere biokemisk recidiv overlevelse.

Desuden miR-183 og

TWIST1

ekspressionsniveauerne var signifikant højere i metastatiske PCA cellelinjer i forhold til niveauet i patienter med pT3 sygdom og high-grade tumorer (tabel S2 i File S1). I cellelinjer, MIR-183 og Twist1 niveauer var 2,64 og 3,54, henholdsvis, mens der i PT3 tumorer, deres niveauer var 40,41 og 14,45, henholdsvis (

P

= 0,009 og

P

= 0,049, henholdsvis).

diskussion

betydningen af ​​EMT i carcinogenese er blevet grundigt undersøgt i de sidste par år, og det er nu betragtes som en af ​​de vigtigste mekanismer, der er ansvarlige for tumor progression og metastatisk spredning. Vores undersøgelse har til formål at vurdere betydningen af ​​udtrykket mønstre af flere miRNA og gener involveret i EMT i kliniske prøver af lokaliseret prostatacancer og metastatiske cellelinier. Vores resultater er opsummeret i figur 2, som viser de vigtigste miRNA og gener involveret i EMT i udviklingen af ​​PCa og deres mulige virkningsmekanisme.

Expression niveauer af miRNA 200b, 30a og en reduktion, når tumoren erhverver high grade-funktioner, mens ekspressionsniveauer af TWIST1 og vimentin stigning. Når tumoren bliver metastatisk, observeres en stigning i ekspressionsniveauerne af miR-183 og TWIST1. De stiplede linjer angiver generne, hvor disse miRNA eller gener kan virke, baseret på tidligere publicerede data.

BR

= Biokemisk Gentagelse.

Vi har vist, at miR-200b, miR-30a, og miR-1 signifikant blev underexpressed i ikke-organ-begrænset tumorer og kunne udgøre interessant prognostiske faktorer. En nylig undersøgelse understøtter vores resultater ved at vise, at miR-200b og miR-1 inducerer mesenchymale-epitelial overgang (MET) i mus og humane PCA celler og er vigtige regulatorer i prostata tumorigenese og tumor progression [23].

miR-200b blev overudtrykt i PCA prøver, og dette fund er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser på PCa [25], [26]. Medlemmerne af miR-200 familien er de vigtigste miRNA er involveret i EMT [27], og studier i PCA celler har vist, at miR-200b hæmmer EMT, vækst og metastase [23], [28]. Vi hypotesen, at miR-200b har det største potentiale til at blive en prognostisk markør, fordi lavere ekspression af miR-200b var signifikant associeret med en høj GS, pT3 sygdom og kortere biokemisk recidiv overlevelse. Rolle MIR-200b er blevet beskrevet i andre tumorer, og dens nedregulering er relateret til fremskreden sygdom stadium [29] og kortere samlet overlevelse [30] – [32]. Svarende til vores resultater, Barron et al fandt, at MIR-200a-niveauer blev reduceret hos patienter, som fik recidiv ved at studere MIR-200a ekspression i formalinfikseret paraffinindlejret væv fra patienter med pT3 sygdom [33], støtte potentiale MIR-200 familie som markør for biokemisk tilbagefald.

Tidligere undersøgelser indikerer, at nedregulering af mIR-200 kan bidrage til udviklingen af ​​PCa [15] [34]. Xu et al observeret en 80% reduktion i miR-200 mia niveauer i kemisk kastrerede LNCaP celler via RNA-sekventering [35]. Emerging beviser understøtter involveringen af ​​EMT processer i deregulering af androgen signalering aksen, men data er stadig kontroversiel. Zhu og Kyprianou observeret, at androgener inducerer selvstændigt EMT mønster inden prostata kræftceller, hvilket resulterer i betydelige ændringer i cellulær invasion og motilitet [36]. Den aktiverede androgenreceptor (AR) er for nylig blevet vist at fremme EMT aktivering via suppression af E-cadherin ekspression i brystcancerceller [37]. På den anden side, Sun et al fandt, at androgen deprivation forårsager EMT in vivo og erhvervelse af mesenchymal funktioner [38].

Dette er den anden undersøgelse vedrørende MIR-1 og prognose i PSA. Hudson et al tidligere fundet, at lavere ekspressionsniveauer af miR-1 var forbundet med tidligere biokemiske gentagelse i PCa [39]. Nu viste vi, at MIR-1 blev nedreguleret i den primære tumor i sammenligning med benign prostata væv, og blev signifikant reduceret i ikke-orgel begrænset sygdom. Det menes, at miR-1 regulerer Slug [23], gennem histon methylering og acetylering [39] og også har som mål gener relateret til spredning, migration og invasion [40] spiller en vigtig rolle i EMT i PSA.

data om den rolle, miR-30a i PCa er knappe og selvmodsigende. I vores undersøgelse viste MIR-30a et skiftende mønster af ekspression. MIR-30a blev beskrevet som værende nedreguleret i den undersøgelse, som Porkka et al [41], mens Carlsson et al rapporterede opregulering af denne miRNA [42]. For nylig, Kao et al viste, at ETS-relateret gen (

ERG

), som er den hyppigst overudtrykt onkogen i PCa, er et direkte mål for MIR-30 og at overekspression af MIR-30 i PCA-celler undertrykker EMT fænotyper og hæmmer celle migration og invasion [43]. miR-30 familien hæmmer også celle migration, invasiv, og metastase

in vitro

i andre tumorer, såsom lunge-, bryst- og hepatocellulær cancer [21], [44] – [46], ved at målrette

SNAI1

[21], [44] og vimentin [45], [46]. I denne undersøgelse var observeret mellem forholdet nedsat ekspression af MIR-30, avanceret patologisk stadium, og højrisiko-sygdom bekræfter MIR-30 som et tumorsuppressor miRNA i PSA. Cheng et al observeret, at lave niveauer af MIR-30a var prædiktorer for fremskredent stadium og lymfeknudemetastaser i invasiv brystcancer [45]. Wang et al viste, at lave ekspressionsniveauer af MIR-30a signifikant var forbundet med en højere forekomst af portal vein tumor trombe i hepatocellulært carcinom [46].

Hvad angår generne, observerede vi overekspression af E-cadherin i stort set alle tilfælde, og hovedparten af ​​de mesenkymale markører, herunder N-cadherin,

TGFB1

,

ZEB1

, vimentin, og

SNAI2

blev nedreguleret. Denne genekspressionsprofilen antyder kraftigt, at lokaliseret PCa opretholder epitel fænotype trods tumor differentiering og stigende fase. Men

TWIST1

blev overudtrykt i 73% af tilfældene.

TWIST1

er en helix-loop-helix transskription faktor, der aktiverer EMT ved indirekte hæmning af E-cadherin [47].

TWIST1

har vist sig at være overudtrykt i PCa på immunhistokemiske assays og til positivt korrelerer med GS [48], [49]. Det er interessant, at et gen med så stor betydning i EMT og med prognostisk værdi i PCa er overudtrykt i lokaliserede tumorer. Den tidlige overekspression af

TWIST1

kan tilskrives dens regulering af

NKX3-1

gen [50], en tumor suppressor der viste sig at være underexpressed i de tidlige stadier af PCa [51 ], [52]. Men den tidlige opregulering af

TWIST1

synes ikke være tilstrækkelig til at indlede EMT-processen. Ifølge Casas et al,

TWIST1

inducerer

SNAI2

at fremme EMT [53], men udtømning af

SNAI2

helt blokerer evne

TWIST1

at undertrykke E-cadherin og fremkalde EMT.

Vi har vist, at høje niveauer af

TWIST1

, samt vimentin, er signifikant associeret med patienter i højrisikogruppen og

TWIST1

var også signifikant højere i de metastatiske cellelinier. I en nylig undersøgelse, Behnsawy et al [12] viste, at høje ekspressionsniveauer af

TWIST1

og vimentin evalueret ved immunhistokemi er en uafhængig faktor for kortere biokemisk tilbagefald overlevelse, hvilket antyder, at disse gener kan være potentielle markører biokemisk tilbagefald efter radikal prostatektomi.

TWIST1

synes at spille en rolle i forskellige trin af EMT, og dens rolle i udviklingen af ​​PCa [49]. I undersøgelsen af ​​Kwok et al,

TWIST1

udtryk var højere i væv afledt af metastatiske læsioner fra knogler og lymfeknuder [48]. Rolle

TWIST1

i dette senere trin i EMT kan forklares ved aktivering af sit mål, miR-10b. miR-10b ikke blot undertrykker E-cadherin [54], men også hæmmer oversættelse af HOXD10 protein, tillader ekspression af den pro-metastatisk gen-produkt,

RHOC

[55].

vi har også observeret, at ekspressionsniveauer af mIR-183 var signifikant højere i metastatiske gruppe. Ueno et al observeret, at højere ekspressionsniveauer af MIR-183 signifikant var forbundet med højere PSA, højere trin og kortere samlet overlevelse efter radikal prostatektomi, men dens opførsel i PCa er absolut kontroversielt nogle viser, at MIR-183 fremmer migration og invasion [56] – [58], mens andre viser, at det hæmmer migration, invasion, og metastase [59] – [61]. er blevet foreslået nogle mål for miR-183,

DKK3

,

Smad4

[56],

EGR1

PTEN

[57], der vender miR-183 en kontekst afhængig miRNA. Baseret på vores resultater, og ifølge tidligere undersøgelser i litteraturen, mener vi, at miR-183 fungerer som en oncomiR i PCa, og mekanismen kan indebære

PTEN

som er relateret til PCa progression og udvikling af metastaser [62 ]. Ding et al viste også, at samtidig

PTEN

Smad4

inaktivering i prostata epitel er i stand til at producere et fuldt penetrerende invasive og metastatiske PCa fænotype i mus [63].

Afslutningsvis er det vigtigt at forstå, at EMT påvirkninger tumorprogression i forskellige trin gennem flere markører. Her beskrev vi en omfattende undersøgelse af miRNA og gener relateret til EMT i PCa og fandt, at ekspressionsniveauerne af miR-200b, miR-30a, miR-1,

TWIST1

Vimentin kunne anvendes i beslutningsprocessen beslutningsprocesser relateret til primære eller adjuverende behandlinger i fremtiden.

Støtte Information

File S1.

Kombineret fil at støtte tabeller. Tabel S1: Ekspressionsniveauer af miRNA og gener fra hver enkelt sag i relation til BPH prøver. Tabel S2: Ekspressionsniveauer af miRNA og gener i PT3 tumorer og i cellelinier (i forhold til PT2 tumorer)

doi: 10,1371 /journal.pone.0113700.s001

(DOCX)